Способ отделения трипаносом от форменных элементов крови

 

Изобретение относится к экспериментальной ветеринарии, в частности к способам выделения трипаносом из крови инвазированных животных для приготовления биологических препаратов. Целью изобретения является повышение выхода паразитарной массы. Кровь гепаринизируют, смешивают с забуференным физиологическим раствором, при рН 7,0-7,2, наслаивают на расл воры сахарозы молярностью 1,75 и 1,46. центрифугируют при 1000- 1200 об/мин 5-10 мин, отделяют трипаносомы и промывают от сахарозы забуференным физиологическим раствором центрифугированием при 2500-3000 об/мин в течение 5-10 мин.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

1 !

6д

Ф (d

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4608045/15 (22) 17.08.88 (46) 28.02.91. Бюл. ¹ 8 (71) Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт Восточного отделения ВАСХНИЛ (72) М.С.Сабаншиев, Л.Г.Косиченко и

А.К.Жумагулов (53) 616,937,5(088,8) (56) Хочоян В,Н„Налбандян Е.С. Флотация и отделение трипаносом от форменных элементов крови, — Айясгани гексапанасанантес, 1967, № 2, с.99-101. (54) СПОСОБ ОТДЕЛЕНИЯ ТРИПАНОСОМ

ОТ ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕНТОВ КРОВИ

Изобретение относится к экспериментальной ветеринарии, в частности к способам выделения трипаносом из крови инвазированных животных для изготовления биологических препаратов.

Цель изобретения — повышение выхода паразитарной массы.

Пример, В опыте были использованы

3 группы белых мышей, по 10 в каждой, Мышей заражали лабораторным штаммом возбудителя случной болезни лошадей и на пике паразитемии (200 — 300 параз;". ов в 1 поле зрения микроскопа) брали от них кровь.

Отделение трипаносом от форменных элементов крови мышей!группы проводили по общипринятому методу, включающему фильтрацию и многократное центрифугирование крови при 2000 — 3000 об/мин в течение 15 — 20 мин. Выход паразитарной массы составил 50%, причем оказалось невозмож Ж 1631431 А1 (57) Изобретение относится к экспериментальной ветеринарии, в частности к способам выделения трипаносом из крови инваэированных животных для приготовления биологических препаратов. Целью изобретения является повышение выхода паразитарной массы. Кровь гепаринизируют, смешивают с забуференным физиологическим раствором, при рН 7,0 — 7,2, наслаивают на растворы сахарозы молярностью 1,75 и 1,46, центрифугируют при 10001200 об/мин 5 — 10 мин, отделяют трипаносомы и промывают от сахароэы забуференным физиологическим раствором центрифугированием при 2500-3000 об/мин в течение 5 — 10 мин. ным полностью отделить трипаносомы от форменных элементов крови.

Отделение трипаносом из крови мышей

2 группы проводили по методу-прототипу.

Метод позволяет получить концентрат трипаносом почти в плотном виде, но для этого необходимо многократное центрифугирование при 6000 — 8000 об/мин во флотационной жидкости. Выход паразитов составил также 50% с примесью форменных элементов крови.

Отделение трипаносом от форменных элементов крови мышей 3 группы проводили по предлагаемому нами способу следующим образом. 10 мл гепаринизированной крови белых мышей, содержащей 1-2 10 паразитов, смешивали с равным обьемом забуференного физиологичесокго раствора (ЗФР) рН 7,2. В центрифужную пробирку обьемом 10 мл вносили 2 мл 1,75 M раствора сахарозы, сверху наслаивали такое же коли1631431

Сравнительная оценка эффективности способов

Составитель И.Марченко

Техред М.Моргентал Корректор М.Максимишинец

Редактор М.Товтин

Заказ 541 Тираж 406 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж -35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 чество 1,46 М раствора сахарозы, На градиент осторожно наносим 4 мл разбавленной крови, пробирки помещали в центрифугу с вертикальным ротором и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 мин, 5

Трипаносомы концентрировались между слоем эритроцитов и плазмы, образуя белое кольцо. Паразитарную массу осторожно отсасывали и отмывали от раствора сахарозы ЗФР при 3000 об/мин в течение 10

5-10 мин. Выход паразитов составил 80907;, без примесей форменных элементов крови.

Проведенные испытания данного способа показали его высокую эффективность, 15

Были проведены сравнительные испытания известных и предложенного способов в лабораторных условиях.

Результаты исследований показали, что 20 при использовании известных способов выход параэитарной массы составил 50-607ь, полностью отделить трипаносомы от форменных элементов крови не удалось, При использовании предлагаемого способа выход паразигарной массы составил 80 — 90,. сравнительно чистой паразитарной массы.

Результаты приведены в таблице.

Применение предлагаемого способа в ветеринарной паразитологии позволит получить эффект выхода 90 -ной паразитарной массы для получения антигена.

Формула изобретения

Способ отделения трипаносом от форменных элементов крови, включающий центрифугирование крови, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения выхода паразитарной массы, кровь предварительно гепаринизируют, смешивают с равным объемом забуфереиного физиологического раствора рН 7,0 — 7,2, наслаивают на растворы сахарозы с молярностью 1,75 и 1,46, центрифугирование проводят при 1000 — 1200 об/мин в течение 5 — 10 мин, затем трипаносомы отмывают от сахароэы забуференным физиологическим раствором центрифугированием при 2500-3000 об/мин в течение

5 — 10 мин,