Способ культивирования личинок пантовой мухи и устройство для его осуществления

Изобретение относится к ветеринарной паразитологии и может быть использовано в пантовом оленеводстве. Способ предусматривает сбор личинок, их выращивание на питательной среде при температуре 35°С при перемешивании и с использованием гигиенической губки. В качестве питательной среды используют цельную кровь маралов, стабилизированную трилоном-Б с добавлением ривициклина-150. Устройство для культивирования личинок пантовой мухи имеет емкость с решеткой и сливным краном, сосуд с питательной жидкостью, гигиеническую губку, используемую в качестве естественного места обитания личинок, и систему подачи и перемешивания питательной среды. Система подачи и перемешивания питательной среды выполнена в виде горизонтально расположенного на решетке цилиндра. Один конец цилиндра посредством шланга с краном сообщен с сосудом с питательной средой, а другой - посредством шланга с краном сообщен с насосом, взаимосвязанным с сосудом с питательной средой. Цилиндр в верхней части имеет прорезь и консольно закрепленные вдоль обеих сторон прорези фигурные планки с ложем для личинок. Губка закреплена в пазах между планками и стенками цилиндра с перекрытием прорези по всей длине. Губка имеет толщину не более 12 мм и ее верхняя часть закрыта съемной крышкой с боковым зазором между губкой и верхними частями планок для свободного доступа личинок при их внедрении. Использование изобретения позволит получить высокий процент окуклившихся личинок и выплод имаго пантовой мухи. 2 н. и 1 з.п.ф-лы, 3 ил., 1 табл.

 

Изобретение относится к ветеринарной паразитологии и может быть использовано в пантовом оленеводстве при предварительном испытании эффективности биологических и химических инсектицидов и лярвоцидов для получения объекта исследования в различное время года, для изучения биологии пантовой мухи и паразитно-хозяинных отношений.

Известен способ культивирования личинок пантовой мухи, включающий сбор зрелых личинок III возраста из ран перед выпадением в почву для окукливания (июнь-июль) и помещение их в садки с субстратом (почвой), в котором происходит их окукливание и развитие до имаго (См. Мелуа Н.К., Разработка мер защиты пантов маралов от пантовой мухи (Booponus borealis rohd). - Автореф. дисс. канд. биол. наук, М., 1983, с.3-6). Однако данный способ позволяет получать имаго только из зрелых личинок III возраста, которых в сборах на момент срезки пантов (в другое время невозможен сбор ввиду полувольного содержания маралов) остается незначительное количество.

Известен способ культивирования личинок пантовой мухи на длиннохвостых сусликах и щенках собак путем имплантации личинок I возраста под кожу в местах надрезов. Личинки II и III стадии развиваются без миграции в местах внедрения личинок I стадии, питаясь кровью хозяина (См. Садовникова Т.П. Пантовая муха и меры борьбы с нею, Автореф. дисс. канд. биол. наук, М., 1969, с.3-4). Кроме негуманности, способ характеризуется низкой приживаемостью личинок, затратами, неудобством содержания в полевых условиях сусликов и щенков собак.

Необходима разработка способа культивирования личинок, обеспечивающего высокий процент окукливания личинок II и III возрастов, а следовательно, и выплод имаго пантовой мухи.

Указанный технический результат достигается тем, что способ культивирования личинок пантовой мухи предусматривает сбор личинок, их выращивание на питательной среде при ее перемешивании при температуре 35°С с использованием гигиенической губки толщиной не более 12 мм, причем в качестве питательной среды используют цельную кровь маралов, стабилизированную трилоном-Б с добавлением ривициклина-150, при следующем соотношении компонентов, мас.%: цельная кровь марала - 95; трилон-Б - 1; ривициклин-150 - 14, а перемешивание питательной среды проводят не реже 2-х раз в сутки.

Устройство, обеспечивающее осуществление данного способа культивирования, характеризуется тем, что оно имеет емкость с решеткой и сливным краном, сосуд с питательной средой, гигиеническую губку, используемую в качестве замены естественного места обитания личинок, и систему подачи и перемешивания питательной среды. Система подачи и перемешивания питательной среды выполнена в виде горизонтально расположенного на решетке цилиндра, один конец которого посредством цилиндра с краном сообщен с сосудом с питательной средой, а другой - посредством шланга с краном сообщен с насосом, взаимосвязанным с сосудом с питательной средой. Цилиндр в верхней части имеет прорезь и консолью закрепленные вдоль обеих сторон прорези фигурные планки с ложем для личинок, а губка закреплена в пазах между планками и стенками цилиндра с перекрытием прорези по всей длине и имеет толщину не более 12 мм. Верхняя часть губки закрыта крышкой с боковым зазором между губкой и верхними частями планок для свободного доступа личинок при их внедрении.

