Способ получения производных 2-амино-4-морфолино-6-пропил-1, 3,5-триазина или их фармацевтически приемлемых кислотно- аддитивных солей

 

Сущность изобретения: продукт: производные 2-амино-4-морфолийо-6-пропил- 1,3,5-триазина общей формулы bCXrV 2 сн2сн2снь где Ri-H, алкил или фенилалкил; Ra-OH, гидроксиалкил, алкоксиалкил, диалкиламино, фенилгидроксиалкил или (гидрооксициклоалкил ) алкил радикал или RI и R2 образуют вместе с атомом азота радикал алкиленимино, замещенный радикалом гидроксиалкил; при этом радикалы алкил и алкокси, имеют 1-4 атома углерода, а радикалы циклоалкил и алкиленимино имеют 4-6 атомов углерода. Реагент 1: 2-хлор-4-морфолино (или - NRi R2) - 6-пропил-1,3,5-тризины. Реагент 2: амин HNRiR2 или морфолин. Условия реакции: в среде органического растворителя в присутствии основания при температуре кипения. Целевой продукт обладает свойством повышения потенциала центральных и периферийных холинэргических эффектов, вызванных холиномиметич еским агентом, таким как, например, оксотреморин. 5 табл. 00 о QS

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ о к : -

N 3 с |,сн-,сн к г» г»

Ъ г

N rR1 () Н вЂ” | -1 | р ц 1кг

Сн сн Сн

1 (21) 4614758/04 (22) 15.08.89 (46) 30.03.93.Бюл,М 12 (31) 88.19493 (32) 16.08.88 (33) GB (71) |ОЦБ С.А.(BE) (72) Эрик Коссман, Жан Гобер, Ролан Буаден и Жак Матье (BE) (56) Патент Великобритании N 1390235, кл.

С 07 D 251/18, 1975.

Европейский патент М 0123473, кл. С 07

D 417/14, 1984. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХХ 2-АМИ НО-4-МОP ФОЛИНО-6ПРОПИЛ-1,3,5-ТРИАЗИНА ИЛИ ИХ

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫХ

КИСЛОТНО-АДДИТИВНЪ|Х СОЛЕЙ (57) Сущность изобретения: продукт: производные 2-амино-4-морфолино-6-пропил1,$,5-триазина общей формулы

Изобретение относится к способу получения новых 2-амино-морфолино-6-пропил1,3,5-триазинов или их кислотно-аддитивных нетоксичных фармацевтически приемлемых солей общей формулы l

„„ Ц „„1806142 АЗ (я)л С 07 О 413/04, А 61 К 31/33 // (С 07 0 413/04, 251: l2, 295:02) // где Ri-Н, алкил или фенилалкил; R2-0Н, гидроксиалкил, алкоксиалкил, диалкиламино, фенилгидроксиалкил или (гидрооксициклоалкил ) алкил радикал или Ri u Rz образуют вместе с атомом азота радикал алкиленимино, замещенный радикалом гидроксиалкил; при этом радикалы алкил и алкокс имеют

1-4 атома углерода, а радикалы циклоалкил и алкиленимино имеют 4-6 атомов углерода, Реагент 1; 2-хлор-4-морфолино (или — NR> Rz) — б-пропил-1,3,5-тризины. Реагент 2: амин

HNRqRg или морфолин. Условия реакции; в среде органического растворителя в присутствии основания при температуре кипения.

Целевой продукт обладает свойством повышения потенциала центральных и периферийных холинэргических эффектов, вызванных холиномиметиЧеским агентом, таким как, например, оксотреморин, 5 табл. гдв д1 — водород, алкил или фаиилалкил радикал;

Rz — гидроксильная группа, гидроксиалкил, алкоксиалкил, диалкиламино, фенилгидроксиалкил или (гидроксициклоалкил)алкил радикал

: или R> и Rz образуют вместе с атомом азота, с которым они связаны, радикал алкиленимино, замещенный радикалом гидроксиалкил, при этом радикалы алкил и алкокси имеют 1-4 атомов углерода, а ради1806142

20

30

Х-КЬГС3

NyN

СН2СН2СН Ъ

40

55 калы циклоалкил и алкиленимино имеют 4-6 атомов углерода, которые обладают ценными фармацевтическими свойствами и, в частности, свойством повышения потенциала центральных и периферийных холинэргических эффектов, вызванных холиномиметическим агентом таким, как, например, оксотреморин в то время, как сами новые соединения не обладают собственным холинэргическим эффектом. Известны структурные аналоги -2-амино-4-морфолино-б-алкил-1,3,5триазины, не имеющие заместителей по аминогруппе в положении 2/1/, которые увеличивают секрецию кортиноидов, в гормональной системе.

