Способ выявления летучих антибиотиков у грибов
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР . (ГОСПАТЕНТ CCCP) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ABTOPCKOMY. СВИДЕТЕЛЬСТВУ .> (21) 4902583/13 (22) 16,01.91 (46) 23.08.93. Бюл. N. 31 (71) Украинская сельскохозяйственная академия (72) С.Н.Харченко (56) Харченко С.Н. Микромицеты, поражаю щие корма в условиях Украинской ССР, и их токсичные свойства (экологические и прикладные аспекты). Автореф. дис,на соиск.уч.степ.докт.биол.наук, Киев, 1988. (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ЛЕТУЧИХ АНТИБИОТИКОВ У ГРИБОВ
° (57) Использование: изыскание продуцентов антибиотиков и других биологически акИзобретение относится к изысканию среди микроорганизмов продуцентов антибиотиков и других биологически активных веществ и может быть использовано в сельском хозяйстве при разработке экспрессметодов обнаружения в кормовых субстратах летучих продуктов, образуемых токсическими плесневыми грибами.
Целью изобретения является повышение эффективности способа выявления летучих антибиотиков грибов.
Поставленная цель достигается тем, что грибной материал (мицелий, споры и другие элементы), полученный при культивировании грибов в течение 10-ти суток на плотных и жидких питательных средах (пивное сусЛо и среда Чапека) при температуре 26-28 С, тщательно измельчают в кашицу и в количестве 10-15 r помещают равномерным слоем на дно стеклянных сосудов (стаканы объемом 50 — 100 мл, чашки Петри и Коха и др.).
Для получения фотоэффекта указанные емкости накрывают на расстоянии 2-10 см от грибной массы черной светонепроницае. Ы 1835429 А1 (я)л С 12 0 1/04, С 07 G 11/00, С 12 М 1/14 тивных веществ среди микроорганизмов и может быть использовано в сельском хозяйстве при разработке экспресс-методов обнаружения в кормах токсинообразующих плесневых грибов, продуцирующих летучие антибиотики. Сущность изобретения: грибной материал и колонии микромицетов измельчают и помещают на дно емкости, которая на расстоянии 2 — 10 см от грибной массы накрывают светонепроницаемой бумагой с вырезанными в ней отверстиями, сверху накладывают фотобумагу или фотопластину эмульсией вниз и экспонируют, после чего получают отпечатки воздействия летучих антибиотиков. 1 табл. мой бумагой с вырезанными в ней отверсти- ями в виде геометрических фигур. Затем сверху на светонепроницаемую бумагу накладывают фотобумагу или фотопластину эмульсией вниз, которые экспонируют над продуцентами ЛА в течение 5 — 60 мин в светозащищенном боксе или камере при ком, натной температуре (18-20 С).
Эффект действия ЛА грибов на фотоматериал получают без обработки его проявителем или закрепителем. Результат воздействия ЛА на фотоэкран (т.е. фотобумагу или фотопластины) получают в виде позитивных отпечатков иэображений узоров, вырезанных отверстий в фотонепроницаемой бумаге.
Влияние ЛА грибов на фотоэмульсию является результатом химического взаимодействия между ЛА и эмульсионным слоем подобно реакции бромистого калия с серебром, входящего в состав фотоэмульсии. По нашим данным интенсивность изображения отпечатков на фотобумаге зависит от химического состава ЛА, вида, штамма. воэ1835429
Тест к льт ы
Экспозиция воздействия
ЛА на фотоэмульсию, мин
Виды грибов-продуцентов ЛА
Е. со0
Вас.
ubtilis
Вача
yclopiu
А, niger
А, flavus оста, Угн етение
5
58
100 раста гриба-подуцента, контакта ЛА с фотоэмульсионным слоем.
