Способ прогнозирования "тлеющей" формы хронического лимфолейкоза

Авторы патента:

Бакиров Ахат Бариевич (RU)

Каримов Денис Олегович (RU)

Викторова Татьяна Викторовна (RU)

Бакиров Булат Ахатович (RU)

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2496110:

Федеральное бюджетное учреждение науки "УФИМСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ МЕДИЦИНЫ ТРУДА И ЭКОЛОГИИ ЧЕЛОВЕКА" (RU)
государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Башкирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, может быть использовано для прогнозирования развития «тлеющей» формы хронического лимфолейкоза. Сущность способа: проводят генотипирование полиморфного локуса - 248G>A гена Bcl-2 ассоциированного X белка (ВАХ - 248G>A). При выявлении у больного генотипа GG прогнозируют высокую вероятность развития «тлеющей» формы хронического лимфолейкоза. Использование изобретения повышает точность прогнозирования «тлеющей» формы ХЛЛ на самых ранних стадиях развития заболевания. 3 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, может быть использовано для прогнозирования развития «тлеющей» формы хронического лимфолейкоза.

Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) - наиболее распространенный вид лейкоза в странах Европы и Северной Америки. В этих странах на его долю приходится 30% от всех лейкозов (Волкова М.А., 1998). Ежегодная заболеваемость составляет 3,0-3,5 на 100 тыс. населения, а для лиц старше 60 лет - до 20 на 100 тыс.населения (Cheson BD et al, 1996, S.C. Finch et al., 1969). Выживаемость больных ХЛЛ варьирует от 2 до 20 лет и более.

Индивидуальные различия в патогенезе и течении гемобластозов могут быть установлены через изменчивость генного полиморфизма. Ряд генов вовлечены в патогенез различных онкозаболеваний и выступают в качестве факторов риска при различных заболеваниях, связанных с неблагоприятным действием факторов внешней среды.

Особое внимание уделяют в последние годы разным формам ХЛЛ. У некоторых больных ХЛЛ может протекать без прогрессии годами и десятилетиями. Такой вариант В-ХЛЛ называется «тлеющим» (по аналогии с «тлеющей» миеломой). Критерии диагностики «тлеющего» хронического лимфолейкоза предложены профессором E.Montserrat в 1993 году: это стадия по Binet - «А», тип инфильтрации в костном мозге - не диффузный, время удвоения лимфоцитов больше 12 месяцев, уровень гемоглобина больше или равен 130 г/л. Если пациент удовлетворяет всем перечисленным признакам, то ожидаемая продолжительность жизни составляет около 20 лет. Также Montserrat E (1993) выделяет эту группу больных ХЛЛ по следующим параметрам: отсутствие увеличенных лимфоузлов и селезенки или минимальное их увеличение, нормальный уровень гемоглобина и тромбоцитов, уровень лейкоцитов меньше 30×10⁹/л, фаза плато лимфоцитоза в течение 3 лет.

Исторически терапия ХЛЛ была основана на применении алкилирующего препарата - хлорбутина или его сочетания с глюкокортикоидными гормонами. Обычно применяют хлорбутин в дозе 0,1-0,2 мг/кг массы тела. Он весьма эффективно понижает лейкоцитоз у 70-75% больных, и с его помощью удается надежно контролировать заболевание в течение многих лет, несмотря на изменение дозы или полную отмену препарата. С появлением новых препаратов и схем лечения ХЛЛ, терапия хлорбутином отошла на задний план. Несмотря на это пациентам, у которых ХЛЛ протекает в «тлеющей» форме, применение хлорбутина вполне оправдано, в связи с тем, что причинами летального исхода таких пациентов являются осложнения от проводимой химиотерапии. Также благодаря непроведению химиотерапии у таких пациентов, возможна экономическая выгода, так как лечение ХЛЛ одно из самых дорогостоящих.

