Способ определения амидопирина в биологических жидкостях

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

t st)s G 01 N 33/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4760331/14 (22) 20.11.89 (46) 15.11.91. Бюл. N. 42 (71) Винницкий медицинский институт им.Н.И.Пирогова (72) В.М.Истошин, А.А.Пентюк, Н,Б.Луцюк, В.И.Богомаз, P.À.Ìóñèí, В.Г.Илыка и Г.Ç.Лычик (53) 612.461.175:612,111,1 (088.8) (56) Renneberg R.et al Anal, Chem. Acta, 1982, ч.134, р.359 — 364.

Изобретение относится к медицине,а именно к биохимии, и может быть использовано для определения амидопирина в.биологических жидкостях в присутствии его метаболита 4-.аминоантипирина (4-ААП).

Целью изобретения является повышение специфичности способа определения амидопирина.

Для выявления оптимальных условий определения амидопирина изучено влияние реакции среды (рН), концентрации пероксидазы и пероксида водорода, определен максимум поглощения окрашенного продукта реакции и другие параметры метода.

Изучено влияние реакции среды на выход продуктов окисления амидопирина и

4-ААП (табл 1).

Иэ данных табл.1 видно, что при рН 7,2—

7,6 4-ААП окрашенных продуктов практически не образует, в то время как амидопирин при этих значениях рН дает наибольшую интенсивность окрашивания.

Определение максимум а поглощения продуктов окисления амидопирина (табл,2) проводили на спектрофотометре СФ-26.

Как видно из данных табл.2. определение амидопирина следует проводить при

„„Я2„, 1691742 А1 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИДОПИРИНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ (57) Изобретение относится к медицине, а именно биохимии. Целью изобретения является повышение специфичности определения амидопирина. Это достигается тем, что определение амидопирина проводят при рН

7,2 — 7,6 и длине волны А = 570 — 580 нм.

Чувствительность способа 1,15 мкг/мл, точность 1 мкг/мл. 3 табл.

570 — 580 нм, когда достигается максимум . ф поглощения.

Воспроизводимость способа определе- (/l ния (табл.3) была оценена на серии из вось- С ми опытов.

Прямое определение амидопирина в биологической жидкости, в частности в моче, оказалось невозможным из-за мешающего влияния других компонентов мочи, поэтому была применена экстакция амидо- О» пирина из мочи хлороформом. Полученный»О хлороформный экстракт отделяли, упарива- а ли на водяной бане при 40 — 60 С, сухой экстракт растворяли в дистиллированной ф воде и проводили определение с помощью пероксидазы.

Пример. Реактивы. Раствор перокси- а дазы из хрена в 0.1 М фосфатном буфере с концентрацией 10 ЕД/мл и рН 7,4. Пероксид водорода с концентрацией 4 мкмоль/мл. Хлороформ.

Ход определения. К 2 частям мочи (2 мл) прибавить 5 частей хлороформа (5 мл) и экстрагировать в течение 10 мин в колбе с притертой пробкой, затем отцентрифугировать в течение 10 мин, отобрать хлороформный

1691742

Таблица1

Выход окрашенных продуктов окисления амидопирина и 4 — ААП в зависимости от рн среды.

Продолжение табл 1

П р и м е ч а н и е: В пробе содержалось по 50мкг амидопирина или 4 — ААП.

Таблица 2

П р и м е ч а н и е: в пробе 50 мкг амидопирина. экстракт и упарить его на водяной бане при

40 — 60 С.

К сухому экстракту добавить 2 части дистиллированной воды (2 мл) и встряхивать 5 мин до его растворения.

В чистую пробирку внести 0,1 часть раствора пероксидазы из хрена в 0,1 М фосфатном буфере(0,1 мл), прибавить 0,1 часть перокси., да водорода (0,1 мл) и 1 часть водного раствора пробы (1 мл), Оптическую плотность определяли через 2 мин при 1=580 нм в кювете с длиной светового пути 1 см и объемом 0,4 мл, Количество амидопирина рассчитывали по калибровочному графику, Определение амидопирина в крови, Реактивы аналогичны при определении в моче.

Ход определения. К 1 мл плазмы прибавляли 5 мл хлороформа и экстрагировали в течение 10 мин в колбе с притертой пробкой, после чего центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин, отбирали хлороформный экстракт и упаривали на водяной бане при 40 — 60 С, К сухому остатку добавляли

0,5 мл 0,1 М фосфатного буфера с рН 7,4 встряхивали и прибавляли 0,1 мл раствора

5 пероксидазы хрена и 0,1 мл перекиси водорода, оптическую плотность измеряли через

2 мин при А = 580 нм в кювете в длиной светового пути 1 см и объемом 0,4 мл. Количество амидопирина определяли по граду10 ировочному графику, Чувствительность предлагаемого способа 1,15 мкг/мл, точность 1,0 мкг/мл, Формула изобретения

Способ определения амидопирина в

15 биологических жидкостях путем его экстракции, окисления пероксидазой хрена и спектрофотометрирования окрашенного продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности способа, 20 окисление амидопирина проводят при рН

7,2 — 7,6, а спектрофотометрируют при длине волны 570 — 580 нм.

1691742

Таблица3

П р и м е ч а н и е: Х вЂ” среднее арифметическое; S — средняя квадратическая ошибка; Ч вЂ” коэффициент вариации.

Составитель В.Митюшин

Техред M.Ìoðãåíòàë Корректор И,Муска

Редактор Ю.Середа

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул,Гагарина, 101 !

Заказ 3924 Тираж Подписное

8НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5