Скрининг химических соединений, обладающих фунгицидной активностью и ингибирующих биосинтез меланина у возбудителя пирикуляриоза риса
Изобретение относится к исследованиям влияния химических веществ на растения , в частности к определению фунгицидной активности веществ разного происхождения , и может быть использовано в сельском хозяйстве и оценке активности новых фунгицидов. Цель изобретения - ускорение и упрощение процесса оценки фунгицидной активности веществ. Скрининг химических соединений, обладающих фунгицидной активностью и ингибирующих биосинтез маланина у возбудителя пирикуляриоза риса, заключается в том, что анализируемое вещество добавляют в жидкую или агаризованную питательную среду, на которую засевают гриб Pyricularia oryzae, образующиеся споры или мицелий сушат, засыпают в ампулы, на ЭПР-спектрометре снимают спектры образцов, а оценку фунгицидной активности ведут по степени снижения содержания меланина в мицелии или спорах по отношению к контролю. 2 табл. (Л С
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕ ННЫ И КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ о (л) (л
О
О
4 (21) 4465955/13 (22) 26,07.88 (46) 15.03.91. Бюл. ¹ 10 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт фитопатологии Госагропрома
СССР и Институт химической физики
АН СССР (72) А.А.Аверьянов, В.Г.Джавахия, А.Е,Донцов, В.П.Лапикова, M,А.Островский и
Г, Г,Петелина (53) 576.8(0 8.8) (56) Бери, Н.Г. Химичес.<ая защита растений. Л.: Колос, 1972, с.бб7. (54) СКРИНИНГ ХИМИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ, ОБЛАДАЮЩИХ ФУНГИЦИДНОЙ АКТИВНОСТЬЮ И ИНГИБИРУЮЩИХ
БИОСИНТЕЗ МЕЛАНИНА У ВОЗБУДИТЕЛЯ ПИРИКУЛЯРИОЗА РИСА (57) Изобретение относится к исследованиям влияния химических веществ на растеИзобретение относится к исследованию влияния химических веществ на растения, в частности к способам определения фунгицидной активности веществ разного происхождения, и может быть использовано в сельском хозяйстве при поиске и оценке активности новых фунгицидов.
Цель изобретения — ускорение и упрощение процесса оценки фунгицидной активности вещества.
Скрининг химических соединений, обладающих фунгицидной активностью и ингибирующих биосинтез меланина у возбудителя пирикуляриоза риса осуществляют следующим образом, „!Ж, „1635094 А1
Is» s G 01 N 24/10, А 01 N 63/04, С 12 0 1/00 ния, в частности к определению фунгицидной активности веществ разного происхождения, и может быть использовано в сельском хозяйстве и оценке активности новых фунгицидов. Цель изобретения — ускорение и упрощение процесса оценки фунгицидной активности веществ, Скрининг химических соединений, обладающих фунгицидной активностью и ингибирующих биосинтез маланина у возбудителя пирикуляриоэа риса, заключается в том, что анализируемое вещество добавляют в жидкую или агариэованную питательную среду, на которую засевают гриб Pyricularia oryzae, образующиеся споры или мицелий сушат, засыпают в ампулы, на ЭПР-спектрометре снимают спектры образцов, а оценку фунгицидной активности ведут по степени снижения содержания меланина в мицелии или спорах по отношению к контролю. 2 табл.
Анализируемое вещество добавляют в жидкую или агаризованную питательную среду, на которую засевают грибом
Pyricularia oryzae. На жидкой среде выращивают мицелий, который отделяют от среды фильтрацией через ткань, промывают водой и отжимают. На агаризованной среде образуются колонии гриба, с которых смывают споры, Последние отделяют от среды центрифугированием, ресуспендируют в воде, центрифугируют вновь, а надосадочную жидкость отбрасывают. Полученный материал сушат при комнатной температуре, засыпают в ампулы и взвешивают. Величина навески 5-10 мг. На ЭПР-спектрометре снимают спектры образцов и рассчитывают
1635094
50 концентрацию парамагнитных центров в спинах на 1 мг материала.