Известны также производные морфолина, замещенные в положении 2 группами, выбранными из урацилина, цитозинила, тиазолила (2), обладающие противоопухолевой активностью.

Цель изобретения — получение новых производных 1,3,5 — триазина, обладающих иным спектром биологических свойств, чем известные структурные аналоги.

Поставленная цель достигается синтезом новых производных 2-амино-4-морфолино-6-пропил — 1,3;5 — триазина общей формулы 1; который заключается втом,,что подвергают взаимодействию 2-хлор-б-.пропил-1,3,5-триазин общей формулы И где X — радикал морфолино или радикал—

NR>Rz, где R> и Яг имеют указанное значение. с азотсодержащим соединением, выбранным из амина формулы HNR>Rz, когда

Х вЂ” радикал морфолино, и из морфолина формулы l I I где X — радикал — NR

Способ согласно изобретению предпочтительно осуществлять при повышенной температуре, в основном, при температуре кипения используемого растворителя и в присутствии основания. Растворителем, в среде которого осуществляют реакцию, является либо сам амин. используемый s избытке, либо инертный органический растворитель, предпочтительно диоксан. В последнем случае используемым основанием является минеральное или органическое основание. отличающееся от амина, используемого в реакции, например, триэтиламин, Полученные таким образом 2-амино-4морфолино-б-пропил-1,3,5-триазин ы могут быть переведены в их соли присоединения нетоксической фармацевтически пригодной кислоты известными методами. В качестве примеров таких кислот можно назвать минеральные кислоты, например хлористоводородная кислота, бромистая кислота, серная и азотная кислоты, фосфорная кислота, органические кислоты, например уксусная, лимонная, винная, бензойная,. салициловая, малеиновые кислоты.

Когда молекула содержит один асимметрический атом углерода,. соединения формулы l могут быть представлены либо в форме рацемической смеси, либо в форме одного или другого энантиомера. Рацемическую смесь можно разделить на оптические энантиомеры известными методами, Исходные соединения формулы П, где

Х=NR)R2, получают известным методом путем взаимодействия 2,4-дихлор-6-пропил1,3,5-триазина с амином формулы HNR1R2, где R1 и Rz имеют указанные значения.

Изобретение иллюстрируют следующие примеры, Пример 1. 2-j/4-морфолино-6-пропил1,3,5-триазин-2-ил/амино) — этанол (соединение 1), Растворяют 145,5 г (0,6 моль) 2-хлор-4морфолино-б-пропил-1,3,5-триазина в 600 мл диоксана, В этот раствор вводят по каплям и при хорошем перемешивании примерно за 80 мин раствор 444 г (7,28 моль)

2-аминозтанола в 600 мл диоксана. Затем реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 7 ч, Образовавшийся хлоргидрат2-аминоэтанола охлаждают, декантируют и удаляют диоксан под пониженным дарлением. Полученный осадок растворяют в 5 л дизтилового эфира.

Этот раствор промывают водой, а промывочную воду повторно экстрагируют дихлорметаном, Органические фазы объединяют и высушивают на сульфате магния. Удаляют . растворитель под пониженным давлением.

Полученный твердый осадок рекристаллизуют из смеси 50:50 (объем) этилацетат — петролейный эфир.. Получают l39,8 r

2-((4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триази н-2-ил) амино)-этанола.

Выход: 88%. Точка плавления: 95-99 С, Анализ для С12Н211Ч502;

Вычислено,%: С 53,91; Н 7,92; N 26,20.

Найдено,%: С 54,30; Н 8,10; N 26,13, 2- /4-морфоли но-6-пропил-1,3,5-т р иаз- °

-ин-2-ил/амино)-этанол может быть пред1806142

20

30 моль/ 2-(/4-хлор-б-пропил-1,3,5-триазин-2ил/амино)-этанола и 8,7 г /0,10 моль/ морфо- 35 лина в 150 мл диоксина, Самопроизвольно

55 ставлен в двух различных кристаллических формах в зависимости от рекристаллизации продукта в метаноле (точка плавления: 9799 С) или в. толуоле (точка плавления: 8999 С).

Таким же образом получают соединения формулы I, приведенные в табл.1.

