Способ моделирования неспецифического язвенного колита

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для моделирования неспецифического язвенного колита. Для этого экспериментальному животному в слепую кишку внутрипросветно одновременно вводят 45-50% спиртовой раствор пикрилсульфоновой кислоты в дозе 0,8-1,0 мл/кг, 1-1,5% водный раствор метиленового синего в дозе 1,5-2,0 мл/кг и индерал в дозе 0,5-1,0 мг/кг. Способ обеспечивает адекватное воспроизведение модели при повышении точности моделирования и снижении трудоемкости.

 

Изобретение относится к медицине а именно к гастроэнтерологии, и может быть применено при моделировании неспецифического язвенного колита.

Известен способ моделирования острой язвы желудка с кровопотерей, включающий иммобилизацию крысы на 23-25 ч, а для получения кровопотери производят забор крови в объеме 25-35% от циркулирующей из хвостовой вены (1 - патентный документ РФ №2002131343, 2002). Данный способ принят за аналог.

Известен способ моделирования неспецифического язвенного колита (2 - Лисяная Т.А. Экспериментальное обоснование применения пиримиданта и спленина на модели неспецифического язвенного колита. 1991 г.). Этот способ принят за прототип.

Однако точность данного способа сравнительно ограничена.

Целью изобретения является повышение точности моделирования язвенного колита при снижении трудоемкости.

Указанная цель достигается тем, что экспериментальному животному в слепую кишку внутрипросветно одновременно вводят 45-50% спиртовой раствор пикрилсульфоновой кислоты в дозе 0,8-1,0 мл/кг, 1-1,5% водный раствор метиленового синего в дозе 1,5-2,0 мл/кг и индерал в дозе 0,5-1,0 мг/кг.

Способ осуществляется следующим образом.

Способ реализовывали на крысах породы Вистар весом 250-270 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза (40-60 мг/кг). Регистрировали электромоторную активность (ЭМА) слепой и подвздошной кишки с помощью биполярных поверхностных электродов площадью контактной поверхности 1,5-2 мм. Регистрацию проводили с помощью многоканального полиграфа Nishon-Konden.

Фоновая ЭМА слепой кишки характеризовалась медленноволновой активностью с частотой 10,7±1,9 в мин и амплитудой 0,24±0,04 мВ. Фоновая ЭМА слепой кишки характеризовалась достаточно интенсивной электрической и механической составляющей.

Фоновая ЭМА подвздошной кишки характеризовалась высокочастотными (20,8±3,2 в мин) и среднеамплитудными (0,52±0,07 мВ) медленными волнами. Таким образом, фоновая моторная активность подвздошной кишки была достаточно интенсивна.

Экспериментальному животному в слепую кишку внутрипросветно одновременно вводят 45-50% спиртовой раствор пикрилсульфоновой кислоты в дозе 0,8-1,0 мл/кг, 1-1,5% водный раствор метиленового синего в дозе 1,5-2,0 мл/кг и индерал в дозе 0,5-1,0 мг/кг.

Моделирование неспецифического язвенного колита сопровождалось следующими изменениями ЭМА слепой кишки: частота медленных волн составила 7,6±1,2 в мин, амплитуда - 0,27±0,05 мВ. Таким образом, введение препарата сопровождалось угнетением ЭМА слепой кишки.

ЭМА подвздошной кишки при моделировании неспецифического язвенного колита изменялась следующим образом: частота уменьшилась до 18,1±1,2 в мин (12,5%), амплитуда - до 0,34±0,03 мВ (на 34,6%, р<0,05). Таким образом, и в случае подвздошной кишки моделирование неспецифического язвенного колита также сопровождалось угнетением ЭМА подвздошной кишки.

Проводилось морфологическое исследование биоптатов слепой кишки на 10-й день моделирования неспецифического язвенного колита. Биоптаты слепой кишки фиксировали осмием и окрашивали толуидиновым синим. В биоптатах слизистой оболочки толстой кишки определяются признаки неспецифического иммунного воспаления: густая диффузная воспалительная инфильтрация слизистой оболочки лимфатическими клетками с примесью нейтрофилов и эозинофилов, поверхностные язвы, встречаются криптабсцессы и изменения формы и величины желез. Количество межэпителиальных лимфоцитов значительное - 4-5 в поле зрения. Они мигрируют из собственной пластинки в эпителий. Гистологические признаки воспаления локализуются в пределах собственной пластинки, не обнаруживаясь за пределами мышечной оболочки.

