Способ прогнозирования отслойки хориона и плаценты на ранних сроках беременности на основании определения полиморфизма гена ингибитора активатора плазминогена i типа (pai-1)



Способ прогнозирования отслойки хориона и плаценты на ранних сроках беременности на основании определения полиморфизма гена ингибитора активатора плазминогена i типа (pai-1)
Способ прогнозирования отслойки хориона и плаценты на ранних сроках беременности на основании определения полиморфизма гена ингибитора активатора плазминогена i типа (pai-1)

 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2494400:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования отслойки хориона и плаценты на ранних сроках беременности. Осуществляют выделение ДНК с последующей амплификацией полиморфизма -675 5G>4G гена ингибитора активатора плазминогена I типа (PAI-1) при помощи метода ПЦР. Вероятность развития отслойки хориона и плаценты у женщин с высоким риском самопроизвольных репродуктивных потерь при генотипе 4G/4G прогнозируют как 50,0%, при генотипе 4G/5G - как 35,3%. Изобретение позволяет с довольно высокой точностью прогнозировать вероятность отслойки хориона и плаценты на ранних сроках, что способствует более рациональному ведению беременности и улучшению ее исходов. 3 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и предназначено для прогнозирования отслойки хориона и плаценты на ранних сроках при полиморфизме генов PAI-1.

Отслойка хориона и плаценты на ранних сроках беременности в общей популяции составляет 3%, у женщин с привычной потерей беременности может достигнуть 10-15%. Наиболее часто встречаются субхориальные отслойки в среднем в 7 недель беременности, что соответствует наиболее активной фазе инвазии цитотрофобласта в стенки спиральных артерий [3].

Наличие отслоек сопровождается наружным кровотечением в 71%, бессимптомным течением - в 29%. Если не происходит гибель эмбриона (плода), то в дальнейшем возможно развитие плацентарной недостаточности - в 24% случаев, преждевременных родов - в 16-19%, преэкламсии - в 8%, задержки развития плода - в 7%, дистресс-синдрома у новорожденного - в 19%. Частота кесарева сечения у данного контингента беременных составляет 27% [2].

Существенное значение в процессе инвазии цитотрофобласта играет соотношение фибринолитических и антифибринолитических компонентов системы гемостаза на локальном (эндометрий) уровне. Процесс регуляции фибринолиза зависит от активности активаторов плазминогена тканевого и урокиназного типа (t-PA и u-РА) и от уровня синтеза и секреции ингибиторов активации плазминогена (PAI-1 и PAI-2). [1, 5]

PAI-1 ответственен не только за повышение депозиции фибрина в маточных сосудах и снижении маточно-плацентарного кровотока, ему принадлежит также важная роль в снижении степени инвазии трофобласта в ранние сроки беременности. Имеется также связь между ранними преэмбриотическими потерями и уровнем PAI-1, что в основном связано с дефектами имплантации [4].

При подготовке к имплантации под влиянием прогестерона в эндометрии происходит повышение содержания PAI-1, тканевого фактора и снижение уровня активаторов плазминогена тканевого и урокиназного типов (t-PA и u-РА) и других протеаз, необходимых для разрушения экстрацеллюлярного матрикса в процессе имплантации. В условиях гипофибринолиза, в частности, связанных с полиморфизмом генов PAI-1 происходит десинхронизация локальных процессов фибринолиза и фибринообразования при имплантации. В такой ситуации протеаз, синтезируемых бластоцистой, становится недостаточно для разрушения экстрацеллюлярного матрикса и адекватного внедрения в эндометрий. В связи с этим происходит образование ретрохориальных отслоек наиболее часто в сроки 8,3±0,4 недели [2].

Ингибитор активатора плазминогена (PAI-1) образуется в клетках эндотелия, гепатоцитах, а также в неактивной форме может высвобождаться из тромбоцитов. Концентрация PAI-1 зависит как от внешних (уровень триглицеридов [8], курение [9]), так и внутренних (генетических) факторов. Известен полиморфизм в промоторной области гена PAI-1. Различия в фенотипических проявлениях генотипа PAI-1 обусловлены тем, что с промотором гена 5G может связываться как активатор, так и репрессор, а с промотором гена 4G - только активатор. Поэтому ген 5G, легко включается и легко выключается, а ген 4G легко включается, но слабо выключается [6, 7].