Пример 2, а) Получение исходного

2-f/4-хлор-б-пропил-1,3,5- триазин-2ил/амино ) - этанола, При температуре окружающей среды добавляют по каплям 24,4 г (0,4 моль) 2-аминоэтанола, растворенного, в 100 мл диоксана, в раствор 38,4 г (0,2 моль) 2,4-дихлор-б-пропил-1,3,5-триазина в 100 мл диоксина. После добавления выдерживают еще перемешивание в течение одной ночи. Фильтруют хлоргидрат 2-аминоэтанола,.а фильтрат выпаривают под пониженным давлением.

Полученный осадок рекристаллизуют иэ смеси этилацетат — гексан 50:50 (объем) Получают 41,5 г 2-f/4-хлор-б-пропил-1,3,5триазин-2-ил/амино)-этанола., Выход: 967. Точка плавления: 87-88 С

Аналиэ для CBH12CIN40

Вычислено, 6: С 44,34; Н 6, N 25,88; CI

16,40.

Найдено, g: С 44,42; Н 6,17; N 25,69; О

16,52. в) Получение 2-(/4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триазин-2- ил /амино ) -этанола.

Вариант 1. Смешивают 10,83 r/0,05 повышают температуру смеси до 41 С. Затем образовавшийся хлоргидрат морфолина нагревают в рефлюксе в течение 30 мин, затем охлаждают и фильтруют. Фильтрат выпаривают и рекристаллизуют в смеси

50:50 (объем) этилацетат-гексан. Получают

11,8 r 2-(/4-морфолино-б-пропил-1,3,5-триазин-2-ил /амин о}-эта нола.

Выход 88,4 $. Точка плавления 93-94 С.

Рекристаллизованный в метаноле продукт плавится при 97-98 С и является идентичным соединению I, полученному по примеру 1.

Вариант 2. Смешивают 10,83 г/0,05 моль/ 2-(/4-хлор-б-пропил-1,3,5-триаэин-2ил/амино)-этанола и 15,15 г /0,15 моль/ Мметилморфолина в 100 мл диоксана. Смесь нагревают в рефлюксе в течение 20 ч; затем охлаждают и удаляют диоксан под пониженным давлением. Осадок растворяют в

200 мл этилацетата. Раствор промывают два раза посредством 50 мл воды, высушивают над сульфатом натрия и концентрируют раствор. Продукт кристаллизуют в ходе выпаривания. Получают 9,23 r 2-(/4-морфолиноб-пропил-1,3,5-триазин-2-ил/амино)-этанола, идендичного продукту, полученному выше.

5 Как было указано, 2-амино-4-морфолино-б-пропил-1,3,5-триазины формул ы, а также их аддитивные соли обладают свойством коррекции эффектов гипофункции холинэргической системы. Это преимущественное свойство было выявлено в результате серии фармакологических испытаний, показывающих, что эти соединения оказывают определенный эффект, подобный эффекту хорошо известных холинэргических соединений таких, как оксотреморин, ареколин или фиэостигмин, или же противодействуют эффекту такого холинэргического антагониста, как скопбламин.

Соединения, полученные согласно изобретению, подвергались фармакологическим испытаниям. результаты которых приводятся ниже.

1. Потенциализация холинэргических .эффектов оксотреморина.

Целью этого теста является доказательство того. что соединения, согласно изобретению, усиливают центральные и периферийные холинэргические эффекты, вызванные путем введения мыши небольшой дозы оксотреморина, Степень периферийной холинэргической активации измеряется по слюновыделению, количественно определяемому по следующей системе отсчета:

О очков: союновыделение не превышает слюновыделение у обычной мыши;

1 очко: немного слюны находится вокруг зубов;

2 очка: слюна образует узкую полоску вокруг рта;

4 очка: слюна смачивает кожу под подбородком;

6 очков: слюна течет изо рта, например, на передние конечности.

Промежуточные очки не применяются, а слюна снимается после каждого наблюдения, Степень центральной холинэргической активации измеряется по тремогенному эффекту, количественно определяемому по следующей системе отсчета:

0 очков: нет дрожи;

1 очко: случайное, легкое периодическое дрожание;

2 очка: умеренно-легкое, часто повторяющееся дрожание;

4 очка; сильное дрожание, но с периодами покоя;

6 очков; очень сильное; почти постоянное дрожание, 1806142

Самцы мышей И MRI /20-25 r/ распре-. деляются на четыре группы по пять животных, а именно: одна контрольная группа и три обработанные группы. Тестируемое со- единение вводится интраперитональным 5 путем (в трех обработанных группах) эа 20 мин перед введением оксотреморина с разными дозами для каждой из образованных групп. Оксотреморин вводится нитреперитональным путем в обработанных группах и 10 в контрольной группе, с дозировкой 0,05 мг/кг, в растворе в 10 мл/кг физиологической сыворотки. Эта доза соответствует примерно минимальной дозе оксотреморина, которая вызывает дрожание и выделе- 15 ние слюны.

