Способ получения производных морфолинилдоксорубицина

 

Изобретение касается замещенйых гетероциклических веществ, в частности получения 3 -дeзaминo-3 -(4 -мop- )-5-иминoдoкcopyбицинa или З -дезамино- З (3 -циано-4 морфолинил)-5-иминодоксорубицина, обладающих противоопухолевой активностью, что может быть использовано в меди- 1щне. Цель - создание более активных и менее токсичных веществ указанного класса Их -синтез ведут реакцией соответствующего морфолинил-доксорубицина ГБ нем ОН-заместитель в группе С(0)СН20Н замещают п-метокситритиловой группой с помощью п-анизилхлордифенилметанаЗ с насыщени.1м аммиаком спиртовым раствором сначала при 1 ч, а затем при 26-27 ч. После удаления растворителя полученный 5-амино-14-эфир очищают колоночной хроматографией на силикагеле с использованием элюирукяцей смеси CHjOH (объемное соотношение 99:1, причем количество GHijOH возрастает до соотношения 90:10), После очистки удаляют защитную группу с помощью CHjCOOH или ледяной CFgCOOH при комнатной температуре и выделяют целевой продукт, содержащий CN-грушгу, или превращают его в хлоргидрат обработкой 0,1 Н. НС1. Новые вещества ингибируют лейкемию L-1210, Р-388, обеспечивая время выживания мышей до 157-160% в сравнении с контролем. 1 табл. О) 4ib :л о sl 4 :о

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСГЮБЛИК (1В (И) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н llATKHTY

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ,(21 ) 3 751 084/2 3-04 (62) 3624053/23-04 (22) 14.06.84 (23) 14.07.83 (46) 07.01.89. Бюл. М 1 (71) Сри Интернэшнл (118) (72) Кэрол Волкер Иошер, Дко1„,ж JIoy

Тонг и Эдвард Ик Интош Энтон ) (53) 547.455,07(088.8) (56) George L, Tong, Helen ии, Thomas Н. Smiths Аах .amyc; alogues, — Ль Ned. Chem., !979 г. 22, Н 8, р. 912-918, Патент CHlA 1!I 43012II7, кл, С 07 Н 15/24, опубл:ы. 1981. (54) СПЩОБ ПОЛУЧЕНИЯ П. ОИЗВОДНЫХ

ЮРФОЛИНИЛ-ДОКСОРУБИЦИНА (57) Изобретение касается замещенных гетероциклических веществ, в частности получения 3 -деэамино-3 -(4 -мор< I fI фолинил)-5-иминодоксорубицина или

3 -деэамино- 3 (3 -циано-4"-морфолинил)-5-,иминодоксорубицина, обладающих противоопухолевой активностью, что может быть использовано в медицине. Цель " создание более активных (504 С 07 Н 15 252 А 61 К 31 70 и менее токсичных веществ указанного класса. Их синтез ведут реакцией со1 ответствующего морфолинил-доксорубицина (a нем ОН-,заместитель в группе

С(О)СН ОН замещают и-метокситритиловой группой с помощью и-анизилхлордифенилметана1 с насыщенным аммиаком спиртовым раствором сначала при O C

1 ч, а затем при 3 С 26-27 ч. После удаления растворителя полученный

5-амино-14-эфир очищают колоночной хроматографией на силикагеле с использованием элюирующей смеси СН С1 "

СКЛОН (обьемное соотношение,,99:1, причем количество СНпРН возрастает до соотношения 90:10) . После очистки удаляют защитную группу с помощью

СН5СООН или ледяной CFgCOOH при комнатной температуре и выделяют целевой продукт, содержащий CN-группу, или превращают его в хлоргидрат обработкой 0,1 H. НС1. Новые вещества ингибируют лейкемию Ь-1210, P-388, обеспечивая время выживания мьппей до

157-160Х в сравнении с контролем.

1 табл.

1450749

Изобретение относится к способу получения новых производных доксорубицина общей формулы

ОН

5 сося он

OH где А - водород или циангруппа, обладающих провивоопухолевой актив- . .ностью

Цель изобретения — получение новых производных,доксорубицина, обладающих большей активностью и меньшей 25 токсичностью, чем известные даунорубицин и доксорубицин.