Количественная и качественная оценка активности ЛА в каждом конкретном случае может служить показателем степени и продолжительности воздействия токсических микромицетов на контаминированные ими корма,"а также дать одно из разъяснений причин микостазиса кормовых субстратов, а также избирательности поражения кормов определенными видами грибов.
Нами, например, установлена особенность воздействия на фотоматериал ЛА грибов, характеризующихся дерматонекротическим действием. В частности, показано, что после контакта эмульсии фотобумаги (а также фотопластин) с ЛА, продуцируемыми
Dendrodochium toxicum, Stachybotrys alternans, Fusarium sporotrichlella, F,graminearum, изображение геометрических фигур отмечалось через 5 — 60 мин, Интенсивность и четкость отпечатков зависела в первую очередь от видовой принадлежности и возраста грибаподуцента ЛА (при прочих равных условиях эксперимента), В качестве биологических индикаторов (а также контроля) на продукцию ЛА служили отобранные в процессе работы чувствительные к летучим антибиотикам тест-культуры гифомицетов (Aspergillus fiavus А,niger. Penicillium
cyclopium) и некоторые бактериальные тесты
{Sarclna fiava, Е.coli, Вас,subtiiis), По нашим данным, во время осеннезимнего (ноябрь-февраль) хранения кормов особо опасные токсинообразующие виды грибов О toxicum, Р martensii u S.alternans при формировании на сене, соломе, зернофураже типичных для них грибниц с органами спороношения, проявляли в этот йериод наиболее высокую степень дерматонекротического влияния на кожу кролика, которая коррелировала в свою очередь с высоким выходом ЛА, о чем свидетельствовали отчетливо выраженные отпечатки на фотобумаге, появление которых регистрировали через
5-10 мин после начала контакта фотоэмульсии с токсинообразующими грибами, а также
Stachybotrys alternans 1012
S, alternans 902
Dendrodochium toxicum 93
D. toxicurn 1914 уровень антигрибной и антибактериальной активности летучих фунгистатиков.
Фотоэффект и антимикробная активность летучих антибиотиков грибов даны в таблице, Напротив, весной и летом (апрель-август) указанные в таблице грибы образуют на грубых кормах аспорогенные, с хорошо развитым воздушным мицелием атоксиче10 ские колонии, которые, как правило, характеризовались минимальной интенсивностью выделения ЛА (экспозиция воздействия ЛА на фотоэкран 30 — 60 мин). При этом наблюдалась смена видового состава микофлоры кормовых субстратов: S,alternans. и О toxlcum уступали место развитию грибов родов
Aspergillus и Peniclllium, активно продуцирующих ЛА (экспозиция воздействия ЛА на фотоэмульсию 5 — 10 мин).
20 Исходя из полученных данных, мы условно разделили токсинобразующие грибы по фотоэффекту (учитывая экспозицию воздействия ЛА на фотоэмульсию) на три группы, Если фотоэффект отмечался через 5-10 мин — гриб характеризуется остротоксическим, через 10 — 30 мин — среднетоксическим, через 30-60 мин — слаботоксическим.
Разработанный нами способ выявления
ЛА грибов с помощью фотоэмульсионных
30 экранов может быть использован для определения наличия ЛА и установления продолжительности воздействия их на кормовой субстрат и его микобиоту.
Практическая значимость подобных разработок состоит в том, что они имеют значительные преимущества перед органолептическим (часто субъективным) анализом, с помощью которого не всегда удается установить качество кормов.
40 . Формула изобретения
Способ выявления летучих антибиотиков у грибов, основанный на применении фотоэмульсионных экранов, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения эффективности способа, фотоэмульсионные экраны помещают над измельченным грибным мицелием на расстоянии 2 — 10 см при
18 — 20 С в течение 5 — 60 мин.
1835429
Продолжение таблицы
Составитель С. Харченко
Техред М.Моргентал Корректор Л. Пилипенко
Ъ
Редактор Т, Куркова
Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101
Заказ 2977 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва. Ж-35, Раушская наб.. 4/5