После введения оксотреморина животные отдельно помещаются в небольшие клетки и за ними устанавливается наблюдение с равномерными интервалами в 5 мин 20 до полного исчезновения холинэргических эффектов.

Для каждой из групп суммируются индивидуальные очки, исчисляемые за каждый период наблюдения; это позволяет соста- 25 вить кривую, представляющую сумму очков в зависимости от времени, характерную для каждой группы.

Средние значения поверхностей под кривыми; полученными для каждой иэ обра- 30 ботанных групп, сравнивают со средним значением поверхности под кривой, соответствующей контрольной группы, и проводят статистический анализ по методу

Манн-Уитнея. В результате этого сравнения 35 можно определить "минимальную активную дозу". Эта пминимальная активная доза" является минимальной дозой соединения, необходимой для наблюдения потенциализации эффекта слюновы- 40 деления или тремогенного эффекта оксотреморина, или, другими словами, для получения поверхности большей, чем поверхность для кривой, полученной для контрольной группы. 45

Результаты, полученные в этом тесте, с соединениями, полученными согласно изобретению, приводятся в табл.2. В табл.2 приводится для каждого соединения, подвергшегося испытанию (колонка 1), мини- 50 мальная доза (выраженная в мг/кг), введенная внутрибрюшным путем, необходимая .для наблюдения потенциализации эффекта слюноотделения (колонка 2) или тремогенного эффекта оксотреморина (ко- 55 ланка 3), Результаты, полученные в этом тесте,. доказывают. что все соединения, полученные согласно изобретению, усиливают эффект сл оноемделенил оксотреморине при минимальной дозе, составляющей 2,8-107 мг/кг, и усиливают тремогенный эффект при минимальной дозе. составляющей 8-112 мгlкг. Кроме того, минимальные активные дозы не обладают собственным холинэргическим эффектом и очень далеки от смертельных доз, определенных в тесте Ирвина, К оме того, этот тест выявил то, что эти соед нения; введенные в минимальной активной дозе, обладают более продолжительным эффектом, чем сложный метиловый эфир 1.2,5,6-тетрагидро-1-метил-З-пиридинкарбоновой кислоты (ареколин), являющийся хорошо известным холинэргическим соединением."

Таким образом, соединения изобретения показывают потенциалиэацию эффектов слюновыделения и тремогенных эффектов оксотреморина через 20 мин по-, сле их введения при минимальной активной дозе в то время, как в тех же самых условиях ареколин не дает никакой потенциализации.

2. Торможение черезмерной активности, вызванной скополамином, Животное, ломещенное впервые в новую окружающую среду, проявляет интенсивную исследовательскую активность по изучению этой новой среды.

Постепенное снижение.и последующее исчезновение этой активности по изучению, другими словами, привыкаемость к новой среде, может рассматриваться как элементарная форма обучения. Эта элементарная форма обучения чувствительна к влиянию . медикаментов, которые облегчают или которые замедляют обучение, Так, например, скополамин, соединение, которое вызывает мнезические расстройства, приводит к черезмерной познавательной активности у крысы, помещенной в новую окружающую среду; это явление связано с центральной антихолинэргической активностью этого соединения. Зато холинэргический агонист, типа физостигмина, противодействует черезмерной активности. созданной скополамином, В описанном тесте, в зависимости от их растворимости, соединения вводятся либо в физиологическую сыворотку, либо в соответствующий носитель (обычно, буферный раствор — цитрат с рН 5).

Этот тест позволяет установить, для соединений. полученных согласно изобретению, активность, сравнимую с активностью физостигмина.

Он базируется, с одной стороны, на ори- . гинальной технике, описанной А.P L ATEL, и, с другой стороны, на способе автоматизации регистрации измерений, В этом тесте используют самцов крыс

$ргадие-Dawley SPF. В течение недели пе1806142

40

55 ред экспериментом этих животных содержат в нормальных условиях группами по 15 животных в стандартных огражденных решетками клетках со свободным доступом к пище и питью.

