Способ иммунизации животных

 

Изобретение относится к иммунологии и ветеринарной вирусологии. Целью изобретения является повышение иммуногенности противовирусных вакцин. Для этого используют в качестве иммуностимулятора суспензии микроконидий грибов-дерматофитов, выбранных из группы Trichophyton verrucosum (ВГНКИ № 130, 130Л и 153) или Trichophyton mentagrophytes (ВГНКИ №

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 А 61 К 39/39,39/12

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4727529/13 (22) 04 08,89 (46) 15.09.91, Бюл. М 34 (71) Всесоюзный государственный научноконтрольный институт ветеринарных препаратов (72) И.И.Жарков, О.И.Сухарев, В.В.Гуненков, А.E.Çåëåíîâ, Г.Д.Кузнецова и С.В.Ласский (53) 576.8.093.2 (088.8) (56) Патент США М 3849551, кл. 424-88,1979.

Кашкина M.À. и др. Иммуномодулирующая активность полисахаридов. Микология и фитопатология, т. 19, в. 4, с. 345, 1985.

Изобретение относится к иммунологии и ветеринарной вирусологии.

Цель изобретения — повышение иммуногенной активности противовирусных вакцин.

Пример 1. Для осуществления способа культуру грибов Trichophyton verrucosum или Trichophyton

mentagrophytes выращивают на поверхности сусло агара, рН 6,4 — 6,8, в стеклянных колбах или матрах в течение 10-20 дней при 26 С, после чего ее смывают или снимают скребками с поверхности агара, из мельчают в стерильном гомогенизаторе до получения суспензии микроконидий, и при необходимости лиофилизируют в ампулах.

Концентрацию микроконидий в суспензии определяют подсчетом клеток гриба в камере Горяева. Жизнеспособность спор определяют по количеству выросших коло„„5U 1676629 А1 (54) С П О С О Б ИММУНИЗАЦИИ ЖИВОТНЫХ (57) Изобретение относится к иммунологии и ветеринарной вирусологии, Целью изобретения является повышение иммуногенности противовирусных вакцин. Для этого используют в качестве иммуностимулятора суспензии микроконидий грибов-дерматофитов, выбранных из группы Trichophyton

verrucosum (ВГНКИ М 130, 130Л и 153) или

Trichophyton mentagrophytes (ВГНКИ М

135). При этом на одну прививочную дозу вакцины используют суспензию, содержащую 4,0-8,0 млн, живых спор. 4 табл.

Ф ний на сусло агаре в чашках Петри, засеянных культурой гриба.

Иммунизацию крупного рогатого скота против парагриппа — 3(ПГ-3) проводят аей путем введения живой вакцины ПИ-3, ко- 0 торую предварительно ресуспендируютдо 4 рабочего разведения (доза 2 мл) и смеши- { Ь вают с микроконидиями штамма 0с, Т.verrucosum ВГНКИ М 130Л из расчета 8 млн. живых грибных клеток в одной дозе О вирусвакцины.

Трем(1, 2 и 3) группам телят(по 10 голов, в группе) полученный биопрепарат вводят внутримышечно, двукратно с интервалом соответственно 10, 20 и 30 дней. Для контроля в те же сроки иммунизируют по 5 телят вакциной против ПГ-3 без добавления микроконидий гриба. Титры антител к вирусу возбудителю ПГ-3 в сыворотках крови телят определяют в РТГАдо иммунизации и в раз1676629 ные сроки после второй инъекции антигенов. Результаты серологических исследований, представленные в табл. 1, показывают, что у телят, иммунизированных по предлагаемому способу, титры специфических антител в сроки от 10 сут. до 1 года после иммунизации существенно выше (на 0,5—

1,5 logy), чем у телят, иммунизированных известным способом только вакциной против ПГ-Ç.

Пример 2, К вакцине против ПГ-3 перед применением добавляют микроконидии штамма Т.verrucosum ВГНКИ N. 130 из расчета 6,0 млн живых спор в одной дозе вирусвакцины.

Трем (1, 2 и 3) группам кроликов (по 5 животных в каждой) вводят полученную смесь внутримышечно, двукратно с интервалом 10, 20 и 30 сут, Кроликов трех контрольных групп (4, 5 и 6) в те же сроки вакцинируют вакциной против ПГ-3 без добавления микроконидий гриба, Кроликам еще трех групп (7, 8 и 9) дважды, соответственно через 10, 20 и ЗО сут, вводят только микроконидии в дозе 20 млн. кл.