Пример 1. 50 мкг/мл трициклаэола добавляют в жидкие и агариэованные питательные среды следующих составов: жидкая питательная среда Q 1 содержит морковный отвар, полученный кипячением сухой моркови иэ расчета 50 г/л воды, а среда N 22 с оод еер ж и т Т 22,5 г/л йайОэ, 1 г/л
КН РО, 0,5 г/л MgSO4,5г/л сахарозы,0,2 мг/л тиамина, 5 мкг/л биотина, 3 г/л гидролизата казеина.
Для получения агаризованных сред в каждую из указанных сред добавляют 15 г/л агара.
Одновременно готовят аналогичные питательные среды беэ добавления трициклазола, Все среды засевают грибом Pyrlcularia
oryzae, На жидких питательных средах выращивают мицелий, который отделяют от среды фильтрацией через ткань, промывают водой и отжимают. На агариэованной питательной среде образуются колонии гриба, с которых смывают споры, Полученный материал сушат при комнатной температуре, засыпают в ампулы и взвешивают. Величина навески 5 — 10 мкг.
На ЭПР-спектрометре снимают спектры образцов и рассчитывают концентрацию парамагнитных спектров в спинах на 1 мг материала.
B табл.1 показано влияние 50 мкг/мл трициклазола на содержание меланина в мицелии и спорах гриба Pyrlcularla oryzae на разных питательных средах (возраст культуры 10 дней (споры) и 14 дней (мицелий).
Пример 2. Выращивание гриба осуществляют по примеру 1, только в качестве исследуемого вещества в питательные среды добавляют фталид в концентрациях
2 мкгlмл и 50 мкг/мл, В табл,2 показано влияние фталида на содержание меланина в спорах гриба
Pyricularia oryzae, Как показано в табл.1 и 2 подавление меланизации гриба испытанными фунгицидами четко регистрируется по значительному падению сигнала ЭПР, Оно происходит на обеих средах и затрагивает как мицелий, так и споры. Эффект зависит от концентрации фунгицидов, причем в одинаковых условиях трициклазол является более сильным ингибитором меланиногенеза, чем фталид.
Пример 3, Одновременно проводят определение фунгицидной активности трициклазола в тепличных условиях известным способом биологического заражения растений.
Испытания проводят на растениях риса сорта Клейкий 424. Фунгицид вносят в почву, а инокуляцию проводят путем опрыскивания растений суспензией спор гриба. В контроле используют 54 растения, степень развития болезни 67ф,, тип реакции 3-4.
Трициклазолом обработано 52 растения, степень развития болезни 0,3, тип реакции 2 — 3. Можно видеть, что трициклазол уменьшает степень развития болезни приблизительно в такой же мере, как и сигнал
ЭПР в клетках гриба.
Предлагаемый способ исключает такие трудоемкие операции, как выращивание растений в контролируемых условиях. заражение, растений, количественный учет развития болезни по сравнению с известным способом, а также сокращает время анализа вдвое-втрое и уменьшает его трудоемкость.
Скрининг химических соединений, обладающих фунгицидной активностью, позволяет легко ограничить число препаратов для окончательного подтверждения их активности согласно известному способу.
Формула изобретения
Скрининг химических соединений, обладающих фунгицидной активностью и ингибирующих биосинтез меланина у возбудителя пирикуляриоза риса, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, готовят питательные среды с исследуемым веществом и без него, засевают каждую из них микроскопическим грибом Pyricularia oryzae. выращивают его, отделяют образующиеся споры или мицелий от среды, высушивают и определяют в них содержание меланина методом 30Р, а оценку фунгицидной активности ведут по степени снижения содержания меланина в мицелии или спорах, выращенных на среде с добавлением исследуемого вещества по сравнению с мицелием или спорами, выращенными на среде без добавления исследуемого вещества.
1635094
Таблица 1
Таблица 2
Составитель Н.Мхветаридзе
Редактор М.Петрова Техред М.Моргентал Корректор С.Шекмар
Заказ 752 Тираж 392 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35. Раушская наб.. 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101
