Штамм гриба fusаriuм oxy sроruм (sснlеснт) snyd.ет наns.var.оrтносеrаs (арр ет w @ ) в @ @ , используемый для оценки сои на устойчивость к фузариозу
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
1 (21) 4666886/13 (22) 27.03.89 (46) 30.10.91. Бюл. М 40 (71) Институт экологической генетики АН
МССР. (72) Л. С. Корецкая, Ж. Г, Простакова и А. И.
Бронштейн, (53) 63.576.8(088,8) (56) Простакова Ж. Г. и др. Патогенная микрофлора сои. Кишинев, 1986, с. 11 — 19, 57.
Методика оценок устойчивости сои к 6олезням и вредителям (Методические рекомендации СГИ) /Под ред. Бабаянц Л. Г., Одесса, 1985, с. 30, (54) ШТАММ ГРИБА FUSARlUM
0XYSPORUM (SCHLECHTj SNYD. ЕТ HANS .-ЧАЯ. ORTHOC ERAS (APP. ЕТ, WR) В1 А1, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОЦЕНКИ СОИ НА УСТОЙЧИВОСТЬ К ФУЗАРИОЗУ
Изобретение относится к сельскому хозяйству и представляет собой новый штамм гриба Fusarium oxysporum (schlecht) snyd.
et. Hans. чаг. orthoceras (арр. et. Wr) ВИа1, используемый для создания искусстввнного инфекционного фона при оценке сои на устойчивость к фуэариозу..
Цель изобретения — получение нового штамма, обладающего более высокой вирулентностью по отношению к сое.
Штамм гриба Fusarium oxysporum (schlecht) snyd. et. Hans var. orthoceras(app.
et. Wr) Bllal 693 — 4 выделен из растений сои, пораженных фузариозом, идентифициро-. ван по системе Билай ВИ, депонирован в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского института сельскохозяйственной микробиологии под N. 36.
„„Я „„1687195 А1 (я}5 А 01 N 63/04, С 12 N 1/14 (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству и представляет собой новый штамм гриба Fusarium oxysporum, используемый для создания искусственного фона при оценке сои на устойчивость к фуэариозу.
Целью изобретения является получение нового штамма гриба, обладающего более высокой вирулентностью по отношению к сое.
Штамм гриба Fusarium oxysporum (schiecht)
snyd. et Hans var. orthoceras (арр. et, nr) Bilai
693 — 4 выделен иэ растений сои, пораженных фузариозом, идентифицирован по сис ° еме Билай В. И., депонирован в коллекции
ВНИИСХМ под N. 36. В полевых условиях при заражении устойчивой линии сои ВИР—
К вЂ” 8845 через почву вирулентность штамма
Fusarium oxysporum N 693 — 4 (ВНИИСХМ
36 . превышала вирулентность природного иэолята 693 на 12,6;4. 4 табл.
Культурально-морфологические и физиолого-биохимические признаки штамма.
Хорошо растет на сусло-агаре, картофельно-декстрозном агаре, на стерилизованных отходах овса, пшеницы и на жидкой среде Чапека при поверхностном и глубинном культивировании.
При культивировании штамма на суслоагаре при 22 — 25 С в течение 7 сут образуются колонии размером 7,0 — 7,3 см, круглые с ровными краями, мицелий паутинистый, плотный, обратная сторона лилово-карминовая. Макроконидии отсутствуют на 15-й день культивирования, микроконидии одноклеточные, обильные образуются в воздушном мицелии (7,0М,04 мкм), хламидоспоры промежуточные и верхушечные, гладкие, неокрашенные.
1687195
На картофельно-декст1 озном агаре при выращивании в тех же условиях колонии размером:9,8-7,2 см, круглые, край ровный, невысокие, слабопушистые, поверхность темно-лилового цвета с карминовым оттенком, обратная сторона темно-лиловая.
Спорообрэзующий, макроконидии отсутствуют, микроконидии одноклеточные, обильные, образуются в воздушном мицелии (6,8+0,02 мкм), хламидоспоры промежуточные и верхушечные, гладкие, неокрашенные, На твердой среде Чапека колонии размером 5,0 — 6,1 круглые, невысокие, неровные, пленчатые, слабопушистые, с возрастом уплотня ющиеся от белого до слаборозового цвета, обратная сторона белая или желтоватая.
Спорообрэзук>щий, макроконидии огсутствуют, микроконидии одноклеточные, обильные, образуются в воздушном мицелии (7,6+0,03 мкм), хламидоспоры промежуточные и верхушечные, гладкие, неокрашенные, Штамм растет при 4 — 37,5 С, оптимальная температура роста 22 — 25" С, рН среды
5,4 — 8,2, оптимальное значение рН среды
6,0-6,2.
Отношение к источникам углерода: усваивает сахарозу и крахмал. Отношение к источникам азота: усваивает МайОз, К1чОз, казеин, соевый белок, альбумин.