8 начале эксперимента крыс распределяют на 4 однородные группы по 10 животных и приучают, в течение 1 ч, к месту эксперимента. Затем каждая группа животных подвергается определенной обработке: группа 1 получает две одновременные интраперитональные инъекции физиологической сыворотки или использованного носителя; группа 2 получает одну интраперитональную инъекцию физиологической сыворотки или использованного носителя и одну интраперитональную инъекцию в 0,5 мг/кг скополамина в растворе; группа 3 получает одну интраперитональную инъекцию тестируемого соединения в растворе в соответствующем носителе и одну интраперитональную инъекцию физиологической сыворотки или использованного носителя; группа 4 получает одну, интраперитональную инъекцию тестируемого соединения и одну интраперитональную инъекцию в 0,5 мг!кг скополамина.

Через 30 мин после этой обработки одновременно тестируют четыре группы животных. Для этой цели каждую группу помещают в квадратную камеру (100x100 см) с решетчатым полом и одной вертикальной стенкой высотой 50 см. Каждая из этих камер имеет 16 зон, включая 4 зоны по углам, 4 центральные эоны и 8 периферийных зон. Кроме того, каждая камера снабжена двумя рядами элементов инфракрасного излучения, расположенными в 2 см над полом,, для регистрации горизонтальных перемещений животных и двумя другими рядами элементов инфракрасного излучения, расположенными на высоте 10 см от пола, для регистрации вертикальных перемещений.

Эти элементы инфракрасного излучения соединены с микропроцессором, который позволяет определять среднюю от пройденных расстояний (в см) для одной группы животных, определять среднее число осуществленных выпрямлений, а также распределение горизонтальных перемещений в различных центральных, периферийных и угловых зонах, выраженных средним временем пребывания в этих различных зонах.

Каждое тестированное соединение исследуют, по меньшей мере. при трех различных дозах, исходя из которых определяют минимальную активную зону, которая тормозит черезмерную активность, наведенную интраперитональным введением 0,5 мг/кг скополамина. Затем сравнивают либо зна5

35 чения, полученные в группе 2, обработанной только скополамином, со значениями, которые получены в группе 4, одновременно обработанной скополамином и тестируемым соединением, либо значения, полученные в группе 4, со значениями, полученными в группе 3, обработанной только тестируемым соединением. Контрольная группа 1 служит для контроля действия скополамина, введенного в группу 2. Во всех случаях, отмеченныее различия статистически оценивают по методу Манн-Уитнея. "

Полученные в этом тесте результаты показывают. что соединения изобретения обладают хорошей тормозящей активностью в отношении черезмерной активности, наведенной скополамином. Определенные для этих соединений минимальные активные дозы составляют 1-89 мг/кг. Однако в противоположность физостигмину, который является неактивным, когда он вводится более чем за 15 мин (перед проведением измерений), соединения согласно изобретению еще обладают тормозящей активностью, когда они вводятся за 30 мин перед проведением измерений. Следовательно, их активность является более продолжительной, чем активность физостигмина, 3. Торможение эффектов скополамина на электроэнцефалограмме (ЭЭ Г).

Введение скополамина человеку или животному вызывает мнезические расстройства, сравнимые с расстройствами, которые появляются в ходе нормального или патологического старения. У пациентов, страдающих старческим слабоумием типа

Альцхаймера, получают улучшение мнезических расстройств путем введения физостигмина, соединения, которое тормозит ацетил-холинэстеразу.

Скополамин, введенный крысам интраперитональным путем, при дозе 0,5 мг/кг, приводит к изменениям спектра ЭЭГ, которые выражаются в повышении мощности полосы в 8 Гц, уменьшении мощности полос

20,8-40 Гц, а также в повышении общей мощности спектра ЭЭГ, Физостигмин противодействует этим изменениям.

Целью этого теста является подтверждение, посредством метода количественного анализа электроэнцефалограммы, того, что соединения изобретения обладают свойством нейтрализации воздействия скополамина на спектр ЭЭГ.

B. этом тесте используют самцов крыс

Albinos Sprague Dawley SPF (160-200 г).

Когда животные достигают возраста 3 мес, вживляют накрепко, асептически и под общей анестезией, 5 кортикальных электродов: один нейтральный, один лобный левый, 1806142

12 один лобный правый, один затылочный левьм и один затылочный правый электроды.

