Способ определения эндотоксикоза

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Изобретение относится к медицине и касается способов определения эндотоксикоза у больных различного профиля. Целью изобретения является повышение точности определения. Для этого белки сыворотки крови фракционируют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. При наличии в составе белков сыворотки крови фракции полипептидов с мол. мас. 9 кД определяют эндотоксикоз. Способ позволяет значительно повысить точность диагностики заболеваний.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 G 01 N ЗЗ/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ сти (21) 4480719/14 (22) 06.09.88 (46) 15.07.91, Бюл. М 26 (71) Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова (72) И.М. Макаршев, Н.Е. Ястребова, С.С.

Николаевских1 и Ж.К. Вовк (53) 615,475(088.8) (56) Габриелян H.È, и Липатова В.И. Клиническая медицина, 1981, N. 10, с. 138-140, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОТОКСИ КОЗА

Изобретение относится к медицине и касается способа определения эндотоксикоза у больных различного профиля.

Цель изобретения вЂ” повышение точноСпособ осуществляется следующим об разом.

Готовят 10%-ный полиакриламидный гель (ПААГ). К 20 мл 30%-íoão водного раствора акриламида приливают 15 мл 1,5 М трис-НО буферного раствора с рН 8,8, Добавляют 24,7 мл дистиллированной воды.

0,3 мл 1%-ного персульфата аммония и 20 мкл тетраметилдиамина (ТЕМЕД). Смесью заливают промежуток между двумя стеклами стеклянных пластин для вертикального элетрофореза и дают заполимеризоваться.

Приготовленной смеси достаточно для пол учения двух полиакриламидных пластин.

Готовят концентрирующий гель. К 2,66 мл 30%-ного акриламида прибавляют 5 мл

0,5 М трис-HCI буферного раствора с рН 6,8, 12.2 мл дистиллированной воды, 100 мкл

1%>-ного персульфата аммония и 10 мкл ТЕМЕД. В оставшееся между стеклами пространство с 10%-ным tlAAI заливают

„„ЯЦ „„1662678 А1 (57) Изобретение относится к медицине и касается способов определения эндотоксикоза у больных различного профиля. Целью изобретения является повышение точности определения. Для этого белки сыворотки крови фракционируют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. При наличии в составе белков сыворотки крови фракции полипептидов с мол.мас. 9 кД определяют эндотоксикоз. Способ позволяет значительно повысить точность диагностики заболеваний. приготовленную смесь и дают ей заполимеризоваться. Предварительно в это пространство вставляют "гребенку". После того, как гель заполимеризуется. "гребенку" вынимают, В геле остаются лунки для образцов.

Готовят образцы для анализа, К 1 мл сыворотки больного добавляют 0,5 мл 10 ° Ъ ной ТХУ, выпавший осадок отделяют центрифугированием, а супернатант используют О для анализа, Перед анализом к 100 мкл су- СЬ пернатанта добавляют 12 мкл глицерина. Я

Проведение электрофореза, Две пласти- Ос ны помещают в камеру для вертикального с электрофореза. Верхний и нижний сосуды камеры заполняют трис-глициновым буферным раствором (0,025 M) с рН 8,3-8,5, содержащим 0,10 додецилсульфата натрия.

Подготовленные образцы вносят под буфером в лунки концентрирующего геля в количестве 100 мкл. Стандартные растворы белков вносят аналогичным образом. Обычно в качестве стандартов используют готовые смеси, содержащие белки с мол. м. 9 кД.

Злектрофорез проводят в приборе для вертикального электрофореза. Условия элект1662678

Формула изобретения

Составитель Э. Цыганов

Техред М,Моргентал Корректор M. Кучерявая

Редактор M. Келемеш

Заказ 2220 Тираж 414 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 рофореза: длительность 3 вЂ” 4 ч, напряжение

180 В, сила тока 50-55 мА.

Фиксация, окраска, отмывка геля и анализ результатов, После окончания электро фореза гель освобождают из стеклянных 5 пластин и помещают для фиксации в 15 ную ТХУ на 2 ч. После фиксации пластины окрашивают в 1 -ном растворе кумаси R, приготовленном на смеси вода: уксусная кислота (1:1) в течение 18 ч при комнатной 10 температуре или 2 вЂ” 3 ч при 37чС, После окраски пластины отмывают в растворе, содержащем уксусную кислоту, метанол и воду в соотношении 2;7:10, добиваясь бледно-голубого фона. Последняя порция от- 15 мывки должна содержать 10 глицерина.