Существует много предложений по прогнозированию различных форм ХЛЛ на основе данных биохимического, иммунохимического, цитологического и молекулярно-генетического обследования. Так, Т.П. Загоскиной, В.И. Шардаковым, Е.Л. Назаровой, М.М. Куликовой, И.М. Земцовой предложен способ дифференциальной диагностики доброкачественной и прогрессирующей формы хронического лимфолейкоза, включающий определение β²-микроглобулина в сыворотке крови с помощью радиоиммунологического метода с I¹²⁵ в дебюте заболевания, на ранних стадиях опухолевого процесса, при этом доброкачественную форму ХЛЛ определяют уровнем β²-микроглобулина <5 мг/л; а прогрессирующую >5 мг/л [патент RU 2242004, 2004 г.]. Однако данный метод остается достаточно трудоемким и дорогостоящим. Также его недостатком, на который указывают авторы является прогнозирование формы заболевание лишь в его дебюте.

Известен способ дифференциальной диагностики развернутой и терминальной стадии ХЛЛ, характеризующийся тем, что в крови больного определяют способность эритроцитов сорбировать витальные красители. При значении сорбционной способности эритроцитов менее 44,5% судят о развернутой стадии, при ее значении более 44,5% - о терминальной стадии ХЛЛ [патент RU 2138808, 1998 г.]. Существенным недостатком этого способа является отсутствие ранней диагностики ХЛЛ.

Известен способ диагностики форм ХЛЛ, заключающийся в том, что в лимфоцитах периферической крови больного определяют количество ядрышковых организаторов на клетку путем импрегнации серебром и при значении их 1,0-1,39 диагностируют прогрессирующий вариант ХЛЛ, а при значении - 1,4-1,7 диагностируют опухолевую форму заболевания [патент RU 2068995, 1996 г.]. Способ позволяет упростить диагностику форм ХЛЛ и повысить ее точность. Недостатком данного способа является отсутствие диагностики «тлеющей» формы заболевания.

Известен способ прогнозирования прогрессирования хронического лимфолейкоза, заключающийся в определении количественного содержания ядрышкового белка В23/нуклеофозмина в иммуноблотах лизатов клеток, повышенный уровень которого является наиболее ранним предвестником прогрессирования заболевания [патент RU 2310201, 2007 г.].

Прототипом данного изобретения является метод, описанный O. Moshynska и др. (Molecular detection of the G(-248)A BAX promoter nucleotide change in В cell chronic lymphocytic leukaemia. O. Moshynska, K. Sankaran, A. Saxena, Mol Pathol. 2003 August; 56(4): 205-209.), включающий генотипирование методом ПЦР полиморфизма гена ВАХ с последующими амплификацией и рестрикцией, повышение частоты полиморфизма гена ВАХ у больных ХЛЛ по сравнению с контрольной группой. На основании полученных данных авторы сделали заключение о вовлечении продукта гена ВАХ в патогенез ХЛЛ.

Недостатками данных методов является следующее.

1. Отсутствие данных о полиморфизме указанных генов при ХЛЛ в зависимости от форм заболевания.

2. Малая выборка больных ХЛЛ.

Техническим результатом изобретения является повышение точности прогнозирования «тлеющей» формы ХЛЛ на самых ранних стадиях развития заболевания.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе прогнозирования течения хронического лимфолейкоза, включающем выделение ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, генотипирование методом ПЦР полиморфизма гена ВАХ с последующими амплификацией и рестрикцией, согласно изобретению проводят генотипирование полиморфного локуса -248G>A гена Bcl-2 ассоциированного X белка (ВАХ -248G>A) и при выявлении у больного генотипа GG прогнозируют высокую вероятность развития «тлеющей» формы хронического лимфолейкоза.

Предлагаемый способ прогнозирования осуществляется следующим образом.

ДНК выделяют из лимфоцитов периферической крови. В качестве консерванта используют раствор следующего состава: 0.48% лимонной кислоты, 1.32% цитрата натрия, 1.47% глюкозы. При заборе крови к 1 мл консерванта добавляют 4 мл крови и хорошо перемешивают.

Для получения ДНК необходимой степени чистоты и достаточного молекулярного веса используется метод выделения ДНК из крови фенольно-хлороформной экстракцией, описанный Мэтью (Mathew C.C. The isolation of high molecular weight eucariotic DNA // Methods in Molecular Biology. / Ed. Walker J.M., N.Y., L.: Human Press.; - 1984. - V.2. - P.31-34).

