Способ получения 4 @ -галоид-антрациклингликозидов

 

Изобретение касается гликозидов, в частности получения 4-деокси-4-бромдаунорубицина или 4-деокси-4-бромдоксорубицина, или 4-деокси-4-хлордаупорубицина, или 4-деокси-4-хлордоксорубицина, обладающих противоопухолевой активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых более активных веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией 4 1-эпи-4 1-0-трифторметансульфонил-N-трифторацетилзамещенного даупорубицина в водном CH 2CL 2 с тетра(N-бутил)аммоний бромидом (хлоридом) при комнатной температуре с последующим снятием защитных групп в полученном веществе с помощью мягкого щелочного гидролиза водным раствором 0,1N. NAOH. Целевой продукт выделяют в виде хлоргидрата или, при необходимости, его подвергают реакции с раствором брома в CHCL 3 с последующим гидролизом водным раствором формиата натрия. Новые вещества эффективны против общей лейкомии. 4 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

5 А3 (19) 01) ОПИСАНИЕ. ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

0 ОИ

СОСНАХ

ОН

НЗСО 0 ОН

Н3

Bi ж изводным.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

IlPH ГКНТ СССР (21) 3781800/23-04 (22) 07.08.84 (31) 832,1676 (32) 11.08.83 (33) GB (46) 15. 07. 90. Бюл. М - 26 (71.) Фармиталиа Карло Эрба С.H.À. (? Т) (72) Антонино Суарато, Серджио Пенко, Фернандо Джиулиани и Федерико Аркамоне (1Т) (53) 547.689.6.07(088.8) (56) Патент СИА II 3803124, кл. 260-210, 1974.

Патент СССР (((1378784, кл. С 07 D 15/252, 1983.

Патент СССР II- 1181550, кл. С 07 D 15/24, 1982.

I (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 4 -ГАЛОИД-АНТРАЦИКЛИН ГЛИКОЗИДОВ (57) Изобретение касается гликозидов, (( в частности получения 4 -деокси-4

Изобретение относится к способу получения новых производных 4 -галоид-антрациклингликозидов общей формулы (51)5 С 07 Н 15/252 А 61 К 31/70

-бромдаунорубицина или 4 -деокси-4т(I

-бромдоксорубицина, или 4 -деакси-4—

I (-хлордаупорубицина,или 4 -деокси-4 хпордоксорубицинау обаладающих противоопухолевой активностью, что может быть использовано в.медицине. Цель создание новых более активных веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией 4 -эпи-4 -0-трифторметансульфо(( нил-N-трифторацетилзамещенного даунорубицина в водном СН С1 с тетра(н"бутил)аммоний бромидом (хлоридом) при комнатной температуре с последующим снятием защитных групп в полученном веществе с помощью мягкого щелочногогидролиза водным раствором О, 1N Na0H. а

®

Целевой продукт выделяют в виде хлоргидрата или при необходимости его подвергают реакции с раствором брома .в СНС1 с последующим гидролизом водным раствором формиата натрия. Новые вещества эффективны против общей лей- 2 комии. 4 табл..где Х вЂ” водород или гидроксильная группа; — бром или хлор, обладающих противоопухолевой активностью, Цель изобретения — получение новых

4 -галоид-антрациклингликозидов, обладающих большей активностью по сравнению с родоначальниками данного ряда соединений — доксорубицином и даунорубицином и ближайшим структурным аналогом-соответствующнм 4 -йодпро1579465

Поставленная цель достигается путем взаимодействия 4 -эпи-4 -О-три( фторметансульфонил-N-замещенного даунорубицина в водном метиленхлориде э с тетра (н-бутил) аммоний бромидом или тетра (н-бутил)аммоний хлоридом с получением соответствующих 4 "бром- или

4 -хлорпроизводных, которые подвергаI ют мягкому щелочному гидролизу с целью снятия защитных групп, и полученный 4 -галоиддаунорубицин в случае необходимости переводят в соответствующее 4(-галоидпроизводное доксорубицина.

I (1 5

Пример 1. 4 -Деокси-4 -бромдаунорубицин (X-kI, R(-ОСН>, R -Br).

