Противоопухолевое средство
Область применения: изобретение относится к медицине, а именно онкологии. Цель: повышение активности средства и снижение побочных эффектов. Сущность изобретения: состав содержит (в мас.%): 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин) 0,6-0,95; 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин) 0,05-0,4; декстран (м. м. 40000) или полиглюкин (м.м. 60000) или поливинилпирролидон (м. м. 12600) 0,5-2,0; лимонную кислоту или сорбиновую кислоту 0,025-0,1; воду для инъекций или 5%-ный раствор глюкозы или изотонический раствор натрия хлорида до 100. 14 табл., 4 ил.
Изобретение относится к медицине и касается лекарственных средств, предназначенных для лечения злокачественных опухолей. Целью изобретения является повышение активности и снижение побочных эффектов. Цель достигается тем, что прелагаемое лекарственное средство для лечения злокачественных новообразований содержит 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин, 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин, декстран (м. м. 40000) или полиглюкин (м. м. 60000), или поливинилпирролидон низкомолекулярный (м. м. 12600), лимонную или сорбиновую кислоту, воду или 5% раствор глюкозы, или 0,9% раствор натрия хлорида для инъекций в следующих соотношениях, мас. 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,60-0,95, 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,5-0,40, декстран (м.м. 40000) или полиглюкин (м.м. 60000) или поливинилпирролидон (м.м. 12600) 0,5-2, лимонная или сорбиновая кислота 0,025-0,100, воды или 5%-ного раствора глюкозы, или 0,9% раствора натрия хлорида для инъекций до 100. Лекарственное средство готовят следующим образом: ингредиенты растворяют в воде для инъекций или другом указанном растворителе при слабом встряхивании, избегая нагревания и вводят больному внутривенно. П р и м е р 1. 9-(2-Хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,95 9-(2-Хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,05 Поливинилпирролидон (м.м. 12600) 0,5 Сорбиновая кислота 0,025 Изотонический раствор натрия хлорида До 100,0 мм П р и м е р 2. 9-(2-Хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,80 9-(2-Хлорэтил-9-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,20 Полиглюкин (м.м. 60000) 0,80 Лимонная кислота 0,04 Раствор глюкозы 5% для инъекций До 100,0 мл
П р и м е р 3. 9-(2-Хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,75
9-(2-Хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,25
Полиглюкин (м.м. 60000) 1,00
Лимонная кислота 0,05
Раствор глюкозы 5% для инъекций До 100,0 мл
П р и м е р 4. 9-(2-Хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,73
9-(2-Хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,27
Полиглюкин (м.м. 60000) 1,00
Лимонная кислота 0,05
Раствор глюкозы 5% для инъекций До 100,0 мл
П р и м е р 5. 9-(2-Хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,67
9-(2-Хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,33
Декстран (м.м. 40000) 1,00
Лимонная кислота 0,06
Вода дистиллированная для инъекций До 100,0 мл
П р и м е р 6. 9-(2-Хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,60
9-(2-Хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,40
Декстран (м.м. 40000) 2,00
Лимонная кислота 0,10
Вода дистиллированная для инъекций До 100,0 мл
Предлагаемое лекарственное средство в качестве биологически активного вещества содержит нитрозопроизводные аминокислоты (гомоцитруллина) - 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин (изомер I) и 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин (изомер II), которые в отличие от прототипа обладают более низкой (в 15 раз ниже) алкилирующей активностью (табл.1). В отличие от прототипа они обладают антиметаболической активностью, конкурируя за ферментную транспортную систему с природным субстратом-лизином. Противоопухолевая активность предлагаемого лекарственного средства различного состава представлена в табл.2. В опытах использовались мыши BDF1, самцы и самки, с перевиваемым лейкозом L-1210. Препарат вводили однократно, в/бp через 48 ч после перевивки опухоли. Излеченные животные наблюдались от 3 до 24 месяцев без патологии и рецидивов. Контрольные животные (без лечения) погибали через 7-8 дней. Предлагаемый препарат показал высокую эффективность при лечении животных с опухолью легкого Льюис на мышах (однократное, в/бр введение) (табл.3). Излеченные животные наблюдались 12-24 месяца без проявления рецидивов и патологических отклонений. Не обнаружено никаких изменений внутренних органов (в том числе легких) при вскрытии забитых животных, контрольная группа (без лечения) погибала