1. Кровь в пробирке с консервантом тщательно перемешивается и переливается в центрифужный стакан на 100 мл, туда же добавляли 50 мл охлажденного лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% раствор тритона X-100, 5 мМ MgCl₂, 10 мМ трис HCl (pH 7,6).

2. Смесь центрифугируется 20 мин. при 4000 об./мин.

3. Надосадочную жидкость сливают, к получившемуся осадку приливают 8 мл 25 мМ ЭДТА, pH 8.0, суспендируют.

4. К суспензии добавляют 0,8 мл 10% SDS и протеиназу К (концентрация - 10 мг/мл). Смесь для лизиса оставляют на ночь в термостате при температуре 38°C.

Экстракцию ДНК осуществляют в следующем порядке.

1. Для депротеинизации к лизату добавляют 0,5мл 5М перхлората натрия и 8 мл фенола, насыщенного 1 М трис HCl до pH 7.8.

2. Смесь центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 10 мин.

3. Отбирают водную фазу, содержащую ДНК, РНК и неденатурированные белки.

4. Отобранную фазу обрабатывают смесью фенол-хлороформа (1:1), а затем - хлороформом.

5. Препараты осаждают двумя объемами 96% этанола.

6. Образовавшийся осадок ДНК растворяют в 1,5мл деионизированной H₂O; раствор хранят при -20°C.

В дальнейшем полученную ДНК используют в качестве матрицы для полимеразной цепной реакции (ПЦР). Последовательность олигонуклеотидных праймеров для полиморфного локуса -248G>A гена ВАХ F: 5′-CATTAGAGCTGCGATTGGACCG-3′, R: 5′-GCTCCCTCGGGAGGTTTGGT-3′. Состав реакционной смеси для ПЦР был следующим: 0.1-1 мкг геномной ДНК, 0.25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата (Promega, USA) помещали в 25 мкл однократного буфера для ПЦР следующего состава: 67 mM Tris-HCl, pH 8.8, 6.7 mM MgCl₂, 16,6 mM (NH₄)₂SO₄, 0.01% Tween-20. Полученную смесь прогревают 2 минуты при 94°C, добавляют 5 единиц термофильной ДНК-полимеразы, 20-30 мкл минерального масла. Режим амплификации: 30 циклов со следующими параметрами: 94°C - 45 секунд, 55°C - 45 секунд, 72°C - 45 секунд. После 30-го цикла проводили инкубацию при 72°C в течение 7 минут.

Нуклеотидную замену G→A в положении -248 гена ВАХ выявляют при помощи рестрикционного анализа. Для этого 7 мкл амплификата смешивают с 5 ед. эндонуклеазы рестрикции MspI, смесь выдерживают при 37°C в течение 10-12 часов в термостате. Затем проводят электрофорез в вертикальном 7% полиакриламидном геле. В качестве электролита для электрофореза применяют IX боратный буфер (0,089М трис HCl pH=7,8; 0,089 М борная кислота, 0,002 М ЭДТА с pH=8,0).

Перед нанесением на вертикальный электрофорез пробы смешивают в соотношении 1:5 с краской, содержащей 0,25% бромфенолового синего, 0,25%) ксиленцианола, 15% фикола. Электрофорез проводят при постоянном напряжении 10 вольт/см после 15-минутного преэлектрофореза. Детекцию результатов проводят путем окрашивания полиакриламидного геля бромистым этидием в течение 10 минут с последующей визуализацией в ультрафиолетовом свете на трансиллюминаторе. Генотипы полиморфного локуса -248G>A гена ВАХ типируются по критерию присутствия или отсутствия сайта рестрикции и соответствующего фрагмента на электрофорезе так, что при наличии фрагмента размером 96 пар нуклеотидов (пн) идентифируется аллель G и гомозиготный генотип GG, при наличии двух фрагментов размером 96 и 76 пн идентифицируется гетерозиготный генотип GA, при наличии фрагмента размером 76 пн идентифицируется гомозиготный по редкому аллелю генотип АА. При выявлении у больного генотипа GG прогнозируют высокую вероятность развития «тлеющей» формы хронического лимфолейкоза.