Штамм не имеет маркерных признаков.
Обладает способностью к биосинтезу фузариевой кислоты, ее содержание в культурал ьной жидкости 14-дневно В кул ьтуры . 40,8 — 53,5 мкг/мл (при выращивании в стационарных условиях нэ жидкой среде Чапека при 22 — 25 С).
Активность протеолитических ферментов при использовании в качестве субстрата казеина — 0,590 усл, единиц, при использовании N2-бензоил-D,i=àðãèíèí-п-нитроанилида — 0,140 усл,ед.
Признаки штамма устойчивы, Штамм хранят на сусло-агаре под вазелиновым маслом при 4 С 3-6 мес, затем пересевают.
Штамм гриба Fusariurn oxysporurn (schlecht) Snyd. е;. i4ans var. ortoceras (Арр.
et. Wr) В11а1 693 — 4 отобран из 451 изолятов, . выделенных из больных растений сои на стадии всходов и в фазе цветения в различных экологических зонах Молдавии.
Этими изолятами проведено искусственное заражение изолированных корней сои устойчивой линии К-8409 и восприимчивого сорта Букурля оо модифицированному методу Kendall, еэФ 1984, Выделенные изоляты гриба выращивают на чашках Петри на твердой среде сусло-агар в течение 2
30 качалке или 10 дн. в стационарных условиях.
Увлажненный субстрат (отходы пшеницы, Пример использования штамма для
40 оценки сои на устойчивость к фузариозу.
50 а
55 нед. при 25 С, Для заражения отдельных корней, помещенных в чашках Петри, используют диски мицелия, вырезанные сверлом диаметром 1,5 мм.
Для искусственного заражения сои используют корни 5-дневных растений, выращенных в проСтерилизованном песке при увлажнении до 60% или в рулонах увлажненной фильтровальной бумаги при 25 С из семян, предварительно простерилизованных в течение 2 мин последовательно 96%ным зтиловым спиртом и водным раствором
КМп04
Результаты, полученные при инфицировании корней сои восприимчивого сорта и устойчивой линии сои, представлены в табл, 1 и 2.
Из полученных данйых следует, что наибольшую длину гниения корня при контакте с культурой гриба (без нанесения повреждений) восприимчивого сорта Букурия и устойчивой линии К-8409 вызывает штамм F. oxysporum чаг. orthoceras N 693, превышающий по патогенности все выделенные и исследованные изоляты (табл. 1).
Пример использования штамма для йолевого инфекционного фона, Рассевают хранящиеся культуры на жидкую среду Чапека, выращивают 5 дн . на овса — 1 ч. воды нэ 2,5 ч. субстрата) стерилизуют при 1 атм., 1 ч. Заражение субстрата проводят жидкой средой, содержащей
10000 спор/1 мл культуральной жидкости.
Выращивают при комнатных условиях (1825ОС) в течение 15 дн.
Полученный описанным способом инокулюм вносят в почву при посеве семян из расчета 100 r инфекционного материала на
1м.
Оценку поражаемости сортов сои проводят по поражению корневой системы при раскапывании 10 растений из каждого ряда и оценки поражаемости по площади поражения данного органа:
0 — растения здоровые, без признаков заболевания.;
1 — поражение очень слабое, наблюдаются отдельные мелкие точечные пятна, занимающие не более 10%. поверхности органов растения;
2 — поражение слабое — 11-25% поверхности;
3 — поражение среднее — 26 — 50%;
4 — сильное поражение (свыше 50%, но ие более 75%), растения сильно угнетены;
1687195
Так как оценка поражаемости проводится по максимальному индексу развития болезни, более высокий уровень патогенности возбудителя позволяет более четко дифференцировать устойчивость сорта и проводить индивидуальный отбор линий— источников устойчивости к фузариозным корневым гнилям. При этом определяется,что Хабаровская-53 х Adepta, Чайка х
Adepta являются восприимчивыми, а не средневосприимчивыми, Pridesoy Приморская 520 — средневосприимчивыми, а не устойчивыми, ч-о имеет место при использовании прототипа. Сорта и гибриды со стабильным уровнем реакции подтверждают свою характеристику. Поэтому использование для создания инфекционного фона штамм- N. 693-4 обеспечивает более четкую иммунологическую характеристику, т.е. достигается ускорение селекционного процесса с меньшими затратами труда, полевыми площадями и инфекционной нагрузкой на природную среду.
Формула изобретения
Штамм гриба Ризаrlum oxysporum (s chIecht) snyd. et Hans var. orthoceras (арр.
et Nfr) Biiat, ВНИИСХМ N-36, используемый для оценки сои на устойчивость к фузариозу.