через 28-33 дня после перевивки. Предлагаемое лекарственное средство обладает более избирательным противоопухолевым действием по сравнению с прототипом, о чем свидетельствует вдвое больший по величине химиотерапевтический индекс (табл.4). Это обусловлено наличием в лекарственном средстве двух изомерных форм нитрозопроизводных аминокислоты. Диапазон терапевтических доз изомера II, вызывающих 100% извлечение животных с лейкозом L-1210 37,5-47,4 мг/кг, а в предлагаемом лекарственном средстве этот диапазон расширяется в 2 раза и составляет 26-57 мг/кг (табл.5). Обнаружено, что предлагаемое средство более избирательно, чем другие нитрозопроизводные нарушает репродуктивную функцию опухолевых клеток при кратковременном воздействии высоких концентраций, вызывая, например, полное ингибирование синтеза ДНК в клетках лейкоза L-1210 (фиг.1). (Влияние лекарственного средства (160 мг/кг) (1), изомера II (40 мг/кг) (2) и изомера I (120 мг/кг) (3) на включение 2-14С-тимидина в ДНК клеток лейкоза L-1210). Наряду с этим наблюдается минимальное повреждающее действие препаратов на синтез ДНК в здоровых клетках костного мозга и клетках эпителия тонкого кишечника (фи.2,3). Как показали наши исследования это объясняется конкурентным транспортом изомеров через плазматическую мембрану клетки. Оба изомера переносится в клетки 2-компонентной транспортной системой, а именно лизиновым переносчиком с близкими величинами констант ингибирования транспорта лизина (3,0
0,01 мм изомер I, 1,60,01 мМ изомер II для высокоаффинной транспортной системы, 2,50,2 мМ и 2,30,34 мМ соответственно, для низкоаффинной транспортной системы), конкурируя между собой за места связывания с ферментом-переносчиком. Обнаружено, что отдельные изомеры вызывают более сильные повреждения синтеза ДНК здоровых клеток, чем предлагаемое средство (см.фиг.2,3). (Влияние лекарственного средства (160 мг/кг) (1), изомера II (40 мг/кг) (2) и изомера I (120 мг/кг) (3) на включение 2-14С-тимидина в ДНК клеток костного мозга мышей с лейкозом L-1210, фиг.2). (Влияние лекарственного средства (160 мг/кг) (1), изомера II (40 мг/кг) (2) и изомера I (120 мг/кг) (3) на включение 2-14С-тимидина в ДНК клеток эпителия тонкого кишечника мышей с лейкозом L-1210, фиг.3). Неожиданное сочетание защитного эффекта в отношении здоровых клеток с максимальным повреждающим действием на опухолевые клетки обеспечивает высокую противоопухолевую активность предлагаемого лекарственного средства при сравнительно низкой его токсичности и превосходство предлагаемого лекарственного средства проявляется и в том, что оно не имеет перекрестной резистентности с известными противоопухолевыми препаратами: НММ, арабинозид-цитозином (Ара-Ц), фторурацилом (5-ФУ), сарколизином, обладает только частичной перекрестной устойчивостью с прототипом и дихлордиаминоплатиной (ДДП) (табл. 6,7,8). Как видно из таблиц предложенное лекарственное средство дает 100% извлечения животных с перевиваемыми штаммами L-1210, резистентными к широко известным противоопухолевым препаратам (сарколизину, 5-фторурацилу, арабинозид-цитозину и НММ). Предлагаемое лекарственное средство высокоэффективно на других лейкозах: излечивает часть животных с лейкозом Р-388, в 2 раза эффективнее по сравнению с прототипом в отношении плазмоцитомы МОРС-406. Существенные преимущества выявлены у него перед прототипом в действии на вирусные лейкозы, он в 2,5 раза эффективнее прототипа в отношении клеточного варианта лейкоза, индуцированного вирусом Мазуренко (табл.9). После лечения предлагаемым лекарственным средством у животных нормализуется масса селезенки и печени, приближаясь к соответствующим показателям интактных животных, чего не наблюдается при лечении прототипом (фиг.4). Предлагаемое лекарственное средство в 2-3 раза эффективнее прототипа при лечении мышей линии АКР со спонтанным вирусом лейкоза (первые генерации) УПЖ 53-143% и 19-54% соответственно). Лекарственное средство обладает широким спектром действия в отношении солидных опухолей (табл.10,11), превосходя известные препараты по противоопухолевой эффективности. Это обусловлено потенциированием эффекта индивидуальных изомеров в отношении некоторых опухолей. Например, изомер I эффективен только в высоких дозах до 1000-1250 мг/кг. При использовании доз адекватных по содержанию в предлагаемом лекарственном средстве (150-130 мг/кг) эффекта не было достигнуто ни при одной локализации опухоли. Изомер II в дозах 40-45 мг/кг тормозил рост опухоли ОЖ-5 на 74% со снижением эффекта. Продолжительность жизни животных увеличивалась лишь на 18% в дозах 47,50-50 мг/кг он был токсичен. Предлагаемое средство в дозах 175-200 мг/кг (доза изомера II 45-50 мг/кг) проявляло стабильный противоопухолевый эффект: торможение роста опухоли 74% сохранялось в течение 3 недель после однократного применения, продолжительность жизни животных увеличивалась на 42% (табл.12). Особенно наглядно проявляется преимущество предлагаемого лекарственного средства по отношению к известными в отношении развившихся опухолей (табл. 13,14). Одновременно в эксперименте показано, что эффективность лечения развившихся опухолей можно повышать повторными введениями лекарственного средства (см.