Сущность способа заключается в том, что разработанная питательная смесь, позволяет получать высокий выход имаго из личинок II и III возраста при применении ряда моментов в заявленном устройстве. Так, использование губки толщиной не более глубины закрепления личинки (не более 12 мм) позволяет им питаться непосредственно из полости цилиндра, при этом экскременты отделены от зоны питания самой губкой, исключена необходимость регулярной промывки губки, а неоднократное принудительное возбуждение питательной смеси при подключении насоса обеспечивает исключение ее застоя и равномерное перемешивание, сохраняя качество питательной среды.

Выбор оптимального состава питательной среды для культивирования личинок II и III возраста пантовой мухи был осуществлен на опытах с пятью питательными средами с использованием стабилизированной крови марала трилоном-Б, гепарином, цитратом натрия, дефибринированной кровью и сывороткой крови марала. Во всех случаях использовался антибиотик ривициклин-150 при температурных режимах от 29 до 38°С.

Влияние состава питательной среды и условий культивирования на развитие личинок пантовой мухи приведены в таблице 1.

Таблица 1. Влияние питательной среды и условий культивирования на развитие личинок пантовой мухи
Компоненты питательной среды	Температура воздуха, °С	Заложено личинок	Достигло стадии предкуколки, %	Выплодилось имаго
без диапаузы	с диапаузой	всего, %
1. Кровь марала стабилизированная, 95 мл; Трилон-Б, 10% р-р, 1 мл; ривициклин-150, 4 мл	29,0	20/10	10,0/60	0/2	0/3	0/30
	32,0	23/12	30,4/78	0/1	2/5	8,7/41,6
	35,0	22/8	81,8/100	2/1	11/7	61/1/87,5
38,0	20/9	45,0/66,7	0/1	2/3	10,0/33,3
2. Кровь марала стабилизированная, 95 мл; гепарин 1% р-р 1 мл; ривициклин-150, 4 мл	29,0	25/19	4,0/21,1	0/3	0/5	0/26,3
	32,0	22/17	13,6/58,8	0/2	1/8	4,5/47,1
	35,0	25/20	40,0/75,0	2/4	5/11	20/55,0
38,0	24/21	20,8/47,6	0/1	1/5	42/23,8
3. Кровь марала стабилизированная, 95 мл; натрия цитрат, 100 мг, ривициклин-150, 4 мл	29,0	18/10	0/50,0	0/2	0/3	0/30,0
	32,0	20/10	15,0/60,0	0/2	1/4	5,0/40,0
	35,0	19/15	52,6/66,6	2/3	8/8	42,1/53,3
38,0	18/12	27,8/33,3	0/1	1/2	5,5/16,7
4. Кровь марала дефибринированная, 95 мл; ривициклин-150,4 мл	29,0	16/11	6,2/54,5	0/2	0/4	0/36,4
	32,0	18/16	44,4/56,3	0/2	3/5	16,6/31,2
	35,0	18/18	61,1/77,8	1/2	7/10	38,8/55,6
38,0	14/19	35,7/52,6	0/1	1/4	7,1/21,1
5. Сыворотка крови марала, 75 мл; глюкоза 10% р-р, 20 мл; ривициклин-150, 4 мл	29,0	15/15	0/13,3	0/0	0/0	0/0
	32,0	17/12	0/8,3	0/0	0/0	0/0
	35,0	14/16	7,1/25	0/1	0/1	0/6,2
38,0	15/13	0/15,4	0/0	0/0	0/0

Из данных таблицы видно, что состав питательной среды и температурный режим играют важную роль при культивировании личинок пантовой мухи. При температуре 35°С количество личинок, достигших стадии предкуколки, во всех опытах было максимальным. Данная температура принята за оптимальную. При кормлении личинок питательной средой, состоящей из крови, стабилизированной трилоном-Б и содержащей 4 мл ривициклина-150, 81,8% личинок II и 100% личинок III возраста достигли стадии предкуколки, а выплод имаго произошел в 61,1 и 87,5% случаев соответственно.

При кормлении личинок другими питательными средами окукливание личинок II возраста наблюдается в 40-61,1%, III возраста - 66,6-77,8%, а выплод имаго - 20-42,1% и 53,3-55,6% случаев соответственно. В опытах с питательной средой, состоящей из сыворотки крови марала, глюкозы и ривициклина-150, количество окуклившихся личинок и выплодившихся мух было минимальным (7,1; 25% и 0;6,2%).

Устройство для осуществления способа культивирования личинок II и III возрастов пантовой мухи изображено на фиг.1. - общий вид цилиндра в продольном разрезе, на фиг.2 - разрез по А-А, на фиг 3 - общая схема устройства.