Полиморфный вариант 4G сопровождается повышенной экспрессией гена и повышением уровня PAI-1 в крови [9]. В результате снижается активность фибринолитической системы. В крови людей, имеющих вариант 4G/4G, концентрация PAI-1 значительно выше, чем при вариантах 5G/4G и 5G/5G.

Задача изобретения - повысить эффективность прогнозирования отслойки хориона и плаценты на ранних сроках беременности на основании определения полиморфизма гена PAI-1.

Поставленная задача решается тем, что на основании определения полиморфизма гена PAI-1 вне беременности с высокой степенью вероятности возможно прогнозирование отслойки хориона и плаценты на ранних сроках беременности и проведение лечебно-профилактических мероприятий.

Определение полиморфизма гена PAI-1 необходимого производить у женщин:

1) с метаболитическим синдромом;

2) при наличии репродуктивных потерь;

3) при наличии плацентарной недостаточности в анамнезе;

4) при наличии преэкламсии в анамнезе.

Практически способ осуществляется следующим образом:

Материалом для проведения исследования является периферическая кровь. Взятие крови для исследования осуществляется путем пункции кубитальной вены. В качестве антикоагулянта используется ЭДТА. Допустимо также использовать цитрат.

1-й Этап: Выделение ДНК

Для выделения ДНК используется комплект реагентов ПРОБА-РАПИД-ГЕНЕТИКА или ПРОБА-ГС-ГЕНЕТИКА (000 «НПО ДНК-Технология», Россия)

Полученный препарат ДНК можно хранить до 7 суток при температуре 2-8°C, при температуре минус 20°C до одного месяца.

2-й Этап. Проведение реакции амплификации

Для проведения амплификации используется комплект реагентов для определения генетических полиморфизмов, ассоциированных с нарушениями функций сердечно-сосудистой системы «КардиоГенетика» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия).

1. Внести в промаркированные пробирки по 20 мкл соответствующей смеси для амплификации.

2. Приготовить в отдельной пробирке смесь ПЦР-буфера и Taq-AT полимеразы. Добавить в каждую пробирку со смесью для амплификации по 10 мкл смеси ПЦР-буфера и Taq-AT полимеразы.

3. Добавить в каждую пробирку по одной капле (20 мкл) минерального масла.

4. Добавить в соответствующие пробирки по 5,0 мкл анализируемого препарата ДНК.

5. Добавить в пробирки, предназначенные для «К-», по 5,0 мкл отрицательного контрольного образца, прошедшего этап выделения ДНК.

6. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге/вортексе в течение 1-3 сек.

7. Установить пробирки в блок детектирующего амплификатора, заполнить протокол в программном обеспечении детектирующего амплификатора и запустить программу амплификации.

Регистрация и учет результатов ПЦР проводится автоматически программным обеспечением для амплификаторов детектирующих.

Результаты испытаний

Для оценки информативности данного метода обследовано 67 женщин с синдромом привычной потери беременности с учетом особенностей полиморфизма генов PAI-1. Средние сроки выявления субхориальных отслоек составляли 8,3±0,4 недели, средний объем - 1,32±0,25 см2. Средние сроки выявления субамниотических отслоек составляли 12,1±0,5 недель, средний объем - 17,7±6,0 см2. При субхориальных отслойках гипоплазия хориона встречалась в 4 раза чаще, чем при субамниотических (p>0,01).

Субхориальные/субамниотические отслойки в 2 раза чаще встречались среди носительниц полиморфизма PAI-1 (4G4G и 4G5G), чем в группе PAI-1 (5G5G).

При генотипах 4G5G отслойки встречались в 1,5 раза чаще, чем при генотипе 4G4G (p<0,05).

Отношение шансов (OR) образования отслоек при носительстве аллели 4G при гетерозиготном генотипе полиморфизма гена PAI-1 (4G/5G) равнялось 4,04 (1,06-15,34, р=0.062) при 95% конфиденциальном интервале (95% CI 1,06-15,34, р=0.062). При гомозиготном генотипе полиморфизма гена PAI-1 (4G/4G) отношение шансов (OR) равнялось 7.4 (95% CI 1.51-36.33, p=0.026).

Для решения вопроса о влиянии 4G аллели на образование ретрохориальных/ретроамниотических отслоек были рассчитаны частоты образования отслоек в зависимости от генотипа. Полученные результаты отражены в таблице 3.