табл.14). Это имеет немаловажное значение для лечения больных с запущенными формами опухолей. Повторное введение лекарственного средства возможно, так как обнаружено, что оно не обладает кумулятивными свойствами. Индекс кумуляции на мышах был вычислен по формуле:
МПД при однократном применении 240 мг/кг, при 15 кратном ежедневном применении разовая доза 30 мг/кг
Отрицательная величина индекса кумуляции свидетельствует об отсутствии кумуляции токсического действия (Давыдов В.Д. Вопросы медицинской токсикологии в курсе фармации. Горький, 1982). Клиническая картина интоксикации при многократном применении лекарственного средства аналогична токсическим проявлениям при однократном введении. Наблюдается снижение массы тела подопытных животных в течение трех недель после окончания курса введений, выявлено гематотоксическое действие, проявляющееся в снижении количества лейкоцитов в основном за счет уменьшения содержания лимфоцитов. Степень гематотоксичности прямо коррелирует с величиной применяемой дозы и носит обратимый характер. Не отмечено влияние препарата на функцию сердечно-сосудистой системы и мочевыделительной системы, печени и активность трансаминаз. Эффективность лекарственного средства была проведена в эксперименте на собаках со спонтанными опухолями, которые поступают в клинику животных ВОНЦ АМН СССР от жителей г.Москвы и Московской области. После отработки доз и режимов, лечению подвергалось 6 собак: 4 с диагнозом лимфобластная саркома III-IV стадии заболевания, 1 злокачественный мастоцитоз, 1 меланома. Эффект достигнут у всех животных с лимфобластной лимфосаркомой отмечалось уменьшение размеров лимфоузлов, снижение количества бластных клеток в периферической крови и костном мозге. Полная ремиссия в течение месяца получена у одного животного, у трех частичная различной длительности (в среднем 14 дней). Собака с инфильтрацией бластными клетками костного мозга и периферической крови (27 и 12 соответственно), после лечения предлагаемым лекарственным средством находится в частичной ремиссии без рецидивов около 15 месяцев, наблюдение продолжается. Представляет интерес лечение злокачественного мастоцитоза так как по данным литературы и собственным исследованиям известно, что это заболевание крайне устойчиво ко всем видам существующего лечения. Животное с рецидивом мастоцитоза после хирургического вмешательства в течение 2 месяцев лечили по схеме АЦОП, амбулаторно, лечение было не эффективно. Через месяц после окончания полихимиотерапии животному ввели однократно предлагаемое лекарственное средство. Через 5 дней после введения было отмечено уменьшение опухолевого узла на 63% и уменьшение региональных лимфоузлов. Длительность ремиссии составила 32 дня, затем рост опухоли возобновился. Лечение собак с меланомой не имело эффекта. Таким образом, показана эффективность предлагаемого лекарственного средства в монорежиме по сравнению с известными высокоэффективными препаратами (циклофосфан, локадин, ликурим и др.). Предлагаемое лекарственное средство для лечения злокачественных новообразований является новым, оригинальным по составу, высокоэффективным в отношении широкого спектра злокачественных опухолей, малотоксичным по сравнению с существующими, обладает избирательностью противоопухолевого действия, эффективно при лечении запущенных форм рака, не обладает кумуляцией и может применяться в повторных курсах лечения без выраженных побочных явлений.
Формула изобретения
РИСУНКИ
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11QB4A Регистрация лицензионного договора на использование изобретения
Лицензиар(ы): Государственное учреждение Российский Онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина Российской Академии Медицинских Наук, Институт органического синтеза им. И.Я.Постовского Уральского отделения Российской Академии наук
Вид лицензии*: ИЛ
Лицензиат(ы): Общество с ограниченной ответственностью "Завод Медсинтез"
Договор № РД0018414 зарегистрирован 09.02.2007
Извещение опубликовано: 20.03.2007 БИ: 08/2007
* ИЛ - исключительная лицензия НИЛ - неисключительная лицензия