Тест проводят, когда животные достига. ют возраста примерно 15 мес. В интервале животные содержатся в индивидуальных 5 клетках, они получают воду и пищу по желанию и подвергаются регулярному суточному циклу, содержащему период темноты от 18 ч вечера до 6 ч утра, Одновременно, животные постепенно привыкают к клеткам зву- 10 конепроницаемой кабины, которые они, впоследствии, будут занимать для записи электроэнцефалограмм, а также к экспериментальным условиям путем введения плацебо интраперитональным путем. 15

Продукты вводят сразу перед записью

ЭЭГ.

Крыс распределяют по группам из 8 животных и записывают l6 образцов спектров

ЭЭГ за 5 секунд (два спектра ЭЭГ на живо- 20 тное), Затем полученные спектры анализируют на 3ВМ, что позволяет определять, для каждой группы, среднюю из 16 проведенных измерений и вычислить из нее, для одного животного, общую мощность спект- 25 ра ЭЭГ, а также распределение этой мощности (в %) o р азличных полосах частот.

Эту операцию (запись спектров) повторяют 9 раз (общая продолжительность

121 мин). 30

Эффект изучаемого соединения вычисляется из статистического сравнения результатов, полученных для различных групп животных, которым ввели соответственно тестируемое соединение, скополамин и пла- 35 цебо, В табл.3 приводится для некоторых соединений изобретения, введенных интраперитональным путем при дозе, указанной в мг/кг, процент снижения увеличения мощ- 40 ности 36 полосы 6,4-9,6 Гц (средняя 8 Гц), вызванного интраперитональным введением 0,5 Mã/êã скополамина.

Результаты показывают, что соединения, полученные согласно изобретению, как 45 и физостигнин, тормозят эффекты, которые оказывает скополамин на электроэнцефалограмму, Видно, что это торможение достигает и даже превышает 50 при относительно небольших дозах, очень дале- 50 ких от токсичных доз, что не является случаем для физостигмина.

4. Пассивное уклонение с многократными испытаниями, Соединения изобретения исследова- 55 лись с целью выявления, с одной стороны, их свойства содействия обучению, выраженного уменьшением числа испытаний, необходимых для достижения заранее определенного критерия, и, с другой стороны, их свойства противодействия амнезии, вызванной введением скополамина. Для этой цели использовали метод пассивного уклонения с многократными испытаниями. Этот метод хорошо известен в плане оценки эффектов, которые оказывает продукт на память и на обучение, Тест проводят на самцах крыс SpragueDawley(160-200 г), которых выдерживают во время эксперимента в стандартных клетках, Использованным устройством является квадратная прозрачная клетка со стороной 35 см и высотой 25 см, снабженная решетчатым электрифицированным полом. На полу, в одном из углов клетки, размещают резиновый изоляционный слой (10х17 см).

Для оценки способности соединения содействовать обучению осуществляют следующее испытание, Каждое животное помещают на резиновый слой и отмечают время, которое животное затрачивает на решение покинуть это место для исследования клетки, После 20 с исследования животное получает удар электрическим током (продолжительность 3 с) в лапы, вызывая реакцию бегства. Крысу сразу извлекают из устройства и снова помещают в прежнюю клетку. Повторяют этот эксперимент до тех пор, пока животное не остается по меньшей мере 180 с на резиновом слое, чтобы избежать получения удара электрическим током. Обучение выражается в среднем числе испытаний, необходимых для достижения времени пребывания на слое в 180 с.

Время пребывания на резиновом слое в

180 с рассматривается как максимальная достигаемая характеристика для животного для избежания получения удара электрическим током. Крысы, которые остаются на слое в течение этого времени, приобретают рефлекс уклонения и снова помещаются в их прежнюю клетку без получения удара электрическим током.

Для оценки способности соединения содействовать мнезическому удержанию по истечении времени, проводят следующий эксперимент. Каждое животное подвергают четырем испытаниям по.времени 0; 4; 24 и

28 ч, При первом испытании (время О), животное помещают на резиновый слой и отмечают время, которое затрачивает животное для принятия решения покинуть это место для исследования клетки.flocfte 20 с исследования крыса получает удар электрическим током (продолжительность 3 c) в лапы, вызывая реакцию бегства, Крысу немедленно извлекают иэ устройства и снова помещают в прежнюю клетку, В ходе трех последующих ислытеиий (еремя 4;.24 и 28 ч) 13

