Способ определения эндогенной интоксикации

 

Способ определения эндогенной интоксикации , Использование: в медицине, в ла . .I бораторной практике. Цель: повышение точности , упрощение и ускорение способа. Сущность изобретения: после осаждения белка крови трихлоруксусной кислотой, центрифугирования, к супернатанту добавляют щелочь и реактив Бенедикта и через 15 мин устанавливают оптическую плотность пробы при 330 нм и при значениях более 0,25 опт.ед./мл определяют наличие эндогенной интоксикации. Положительный эффект: использование способа позволит на 20% и более повысить точность способа и почти в 1,5 раза ускорить его.

СОК)3 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)л G 01 N 33/48

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4666451/14 (22) 24.03.89 (4&) 23.02.93. Бюл. ¹ 7 (71) Челябинский государственный медицинский институт (72) А.К.Однопозов, И.А.Волчегорский, А.С.Пужевский и P.È.Ëèôøèö (56) Авторское свидетельство СССР

¹ 1255933; кл. 6 01 N 33/68, 1986. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ (57) Способ определения эндогенной интоксикации, Использование: в медицине, в лаФ

Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики эндогенных интоксикаций любого происхождения.

Известен способ диагностики эндогенной интоксикации при почечной недостаточности путем определения в сыворотке крови субстратов эндогенной интоксикации средней молекулярной массы с помощью обработки сыворотки крови 20-25% трихлоруксусной кислотой с последующим центрифугированием и определением в супернатанте белково-пептидн ых компонентов методом Лоури.

К недостаткам известного способа относятся недостаточно высокая точность. определенная техническая сложность, что связано с использованием метода Лоури.

На осуществление аналитического этапа способа затрачивается не менее 40 минут.

Целью изобретения является повышение точности, упрощение и ускорение способа диагностики эндогенной интоксикации.

Цель достигается тем, что сыворотку или плазму крови депротеинируют трихло„„ Ж „„1797059 А1 бораторной практике. Цель; повышение точности, упрощение и ускорение способа, Сущность изобретения; после осаждения белка крови трихлоруксусной кислотой, центрифугирования, к супернатанту добавляют щелочь и реактив Бенедикта и через 15 мин устанавливают оптическую плотность пробы при 330 нм и при значениях более

0,25 опт.ед./мл определяют наличие эндогенной интоксикации. Положительный эффект; использование способа позволит на

20% и более повысить точность способа и почти в 1,5 раза ускорить его. руксусной кислотой в конечной концентрации не менее 8%, отделяют осадок белка .центрифугированием, в супернатанте проводят биуретовую реакцию с реактивом Бенедикта и через 15 мин (после добавления реактива Бенедикта) проводят спектрофотометрическое определение в супернатанте субстратов эндогенной интоксикации — определяют оптическую плотность пробы при

330 нм, и при значениях более 0,25 опт.ед./мл диагностируют эндогенную инТОКСИКдЦИЮ.

Способ осуществляют следующим образом.

Обраацы биоаогикескои жидкости гсы- ) и воротки или плазмы крови) в количестве 1,0 мл депротеинируют добавлением 0,2 мл трихлоруксусной кислоты в конечной концентрации не менее 8%; — через 5 мин осадок белка огделяют центрифугированием: центрифугирование осуществляют в течение 5-15 мин при 3000 об/мин, 1797059

10 — после осаждения белка проводят в супернатанте биуретовую реакцию с реактивом Бенедикта: 0,5 мл супернатанта переносят в пробирки, содержащие 1,5 мл Н О и

2,0 мл 6%-ного раствора NaOH, добавляют

0,2 мл реактива Бенедикта (опыт); в контрольные пробирки вместо супернатанта вносят дистиллированную воду; — не менее чем через 15 минут измеряют оптическую плотность пробы при 330 нм в опыте и контроле в кюветах с длиной оптического пути 10 мм; — количество субстратов эндогенной интоксикации (биуретположительных веществ) выражают в единицах оптической плотности при 330 нм на 1 мл биологической жидкости. Для расчета величину оптической плотности Еззо умножают на 2 (для приведения к 1 мл) и на разведение, которое складывается из разведения биологической жидкости при депротеинировании в 1,2 раза и исходного разделения биологического материала (если таковое имеется); — при величине оптической плотности, превышающей 0,25 опт.ед,/мл диагностируют эндогенную интоксикацию.

Осуществление заявляемого способа при обследовании 14 здоровых доноров показало, что среднее значение содержания субстратов эндогенной интоксикации в норме составляет 0,22 +0,01 опт.ед,/мл, а предельное значение (верхняя граница нормы) для содержания биуретположительных веществ- 0,25 ед./мл, Пример 1. Больной Д-н поступил с проникающим ранением толстого кишечника. На второй день после оперативного вмеш ател ьства состояние ухудшилось, развился разлитой перитонит, t = 39,5 . У больного взято 4 мл крови, которую центрифугировали в течение 10 минут при 3000 об/мин. К 1,0 мл полученной сыворотки доФормула изобретения

Способ определения эндогенной интоксикации, включающий забор крови, добавление трихлоруксусной кислоты в конечной концентрации не менее 8%, отделение

: осадка белка центрифугированием и спектрофотометрическое определение в супернатанте субстратов эндогенной интоксикации, бавляли 0,2 мл 60 ТХУ, центрифугировали в течение 30 минут при 3000 об/мин. Полученный супернатант — 0,5 мл — перенесли в пробирку, добавили 1,5 мл дистиллированной воды и 2,0 мл 6% Na0H и 0,2 мл реактива Бенедикта. Через 15 минут замеряли оптическую плотность при 330 нм против контроля (в контроле заменяли сыворотку крови на 0,9% NaCl). Величина оптической плотности — 0,434 ед., т,е. содержание субстратов эндогенной интоксикации составило 1,042 опт. ед/мл, что превышает верхнюю границу нормы в 4,17 раза, В соответствии с предложенным способом постав15 лен диагноз: синдром эндогенной интоксикации. Диагноз подтвержден клинически.

Пример 2. Больной Ч-в, 29 лет, Поступил с жалобами на боли а правой под20 вздошной области, слабость, головную боль, диспептические явления, т = 39,7 С, о

При физикальном обследовании заподозрен острый аппендицит. При оперативном вмешательстве был удален гангренозноизмененный аппендикулярный отросток, обнаружен местный перитонит, В соответствии с предложенным способом определено содержание субстратов эндогенной интоксикации в сыворотке крови больного: Еззо =0,252

30 ед., содержание биуретположительных субстратов эндогенной интоксикации — 0,605 опт,ед,/мл, что превысило верхнюю границу нормы в 2,42 раза. Диагноз: эндогенная интоксикация, что соответствует клиниче35 скому состоянию больного.

По сравнению со способом-прототипом повысилась точность диагностики. Способ более прост в техническом осуществлении, так как содержит меньше технологических

40 операций. Продолжительность аналитического этапа предложенного способа составляет 15 мин, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, упрощения и ускорения способа, к супернатанту добавляют щелочь и реактив Бенедикта, проводят биуретовую реакцию и через 15 минут определяют оптическую плотность пробы при

330 нм и при значениях более 0,25 опт,ед/мл определяют наличие эндогенной интоксикации.