Пример 1. Получение 3 -дезН аиино-3 -(4 -морфолинил) -5-иминодоксо- рубицииа.

f 30

K раствору О;396 г 3 -дезамино3 -(4"-морфолинил)доксорубицина в

5 мл сухого пиридина добавляют

° 0,990 г п-анизилхлордифенилметана.

Смеси дают воэможность реагировать при комнатной температуре в темнотел в течение примерно двух дней. Раствор охлаждают в ледяной воде и добавляют 0,5 мл метанола. Смесь перемешивают в течение 2 ч и добавляют 0,5 мл4О метанола. Смесь перемешивают в течение 2 ч и добавляют к 50 мл разбавленного 6икарбоната натрия и экстрагируют метиленхлоридом. Экстракты концентрируют, получая смолообраэный 45 остаток, который растворяют в толуоле, концентрируют, растворяют в метиленхлориде и осаждают с помощью медленного добавления петролейного эфира. Осадок выделяют, повторно растворяют в метиленхлориде и осаждают смесью 2:1 петролейного эфира и диэтилового эфира, получая 14-О-и-анизилдифенилметил-3" -дезамино-3 -(4 -морфо(f линии)доксорубицина (ХТ) в виде аморфного твердого вещества с выходом

94X .

Вещество идентифицируется с помо,щью 90 МГц ЯМР в СДС1з.

Раствор 0,532 г 14-G-и-анизилдифенилметил-3 -дезамино-3 -(4 -морфоли1 1( нил)доксорубицина в 10 мл метиленхлорида добавляют к 30 мл метанола, насыщенного аммиаком, при О С. Смесь перемешивают при О С в течение 1 ч., а затем ее оставляют стоять при 3 С в течение 27 ч. Растворитель в реакционном продукте упаривают. Остаток растворяют в 4:1 смеси метиленхлорида и метанола и концентрируют. Операцию повторяют два раза, и твердое вещество растворяют в метиленхлориде, фильтруют через целит, концентрируют, растворяют в 1:2 смеси метиленхлорида и метанола и снова концентрируют .и сушат, получая 0,52 г (977) фиолетового остатка.

Полученный остаток растворяют в

2 мл метиленхлорида и наносят на

1,5х40 см силикагельную колонку и элюируют метиленхлоридом (50 мп), а затем смесью метиленхлорида и метано ла (99:1, 150 мл; 98:2, 150 мл; 9713 °

500 мл; 95:5, 100 мл; 93:7, 100 ив и 90:10, 200 мл). После 565 мл элиа ента отделяют фракцию 335 мл, фильм руют, упаривают и получают 59,9Х нанесенного образца в виде единственного вещества. Это вещество идентифицируется как 14-О-и-анизилдифеиилметил"3 -дезамино-3 †(4 -морфолинил)-5-иминодоксорубицин по данным

90 МГц ЯМР.

Образец 0,341 г полученного продукта растворяют в 20 мп 80Х-ной уксусной кислоты, и раствор перемешивают в темноте в течение 7 ч. Раствор затем разбавляют 50 мл воды и экстрагируют три раза хлороформом.

Водную фазу, содержащую требуемый продукт, лиофилизуют в темноте, получая 0,294 r твердого вещества, которое растворяют в 0,1 н. уксусной кислоте. Раствор промывают хлороформом, подщелачивают бикарбонатом натрия и экстрагируют хлороформом, Требуемый продукт переходит в органическую фазу, которую промывают, сушат, фильтруют и концентрируют, Остаток растворяют в смеси хлороформа и метанола (1:10), концентрируют и сушат, получая 0,228 г 3 -дезамино-3 (4 морфолинил)-5-иминодоксорубицина.

Идентичность вещества подтверждается данным ЯМР 300 МГц и элементным анализ ом

3 14507

Пример 2. Получение аддитивной соли кислоты.

Продукт в виде свободного основа- ния примера I суспендируют в 20 мп воды. Смесь перемешивают, медленно добавляют 3,2 мп 0,1 í. Htl с получением рН 4,5. Суспендированное твердое вещество постепенно растворяется.

Раствор лиофилизуют в темноте, полу- 10 чая аддитивную соль кислоты — гидро хлорид 3 -деэамино-3 -(4" -морфолинил)-5-иминодоксорубицина с чистотой

97Х по данным анализа HPLC, Вычислено, Х: С 54,35; Н 6,03;

Cl 5 17; N 4,09.

C g) Hg tt Ng 0t, HC1 2Н О

Найдено, Х: С 54,20; Н 5,96;

Cl 4,33; N 4,03.

