Способ получения вещества, обладающего литическим действием

 

Штамм Xanthomonas campestris ВКПМ В-4102 культивируют на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, и выделяют целевой продукт после культивирования известными приемами. При этом получают вещества, обладающие лептическим действием на патогенные множественно устойчивые к антибиотикам микроорганизмы.

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам получения литического препарата, используемого в медицине. Пример выполнения способа. Культуру Xanthomonas campestris выращивают на среде, содержащей 1,5% дрожжевого экстракта "Difeo", рН 7,6, в течение 26-28 ч при 28^оС на качалках в медицинских колбах объемом 750 мл. Клетки отделяют центрифугированием на холоду при 45000 g в течение 40 мин. Полученную культуральную жидкость подвергают ультрафильтрации. В сконцентрированный раствор на холоду добавляют сульфат аммония, осадок удаляют центрифугироавнием (1 ч при 45000 g). К супернатанту добавляют сульфат аммония до 80% насыщения и выпавший в осадок белок собирают центрифугированием на холоду (1 ч при 45000 g). Осадок ресуспендируют в небольшом объеме 0,01 М Трис-HCl буфера, рН 8,5 и диализуют против 0,001 М Трис-HCl буфера на магнитной мешалке в течение 12-18 ч с частой сменой буфера. Полученный штамм характеризуется следующими свойствами. Морфологические и культуральные признаки. Грамотрицательные палочки, не образующие спор, 0,5-0,7х2,0-5,0 мкм при росте на агаризованных средах. При культивировании в жидких питательных средах с аэрацией образует нитеподобные клетки от 10 до 20 мкм. Жгутики отсутствуют. Клетки неподвижны. Образует пигмент двух типов: бледный зеленовато-желтый каротиноидной природы, не выделяющийся в среду, и бурый, меланиноподобный, диффундирующий в среду. Штрих на МПА зеленовато-желтый, блестящий, слизистый. Рост хороший. Бактериальная масса плохо захватывается петлей. Колонии на МПА через 18-24 ч 2-3 мм в диаметре, выпуклые круглые с ровным краем, в проходящем свете не просвечивают. При росте в МПБ образует пленку, осадок, муть. Физиолого-биохимические свойства. В качестве источника азота использует аммонийные соли, пептон. В качестве источников углерода углеводы, органические кислоты, хорошо растет на богатых органических средах. Метаболизм углеводов окислительный. Образует кислоту в минеральных средах с арабинозой, глюкозой, галактозой, фруктозой, сахарозой, лактозой, трегалозой, целлобиозой. Не использует уксусную и щавелевую клетчатку, агар не разрушает, крахмал не гидролизует, желатину разжижает, молоко свертывает и пентонизирует, сероводород на средах с пептоном не образует, нитриты из нитратов не образует. Каталазная активность слабая, 0,1% тетразолий бромистый ингибирует рост. Температурный оптимум 28^оС. Не растет при 37^оС. Оптимум рН 7,0. Растет в интервале рН 6,6-9,0 строгий аэроб. Процентное содержание Г+Ц в ДНК 66,0. Хранится на МПА. Из-за энергичного автолиза требует частых пересевов через 3-5 сут. Литическое действие выделенного препарата проведено на 99 непатогенных культурах грамположительных и грамотрицательных бактерий и 39 представителях дрожжей из коллекции ИБФМ АН СССР. Препарат оказывает активное литическое действие на все отобранные для испытания грамположительные бактерии и на некоторые дрожжи.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ЛИТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ на патогенные множественно устойчивые к антибиотикам микроорганизмы, отличающийся тем, что штамм Xanthomonas campestris ВКПМ В-4102 культивируют на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, и выделяют целевой продукт после культивирования известными приемами.