Таблица 3
Вероятность развития отслоек в зависимости от количества 4G аллели.
Количество аллели 4G Количество пациенток с отслойками / количество пациенток-носителей аллели Частота образования отслоек
2 (4G/4G) 4/8 50%*
1 (4G/5G) 6/17 35,3%
0 (5G/5G) 5/42 11,9%
*p<0,05
R2=0,98

Как следует из представленных в таблице 3 данных, частота образования ретрохориальных/ретроамниотических отслоек «дозозависима» от аллели 4G (p<0,05, коэффициент достоверности аппроксимации R2=0,98).

В результате проведенного исследования была установлена высокая прогностическая значимость определения полиморфизма генов PAI-1 при развитии отслойки хориона/плаценты на ранних сроках беременности.

В соответствии с полученными ранее данными при наличии полиморфизма генов PAI-1 и образование ретрохориальных/ретроамниотических отслоек в ранние сроки беременности с лечебно-профилактической целью следует использовать селективные ингибиторы фибринолиза (транексам) в сочетании с антиагрегантами (курантил). При наличии тромбофилических состояний возможно одновременное назначение антифибринолитиков и низкомолекулярных гепаринов. Наряду с общепринятыми методами терапии подобная тактика позволяет снизить частоту развития плацентарной недостаточности, преэкламсии, преждевременных родов и ряда других осложнений [2].

Ниже следует пример, который иллюстрирует способ по изобретению.

Беременная И., 30 лет, обратилась на обследование и подготовку к беременности. Наследственность не отягощена. Из соматических заболеваний: хронический цистит, хронический панкреатит. Аллергологический анамнез не отягощен. Менструальная функция с 13 лет через 28 дней по 6 дней, без особенностей.

Гинекологические заболевания: бактериальный вагиноз.

Имела 3 самопроизвольные потери беременностей в сроках 8-9 недель, 7-8 недель и 5-6 недель. Обследование вне беременности:

1. Бак. посев из цервикального канала - роста микроорганизмов не обнаружено.

2. Гормональный профиль - в пределах N

3. Гемостазиограмма - в пределах N

4. Спектр антифисфолипидных антител и антител к ХГЧ - в пределах N.

5. Кариотип супругов - в пределах N

6. HLA типирование I и II классов - отклонений нет.

7. Гомоцистеин - в пределах N

8. Диагностика полиморфизма генов тромбофилии:

- С677Г - гетерозиготная форма (метилентетрагидрофолатредуктаза)

- Полиморфизм генов F5 и F2 (кодирующих V и II факторы) - отсутствует

- Выявлен полиморфизм гена PAI-1 - генотип 4G/4G (гомозиготная форма).

В сроке 7 недель беременности отмечала сукровичные выделения из половых путей. По данным УЗИ - хорион кольцевидный, толщиной 5 мм, определяются 2 ретрохориальные отслойки размерами 2,4×1,1×2,6 см и 2,7×1,1×2,4 см. Гемостазиограмма - гиперкоагуляция. К терапии добавлен транексам 1 табл. × 3 р.

В сроке 9 недель - сукровичные выделения прекратились. По данным УЗИ - хорион по передней стенке, толщиной 9 мм, ретрохориальная отслойка в стадии организации, размерами 3,3×1,6×0,7 см. Гемостазиограмма - нарастание гиперкоагуляции, повышение функции тромбоцитов. Дополнительно назначен курантил по 1 т (25 мг) × 3 р.

В сроке 13 недель - выделения светлые. По данным УЗИ - плацента по передней стенке, толщиной 12 мм, определяется организовавшаяся ретроамниотическая отслойка размерами 2,2×0,6×2,1 см.

Гемостазиограмма - признаки хронической формы синдрома ДВС. Транексам и курантил отменены, назначен фрагмин по 2500 ЕДх1р п/к - сроком на 3 недели.

При сроке беременности - 20 недель - хирургическая коррекция истмико-цервикальной недостаточности, дальнейшее течение беременности без осложнений.

Родоразрешена в 39 недель путем операции кесарева сечения. Ребенок женского пола массой 3152, ростом 50 см, оценка по шкале Апгар 8/9 баллов. Течение послеродового и раннего неонатального периодов без особенностей.

В заключение следует отметить, что предложенный нами метод позволяет с довольно высокой точностью прогнозировать вероятность отслойки хориона и плаценты на ранних сроках, что способствует более рациональному ведению беременности и улучшению ее исходов.