2 r бромида тетра (н-бутил) аммо( ния вводят в раствор 4,0. r. 4 -эпи:-4—

-О-трифторметансульфонил"N-трифторацетилдаунорубицина (2:R<-ОСН, .R -C0CF ) в 80 мл водного метиленхлорида. Через 1.ч при комнатной температуре реакционную смесь промывают водой и органическую фазу выпаривают в вакууме. Остаточный продукт выпаривания очищают на силикагеле, используя смесь метиленхлорид: ацетон в качестве элюента в результате чего ! получают 3 5 r 4 -деокси-4 -бром-NЭ ЗО

-трифторацетилдаунорубицина с т.пл.

130 С; FD,. MS 685 (M ). Тонкослойная хроматография на пластинках Kieselgel (Merck F 254) с использованием системы растворителя метиленхлорид: ацетон (в объемном отношении 10: 1), Rf 0,5, (l

Б раствор 3 г 4 -деокси-4 -бром-N-.TðèôToðàöåòèëäsóíoðóáèöèHà в 20 мл ацетона вводят 160 мл 0,1 N водного 4 раствора гидрата окиси, натрия. Через

4 ч при комнатной температуре величи-. ну рН раствора доводят до 8,6 посредством О, 1 N кислоты и экстрагируют раствор метиленхлоридом. PscTBopHTBJIh выпаривают и остаточный продукт выпаривания подвергают обработке метанольным- раствором хлористого водopoда, в результате чего получают хлоргидрат целевого продукта (2,2 г, .т.пл. 180 С с одновременным разложео нием); тонкослойная хроматография на пластинках Kieselgel (Meгck F 254) с использованием системы растворителей метиленхлорид: метанол: вода: уксусная кислота в обьемном отношении 80:

:20:7:3, Rf = 0,32.

Пример 2 ° 4 -Деокси-4 -бром, доксорубицин (X-OH., К -Br).

2 г 4 -деокси-4 -бромдаунорубицина, полученного как описано в примере

1, растворяют в смеси метанола с диоксаном. Раствор подвергают обработке обычным образом сначала бромом, в результате чего получается 14-бромпроизводное, а затем — водным раствором формиата натрия, в результате чего получают 4 -деокси-4 -бромдоксоруl I бицин. Это соединение превращают в

его хлоргидрат путем обработки метанольным раствором хлористого водорода. Т.пл. этого продукта составляет

170 С (с разложением), FD, MS 605 (М+), тонкослойная хроматография на пластинках Kieselgel (Merck F 254) с использованием системы растворителя метиленхлорид: метанол: вода: уксусная кислота в объемном отношении

80:20:7:3, Rf = 0,20. (Пример 3. 4(-Деокси-4 -хлордаунорубицин (Х-Н, R -Cl). (В результате обработки 4 -эпи-4—

-О-трифторметансульфонил-N-трифторацетилдаунорубицина (2, R -ОСНэ, К -COCF ) хлоридом тетра (н-бутил)аммония, как описано в примере 1, получают 4(-деокси-4 -хлордаунорубицин, ф т.пл. 175 С с разложением, FD MS

545 (М+), тонкослойная хроматография на пластинках Kieselgel (Merck F 254) с использованием системы растворителя метиленхлорид: метанол: вода: уксусная кислота в объемном отношении

8 .20:7:3, Rf = 0,32.

Пример 4 ° 4(-Деокси-4 -хлордоксорубицин (Х - ОН, R — Cl) . ф 1 °

По методике примера 2 4 -деокси-4.-хлордаунорубицин превращают в 4 -де( окси-4 -хлордоксорубицин и выделяют

его в виде хлоргидрата: т.пл. 180 С о с разложением; FC,ìàññ-спектр 551 (М ). Тонкослойная хроматография на пластинках Kieselgel (МегсЕ Р 254) с использованием системы растворителя хлористый метилен: метанол: вода: уксусная кислота в объемном отношении 80:20:7:3 Rf = 0,2.