Устройство состоит из сосуда 1 с питательной жидкостью, соединенного шлангом 2 с цилиндром 3, расположенным на решетке 4, закрепленной у дна емкости 5 со сливным краном 6. Цилиндр 3 в верхней части имеет продольную прорезь 7 и консольно закрепленные с двух ее сторон фигурные планки 8 с ложем 9 для личинок. Губка 10 закрепляется в пазах, образованных планками 8 и цилиндром 3. Верхняя часть губки 10 прикрыта свободно лежащей крышкой 11 с зазором между ее боковыми гранями и планками 8. Крышка 11 не позволяет личинкам при посадке расползаться по всей поверхности губки. Расползание личинок затруднило бы сбор экскрементов, тем более что последние являются для личинок ядом и вызывают их гибель. Второй конец цилиндра 3 шлангом 12 соединен с насосом 13, который в свою очередь соединен с сосудом 1. Шланги 2 и 12 закреплены в торцах цилиндра 3 посредством пробок 14 с отверстиями и снабжены кранами 15 и 16 соответственно.

Пример. Работа устройства и осуществление способа выглядят следующим образом. После сборки устройства (согласно чертежу) в сосуд 1 наливают питательную смесь и открывают кран 15. Личинок пантовой мухи II и III возрастов сразу после сбора промывают физиологическим раствором и размещают на ложах 9 планок 8, предварительно надавив крышкой 11 на губку 10, чтобы поступившая в цилиндр питательная смесь смочила губку. Личинки внедряются в губку на всю ее толщину (не более 12 мм) и закрепляются при помощи шипиков. Задние концы личинок при этом остаются свободными, в то время как ротовые отверстия проникают в полость цилиндра с питательной смесью. 2 раза в сутки открываются краны 15 и 16 и включается на 30 секунд насос 13 для предупреждения расслоения питательной смеси и ее оседания. Кратность и время перемешивания достаточны (как показали исследования) для сохранения качества заявленной питательной среды. В это же время удаляются экскременты путем протирания ложа 9 ватно-марлевым тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором. Культивирование личинок проводят при температуре 35°С посредством помещения всего устройства в термостат. Дважды в сутки проверяют состояние личинок - по внешнему виду, изменению их объемов и цвета тела. Погибших личинок убирают, а зрелых переносят в садки с субстратом, где и происходит окукливание. При необходимости повторного использования устройства, оно разбирается, промывается, использованная губка заменяется на новую.

Садки с окуклившимися личинками помещают в нижнее отделение холодильника, где они хранятся при температуре 4°С. По мере необходимости садки достают и задают им нужный температурный режим для выплода имаго.

Использование заявленного способа и устройства для его осуществления позволяет обеспечить высокий процент окуклившихся личинок и выплод имаго пантовой мухи не только из зрелых личинок, но и из незрелых личинок II и III возрастов путем исключения гибели личинок из-за закисания в толще губки питательной смеси, разделения зоны питания и зоны выделения экскрементов, регулярного поддержания качества питательной смеси, что предупреждает ее расслоение, оседание и закисание.

1. Способ культивирования личинок пантовой мухи, предусматривающий сбор личинок, их выращивание на питательной среде при ее перемешивании и при температуре 35°С с использованием гигиенической губки толщиной не более 12 мм, причем в качестве питательной среды используют цельную кровь маралов, стабилизированную трилоном-Б с добавлением ривициклина-150, при следующем соотношении компонентов, мас.%: цельная кровь маралов - 95, трилон-Б - 1, ривициклин-150 - 4.

2. Способ по п.1 характеризуется тем, что перемешивание питательной среды проводят не реже 2-х раз в сутки в течение 30 с.

3. Устройство для культивирования личинок пантовой мухи по п.1 характеризуется тем, что оно имеет емкость с решеткой и сливным краном, сосуд с питательной жидкостью, гигиеническую губку, используемую в качестве замены естественного места обитания личинок, и систему подачи и перемешивания питательной среды, при этом система подачи и перемешивания питательной среды выполнена в виде горизонтально расположенного на решетке цилиндра, один конец которого посредством шланга с краном сообщен с сосудом с питательной средой, а другой - посредством шланга с краном сообщен с насосом, взаимосвязанным с сосудом с питательной средой, причем цилиндр в верхней части имеет прорезь и консольно закрепленные вдоль обеих сторон прорези фигурные планки с ложем для личинок, а губка закреплена в пазах между планками и стенками цилиндра с перекрытием прорези по всей длине, имеет толщину не более 12 мм, и ее верхняя часть закрыта съемной крышкой с боковым зазором между губкой и верхними частями планок для свободного доступа личинок при их внедрении.