Способ получения плотной питательной среды для культивирования микроорганизмов

 

Изобретение относится к способу получения плотной питательной среды для культивирования микроорганизмов. Изобретение позволяет упростить технологию изготовления плотной питательной среды за счет сополимеризации акриламида и N.N -метиленбисакриламида в присутствии разветвленного полиакриламидз со средней молекулярной массой 7,2 104 при массовом соотношении разветвленного полиакриламида, акриламида, N.N -метиленбисакриламида, равном 0,028-0,11:7,0- 15,0:0,11-0,21 соответственно. 1 з.п.ф-лы, 1 табл.

СОЮЗ СОВ ЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

Г СУДАРСТВЕН.ЮЕ ПАТЕНТНОЕ

ЕДОМСТВО СССР (ОСПАТЕНТ СССР) фПИСАНИЕ ИЗОЬРЕтЕНИЯ

К: АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Ф и тяя

ЪФ (21) 4278310/05 (2(2) 25.06.87 (6) 30.08.93. Бюл. N. 32 (1) Киевский медицинский институт и .акад.A.À.Áoãîìoëüöà (2) В.B.Ãàøèíñêèé, В.П.Широбоков, Н .Н. Марченко, В.Г. Вой цеховский, 1

Т1И.Крайнюкова и В,В.Онищенко (5Д) Авторское свидетельство СССР и 1105767, кл. С 08 F 220/56, 1982., Авторское свидетельство СССР

1669158, кл. С 08 F 220/56, 1985. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЛОТНОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Изобретение относится к получению и отных питательных сред на основе поли ерных гелей и найдет применение в медицине и биологии.

Целью изобретения является упрощен е технологии изготовления питательной с еды за счет того, что отпадает необходим сть использования реактора (разлив в ч шки Петри) и сокращение времени реакц идо10-15 мин.

fl р и м е р 1. Для получения геля готовят ч тыре раствора А, В, С, О по следующей м тодике (укаэанные количества компонент в из расчета на 100 мл раствора).

1, Приготовление раствора А.

0,5 N,N.N. N -тетраметил этил ендиамина (Т М ЕД) растворяют в 99,5 мл фивиологичвс(ого раствора.

2. Приготовление раствора B.

0,735 г N,N -метилен-бис-акриламида (Ь БА) растворяют в 50 мл физиологического

„„5U„„1837G59 Al (я)з С 08 F 220/56, С 12 N 1/00 (57) Изобретение относится к способу получения плотной питательной среды для культивирования микроорганизмов. Изобретение позволяет упростить технологию изготовления плотной питательной среды за счет сополимериэации акриламида и

N,N -метиленбисакриламида в и рисутствии разветвленного полиакриламида со средней молекулярной массой 7,2 . 10 при массовом соотношении разветвленного полиакриламида, акриламида, N,N -метиленбисакриламида, равном 0,028-0,11:7,015,0:0,11-0,21 соответственно. 1 з.п.ф-лы, 1 табл. раствора, подогревают до температуры

60 С, добавляют 28 г акриламида (АА), размешивают до полного растворения. Полученный раствор фильтруют и доводят до объема 100 мл физиологическим. раствором.

3. Приготовление раствора С.

0,189 г персульфат ) аммония (ПА) растворяют в 50 мл физиологического раствора или дистиллированной воды и доводят до объема 100 мл.

4. Приготовление раствора О.

10,0 г разветвленного полиакриламида (РПА) со средней молекулярной массой 7,2 х х10 растворяют в 80 мл дистиллированной воды или физиологического раствора при температуре 50-60 С. Объем раствора доводят до 160 мл.

5. Приготовление раствора Е.

K 99,5 мл раствора С добавляют 0,5 мл раствора О, тщательно перемешивают, 1837059

Реакционную смесь готовят иэ растворов, взятых в следующих соотношениях:

А:В."Е 1;2:4, что соответствует весовому соотношению акриламида, N,N -метиленбисакриламида и разветвленного полиактиламида 7.0:0,21;0,028. Смесь разливают в чашки Петри и оставляют на воздухе, Сополимеризация протекает в течение 10-15 мин до Образования геля, который затем отмывают дистиллированной водой или физиологическим раствором в течение 1 ч.

Плотную питательную среду готовят путем пропитки полученного геля триптическим переваром по Хоттингеру (аминный азот 300 мг/; ) в течение 3 ч при температуре 56 С, с последующей стерилизацией в течение 30 минут.

Питательную среду засевают золотистым стафилококком и инкубируют при температуре 37 С втечение 24 часов. Плотная питательная среда обладает хорошими адгезионными свойствами, плотностью и прозрачностью, эластичностью, имеет гладкую поверхность, обеспечивающую эффект скольжения бактериологической петли при посеве микроорганизмов без повреждения ее поверхности. Выросшие микроорганизмы проявляют. характерные для них культурэльные и морфологические признаки, Культура хорошо снимается со среды без повреждения ее поверхности.

Пример 2. Для получения полиакриламидного геля используют растворы А, В.

С, 0 такие, как и в примере 1.

Приготовление раствора Е.

К 99,0 мл раствора С добавляют 1,0 мл раствора Р, тщательно перемешивают.

Реакционную смесь готовят из растворов при следующих соотношениях: А:В:Е =

=1:2;4, что соответствует весовому соотношению акриламида, N,N -метиленбисакриламида и разветвленного полиакриламида

7,0:0,21:0,057, Смесь разливают в чашки Петри и оставляют их для полимеризэции на воздухе.

Сополимеризация протекает в течение 5-10 минут до образования геля, который затем отмывают дистиллированной водой или физиологическим раствором втечение 1 часа.