Испытания на биологическую активность °

Соединения примеров 1,2 и 3 подвергались испытанию в условиях "in

tl

vitro в сопоставлении с даунсрубицином (DNR) и доксорубицином (DX) на действие против клеток HeLa, клеток

Р388 чувствительных и стойких ((У. (Р388 (DX) .

СОСН,=

25

30 H

О 0Н

СОСН

45

НЗСО О ОН 1 пЗС (3 О(О щщ

5 157

Результаты цитотоксической активности соединений примеров 4,3 и 2 представлены в табл. 1.

Все новые производные показали себя более цитотоксичными, чем их родоначальные соединения против клеток HeLa и Р388, чувствительных к

ДХ. Однако эта повышенная цитотоксичность является более явно выраженной, если рассматривать активность данных соединений против P 388 10

У

В данном случае эти новые производные показывают 100-250-кратное увеличение цитотоксичности по сравнению с родоначальным препаратом. Данные соединения подвергались испытанию в условиях "in vivo" против трех различных видов экспериментальной лейкемии.

Противоопухолевое действие на асцитическую лейкемию Р388 приведено в табл. 2.

Как видно из табл. 2, активность действия, проявленная соединениями примера 3 равна активности DNR, в то время как другое производное DNR (соединение примера 1) проявляет активность противоопухолевого действия явно более высокую, чем DNR.

Соединение примера 2 при макси/ мально допустимой дозе (4,15 мг/кг) имеет примерно такую же активность действия, как и DX. Все эти новые соединения проявляют активность действия против лейкемии Р388/DX (см. табл. 3), в то время как DNR u DX неэффективны.

Эти три новых соединения подвергали испытанию после их внутривенной инъекции на действие их против рассеянной общей лейкемии (Gross ЬепМmia), результаты испытания приведены в табл. 4.

В данной системе соединение 3 является таким же активным, как и DNR, в то время как соединение примера 1 является более активным, чем родоначальное соединение. Соединение примера 2 показывает примерно такую же эффективность, как и соединение DX.

Оба эти соединения подвергались испытанию после ввода в организм через рот и показали значительную активность действия, в то время как DNR u DX не были активны при вводе таким же образом.

Цитотоксическое действие на клетки

HeLa сопоставимо (3 нг/мл) для 4 бромдоксорубицина и структурного ана9465 6 лога — 4 -иодоксорубицина, в то время как действие "in vitro" против P 388

l опухолевых клеток, 4 -бромдоксорубицин намного более активно (0,2 нг/мл) по сравнению со структурным аналогом (5+2 нг/мл) .

Аналогичным образом (по отношению к действию . "in vivo против Гросс лейкемии) бып найден показатель Т/С =

= 258K для 4 -бромдоксорубицина при дозе 5,27 мг/кг; 4 — иодоксорубицин имеет показатель Т/С =.150-183Х при дозе 6,0 мг/кг.

Кроме того, смертельные слу1аи от

I отравления составляют 2/17 для 4 -иоддоксорубицина и О/20 для аналогичного бромпроизводного.

20 Формула изобретения (Способ .получения 4 -галоид-антрациклингликозидов общей формулы где Х вЂ” водород NH или гидроксильная

35 группа;

R — бром или хлор, отличающийся тем, что

4 -эпи-4 -0-трифторметансульфонил-N(( -замещенный даунорубицин общей форму40 лы где R< — трифторацетил, растворенный в Bopíoè метнленхлориде, при комнатной температуре подвергают взаимодействию с тетра 1н-бутил)аммоний бромидом или тетра (н-бутнл)аммоний хлоридом, получая, N-защищенный гликозид общей формулы

1579465

O 0H eå 14-бромпроизводное гидролизу т водным раствором Ьормиата натрия с последующим выделением целевого продукта, где Х-ОН, в виде хлоргидрата.