1806142

В колонках 5-12 приводятся результаты, полученные в эксперименте, использованном для оценки мнезического удержания. В колонках 5-8 цифры представляют среднее время пребывания, отмеченное соответственно во время О, 4, 24 и 28 ч для животных группы 3, обработанных только скополамином, а в колонках 9-12 представлены цифры, соответствующие животным группы 4, одновременно скополамином и исследуемым соединением (при дозе, указанной во второй колонке). Благоприятное влияние соединения в плане противодействия амнезии, вы- 5 званной скополамином, доказано увеличением времени пребывания на слое, при каждом наблюдении, Наблюдаемые различия статистически проанализированы по методу Ман-Уитнея, 45

50 животное снова помещают на резиновый слой и отмечают время, затраченное для оставления этого места. Как только четыре лапы животного попадают на решетку, оно получает удар электрическим током и немедленно извлекается из устройства.

В начале эксперимента крыс распределяют на 4 группы однородного состава из 15 животных. За 30 мин перед каждым испытанием каждую группу животных подвергают определенной обработке: группа 1 получает одну интраперитональную инъекцию физиологической сыворотки; группа 2 получает одну интраперитональную инъекцию тестируемого соединения; группа 3 получает одну интраперитональную инъекцию в 0,5 мг скполамина и группа 4 одновременно получает одну интраперитональную инъекцию

0,5 мг скополамина и одну интраперитональную инъекцию тестируемого соединения.

Группы 1 и 2 используют в первом эксперименте, а группы 3 и 4 используют во втором эксперименте.

Результаты, полученные в этом тесте с соединениями изобретения, воспроизводятся в табл.4. В табл.4 указаны подвергающееся испытанию соединение (колонка 1) и введенная интраперитональным путем доза, выраженная в мгlкг (колонка 2).

В колонках 3 и 4 приводятся результаты, полученные в испытании, использованном для оценки обучения. Цифры указывают среднее число испытаний, необходимых для того, чтобы контрольноеживотное(группа 1) или обработанное соединением животное (группа 2) научилось пребывать в течение

180 с на резиновом слое, чтобы избежать получения удара электрическим током.

Результаты проанализированы по тесту

Штудента.

В табл.4 видно, что соединения изобретения способствуют обучению рефлексу уклонения: среднее число испытаний, необходимых для достижения заранее определенного критерия (максимальное время пребывания на слое порядка 180 с), является меньшим для обработанных животных(колонка 4), чем для контрольных животных (колонка 3); амнезионный эффект скополамина очейь ярко выражен: видно, что время пребывания животных группы 3 (колонки 5-8) является явно меньше, чем 180 с, полученных контрольными животными после среднего числа испытаний (колонка

3); и, в этих условиях, благоприятное влияние соединений изобретения для противодействия амнезионному эффекту скополамина является очень явным: животные группы 4, одновременно обработанные скополамином и соединением изобретения, имеют время пребывания при каждом наблюдении значительно больше, чем животные группы

3, обработанные только скополамином (сравните результаты колонки 5 с результатами колонки 9, колонки 6 с результатами колонки 10 и т.д.); физостигмин оказывает благоприятное действие в плане противодействия амнезионному эффекту скополамина, подобное действию соединений изобретения, но при дозе, вызывающей побочные эффекты и очень близкой к токсичной дозе, что не относится к соединениям изобретения, 5. Токсичность.

Токсичность соединений изобретения определяется у самца мыши NMRI посредством теста Ирвина.

Нарастающие дозы тестируемого соединения вводятся итраперитонеальным путем группам из трех мышей до достижения смертельной дозы (доза, вызывающая смерть двух животных из трех за 48 ч).

В табл.5, приводится смертельная доза, наблюдаемая для соединений изобретения.

Из табл.5 следует, что соединения изобретения являются малотоксичными в противоположность физостигмину.

Формула изобретения

Способ получения производных 2-амино-4-морфолино-б-пропил-1,3,5 -триазина общей формулы

Q N — - М

gyN 2 гСНг ь где  — водород, алкил или фенилалкил радикал;

1806142

16 где Х вЂ” морфолино радикал или радикал — NR>Rz, где R> и йг имеют указанные значения, с эзотсодержащим соединением, выбранным из амина формулы HNRiRg, если Х— означает морфолино радикал, или из морфолина формулы

Z -N o, если Х вЂ” означает радикал — NR1Rz, где

Z — водород или радикал метил, à R> и йг имеют укаэанные значения и. при необходимости, полученное соединение переводят в фармацевтически приемлемую кислотноаддитивную соль.

