Способ определения агглютинации лимфоцитов

 

Изобретение относится к иммунологическому анализу клеток. Цель изобретения - повышение чувствительности способа и сокращение времени анализа. В исследуемую суспензию лимфоцитов перед внесением конканавалина А добавляют НАДН в концентрации 70-300 мкг/мл или каталззу в концентрации 20-75 мкг/мл, или лероксидазу в концентрации 20-75 мкг/мл. Агглютинацию лимфоцитов определяют по интенсивности светопропускзния суспензии . По сравнению с прототипом чувствительность увеличивается в 5 раз, а время проведения анализа сокращается в б раз.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ сОциАлистических

РЕСПУБЛИК (я)ю G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4672836/14 (22) 03.04,89 (46) 15.09.91. Бюл. N 34 (71) Белорусский государственный университет им. B.È.Ëåíèíà (72) А.B,Òèìîøåíêî, Л.К.Герасимова и

С.Н.Черенкевич (53) 615,375 (088.8) (56) Cancer res., 1974, 34, 3396 — 3402, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ ЛИМФОЦИТОВ (57) Изобретенле относится к иммунологическому анализу клеток. Цель изобретеИзобретение относится к области иммунохимического анализа клеток и может быть использовано для контроля биотехнологических процессов и в научных исследованиях.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа и сокращение времени анализа.

Способ осуществляют следующим образом.

В исследуемую суспензию клеток перед внесением конканавалина А(кон А) добавляют НАДН в концентрации 70 — 300 мкг/мл или каталазу в концентрации 2075 мкгlмл, или пероксидазу в концентрации

20 — 100 мкгlмл и определяют скорость агглютинации по изменению интенсивности светопропускания, Пример 1. Суспензию лимфоцитов готовят в фосфатно-солевом буфере Дульбекко, рН 7,3 с рабочей концентрацией клеток 5 10 кл/мл и числом жизнеспособных клеток, определяемым по тесту с трипано. Ж, 1 б 77634 А1 ния — повышение чувствительности способа и сокращение времени анализа. B исследуемую суспензию лимфоцитов перед внесением конканавалина А добавляют НАДН в концентрации 70 — 300 мкгlмл или каталазу в концентрации 20 — 75 мкг/мл, или пероксидазу в концентрации 20 — 75 мкгlмл. Агглютинацию лимфоцитов определяют по интенсивности светопропускания суспензии. По сравнению с прототипом чувствительность увеличивается в 5 раз, а время проведения анализа сокращается в6 раз, вым синим, не менее 957;. К исследуемым пробам при 37 С добавляют НАДН в концентрациях О, 65, 70, 100, 150, 200, 250, 300, 305 мкг/мл соответственно и конканавалина А (кон А) фирмы Sigma (США) в концентрации 25 мкгl мл. Интенсивность светопропускания измеряют на лазерном нефелометре, Добавление НАДН в исследуемую пробу увеличивает скорость агглютинации при минимальном содержании агглютинлрующего агента кон А. Регистрацию светопропускания можно проводить уже спустя 5 мин после добавления НАДН и кок А.

Пример 2, К суспензии лимфоцитов, приготовленной по примеру 1, добавляют пероксидазу в концентрациях О, 15, 20, ЗО, 50, 70, 100 и 105 мкг/мл соответственно и кон А в концентрации 25 мкг/мл, затем измеряют интейсивность светспропускания, Пример 3, К суспензии лимфоцлтов, приготовленной по примеру 1, добавлянп каталазу в концентрациях О, 15, 20,: ., 40, 1677634

25 мкг/мл кон А, а в предлагаемом способе при 5 мкг/мл.

Формула изобретения

50, 60, 75, 80 мкг/мл соответственно и кон А в концентрации 25 мкгlмл, затем измеряют интенсивность светопропускания, Таким образом, предлагаемый способ обладает по сравнению с прототипом следу.ющими преимуществами.

Составитель В. Литовченко

Редактор О, Спесивых Техред M.Moðråíòàë Корректор А. Осауленко

Заказ 3111 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Снижением времени агглютинации: при минимальной концентрации агглютинирующего агента кон А добавление НАДН, каталаэы или пероксидаэы увеличивает скорость агглютинации более чем в 6 раз (агглютинация в предлагаемом способе регистрируется спустя 5 мин последобавления кон А, а по прототипу через

30 мин).

Большей чувствительностью: равное время достижения агглютинации лимфоцитов достигается в прототипе при

5 Способ определения агглютинации лимфоцитов, включающий добавление к суспензии лимфоцитов конканавалина А с последующими инкубацией и оценкой агглютинации, отл ича ю щи йся тем, что, 10 с целью повышения чувствительности способа и сокращения времени анализа, в суспензию лимфоцитов дополнительно перед добавлением конканавалина А вносят никотинамиддинуклеотид в концентрации 70—

15 300 мкг/мл или каталазу в концентрации

20-75 мкг/мл, или пероксидазу в концентрации 20-100 мкг/мл, а агглютинацию определяют по интенсивности светопропускания суспензии.