Способ заражения морских свинок при изучении биологических свойств микобактерий туберкулеза

Изобретение относится к ветеринарии, микробиологии, в частности к созданию биологических моделей, и касается заражения морских свинок при изучении биологических свойств микобактерий туберкулеза (МТ). Для этого перед инъекцией в брюшную полость МТ суспендируются в 5 мл крови крупного рогатого скота, стабилизированной 3%-ным раствором цитрата натрия. Способ обеспечивает за счет незавершенного характера фагоцитоза микобактерий туберкулеза ускоренный выраженный генерализованный туберкулезный процесс, сокращение срока постановки биопробы. 1 табл.

 

Изобретение относится к области ветеринарии, преимущественно лабораторному делу и может быть использовано для заражения лабораторных животных при изучении возбудителя туберкулеза.

При изучении туберкулеза и его возбудителя в специальных научно-исследовательских целях применяют различные способы заражения мелких лабораторных животных, в частности морских свинок и кроликов.

В ветеринарных лабораториях известен способ подкожного заражения морских свинок в области паха, который применяется для диагностики туберкулеза, определения видовой принадлежности микобактерий и их вирулентности. При этом туберкулезных микобактерий суспендируют в физрастворе (наставление по диагностике туберкулеза животных. Утв. ДВ РФ - 18.11.2002. М.: - С.35. п.6.4.5.2).

Однако при существующем способе заражения продолжительность биопробы может колебаться от 90 до 150 дней и более (Кузин А.И. Туберкулез с-х животных и его профилактика. М. - Роспромиздат. - 1992. - С.143).

Диагноз на туберкулез считают установленным в хозяйстве только при выделении культуры возбудителя и при получении положительного результата биологической пробы. Удлинение срока постановки диагноза сопровождается масштабными экономическими потерями.

Кроме того, при подкожном способе заражения, на месте инъекции туберкулезных микобактерий образуется воспалительный инфильтрат, превращающийся затем в абсцесс. Примерно через 21 день абсцесс вскрывается наружу и с гноем вирулентный возбудитель выделяется во внешнюю среду и обсеменяет окружающие предметы.

Целью настоящего изобретения является оптимизация срока постановки биопробы и предотвращение контаминации окружающей среды высоковирулентным возбудителем.

Поставленная цель достигается тем, что туберкулезных микобактерий суспендируют в 5 мл стабилизированной крови крупного рогатого скота. Стабилизацию крови проводят 3%-ным раствором цитрата натрия из расчета 0,3 мл на 10 мл крови или любым другим применяемым в ветеринарной медицине антикоагулянтом и вводят в брюшную полость морской свинки живой массой 250-300 г.

У фиксированной головой вниз морской свинки, с левой стороны нижней трети брюшка, после выстригания волосяного покрова и обработки места инъекции суспензии 70% спиртом-ректификатом оттягивают большим и указательным пальцами левой руки кожу в складку от подлежащей ткани. Прокалывают вплотную над большим пальцем надетой на шприц отточенной под углом 45° иглой сначала кожу, а затем продвигают иглу в косом направлении через брюшные мышцы в брюшную полость. После появления чувства провала иглы в полость впрыскивают медленно содержимое шприца. После введения культуры микобактерий иглу вынимают, место вкола иглы дезинфицируют.

Перед введением в брюшную полость прививочный материал в течение 10-15 мин выдерживают в термостате при температуре 37-38°С. Результаты представлены в таблице.