Обследовано 133 больных ХЛЛ, находившихся на стационарном лечении в гематологическом отделении Республиканской клинической больнице. Средний возраст обследованных пациентов, отобранных случайным образом, составил 49,57±1,42 лет. Половое соотношение мужчин к женщинам - 56,4% (75) к 43,6% (58). Клиническое обследование больных проводилось врачами больницы и включало в себя обязательные и дополнительные методы исследования. В группу с «тлеющим» течением хронического лимфолейкоза включено 30 больных в возрасте от 65 до 85 лет (средний возраст 68,23±0,41). В момент диагностики больные предъявляли жалобы на слабость, потливость, незначительное увеличение лимфатических узлов, без увеличения печени и селезенки. Клинико-гематологическая характеристика представлена в таблицах 1-2.

Как видно из данных таблиц, в анализах крови больных наблюдается лейкоцитоз (18,7±1,4×10(9)/л), лимфоцитоз (76,5±5,5%), нейтропения (16,7±2,7%). Количество тромбоцитов было в пределах нормы и составило 228,2±1,3×10(9)/л, гемоглобина - 127,0±5,8 г/л.

Больные наблюдались в амбулаторных условиях. Длительность наблюдения с момента установления заболевания более двух лет. В анализах крови наблюдалось увеличение лимфоцитов - 75-80%, клетки Боткина-Гумпрехта 1-2 в поле зрения. Данной группе больных при появлении прогрессии заболевания была назначена терапия хлорбутином в режиме монотерапии, в дозе 0,5мг/кг в 1-й и 15-й день цикла терапии, каждые 28 дней. Медиана продолжительности терапии в данной группе составила 6 месяцев (5-12 мес). Общая частота достижения эффекта от терапии составила - 42%, полная ремиссия - 3%.

С целью выявления клинико-генетических особенностей течения ХЛЛ проведено исследование полиморфного локуса гена ВАХ между группой с «тлеющей» формой и другими формами хронического лимфолейкоза (таблица 3).

Сравнение общей выборки больных с «тлеющим» течением ХЛЛ с другой группой выявило статистически достоверные различия в распределении частот генотипов между группами. Гомозиготный генотип -248*GG достоверно чаще встречался в группе больных с «тлеющим» течением ХЛЛ (73,33%), тогда как в другой группе частота его составила 45,74% (χ²=5,878, p=0,016, OR=2,45, 95% CI 1,41-4,26). Наличие гетерозиготного генотипа GA было связано с другими формами течения ХЛЛ, но уровня статистически значимых различий достигнуто не было. Также показано, что аллель G чаще встречался в группе больных с «тлеющим» течением ХЛЛ (85,00%), против 67,55%), а в другой группе 67,70% (χ²=6,000; p=0,015) и являлся фактором говорящем о «тлеющем» течении (OR=2,722; 95% CI 1,258-5,889).

На основании полученных результатов можно сделать вывод об ассоциации генотипа GG полиморфного локуса -248G>A гена ВАХ с «тлеющей» формой ХЛЛ.

Изобретение иллюстрируется следующим клиническим примером.

Больной К., 1967 года рождения, город Салават, Республика Башкортостан. Диагноз ХЛЛ установлен в апреле 2007 года, подтвержден стернальной пункцией, костный мозг богат клеточными элементами, представлен зрелыми лимфоцитами 79%. Химиотерапию не получал. В настоящее время диагноз ХЛЛ, стадия по K. Rai II. При молекулярно-генетическом тестировании у больного было взято 8 мл венозной крови с последующим выделением ДНК и амплификацией полиморфных участков генов и в реакционной смеси, содержащей примерно 0.1 мкг геномной ДНК, 1 ед. Taq-полимеразы, 0.25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата в 25 мкл однократного буфера для ГЩР. После рестрикции амплифицированных ПЦР-продуктов эндонуклеазой провели электрофорез фрагментов при постоянном напряжении 250 вольт после 15-минутного преэлектрофореза. После окончания электрофореза гель окрасили раствором бромистого этидия в течение 10 минут и анализировали при ультрафиолетовом освещении на трансиллюминаторе. Исследование полиморфного локуса -248G>A гена ВАХ выявило у больного генотип GG, что позволило прогнозировать «тлеющую» форму ХЛЛ, что было подтверждено в результате трехлетнего наблюдения за пациентом, прогрессирование заболевания не наступило.