Титры антител к вирусу возбудителю парагриппа в сыворотках крови кроликов определяют в РТГА до вакцинации и в разные сроки после второй инъекции антигенов. Результаты представлены в табл, 2.

Данные табл. 2 показывают, что у животных, иммунизированных по предлагаемому способу вакциной против ПГ-Ç, содержащей микроконидии штамма N 130, титры специфйческих антител, спустя 10—

ЗО дней после второй инъекции препарата на 1 — 2 logy выше, чем у кроликов, вакцинированных известным способом только вакциной против ПГ-Ç, П р.и м е р 3, Для иммунизации кроликов против микосматоза вирус-вакцину из штамма В-82 вируса миксомы после ресуспендирования до рабочего разведения—

10 ИДьоумд смешивают с микроконидиями лиофилизированного штамма Т verrucosum

ВГНКИ N 153 иэ расчета 4 млн, живых микроконидий в одной дозе вирусвакцины.

Шесть кроликов иммуниэируют введением этой смеси внутримышечно однократно. Еще шести кроликам вводят также внутримышечно однократно вакцину против миксоматоза в дозе 10 ИДя!vn без добавления микроконидий.

До иммунизации в сыворотках крови всех кроликов антитела к вирусу миксомы в реакции диффузионной прециаитации не выявлялись.

На 7-й, 14-й и 21-й дни после иммунизации по 2 кролика иэ каждой группы и двух контрольных неиммуниэированных эаража5

55 ют вирусом миксомы с целью определения сроков формирования и напряженности противовирусного иммунитета, Перед заражением у кроликов берут кровь для определения титра антител в

И ФА (иммуноферментный анализ).

Эффективность иммунизации оценивают по индексу защиты, представляющего собой степень снижения титра контрольного вируса миксомы на вакцинированных животных no:ñðàâíåíèþ с титром того же вируса на неиммунизированных кроликах.

Индекс защиты от Çig и выше свидетельствует о формировании напряженности иммунитета у иммунизированных кроликов, Результаты, представленные в табл. 3, показывают, что добавление к вакцине против миксоматоза кроликов микроконидий

Тлеггцсоыт N 153 стимулирует антителообразование, ускоряет формирование иммунитета и усиливает его напряженность, Пример 4. К живой вакцине против миксоматоза кроликов из штамма В-82 в рабочем разведении 31 ИДso мл добавляют микроконидии гриба Т.mentagrophytes

ВГНКИ N. 135 из расчета 8 млн. живых микроконидий в одной иммуниэирующей дозе.

17 кроликов иммунизируют введением полученного препарата внутримышечно однократно, 17 других кроликов иммунизируют путем однократного внутримышечного введения вакцины против миксоматоза вдозе 31 ИДцо/Mn без добавления микроконидий, Группу кроликов не вакцинируют (контроль). До иммунизации у кроликов антител в реакции диффузионной преципитации не выявлялось, На 7-й, 14-й, 21-й и 28-й дни после иммунизации по 4-5 вакцинированных кроликов из группы заражают вирусом миксомы с целью определения динамики формирования поствакцинального иммунитета, Перед заражением у кроликов берут кровь для определения титров антител в ИФА, Результаты представлены в табл.4.

Как видно из полученных данных, добавление к вакцине против миксоматоза кроликов микроконидий T.mentagrophytes стимулирует антителообразование и ускоряет формирование иммунитета у привитых животных.

Таким образом, добавление к противовирусным вакцинам суспензии микроко н иди и гри бо в-де рм атофитов из расчета 4-8 млн. спор в иммунизирующей дозе препарата стимулирует иммунный ответ, что выражается в усилении антигенной и иммуногенной активности биопрепаратов и, тем самым, повышении их эффективности.

1676629

Формула изобретения

Способ иммунизации животных, включающий введение биопрепарата с иммуностимулятором, отличающийся тем, что, с целью повышения иммуногенной активности в качестве иммуностимулятора используют суспензию микроконидий грибов-дерматофитов в концентрации 4 — 8 млн. живых спор в иммунизирующей дозе био5 препарата, Таблица 1

Тит ы антител после в хк атной вак ина ии че ез. ней

Вводимый, препарат

Количество животных, гол.

Интервал между вакцинациями, дни

Группа до вакцинации

445

20

В-на ПГ-3

+ Тг. чег.

В-иа ПГ-3

+ Tr. чег.