Полученный гель пропитывают мясопептонным бульоном в течение 3 ч при температуре 56 С, с последующей стерилизацией в течение 30 мин, Питательную среду засевают кишечной палочкой и инкубируют при температуре

37 С в течение 24 ч. Выросшие микроорганизмы проявляют характерные для них культуральные и морфологические признаки, хорошо снимаются со среды без повреждения ее,поверхности. Плотная среда

30. соответствует весовому соотношению акри35

55

25 обладает хорошими адгезионными свойствами, плотностью и прозрачностью, эластичностью, имеет гладкую поверхность, обеспечивающую эффект скольжения бактериологической петли при посеве микроорганизмов без повреждения поверхности.

Пример 3. Для получения полиакриламидного геля готовят три раствора А, В, С по следующей методике.

1. Приготовление раствора А.

0,23 мл N, N, N .N -тетра метил атил е ндиамина растворяют в 50 мл дистиллированной воды или физиологического раствора и доводят до объема 100 мл, 2. Приготовление раствора В.

0,4 г N,N ìåòèëåê-бис-акриламида растворяют в 50 мл дистиллированной воды или физиологического раствора, подогревая дотемпературы 60 С, добавляют 60 r акрилэмида, размешивают до полного растворения, Полученный раствор фильтруют, доводят до обьема 100 мл.

3. Раствор С и 0 готовят аналогично примеру 1.

4, Приготовление раствора Е.

2 мл раствора D вносят в 98 мл раствора

С. Из приготовленных растворов готовят реакционную смесь, для этого растворы смешивают в соотношении А:В:C = 1:2:4, что ламида, N,N -ìåòèëåíáècàêðèëàìèäà и разветвленного полиакриламида 15,0:0,11:0,11.

Смесь разливают в чашки Петри. Сополимеризацию проводят на воздухе s течение 10-15 минут до образования геля.

Полученный гель отмывают дистиллированной водой или физиологическим раствором в течение 1 ч. Пропитку геля осуществляют мясо-пептонным бульоном в течение 3 ч при температуре 50-60 С, после стерилизации засевают споровую культуру.

Полученная среда плотная, обладает хорошими адгезионными свойствами, эластичностью, плотностью, прозрачностью, ровной поверхностью, ярко выраженным эффектом скольжения при посеве микроорганизмов бактериологической петлей. Культура вырастает типичная, хорошо снимается петлей без повреждения поверхности, Пример 4. Для получения полиакриламидного геля используют растворы А, В, С, 0 такие, как в примере 1.

Приготовление раствора Е.

0,1 мл раствора 0 добавляют к 99,9 мл раствора С и тщательно перемешивают.

Реакционную смесь готовят из раствора, взятых в следующих соотношениях:

А:В:Е - 1:2:4. Что соответствует весовому соотношению акрилэмидэ, М,N -метиленби1837059

Среднее количество колоний выросших на средах по прототипу и заявляемых

Среднее количество выросших колояий (по прототипу) Среднее количество выросших колоний (no предлагаемом способ

Посевная доза колониеобразующих единиц

Виды и штаммы микроорганизмов

96

94

94

82

76

100

97

96

94

88 .78

SZ aurevs

Е соИ К-12

Šcoll M — 17

В.cereus 504

В subtilis

Cavd elblcans

Составитель Г.Русских

Техред M.Моргентал Корректор М.Самборская

Редактор аказ 2854 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 сэ криламида и разветвленного полиакриламида 7,0:0,21:0,005.

Смесь разливают в чашки Петри и став т на воздухе. Сополимеризация протекае в течение 10-15 минут до образования г ля, который отмывают физиологическим раствором в течение 1 часа и пропитывают питательным субстратом для получения питательной среды.

Такой гель и питательная среда удовлетворительной плотности, прозрачны, однако имеют неровную, волнистую и верхность, что затрудняет скольжение б ктериологической петли при посеве микр организмов. Полученная питательная с еда не пригодна для работы.

Пример 5. Для получения полиакрил мидного геля используют растворы А, В, С, О такие, как в примере 1.

Приготовление раствора Е.

10 мл раствора 0 добавляют к 90 мл раствора С и тщательно перемешивают, Реакционную смесь готовят иэ раствор в, взятых в следующих соотношениях:

A}B:Е = 1;2:4, что соответствует весовому с отношению акриламида, N,N -метиленби1 о криламида и разветвленного полиакрилаида 7,0:0,21;0,57. Смесь разливают в ч шки Петри и ставят на воздухе. Сополимеризация протекает в течение 10 — 15 минут до образования геля, который отмывают физиологическим раствором в течение 1 часа и пропитывают питательным субстратом для получения питательной среды.

5 Такой гель и питательная среда удовлетворительной плотности слабо прозрачна, имеет матовый цвет, поверхность имеет некоторую шероховатость.- Полученная„питательная среда не пригодна для работы, 10 Формула изобретения

1, Способ получения плотной питательной среды для культивирования микроорганизмов сополимеризацией акриламида и

N,N -метилен-бис-акриламида в присутст15 вии инициатора и структурообразователя в физиологическом растворе до образования геля, отмывкой его и пропиткой питательным субстратом, отличающийся тем, что. с целью упрощения технологии иэготов20 пения, в качестве структурообразователя используют разветвленный полиакриламид со средней мол.м, 7,2 10 нри массовом соотношении разветвленного полиакриламида, акриламидв, N,й -метиленбисакрила25 мида, равном 0,028-0,11:7,0-15,0:0,11-021 соответственно.

2. Способ по и.f. о т а и ч а ю шийся тем, что используют водный раствор разветвленногоо полиакриламида.