Способ прогнозирования отслойки хориона и плаценты на ранних сроках беременности, включающий выделение ДНК с последующей амплификацией полиморфизма -675 5G>4G гена ингибитора активатора плазминогена I типа при помощи метода ПЦР, при этом вероятность развития отслойки хориона и плаценты у женщин с высоким риском самопроизвольных репродуктивных потерь при генотипе 4G/4G прогнозируют как 50,0%, при генотипе 4G/5G - как 35,3%.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу скрининговой диагностики инсулинорезистентности. Способ основан на определении биохимических показателей сыворотки венозной крови, в которой ферментативным методом определяют показатели липидного спектра и глюкозы.
Изобретение относится к области медицины. .
Изобретение относится к области медицины. .
Изобретение относится к области медицины. .

Изобретение относится к области медицины. .

Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии. .

Настоящее изобретение относится к способу прогнозирования клинического течения лимфопролиферативных заболеваний кожи. Заявленный способ включает проведение гистологических исследований биоптатов пораженной кожи, исследование сыворотки периферической крови, определение пола, возраста, социально-профессиональной принадлежности, а также факторов, способствующих заболеванию, оценку прогностических коэффициентов каждого из указанных факторов и суммирование полученных значений. В случае когда указанная сумма прогностических коэффициентов составляет 11,1-17,3, прогнозируют низкую вероятность ухудшения клинического течения заболевания, 17,4-23,6 - среднюю вероятность, а 23,7-29,9 - высокую вероятность ухудшения клинического течения заболевания. Заявленное изобретение обеспечивает повышение точности прогнозирования клинического течения лимфопролиферативных заболеваний кожи для рационального выбора тактики наблюдения, ведения пациентов, выбора вида профилактики неблагоприятного течения заболевания. 9 ил., 2 табл., 3 пр.
Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования ответа на проводимую химиотерапию хронического лимфолейкоза. Проводят генотипирование полиморфного локуса 9360Т гена фактора роста эндотелия сосудов. При выявлении у больного генотипа СС или аллеля С прогнозируют высокую вероятность положительного ответа на проводимую химиотерапию. Способ повышает точность прогнозирования положительного ответа на проводимую химиотерапию у больных хроническим лимфолейкозом на самых ранних стадиях развития заболевания. 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины. Предложен способ определения инфицированности пациента вирусом клещевого энцефалита, основанный на обнаружении РНК вируса методом РТ - ПЦР. Изобретение обеспечивает эффективный способ определения инфицированности пациента вирусом клещевого энцефалита за счет обнаружения РНК вируса клещевого энцефалита в капиллярной крови, забранной в месте присасывания клеща путем прокола кожным скарификатором. 2 пр.