Пример 3. К раствору 0,241 г 20

3 -дезамино-3 - (3" -циано-4"-морфолиt ( нил)доксорубицина в . 4 мп сухого пиридина добавляют 0,587 г и-анизилхлордифеиипметана. Раствор перемешивают при комнатной температуре в тем- 25 ноте в течение 44 ч. Реакционную смесь охлаждают, разбавляют 0,5 мп метанола, перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч,.а затем добавляют к 50 мп разбавленного би- 30 карбоната натрия и экстрагируют метиленхлоридом. Экстракты концентрируют, остаток растворяют при медленном добавлении 40 мп диэтилового эфира,получая 0,333 г (97X) )4-0-и-анизилдифенилметил-3 -дезамино-3 -(3— ( циано-4 -морфолинил)доксорубицина.

90 МГц ЯИР СДС1, 8, 13,84 (с., 6-ОН) 12,99 (с., 11-ОН); 7,82 (д., 40

1-Н) 6, 70-7, 75 (м., 2-Н, З-Н, тритил-арил); 5,42 (шир. с., 1 -Н); 5,08 (шир. с., 7-Н); 4,45 (шир. с., 2, 14HQ); 4,)9 (с., 9-ОН); 4,00 (с., ОСН ); 3, 79 (с., ОСН ) ð 3,30-4, 15

1,60-3,10 (м., 2 -Н, 8-Н, 5 -Hq

10-Н, З -Н); 1,13 (д., 6 -Hg).

Раствор 0,369 г 14-О-и-анизилдифенилметил-3 -дезамино-3 -(Зн-циано- б0

4 -морфолинил)доксорубицина в 8 мп метиленхлорида добавляют к 25 мп метанола, насыщенного аммиаком, при

0 С. Смесь перемешивают при 0 С в течение 1 ч, а затем ее оставляют стоять при 3 С-в течение 26 ч. Реак ционную смесь упаривают до полного удаления аммиака и получают 0,376 г фиолетового остатка.

49

Остаток в 1,5 мп метиленхлорида наносят на силикагельную колонку размером 1„5х28 см (200-400 меш) и элюируют метиленхлоридом (50 мп) а затем смесью метипенхлорида и метанола (99:1, 20 мл, 98:2, 300 мп, 97: 3, 100 мп, 95:5, 100 мп и 90:10, 200 мп).

После сбора 360 мп начального элюата

125 мл фракции упаривают, получая

0,203 r 14-0-п-анизилдифенилметил-3— дезамино-3 -(3 -циано-4" -морфолинил)-

It

5-иминодоксорубицина.

Образец в 0 ° 158 г полученного остатка охлаждают до OOC и растворяют в 8 мп охлажденной льдом 50Х-ной трифторуксусной кислоты. Раствор перемешивают прн ООС в течение 2 мин, а затем выливают в !00 мл ледяной воды. Водную смесь экстрагируют хлороформом (4х10 мл), объединенные экстракты промывают разбавленным бикарбонатом натрия и водой, сушат над сульфатом натрия, фильтруют через целит и упаривают. Остаток растворяют в 3 мл смеси хлороформа и метанола (4:)), раствор перемешивают, по каплям добавляют 25 мп эфира. Получающийся в результате остаток собиI рают,получая 0 093 r 3 -дезамино-3— (3 -циано-4 -морфолинил)-5-иминодоксорубицина.

Анализ HPLC и 300 ИГц ЯИР указывает на то, что данное вещество представляет собой диастереоиэомерную смесь. Анализ HPLC на.колонке Уотерс

Радиал-Пак С-18 с использованием смеси 0,.05 И рН 4 цитратного буфера и метанола (40:60) показывает пики при

18,4 и 25,0 мин в соотношении 69:3) °

Спектр 300 ИГц данного продукта пока. зывает два резонанса для 1-Н, 2-Н, 3-H, lt -Н, 7-Н, 14-Hg 9-0Н, ОСН9, 10А-Н и 6 -Н протонов.

300 ИГц ЯИР СДС1,,d : 15,61 (c. °

11-ОН); 13,74 (д., 6-ОН); 9,27 (д. ° .