Продолжительность жизни у морских свинок, зараженных различными способами культурой М. bovis, выделенными из биоматериала больных туберкулезом животных
№№ п.п.	Название хозяйства	Года неблагополучия	Заражение под кожу	Заражение в брюшную полость
			Дата	Продолжит. жизни (в дн.)	Дата	Продолжит. жизни (в дн.)
заражения	гибели	заражения	гибели
	а) при остром течении туберкулеза
1.	«Рассвет»	1999	12.01.99	9.03.99	56	12.01.99	15.02.99	34
2.	«Луч»	1999	21.11.99	22.12.99	33	21.11.99	5.12.99	24
3.	«Совхоз-техникум»	2000	5.01.00	24.02.00	50	5.01.00	12.02.00	38
4.	им. Вахитова	2000	3.02.00	3.04.00	33	3.02.00	26.02.00	23
5.	«Яна Сала»	2000	14.11.00	26.12.00	41	14.11.00	3.12.02	26
6.	«Новый арыш»	2002	18.06.02	9.08.02	51	18.06.02	26.07.02	39
7.	«Подберезье»	2002	10.10.02	20.12.02	70	10.10.02	7.11.02	28
8.	«Победа»	2002	18.10.02.	29.11.02	42	18.10.02.	12.11.02	25
9.	«Макулова»	2003	4.04.03	12.05.03	38	4.04.03	3.05.03	35
10.	«Матюшино»	2003	9.06.03	8.08.03	70	9.06.03	15.07.03	36
				М±m=48,4±4,55			30,8±2,06
	б) при длительном течении туберкулеза
1.	«Волга»	1999*	22.02.99	22.04.99	60	22.02.99	17.03.99	23
2.	им. Кирова	1999*	1.07.99	1.10.99	87	01.07.99	9.08.99	39
3.	М.Горького	2000*	23.05.00	14.08.00	83	23.05.00	3.07.00	41
4.	«К. - Устье»	2000*	1.11.00	1.02.01	91	01.11.00	18.12.00	47
5.	«Чулпан»	2000*	1.11.00	1.02.01	91	01.11.00	20.12.00	49
6.	«Тан»»	2000*	19.10.00	26.12.00	69	19.10.00	14.11.00	26
7.	«Кр. Октябрь»	2001*	4.08.01	16.10.01	73	04.08.01	29.08.01	25
8.	«Токарликовский»	2002*	11.04.02	9.07.02	89	11.04.02	24.05.02	43
9.	«Болтачево»	2002*	5.12.02	4.02.03	60	05.12.02	30.12.02	25
10.	«Победа»	2002*	17.12.02	5.03.03	79	17.12.02	25.01.03	40
				M±m=78,2±4,03			35,8±3,8
* - Дата повторного возникновения туберкулеза

Как видно из данных таблицы, продолжительность жизни у морских свинок, зараженных возбудителем туберкулеза, выделенным из биоматериала больных животных, с острым течением болезни, подкожным способом, составляет - 48,4±4,55, а внутрибрюшинным - 30,8±2,06 дней; при заражении возбудителем, выделенным из неблагополучных хозяйств с длительным течением болезни, в связи с многократными повторными вспышками болезни, через каждые 4-5 лет, соответственно - 78,2±4,03 и 35,8±3,8 дней.

Удлинение срока постановки биопробы в длительно неблагополучных хозяйствах мы связываем снижением вирулентности туберкулезных микобактерий более широким и интенсивным применением дезинфицирующих средств в этих хозяйствах, которое не всегда убивают, но, несомненно, оказывают значительное влияние на снижение вирулентных свойств микобактерий туберкулеза.

Кроме того, при инъекции туберкулезных микобактерий в брюшную полость на месте введения не образуются воспалительный инфильтрат и абсцесс.

Снижение срока продолжительности жизни у зараженных в брюшную полость происходит за счет разноса туберкулезных микобактерий фагоцитированными клетками крови. Ввиду того, что при туберкулезе фагоцитоз незавершенный, оседая в местах повторного внедрения, туберкулезные микобактерии, повреждая фагоциты, освобождаются и начинают усиленно размножаться, обуславливая генерализованный туберкулезный процесс. Особенно сильно поражаются печень, селезенка, сальник и другие органы. У больных проявляется лихорадка с повышением температуры тела до 39,3±0,28°С, развивается прогрессирующее истощение с потерей живой массы до 31% со 100% гибелью.

Использование предлагаемого способа заражения морских свинок сокращает срок постановки биопробы в 1,5-2,1 раза.

Способ внутрибрюшинного заражения морских свинок при изучении туберкулеза, отличающийся тем, что микобактерии туберкулеза перед инъекцией в брюшную полость суспендируются в 5 мл стабилизированной крови крупного рогатого скота 3%-ным раствором цитрата натрия.