Таблица 1 сосн, 0Н

НСО О ОН1 н,с

LD 50 (нг/мл)

Соединение

1О

NHR

Не а Р388 P388/Х где К1 и R имеют указанные значения, который подвергают снятию защитных групп путем мягкого щелочного гидролиза водным раствором 0,1N гидроксида натрия с последующим выделением целевого продукта, где Х вЂ” водород, в виде хлоргидрата и в случае необходимости полученное соединение подвергают взаимодействию с раствором брома в хлороформе, полученное соответствуDNR 12,3

Пример 1 6,8

Пример 3 5,8

DX 12,5

Пример 2 3

2,8

0 5

2,4

4,25

0„2

980

8,8

1250

4Испытание на ингибирование после действия лекарства в течение. 24 ч.

Цитотоксичность, определяемая после действия лекарства в течение 48 ч. (данные нескольких. экспериментов).

Таблица 2

Активность действия против асцитической лейкемии F388"

Т/С™м

„, ч«кк

1ТБ Токсичный

«М

Соединение Доза мг/г смертель«ик»» ный

165, 155

170, 135

130, 115

325

DNR

Пример 1

Пример 3

Пример 2 Эксперименты осуществлялись на мышах СВЕ,инокулированных клетками (10 ) лейкемии, путем ннутрибрюшинной инъекции.

"Лечение путем внутрибрюшинной.инъекции через день после ввода опухолевого инокулума.

"""Ñðåäíåå время выживания подвергнутых лечению мышей (среднее время выживания контрольных мьнпей х 100) .

«и %И

Выжившие в течение длительного времени организмы () 60 дн)

«кккк

Определено по аутоптическим измерениям.

2,9

4,4 б,б

2,9

4,4

6,6

2,9

4,4 . 6,6

4,4 б,б

2,4

$,88

3,46

4,15

О/20

О/18

О/20

0/10.

О/10

О/10

3/10

О/10

Î/10

0/10

О/8

О/10

0/10

4/10

О/10

О/10

О/10

4/10

О/20

О/18

12/20

О/10

О/10

О/10

О/10

О/10

О/1 О

О/10

6/8

О/10

О/10

О/10

Î/10

О/10 ,0/10

1/10

1579465

Та блица 3

Активность действия против асцитической лейкемии Р388/X доза, Т/С, Токсичный смер+ Х 4 3(-Х мг/кг 7 тельный"" »

Соединение

DNR

Пример 1

Пример 3

Пример 2

Эксперименты проводились на мышах BDF, инокулированных клетками (10 ), введенными путем внутрибрюшинной инъекции.

+%Лечениее путем внутрибрюшинной инъекции через один день после ввода опухолевого инокулума.

4+6

Среднее время выживания подвергнутых лечению . мышей (среднее время выживания контрольных мышей х 100). +%4+

Определено по утоптическим измерениям.

Таблица 4

Эффективность действия против общей лейкемии

А DNR

Внутривенно

Пример 1 Так же

Пример 3—

Через рот

Внутривенно

Пример 2 Так же

4,4

6,6

4,4

6,6 .

10 б,б

2,88

3,46

4,15

22,5

22,5

6,6

6,6

13

16,9

4,05

5,27

91

87

143

143

148

122

108

117

122

137

142, 138 г83, 185

217,92

217

7?

154

169

92

183

242

233

258

О/10

О/10

О/10

О/10

О/10

3/10

1/20

1/20

О/20

О/20

1/20

2/18

1/18

9/!8

О/10

6/9

9/9

О/10

7/10

10/10

О/10

О/10

7/8

О/10

О/10

О/10

О/10

О/10

1579465

Продолжение табл.4

4 5

Э/10

О/10

О/10

6,85 242

4,05 114

5,27 157

Через рот

Ф

Эксперименты осуществляли на мышах С Е, иноку1 лированных клетками лейкемии (2х10 ), путем

А+ внутривенной инъекции.

Лечение путем ввода препарата путем внутривенной инъекции или через рот через день после ввода опухолевого инокулума.

Среднее время выживания подвергнутых лечению

Ф%Ф мышей (среднее время выживания контрольных мьппей х 100) .

Определено по аутоптическим измерениям.

Составитель Г. Коннова

Техред Л.Олийнык Корректор В. Гирняк

Редактор М. Келемеш

Тираж 302

Заказ 1925

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r Ужгород, ул. Гагарина,101