Таблица 1
Клиническая характеристика больных с «тлеющей» формой хронического лимфолейкоза
Показатель	Количество
Количество больных	Мужчины	13
Женщины	17
возраст	65-75	18
75-85	12
Длительность заболевания	1-3 года	2
Длительность заболевания	4-5 лет	9
более 5 лет	21

Таблица 2
Гематологические показатели больных "тлеющей формой хронического лимфолейкоза"
Показатели
Эритроциты (×10¹²)	4,1±2,12
Гемоглобин (г/л)	127,0±5,8
Лейкоциты (×10⁹)	18,7±1,7
Тромбоциты (%)	228,2±13,0
Палочкоядерные нейтрофилы (%)	2,1±0,52
Сегментоядерные (%)	16,7±2,7
Эозинофилы (%)	1,6±0,25
Лимфоциты (%)	76,5±5,5
Пролимфоциты (%)	1,3±0,18
Моноциты (%)	1,8±0,55
СОЭ (мм/ч)	18±1,3

Таблица 3
Распределение частот генотипов и аллелей полиморфного локуса - 248G>A гена ВАХ с «тлеющей» формой заболевания и другими видами течения ХЛЛ
Генотипы	«Тлеющий» (N=30)	Другие виды течения ХЛЛ (N=94)	χ²	P	OR	CI - 95%
Абс.	%	Абс.	%
GG	22	73,33	43	45,74	5,878	0,016	3,262	1,319-8,066
GA	7	23,33	41	43,62	3,135	0,077	0,394	0,154-1,008
АА	1	3,33	10	10,64	0,734	0,392	0,290	0,036-2,366
G	51	85,00	127	67,55	6,000	0,015	2,722	1,258-5,889
А	9	15,00	61	32,45	6,000	0,015	0,368	0,17-0,796

Способ прогнозирования течения хронического лимфолейкоза, включающий выделение ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, генотипирование методом ПЦР полиморфизма гена ВАХ с последующими амплификацией и рестрикцией, отличающийся тем, что проводят генотипирование полиморфного локуса - 248G>A гена Bcl-2 ассоциированного X белка (ВАХ - 248G>A) и при выявлении у больного генотипа GG прогнозируют высокую вероятность развития «тлеющей» формы хронического лимфолейкоза.

Настоящее изобретение относится к медицине, в частности к медицинским, химико-токсикологическим исследованиям, и описывает способ подготовки пробы для газохроматографического определения тиодигликолевой кислоты в моче, включающий дериватизацию, извлечение тиодигликолевой кислоты из пробы этилацетатом, где дериватизацию тиодигликолевой кислоты проводят метанолом в присутствии концентрированной серной кислоты при температуре 80°C в течение 15 минут, а извлечение тиодигликолевой кислоты из пробы проводят этилацетатом путем жидкостно-жидкостной микроэкстракции в течение 5 минут, при этом все операции выполняют в одной емкости.

Способ определения инфицированности пациента вирусом клещевого энцефалита // 2495428

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ определения инфицированности пациента вирусом клещевого энцефалита, основанный на обнаружении РНК вируса методом РТ - ПЦР.

Способ прогнозирования ответа на химиотерапию при хроническом лимфолейкозе // 2495427

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования ответа на проводимую химиотерапию хронического лимфолейкоза. Проводят генотипирование полиморфного локуса 9360Т гена фактора роста эндотелия сосудов.

Способ прогнозирования клинического течения лимфопролиферативных заболеваний кожи // 2495419

Настоящее изобретение относится к способу прогнозирования клинического течения лимфопролиферативных заболеваний кожи. Заявленный способ включает проведение гистологических исследований биоптатов пораженной кожи, исследование сыворотки периферической крови, определение пола, возраста, социально-профессиональной принадлежности, а также факторов, способствующих заболеванию, оценку прогностических коэффициентов каждого из указанных факторов и суммирование полученных значений.