Отмытые пластины высушивают между двумя слоями целофана под прессом. При визуальной оценке результатов определяют наличие на пластинах окрашенных полос 20 полипептидов с мол, м. 9 кД. Просушенные пластины можно денситометрировать. В этом случает по величине пиков, принадлежащих белковым фракциям е мол. м, 9 кД, определяют активность процесса, 25

Пример 1. Больной К,70 лет. Поступил с жалобами на боль в области сердца.

Диагноз при поступлении: ишемическая болезнь сердца. При обследовании с помощью предлагаемого способа обнаружена 30 фракция полипептидов с мол. м 9кД, что свидетельствует о наличии эндотоксикоза, При отсутствии жалоб и удовлетворительном состоянии после проведения лечения больной переведен в общестоматическое от- 35 деление. Однако через 3 сут у больного развился острый трансмуральный инфаркт миокарда.

Пример 2. Больной П, 52 года, Поступил с жалобами на боль в эпигастрии, 40 похудания. Диагноз при поступлении: рак желудка, До и после операции в сыворотке крови четко определяли наличие фракций полипептидов с мол. м. 9 кД, что свидетельствует о наличии эндотоксикоза, нарастала сердечно-легочная недостаточность. Патологоанатомический диагноз: правосторонняя бронхопневмония, несостоятельность операционных швов, гнойный медиастенит.

Пример 3. Больной 3, 20 лет. Поступил с жалобами на схваткообразные боли в животе, слабость, тошноту. Диагноз при поступлении: острая кишечная непроходимость, При обследовании по предлагаемому способу обнаружена фракция полипептидов с мол. м. 9 кД, что свидетельствует о наличии эндотоксикоза. Больной оперирован, Диагноз: прободная язва двенадцатиперсной кишки, разлитой гнойный перитонит. При выздоровлении содержание полипептидов с мол. м.9 кД в сыворотке крови снижалось до их полного изчезновения.

Таким образом, наличие в сыворотке крови фракции полипептидов с мол. м. 9 кД с высокой степенью точности свидетельствует об эндотоксикоэе и имеет не только диагностическое, но и прогностическое значение, Способ определения эндотоксикоза путем клинико-лабораторного обследования, о тл и ч а ю щи и с я тем, что, с целью повышения точности, дополнительно определяют фракционный состав полипептидов сыворотки крови с помощью электрофореза в полиакриламидном геле и при наличии фракции с мол. м. 9 кД определяют эндотоксикоз.

Способ определения предельно допустимых концентраций (пдк) соединений металлов в атмосферном воздухе населенных мест // 1660681

Изобретение относится к медицине, точнее к гигиене, в частности к токсикологии, и может быть использовано для нормирования соединений металлов в атмосферном воздухе населенных мест путем регистрации биохимических показателей в биологических жидкостях подопытных животных

Способ определения содержания продуктов деградации фибрина в плазме // 1659855

Изобретение относится к медицине, в частности к способам определения компоИзобретение относится к медицине и может быть использовано научно-исследовательскими и клинико-диагностическими лабораториями для изучения состояния гемостаза при различных воздействиях, а также у больных

Способ определения локализации очага поражения ткани поджелудочной железы // 1659852

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургическим заболеваниям органов брюшной полости

Способ определения мембранотоксического действия химических веществ // 1659851

Изобретение относится к медицине, медицинской и микробиологической промышленности , экологии, а именно к методам исследования и количественной оценки потенциальной опасности химических веществ , и может быть использовано в токсикологии для установления предельной концентрации мембранотоксического действия химических соединений, в промышленной гигиене для определения предельно допустимого уровня токсических веществ в окружающей среде

Способ определения инфицированности желудка самрylовастеr pyloridis // 1659850

Изобретение относится к области медицины , а именно гастроэнтерологии

Способ определения токсичности веществ // 1659849

Изобретение относится к биологии, медицине

Способ прогнозирования течения и определения показаний к хирургическому лечению состояний, связанных с гиперфункцией селезенки при циррозе печени // 1659848

Изобретение относится к области медицины , в частности к гепатологии

Способ подготовки пробы лейкоцитов для цитологических исследований // 1659847

Изобретение относится к области цитодиагностики и может быть использовано в экспериментальной и клинической медицине

Способ дифференциальной диагностики активной стадии и ремиссии латентного хронического гломерулонефрита // 1658093

Изобретение относится к медицине, в частности к нефрологии, и касается вопросов диагностики гломерулонефрита

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750