В-на ПГ-3

+ Тг. чег.

В-на ПГ-3 в-На пг-3

В-на ПГ-3

7,4+0,33

7.4 «0.24

8,0 + +0.36

7,8 ": 0.34

90+028 85+033

8.2 + 0,42 9,5 + 0,37

8 6 «0.29 8 9 «. 0,29

4,0+027 84+033

5,4 + 0,6 8,2 + 0.26

5,2 «- 0,34 7,9 0.2!

О!

10

6.7 «0,33

8.1 + 0,45!

4,8 + 0,2 7,5 « 0,28

5.0 ". 0.83 7,8 «. 0,58

5.6 ": 0,5 7,2 "= 0,47

5

5,0 " 0,7

6,2 0,37

6,0 + 0,4

6,5" 0.28

7,4 + 0,24

7.0 + 0,7

6.7 + 0,25

9,0 + 0,44

8,7 «.0,74

7,5 «0,28

7,4 ": 0.4

8.0 + 0.4

П р и м е ч а н и е: П вЂ” парагрипп-3; Š— Tr. verrucosum.

Таблица 2

Тит ы антител после в хк атной вак ина ии че ез, ней

Интервал между вакцинациями. дни

Вводимый препарат

Количество животных, гол.

Группа

30

П р и м е ч а н и е, П вЂ” парагрипп-3; Т вЂ” Тг. verrucosum.

Таблица 3

Рез льтаты иссле ований

Дни исследования после им.мунизации

Вводимый препарат

Груп- Количество жила вотных. гол.

Титры антител в ИФА

Индекс защиты в 19

Титры вируса миксомы в

1 И вомл на к оликах

Не вакцинированные

Вакцинированные

П р и меч а н и е: М- вакцина против миксоматоза кроликов из штамма В-82.

T — суспензия микроконидия штамма Tr.verrucosum %153

2

4

67

5

5

5

5

М+Т М

М+Т

М

М+Т

rl+T

П+Т

П+Т

П

П

П

Т.

Т.

Т.

7

14

14

21 21

20 .

О

О

О

О

О

О

О

О

3.! 1.6

5,6 6,1

О

О

8,7 +0,22

7,4 + 0,4

9,9 + 0.28

6.9 0,67 ..8,3 +0.7

78«09

О

О

5.1

5,1

5.1

5,1

5.1

5,1

77 0.93

8,6 ". 0.65

9,6" 0.28

6,5 0,58 7,3 «.0.81

8.3 + 0,7

О

О

2.0 3,5

5,1

5,1

5,1

5,1

7,3 + 0,83

6.3 + 1.0

8,9 +0.31

5.7 «0,92

7,5 + 0,62

7.0 + 0.9

О

О

1:10

О 1:10

1:10 1:20

1:80 1:320

1:20 1:40

1676629

Таблица 4

Рез льтаты иссле ованил

Дни исследованил после иммунизации

Вводимый препарат

Количество животных. гол, группа

Индекс защиты Титры антител в.lg в ИФА

Титры вируса миксомы в

1 И мл на к ликах

Вакцинированwe

Не вакцинированные

0,5 1.5 3,5

0.5 0,5 О

1:6400, 1:3200

1:6400

1:800, 1:400

1:200

1 12800. 1:12800

1:12800

1:12800, 1:12800

1:12800, 1:12800

1:12800 (есе) 5,6 м+ т

5,6

5,6 .

М+ Т

О, О, О, О. 0

О, О, О. О, 2,1

5,6

5,6

5,6 м+ т

М+ Т

3,1, О, О, О, 3,6 3.1 2.1 1 О

1Ч

5,6

5.6

Составитель С.Светлышев

Техред М.Моргентал Корректор О.Кравцова

Редактор И.Сегляник

Заказ 3062 Тираж 446 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 1!!!

5,1 4,1 2.1

5,1 5,1 5.6

О, О. 6,1, О

2,2 2,1, О, О.

П ри меч а ни е: М вЂ” вакцина против миксоматоза кроликов.

Т вЂ” микроконидии дерматофитов штамма Тг. meeeagrOPhytes М 135

5,6 5,6 5,6

О

3,5 3,5 5,6

5.6

5,6 5.6 5.6

5,6 5.6 5,6

3.5

2,5 5,6 5,6

5.6

2.0 2,5 3.5

5,6

1:12800 (все)

1:12800 (все)

1:12800 (все)