Способ прогнозирования отслойки хориона и плаценты на ранних сроках беременности на основании определения полиморфизма гена ингибитора активатора плазминогена i типа (pai-1) // 2494400

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования отслойки хориона и плаценты на ранних сроках беременности.

Способ скрининговой диагностики инсулинорезистентности // 2493566

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу скрининговой диагностики инсулинорезистентности. Способ основан на определении биохимических показателей сыворотки венозной крови, в которой ферментативным методом определяют показатели липидного спектра и глюкозы.

Способ оценки риска развития метаболического синдрома у детей на основе генетических и биохимических маркеров // 2492485

Изобретение относится к области медицины. .

Способ прогнозирования клинической формы хронического лимфолейкоза // 2490642

Изобретение относится к области медицины. .

Способ прогнозирования течения неходжкинских лимфом // 2490641

Изобретение относится к области медицины. .

Способ диагностики эритемной формы иксодового клещевого боррелиоза // 2490640

Изобретение относится к области медицины. .

Способ прогнозирования развития периваскулярных нарушений у больных гриппом // 2496111

Изобретение относится к медицине, а именно к инфектологии, и может быть использовано для прогнозирования развития периваскулярных нарушений у больных гриппом. Сущность способа: у больных гриппом определяют возрастную группу, срок наблюдения и значение ристомицин-агрегации тромбоцитов в сыворотке крови в секундах. Полученные данные подставляют в формулу: ПП=11,4+A*0,28-B*0,51-C*0,73, где ПП - прогностический коэффициент риска развития периваскулярных нарушений; 11,4 - константа математических расчетов для прогнозирования развития периваскулярных нарушений; А - возрастная группа пациентов, где 1 - первая группа, если возраст пациентов колеблется от 21 до - 35 лет, 2 - вторая группа - от 36 до 50 лет, 3 - третья группа - от 51 до 65 лет; В - срок наблюдения: 1 - 1-й срок - 1-3 дни болезни, 2 - 2-й срок - 4-5 дни болезни, 3 - 3-й срок - 6-8 дни, 4 - 4-й срок - 9-14 дни от начала заболевания, 5 - 5-й срок - один месяц от начала заболевания; С - значение ристомицин-агрегации тромбоцитов в сыворотке крови в секундах. Использование способа обеспечивает прогнозирование развития и выраженности периваскулярных нарушений в виде повышенной проницаемости сосудов и микрогеморрагий в микроциркуляторном русле у больных и переболевших гриппом. Также предлагаемый способ дает возможность предпринять комплекс мероприятий, направленных на своевременное выявление и предотвращение этих изменений и обоснованно проводить их коррекцию. 1 пр.

Способ дифференциальной диагностики тяжелой бронхиальной астмы // 2497117

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ дифференциальной диагностики тяжелой бронхиальной астмы, включающий определение вентиляционной функции легких и исследование мононуклеаров, выделенных из венозной крови больного, с последующим расчетом индекса, характеризующего воспалительный процесс. Моноциты культивируют в дендритные клетки. К половине культур добавляют N-этилкарбоксамидоаденозин (NECA). Полученные дендритные клетки собирают и анализируют на содержание мРНК ИЛ-8 при помощи полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией. Выполняют расчет вероятности Р отнесения индивида к группе больных тяжелой бронхиальной астмой по системе уравнений. При Р>0,5 диагностируют тяжелую бронхиальную астму. Изобретение позволяет дифференцировать тяжелую бронхиальную астму от бронхиальной астмы других степеней тяжести. 4 ил., 2 табл., 3 пр.

Быстрый способ обработки гладкомышечных клеток кишечника гемолизином ii bacillus cereus // 2497118

Изобретение относится к медицине и предназначено для повышения проницаемости мембран гладкомышечных клеток тонкого кишечника. Проводят обработку клеток в одной пробе пороформирующим гемолизином HlyII из Bacillus cereus в концентрации 3-5 мкг/мл. