Способ диагностики гетерозиготного носительства при болезни вильсона-коновалова

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при диагностике и лечении заболеваний печени, в частности болезни Вильсона-Коновалова. Способ включает получение антител к оксидазоной и неоксидазной фракциями церулоплазмина, проведение ракетного иммуноэлектрофореза, определение площадей ракет неоксидазной и оксидазной фракции и их отношения. Полученные значения для ребенка и одного из родителей соотносят между собой и в случае здорового родителя при отношении, равном 1, а в случае больного родителя при отношении 1/3 диагностируют гетерозиготное носительство. Способ обладает минимальной травматичностью и практически безвреден для больного, а также диагностировать доклиническую стадию болезни Вильсона-Коновалова.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (gl)g С 01 1 1 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АBTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

flO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4334975/28-14 (22) 08.12.87 (46) 07,06.90, Бюл„ В 21 (71) Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины AMH

СССР (72) Л.В.Пучкова, И„А.Вербина, В,С.Гайцхоки и С.А.Нейфах (53) 616.07(088.8) (56) Major, probl intern,med, v, 28, ch. 14, р.114, (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГЕТЕРОЗИГОТНОГО НОСИТЕЛЪСТВА ПРИ БОЛЕЗНИ ВИЛЬСОНА-КОНОВАЛОВА (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано при диагностике и лечении заболеваний пече=

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при диагностике заболеваний печени, в частности болезни Вильсона-Коновалова.

Целью изобретения является снижение травматичности способа и его упроI щение.

Способ осуществляется следующим образом.

50 мл сыворотки больного болезнью

Вильсона-Коновалова подвергают хроматографии на колонке с аффинным к церулоплазмину сорбентом, Полученные после аффинной хроматографии оксидазную и неоксидазную фракции разделяют препаратнвным электрофорезом в 7,5_#_- ном полиакриламидном геле. Обе фракции элюируют из геля и получают к ним антитела при внутрикожной иммуниÄÄSUÄÄ 1569706 А 1

2 ни, в частности болезни Вильсона-Коновалова. Способ включает получение антител к оксидазной и неоксидазной фракциям церулоплазмина, проведение ракетного иммуноэлектрофореза, определение площадей ракет неоксидазной и оксидазной фракций и их отношения„

Полученные значения для ребенка и одного из родителей соотносят между собой и в случае здорового родителя при отношении, равном 1, а в случае больного родителя при отношении 1/3 диагностируют гетерозиготное носительство.

Способ обладает минимальной травматичностью и практически безвреден для больного, а также позволяет диагностировать доклиническую стадию болез- Е ни Вильсона-Коновалова. зации кроликов. Полученные антитела перекрестно истощают и получают моноспецифические антитела. В дальнейшем эти антитела используют для ракетного иммуноэлектрофореза сывороток, используемых из одного из его роди телей, после чего определяют отношение площади пика (ракеты) неоксидаэной фракции к площади ракеты оксидазной фракции, а затем соотносят получившиеся отношения плошадей ракет у ребенка и родителя„ В случае здорового родителя при отношении, равном единице, а в случае больного родителя при отношении, равном 1/3, диагностируют гетерозиготно» носительство.

Пример 1. Больной I,, 7 лет диагноз: болезнь Вилье< нн-Коновалова.

1569706

Специфическое лечение не дало результатов.

По 5 мкл сыворотки Гольного и его матери исследованы методом ракетного иммуноэлектрофореза в 17.-ном агароэI ном геле, содержащем 50 мкг моноспеI цифических антител в 1 мл. Иммунограмму, содержащую антитела против оксидазной формы, окрашивали 0,04 -ным. раствором ортодианизидина. Иммунограмму с антителами против неоксидазной формы окрашивали .на белок. Отношения площади ракеты неоксидаэной фракции к площади ракеты оксидаэной фракции у больного и у его матери равны 1,55 и 1,52 соответственно, Соотношение этих значений — единица, Так как мать здорова, а отношение равно единице, диагностировали гетерозиготное 2р

;носительство, что отрицает диагноз

;.болезнь Вильсона-Коновалова. Пожиз ненное получение препарата пенициламина отменено. При томографическом обследовании в мозге больного обнару- 25 жена опухоль.

Пример 2, Ребенок Ш 2 года, рождена в браке между здоровой женщиной и больным болезнью ВильсонаКоновалова. Родители происходят из одной местности, Девочка клиничес-! ки здорова. Сыворотка крови ребенка и его отца исследованы предлагаемым способом с целью медико-генетического консультирования.

Отношение площади ракеты неоксидазной фракции к площади ракеты оксидазной фракции у ребенка и отца составляют 1,06 и 3,00 соответственно.

Соотношение этих значений равно 1/3, Диагноз: гетерозиготное.носительство вильсоновской мутации. Рекомендовано медико-генетическое консультирование при вступлении .в брак, Пример 3, Больной М,, 16 .пет 5 с вильсоноподобной симптоматикой, Мать больна болезнью Вильсона-Коновалова, Диагноз — болезнь Вильсона-Коновалова оставался под сомнением в связи с тем, что отец здоров, Сыворотки больного и обоих родителей исследовали методом ракетного иммуноэлектрофореэа с моноспецифическими антителами.

Отношения площади ракеты неоксидаэной фракции к площади ракеты оксидазной

55 фракции у больного, его матери и отца равны 1,50; 1,52 и 0,50 соответственно. Соотношение этих значений в случае здорового родителя (отца) равно 1/3, а в случае больного родителя (матери) — единице.

Диагноз: больной является гомозиготным носителем мутации Вильсона— болен болезнью Вильсона-Коновалова.

Специфическое лечение, назначенное после установления диагноза, привело к улучшению состояния больного.

По сравнению с известным предлагаемый способ диагностики гетероэиготного носительства болезни ВильсонаКоновалова является совершенно безвредным для пациента, так как кровь для анализа может быть взята из пальца.

Предлагаемый способ не уступает. известному по точности, что подтверждается при анализе тридцати семей с больными болезнью Вильсона-Коновало»ва, где диагноз подтвердился во всех случаях, Способ позволяет диагностировать доклиническую стадию болезни Вильсона-Коновалова.

Формула и э обретения

Способ диагностики гетерозиготного носительства при болезни Вильсона-Коновалова путем исследования обмена меди в организме больного и одного из его родителей, о т л и ч а— ю шийся тем, что, с целью снижения травматичности способа и его упрощения, проводят ракетный иммуноэлектрофорез с использованием антител к оксидазной и неоксидазной фракциям, полученным сочетанием аффинной хроматографии и электрофореза в полиакриламидном геле, с последующим обогащением антител перекрестным истощением, после чего определяют отношение площади пика неоксидаэной фракции к площади пика оквидаэной фракции, полученные значения для ребенка и родителя соотносят между собой и в случае здорового родителя при отношении, равном единице,,а в случае больного родителя при отношении 1/3 диагностируют гетероэиготное носительство у ребенка.