Таблица1

2-R-4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триазин

Анализы

Соединение

Моль /1/

Заместитель R

Выход, Точка плавления, С

Расчет- Фактиченый, ский, %

1,1/2/

NHOH

51,6

93-94

86,6

ИНСНгСНгСнгОН

95-96

NH-/СНг/3-СНгОН

74,6

79-80

ИНСНг-CH-СНз !

ОН

90,0

104-105

22,0 56-57

56,76

8,37

23.50

1/3/

ИНСНг-СК-Сгнь

С 5695

Н 8,47

N 2373

ОН

С 56,95

Н 847

И 23,73

NH-СН-СНг ОН

Сгн5

90-91

75,4

56,92

8,40

23,60

85-86

С 56,95

Н 847

N 23,73

С 55,51 .Н 8,19

N 24.91

С 5552

Н 8,19

И 24,91

32,2

NH-Ñ/СНз/г-СНгОН

57,87

8,12

24,24

55.48

8,30

24,86

55,60

8,20

24.99

N/ÑÍç/-CHgCHzOH

62,6

32-33

ИНСНгСНгОСНз

44-45

42,7

Вг — гидроксильная группа, гидроксиалкил, алкоксиалкил, диалкилэмино, фенилгидроксиалкил или (гидрокси-циклоалкил)алкил радикал;. или R> и йг образуют вместе с атомом 5 азота, с которым они связаны, радикал алкиленимино, замещенный радикалом гидроксиэлкил, при этом радикалы алкил и алкокси имеют 1-4 атомов углерода. а радикалы циклоалкил и алкиленимино имеют 4-6 10 атомов углерода, или их фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей, о т л и ч а ю щ и и с я тем. что подвергают взаимодействию

2-хлор-б-пропил-1.3,5-триазин общей фор- 15 мулы N х-к "ГС1 1 Я

Сн Сн ™ ъ

С 5568

Н 8.20

N 32,24

С 55,51

Н 8,18

N 24,91

С 56,95

Н 8,47

N 2373

С 55,52

Н 8,19

N 24.91

55,70

8,19

32,19

55,02

8,26

24,42

56,95

8,61

23,42

55,50

8,00

23,48

1806142

Продолжение табл. 1

Заместитель R

Выход; Точка плавлеоС

Моль /1/

Анализы

Соединение

Фактический, Расчетный, 119-120

С 52 52

Н 7,74

N 23,57

68,7

11 NHCH2CHOHCHzOH

110-111

NH-C/CH2OH/з

51,37

?,64

21,41

54,02

61,0

13 NH-С/СН2ОН/г-СНз

121-122

48,0

Н

С

Н

С

Н

8,04

22,5

63,86

7,56

19,6

61,13

7,24

18,77

57-58

3ч/СН2С6Н5/С2Н40Н

NHCH/СнрОН/-

CHOHCeHs 50

107-108

16/4/ NH СнгСНОН Снз

97-98

С 55,52

Н 8.19

N 2491

17/5/ йНСН2СНОНСНз

94-95

55.52

8,19

24.91

75-76

NHCH

63.

60,90

8,66

20.99

С. Н

19/6/

СН,ОН

52,48

7,40

19,83

134-136

52,40

7.57

20,38

Й Н Й/Снз/2

63,6 105-106

С 54,14

Н 8,97

N .31,58

54,39

8,81

31,65

Таблица2

1) число моль амина на моль исходного продукта;

2) в присутствии 2 моль триэтиламина;

3) в присутствии 1 моль триэтиламина;

4) энантиомер с S-конфигурацией; (а )p25=+15,3/С=1, метанол/;

5) энайтиомер с R-конфигурацией; f а )р =-16,1/C=1. метанол;

6) хлоргидрат..

Потенциализация холинэргических эффектов оксотреморина

52,69

7,76

23,60

50,94

7,53

21,16.54,13

8,00

22,2

64,60

7,76

19,8

62,00

7,45

18,92

56,30

8,42

24.70

55,64

8,13

24,73

59,83

8,73

20,48

Продолжение табл, 2

Торможение эффектов скополамина на полосе 6,4-9,6 Гц ЭЭГ

180ti142

ТаблицаЗ

Таблица4

Таблицаб

1806142 .

Продолжение табл, 5

Составитель Г.Коннова

Техред М.Моргентал Корректор В.Патрушева

Редактор

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 963 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5