Моделированный язвенно-воспалительный процесс в слепой кишке соответствует клинико-морфологическим характеристикам неспецифического язвенного колита.

Способ далее поясняется примерами его реализации.

Пример 1

Белую крысу породы Вистар весом 250 г наркотизировали нембуталовым наркозом в дозе 40 мг и в условиях хирургической стадии наркоза вскрывали брюшную полость по белой линии живота, выделяли слепую и подвздошную кишку, накладывали на них контактные электроды площадью поверхности 1,5-2 мм². Регистрировали электромоторную активность слепой и подвздошной кишки с помощью многоканального полиграфа Nishon-Konden.

Фоновая ЭМА слепой кишки характеризовалась медленноволновой активностью с частотой 8,8 в мин и амплитудой 0,2 мВ. Фоновая ЭМА слепой кишки характеризовалась достаточно интенсивной электрической и механической составляющей.

Фоновая ЭМА подвздошной кишки характеризовалась высокочастотными (17,6 в мин) и среднеамплитудными (0,45 мВ) медленными волнами. Таким образом, фоновая моторная активность подвздошной кишки была достаточно интенсивна.

Экспериментальному животному в слепую кишку внутрипросветно одновременно вводили 45% спиртовой раствор пикрилсульфоновой кислоты в дозе 0,8 мл/кг с одновременным внутрипросветным введением 1% водного раствора метиленового синего в дозе 1,5 мл/кг и индерал в дозе 0,5 мг/кг. Биоптаты слепой кишки фиксировали в 10% нейтральном формалине, обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации, окрашивали осмием.

Моделирование неспецифического язвенного колита сопровождалось следующими изменениями ЭМА слепой кишки: частота медленных волн составила 6,4 в мин, амплитуда - 0,22 мВ. Таким образом, введение препарата сопровождалось угнетением ЭМА слепой кишки.

ЭМА подвздошной кишки при моделировании неспецифического язвенного колита изменялась следующим образом: частота уменьшилась до 16,9 в мин, амплитуда - до 0,31 мВ. Таким образом, и в случае подвздошной кишки моделирование неспецифического язвенного колита также сопровождалось угнетением ЭМА подвздошной кишки.

Проводилось морфологическое исследование биоптатов слепой кишки на 10-й день моделирования неспецифического язвенного колита. В биоптатах слизистой оболочки толстой кишки определяются признаки неспецифического иммунного воспаления: густая диффузная воспалительная инфильтрация слизистой оболочки лимфатическими клетками с примесью нейтрофилов и эозинофилов, поверхностные язвы, обнаруживаются изменения формы и величины желез. Количество межэпителиальных лимфоцитов значительное - 5 в поле зрения. Они мигрируют из собственной пластинки в эпителий. Гистологически определяемое воспаление локализуется в пределах собственной пластинки, не проникая за пределы мышечной оболочки.

Моделированный язвенно-воспалительный процесс в слепой кишке соответствует клинико-морфологическим характеристикам неспецифического язвенного колита.

Пример 2

Белой крысе весом 260 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза (50 мг/кг) вскрывали брюшную полость по белой линии живота, выделяли слепую и подвздошную кишку, накладывали на них контактные электроды площадью поверхности 1,7 мм². Регистрировали электромоторную активность слепой и подвздошной кишки. Фоновая ЭМА слепой кишки характеризовалась медленноволновой активностью с частотой 10,9 в мин и амплитудой 0,26 мВ. Фоновая ЭМА слепой кишки характеризовалась достаточно интенсивной электрической и механической составляющей.

Фоновая ЭМА подвздошной кишки характеризовалась высокочастотными (21,1 в мин) и среднеамплитудными (0,51 мВ) медленными волнами. Таким образом, фоновая моторная активность подвздошной кишки была достаточно интенсивна.

Экспериментальному животному в слепую кишку внутрипросветно одновременно вводили 47% спиртовой раствор пикрилсульфоновой кислоты в дозе 0,9 мл/кг с одновременным внутрипросветным введением 1,3% водного раствора метиленового синего в дозе 1,7 мл/кг и индерал в дозе 0,75 мг/кг.

Моделирование неспецифического язвенного колита сопровождалось следующими изменениями ЭМА слепой кишки: частота медленных волн составила 7,8 в мин, амплитуда - 0,29 мВ. Таким образом, введение препарата сопровождалось угнетением ЭМА слепой кишки.