НН); 8,21 и 8,)9 (2 д,, 1-Н) ° 7,73 и 7,72 (2 т., 2-Н)1 7,33 и 7,32 (2 д., 3-Н); 5,77 и 5,72 (2 д., )"«H)»

5,4)„и 5,38 (2 м., 7"Н); 4,79 и 4,77 (2 с., 14-Н ); 4,72 и 4,66 (2 с., 9-ОН); 4,15 и 4,14 (2 с., ОСН );

4,04 (м., 5 -H) 3,97 (м., 3 -8, 2" В-H); 3,75 (м., бн -Hg, 4 -Н);

3 59 (м, 2 " -H); 3,23 (д )ОВ-Н) °

3,03 (м., )ОА-Н, 3 -H);ð 2,72 (м,, 5"-HC1); 2,33 .(м., 8В-Н); 2,!4 (и., 8А-Н); 1,85 (м., 2 -Но); ),38 и ) 37 (2 д., 6 -Н ) °

1450749 6 где А — водород или цианогруппа, отличающийся тем, что соединение общей формулы

Н3 где А — имеет укаэанные значения, а оксигруппа в СО-СН ОН-группе защищена неустойчивой умеренно кислотной защитной группой, такой как п-метокси-тритиловая группа, подвергают взаимодействию при температуре О С в течение ч и затем при температуре З С в течение 26-27 ч с насыщенным аммиаком спиртовым раствором с получением сырого 5-амино-14-эфира, который после удаления растворителя подвергают очистке колоночной хроматографией на силикагеле с использованием в качестве элюирукицей системы. смеси CHgCly"СН ОН/99:1 V/V с возрастающим количеством СН ОН до 90:10

V/Ó, получая чистый 5-амико-14-эфир, который для удаления вышеупомянутой неустойчивой умеренно кислотной защитной группы в 14 положении обрабатывают уксусной кислотой или ледяной трифторуксусной кислотой при комнат= ной температуре, получая целевой продукт в виде свободного основания, которое выделяют, когда А = CN или, если А = Н, превращают в его хлоргидрат путем обработки 0,1 н. хлористо-водородной кислотой. мулы ОН pe

1 .ОН

К Р ОИ

УФ-Вис (СНЭОН) маркс,, 221 нм (8 31000), 252 (32900), 307 (7100), 520 плечо (9110), 55! (17400), 592 (20700), ДС1-ЕС и/е 638 (М Н), 611 р 0Н (M H-HCN). СОСИСОК

Вычислено, %.: С 58,62, Н 5,69;

ОН

N 6,41.

C HggN gO

Найдено, %: С 58,79; Н 5,47, О

N 6,30. 0

Соединения изобретения обладают СН3 полезностью в качестве противоопухо- НО левых агентов для млекопитающих Данная активность подтверждается данны- 15 РуА ми исследований in vivo u in vitro.

Среднее время выживания различных О обработанных мышей определяется и сравнивается с временем для мьппей, инокулированных лейкемийной асцитной 20 жидкостью, но которым не дается никакого лечения испытываемыми соединениями. Данные, полученные таким образом, представлены в таблице. Дан. ные представлены в виде величин Т/С, которые представляют собой время выживания обработанных мьппей, деленное на время выживания контрольных.и умноженное на 100. В таблице даются также уровни дозировки различных сое 30 динений, которые наблюдаются для получения наилучших результатов улучшения времени выкивания. Формула изобретения

Способ получения производных морфодинил-доксорубицина общей фор

1450749

Активность против лейкемии Р-388 у мыши

Клетки лейкемии Ь-1210

Соединение

Оптимальная доза (g dl),мг/кг

Ингибирование синтеза, БДИ мкгм

РНК

252 7,5 внутрибршшинно

l,5 0,58 160

Доксорубицин 193 2,0 внутрибрвшинно

2,6 1,3

166 2,5 внутривенно

>215 4,0 внутрибрвшинно

0,5 . 165 0,8 внутрйбрюшинно

157

Составитель Г. Коннова

Редактор Н. Бобкова Техред M. Õoäàíé÷ Корректор Г. Решетник .

Заказ 6983/59 Тиран 348 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Уаушская наб,, д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ушгород, ул. Проектная, 4

3 -деамино-3 -(4"— морфолинил (-5-иминодок сорубицин

3 -деамино-3--(4—

У (,морфолинил-3" -цнано )j5-иминодоксорубицин 0,031 0,047

Время выживания э

Т/С, Х

Оптимапьн доза (g 4d

5,9),. мг/кг

Время вышиванияя, T/Ñ, Х