Способ подготовки препарата нервных волокон мышечной ткани для люминесцентной микроскопии

 

Изобретение относится к медицине, а именно к морфологии. Целью изобретения является повышение качества способа за счет лучшей сохранности нервных терминален. Цель достигается инкубацией ткани в течение 10-10,5 мин в среде, содержащей глицерин (20-22 мас.%), АТФ (0,02- 0,025 мас.%), аспаргинат магния (0,1 - 4,5 мас.%) и буфер Хенкса (рН 7,3-7,35). Готовят срезы, которые повторно инкубируют в среде без глицерина в течение 10-10,5 мин. Способ позволяет выявить нервные терминали 1,5-2 мкм в диаметре. (О

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

flQ ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4401787/14 (22) 31.03.88 (46) 23.03.91. Бюл. № 11 (71) Ижевский государственный медицинский институт и 2-й Московский государственный медицинский институт им. Н. И. Пирогова (72) А. В. Исаев, В. М. Чучков, В. Н. Ярыгин и А. В. Кузин (53) 616-0.89.9 (088.8) (56) Архив анатомии, гистологии и эмбриологии, 1987, 93, 10, 91, Швалев В. Н. и др.

Улучшение гистохимического выявления адренергических нервных элементов в растворе глиоксиловой кислоты.

Изобретение относится к медицине, а именно к морфологии, и может быть использовано для выявления катехоламин содержащих структур адренергических сплетений в биопсийном материале различных органов и тканей.

Цель изобретения — повышение качества способа за счет лучшей сохранности нервных терминалей.

Способ осуществляют следующим образом.

Биоптат исследуемой мышечной ткани объемом 0,20 — 0,25 см, содержащей нервные волокна, инкубируют 3 — 3,5 мин в буферном .растворе Хенкса, при 1=2 — 4 С (рН 7,3 — 7,35), в который добавляют криопротектор, в качестве которого берут глицерин, а также модулятор, в качестве которого выбирают аденозинтрифосфорную кислоту, а также флюорограф, при следующих соотношениях компонентов, мас.%: . Глицерин 20 — 22

АТФ 0,02 — 0,025

„„Я1)„„ 16367 8 (51)5 G 01 N 1/28, А 61 В 10/00 (54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПРЕПАРАТА НЕРВНЫХ ВОЛОКОН МЫШЕЧНОЙ

ТКАНИ ДЛЯ ЛЮМИНИСЦЕНТНОЙ МИКРОСКОПИИ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к морфологии. Целью изобретения является повышение качества способа за счет лучшей сохранности нервных терминалей.

Цель достигается инкубацией ткани в течение 10 — 10 5 мин в среде, содержащей глицерин (20 — 22 мас.%), АТФ (0,02—

0,025 мас.%), аспаргинат магния (0,1—

4,5 мас.%) и буфер Хенкса (рН 7,3 — 7,35).

Готовят срезы, которые повторно инкубируют в среде без глицерина в течение

10 — 10,5 мин. Способ позволяет выявить нервные терминали 1,5 — 2 мкм в диаметре.

Аспаргинат 0,1 — 4,5 магния 0,1 — 4,5

Буфер Хенкса Остальное

Способ осуществляют следующим образом.

Биоптат инкубируют 3 — 3,5 мин в буферном растворе Хенкса, в который добавляют криопротектор и флюорофор при 1=2 — 4 С (рН 7,3 — 7,35), затем биоптат замораживают и изготовляют с помощью криомикротома замороженные срезы, которые повторно помещают в буфер Хенкса без криопротектора и инкубируют в течение 10 — 10,5 мин, Добавление к стандартному раствору

Хенкса АТФ до замораживания обусловлено ее влиянием на обратный захват катехоламинов нервными терминалями и предупреждением диффузии последних в окружающие ткани.

Пример 1. Биоптат прямой мышцы живота объемом О,1 см" погружают на 3 мин в холодный раствор Хенкса при 2 С, (рН 7,3 — 7) с концентрацией аспарагината

1636718

Формула изобретения

Составитель Л. Стебаева

Редактор Л. Зайцева Техред А. Кравчук Корректор Т.Малец

Заказ 810 Тираж 398 Подп исное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат «Патент», г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 магния 0,10 мас., АТФ 0,020 мас. Я и глицерина 2,0 мас.Я. Остальное буфер

Хенкса. Затем биоптат замораживают в жидком азоте, хранят в нем до исследования.

Замороженные срезы толщиной 20 мкм монтируют на стекле и повторно инкубируют в буфере Хенкса (рН ? 3), содержащем

0,020 мас.Я натриевой соли АТФ и 4,0 мас.Я аспарагината магния в течение 10 мин при комнатной температуре. В последующем после двухкратного ополаскивания в буфере

Хенкса стекла сушат под струей теплого воздуха 10 мин, заключают в полистирол и исследуют в люминисцентном микроскопе используя светофильтры ФС-1,4, СЗС-24,4

БС-2,8.

Адренергические нервные претерминали и терминали образуют на мышечных волокнах тонкие ветвистые сплетения в желто-зеленом цвете. Выявляются нервные терминали диаметром 1,0 — 1,5 мкм.

Пример 2. Биоптат большой грудной мышцы объемом 0,25 смз погружают на

3,5 мин в холодный буферный раствор

Хенкса при 3 С (рН 7,3) с концентрацией аспарагината магния 0,125 мас.Я, АТФ

0,025 мас. и глицерина 22 мас. Я, остальное буфер Хенкса. Затем биоптат замораживают в жидком азоте и изготавливают на кри опто ме замороженные срезы толщиной 22 мкм, которые монтируют на стекле и повторно инкубируют в буфере

Хенкса (рН 7,3). В последнем содержится

0,025 мас.Я АТФ и 4,5 мас. Я аспарагината магния. Инкубацию осуществляют в течение 10,5 мин при комнатной температуре.

После двухкратного ополаскивания в буфере

Хенкса стекла сушат струей теплого воздуха 10 мин, заключают в полистирол и исследуют в люминисцентном микроскопе используя светофильтры ФС-1,4, СЗС-24,4, БС-2,8.

Адренергические нервные претерминали и терминали образуют на мышечных волокнах вдоль кровеносных сосудов тонкие ветвистые сплетения, флюоресцирующие желтозеленым цветом. Выявляются нервные терминали с размером в поперечнике 0,001—

10 0 0015 мм.

Способ позволяет выявить нервные терминали диаметром 1,5 — 2 мкм, что позволяет в полном объеме выявлять нервные сплетения в мышечной ткани.

Способ подготовки препарата нервных волокон мышечной ткани для люминисцентной микроскопии, путем инкубации в среде, 20 содержащей раствор Хенкса, криопротектор и флюорограф, с последующим приготовлением замороженных срезов и повторной их инкубацией в той же среде без криопротектора, отличающийся тем, что с целью повышения качества препарата за счет лучшей сохранности нервных терминалей, повторную инкубацию проводят в течение 10—

10,5 мин, при этом среда дополнительно содержит АТФ, а в качестве криопротектора используют глицерин и флюорографааспаргинат магния при следующих соотношениях компонентов, мас.g>..

Глицерин 20 — 22

АТФ 0,02 — 0,25

Аспаргинат магния 0,1 — 4,5

Буфер Хенкса Остальное