ЭМА подвздошной кишки при моделировании неспецифического язвенного колита изменялась следующим образом: частота уменьшилась до 18,3 в мин, амплитуда - до 0,32 мВ. Таким образом, и в случае подвздошной кишки моделирование неспецифического язвенного колита также сопровождалось угнетением ЭМА подвздошной кишки.

Проводилось морфологическое исследование биоптатов слепой кишки на 10-й день моделирования неспецифического язвенного колита с фиксацией биоптатов осмием и окраской толуидиновым синим. В биоптатах слизистой оболочки толстой кишки определяются признаки неспецифического иммунного воспаления: густая диффузная воспалительная инфильтрация слизистой оболочки лимфоцитами, нейтрофилами и эозинофилами. Обнаруживаются поверхностные язвы, встречаются криптабсцессы и изменения формы и величины желез. Количество межэпителиальных лимфоцитов значительное - 4 в поле зрения. Они мигрируют из собственной пластинки в эпителий. Гистологически определяемое воспаление локализуется в пределах собственной пластинки, не проникая за пределы мышечной оболочки.

Моделированный язвенно-воспалительный процесс в слепой кишке соответствует клинико-морфологическим характеристикам неспецифического язвенного колита.

Пример 3

Белой крысе породы Вистар весом 270 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза (60 мг/кг) вскрывали брюшную полость по белой линии живота, выделяли слепую и подвздошную кишку, накладывали на них контактные электроды площадью поверхности 2 мм². Регистрировали электромоторную активность слепой и подвздошной кишки. Фоновая ЭМА слепой кишки характеризовалась медленноволновой активностью с частотой 12,6 в мин и амплитудой 0,28 мВ. Фоновая ЭМА слепой кишки характеризовалась достаточно интенсивной электрической и механической составляющей.

Фоновая ЭМА подвздошной кишки характеризовалась высокочастотными (24,0 в мин) и среднеамплитудными (0,59 мВ) медленными волнами. Таким образом, фоновая моторная активность подвздошной кишки была достаточно интенсивна.

Экспериментальному животному в слепую кишку внутрипросветно одновременно вводили 50% спиртовой раствор пикрилсульфоновой кислоты в дозе 1,0 мл/кг с внутрипросветным введением 1,5% водного раствора метиленового синего в дозе 2,0 мл/кг и индерала в дозе 1,0 мг/кг.

Моделирование неспецифического язвенного колита сопровождалось следующими изменениями ЭМА слепой кишки: частота медленных волн составила 8,8 в мин, амплитуда - 0,33 мВ. Таким образом, введение препарата сопровождалось угнетением ЭМА слепой кишки.

ЭМА подвздошной кишки при моделировании неспецифического язвенного колита изменялась следующим образом: частота уменьшилась до 19,3 в мин, амплитуда - до 0,37 мВ. Таким образом, и в случае подвздошной кишки моделирование неспецифического язвенного колита также сопровождалось угнетением ЭМА подвздошной кишки.

Морфологическое исследование биоптатов слепой кишки на 10-й день моделирования неспецифического язвенного колита показало, что в биоптатах слизистой оболочки толстой кишки налицо признаки неспецифического иммунного воспаления: густая диффузная воспалительная инфильтрация слизистой оболочки лимфатическими клетками, имеется примесь нейтрофилов и эозинофилов. Отмечались поверхностные язвы, криптабсцессы; железы измененной формы и различной величины. Количество межэпителиальных лимфоцитов значительное - 5 в поле зрения. Они мигрируют из собственной пластинки в эпителий. Гистологические признаки воспаления ограничены пределами собственной пластинки, не проникая за пределы мышечной оболочки.

Моделированный язвенно-воспалительный процесс в слепой кишке соответствует клинико-морфологическим характеристикам неспецифического язвенного колита.

Моделирование неспецифического язвенного колита осуществлено на слепой кишке 15 животных, модель воспроизведена в 100% случаев.

Источники информации

1. Пат. док РФ №2002131343, 2002.

2. Лисяная Т.А. Экспериментальное обоснование применения пиримиданта и спленина на модели неспецифического язвенного колита. 1991 г

Способ моделирования неспецифического язвенного колита, отличающийся тем, что экспериментальному животному в слепую кишку внутрипросветно одновременно вводят 45-50%-ный спиртовой раствор пикрилсульфоновой кислоты в дозе 0,8-1,0 мл/кг, 1-1,5%-ный водный раствор метиленового синего в дозе 1,5-2,0 мл/кг и индерал в дозе 0,5-1,0 мг/кг.