Таблица
Характеристика выделенных природных изолятов F. охузрогша
var.orthoceras по способности к поражению корней сои при искусственном .заражении
Изолят
Величина пс ажения корня, мм
Повторности
Х- тп х
Реакция
У
В
У
У
В
У
В
У
В
У
В
У
В
У
240 21 0. 300 300
35,0 34,0 33,0. 33,0
100 100 100 150
4,0 0 0 0,6
20,0 25,0 35,0 25,0
0 0 . 5,0 10,0
100 10,0 150 150
10,0 15,0 10,0 20,0
20,0 45,0 20,0 30,0
50 20 3 0 40
5,0 5,0 8,0 9,0
0 0 0 0
20,0 15 ° 0 20,0 20,0
15,0 30,0 20,0 20,0
30,0 30,0 30,0 31,0
693
165
706
4?3
627
702
У вЂ” устойчивая линия;
 — восприимчивый сорт
5 — очень сильное поражение (свыше
75 ), наблюдается гибель растений.
Для диагностики резистентности набора сортов использовали шкалу (табл. 3), где развитие (индекс болезни), в котором число 5 () больных растений и степень (балл) пора- . жения, вычислялось по формуле
R= Х- О, n k где  — развитие болезни; 10 — сумма произведений числа растений с одинаковыми признаками поражения на соответствующий им балл поражения; п — общее число растений;
К вЂ” высший балл шкалы учета. 15
Набор из 12 исследованных сортов соии гибридов распределялся по группам устойчивости следующим образом: средневосприимчивые — Pridesay, Приморская 529, гибрид 676, Nair-2; 20 восприимчивые — Скынтея, Хабаровская-53 х Adepta, Чайка х Adepta, Аурика, Mapi Presto; сильновосприимчивые — Кишиневская16, Букурия, Бельцкая-82.(табл. 4), 25
В полевых условиях при заражении через почву показатели патогенности на
12,6о превышали показатели, полученные при заражении природным изолятом.
20,0
35 0
20,0
40,0
10,0
15,0
30,0
5,0
10,0
30,0
20,0
20,0
25,0+2,1
34,0+0,4.
13,0+2,0
29,0+3,6
14, и- 1, 8
21,0+3,5
21, О+2, 4
28,2 2,0
4,79
1,0
4,47
1,74
8,21
4,47
2,73
4,1.
5,2
1,3
2,3
7,8
5,4
4,6
Таблица 2
1б87195
Определение патогенности моноспоровых клонов изолята 693 по результатам искусственного заражения корней сои
Номер клонов
Длина гниения корня, мм осприимчивый сорт Устойчивая ли(Букурия) . ния К-8409
Та блица 3 йкала для диагностики устойчивости образцов сои к фузариозу з витие боезни, Ж
Обозначен
Иммунологическая характеристика образцов
0-10
11-25 уу у
Высокоустойчивые
Устойчивые
Средневосприимчивые
1?rid.esoy
Зо сприимчив ые
Сил е но в О с и р и (и Еч ив ые
26-50
5.1-75
76-1 00
С
В
ВВ
2
4
7
9
11
12
13
14
16
17
18
19
21
22
23
24
26
27
28
29
30,0
5,0
15,0
34,0
30,0
30,0
30,0
16,0
30,0
25,0
30,0
25,0
30,О
25 0
25,0
15,0
10,0
25,0
25,0
25,0
25,0
25,0 30, 0
28,0
30,0
15,0
30,0
30,0
30,0
30,0
10,0
10,0
12, 0
25,0
12i 0
10,0
10 0.
0,0
11,0
10,0
10,0
0,0
10,0
11,0
10,0
10,0
10,0
11,0
12,0
10,0
10,0
10,0
10,0
10,0
11,0
10,0
12,0
12,0
12,0
12,0
1687195
Та блица 4
Поражение проростков сои при искусственном заражении через почву штаммов 693-Н по сравнению с исходным известным штаммом
1 нтенсивность развития корневых гнилей, 7
Сорта, гибриды сои
Штамм 693-4
Пр евышен ие риродный золят 693
7,4
30,0
5,9
69,2
80,0
9t 9
61,8
50,0
86,0
П р и м е ч а н и е. среднее значение превышения = 12,6Х.
Составитель Т. Полянская
Техред М.Моргентал Корректор О. Кравцова
Редактор М. Келемеш
Заказ 3657 Тираж 351
ВНИИПИ Гос да ственног
Подписное осударственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "П " . У атент, г. жгород, ул.Гагарина, 101
Скынтея
Кишиневская-16
Букурия
Хабаровская-53 х
Adep ts
Чайка х Adept
PridesoyПриморская 529
Бельцкая-82
Аурика
Ивр1 Presto
Гибрид 670
Noir-2
34,0
40,0
20,0
20,0
67,0
65,4
52,0
47,5
28,4) 58,9
61,0
28,3
28,3
85,3
67,8
62,7
48,5
41,2 24, 9
21,0
8,3
8,3
18,3
2,4, 10,7
1ъо
13 2