Настоящее изобретение относится к медицине, в частности к медицинским, химико-токсикологическим исследованиям, и описывает способ подготовки пробы для газохроматографического определения тиодигликолевой кислоты в моче, включающий дериватизацию, извлечение тиодигликолевой кислоты из пробы этилацетатом, где дериватизацию тиодигликолевой кислоты проводят метанолом в присутствии концентрированной серной кислоты при температуре 80°C в течение 15 минут, а извлечение тиодигликолевой кислоты из пробы проводят этилацетатом путем жидкостно-жидкостной микроэкстракции в течение 5 минут, при этом все операции выполняют в одной емкости. Данный способ позволяет повысить чувствительность и точность, уменьшить продолжительность анализа, упростить пробоподготовку, сэкономить расходы особо чистых веществ. 3 табл., 1 пр., 2 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, может быть использовано для прогнозирования развития «тлеющей» формы хронического лимфолейкоза. Сущность способа: проводят генотипирование полиморфного локуса - 248G>A гена Bcl-2 ассоциированного X белка (ВАХ - 248G>A). При выявлении у больного генотипа GG прогнозируют высокую вероятность развития «тлеющей» формы хронического лимфолейкоза. Использование изобретения повышает точность прогнозирования «тлеющей» формы ХЛЛ на самых ранних стадиях развития заболевания. 3 табл., 1 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к инфектологии, и может быть использовано для прогнозирования развития периваскулярных нарушений у больных гриппом. Сущность способа: у больных гриппом определяют возрастную группу, срок наблюдения и значение ристомицин-агрегации тромбоцитов в сыворотке крови в секундах. Полученные данные подставляют в формулу: ПП=11,4+A*0,28-B*0,51-C*0,73, где ПП - прогностический коэффициент риска развития периваскулярных нарушений; 11,4 - константа математических расчетов для прогнозирования развития периваскулярных нарушений; А - возрастная группа пациентов, где 1 - первая группа, если возраст пациентов колеблется от 21 до - 35 лет, 2 - вторая группа - от 36 до 50 лет, 3 - третья группа - от 51 до 65 лет; В - срок наблюдения: 1 - 1-й срок - 1-3 дни болезни, 2 - 2-й срок - 4-5 дни болезни, 3 - 3-й срок - 6-8 дни, 4 - 4-й срок - 9-14 дни от начала заболевания, 5 - 5-й срок - один месяц от начала заболевания; С - значение ристомицин-агрегации тромбоцитов в сыворотке крови в секундах. Использование способа обеспечивает прогнозирование развития и выраженности периваскулярных нарушений в виде повышенной проницаемости сосудов и микрогеморрагий в микроциркуляторном русле у больных и переболевших гриппом. Также предлагаемый способ дает возможность предпринять комплекс мероприятий, направленных на своевременное выявление и предотвращение этих изменений и обоснованно проводить их коррекцию. 1 пр.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ дифференциальной диагностики тяжелой бронхиальной астмы, включающий определение вентиляционной функции легких и исследование мононуклеаров, выделенных из венозной крови больного, с последующим расчетом индекса, характеризующего воспалительный процесс. Моноциты культивируют в дендритные клетки. К половине культур добавляют N-этилкарбоксамидоаденозин (NECA). Полученные дендритные клетки собирают и анализируют на содержание мРНК ИЛ-8 при помощи полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией. Выполняют расчет вероятности Р отнесения индивида к группе больных тяжелой бронхиальной астмой по системе уравнений. При Р>0,5 диагностируют тяжелую бронхиальную астму. Изобретение позволяет дифференцировать тяжелую бронхиальную астму от бронхиальной астмы других степеней тяжести. 4 ил., 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине и предназначено для повышения проницаемости мембран гладкомышечных клеток тонкого кишечника. Проводят обработку клеток в одной пробе пороформирующим гемолизином HlyII из Bacillus cereus в концентрации 3-5 мкг/мл. Способ позволяет уменьшить расход клеточного материала и сократить время обработки без снижения эффективности. 3 пр., 1 ил.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выбора тактики лечения деструктивной формы острого панкреатита. В сыворотке крови определяют концентрацию прокальцитонина (ПКТ) с помощью количественного иммуноферментного анализа. Дополнительно оценивают тяжесть состояния пациента по шкале SAPS. Если уровень ПКТ не превышает 2 мкг/л, а оценка по шкале SAPS не превышает 5 баллов выбирают консервативную лечебную тактику с использованием в полном объеме комплексной интенсивной терапии; если оценка по шкале SAPS превышает 5 баллов, наряду с комплексной интенсивной терапией осуществляют лечебно-диагностическую лапароскопию. Если уровень ПКТ превышает 2 мкг/л, а оценка по шкале SAPS не превышает 5 баллов выбирают в случае локального процесса инфицирования операцию мини-доступа, а в случае распространенного процесса - открытую лапаротомию; если оценка по шкале SAPS превышает 5 баллов выбирают хирургическое вмешательство, при этом в случае локального процесса инфицирования осуществляют пункционно-дренирующую операцию, затем операцию мини-доступа, а в случае распространенного процесса - пункционно-дренирующую операцию, затем открытую лапаротомию. Способ позволяет повысить точность выбора хирургической тактики при лечении пациентов со стерильной и инфицированной формами панкреонекроза. 8 пр.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования популяционных нарушений биотрансформации чужеродных веществ, обусловленных воздействием техногенных химических факторов среды обитания. Производят отбор группы одной этнической популяции, проживающей на территории воздействия вредных химических факторов, отбирают пробы буккального эпителия, осуществляют выделение ДНК, проводят генотипирование полиморфного варианта 9893A/G гена CYP1A1, 921А/С гена CPOX и G308A гена TNF-альфа, устанавливают одно из следующих состояний гена: гетерозиготное, нормальное гомозиготное или минорное гомозиготное, рассчитывают коэффициент распространенности минорных аллелей для изучаемых генов по формуле и прогнозируют популяционные нарушения. Изобретение позволяет точно и достоверно прогнозировать популяционные нарушения биотрансформации чужеродных веществ, обусловленных воздействием техногенных химических факторов среды обитания, и может быть использовано для профилактического обеспечения путей защиты и стабилизации генома этнической популяции в условиях возрастающего загрязнения окружающей среды. 2 табл., 1 пр.
Наверх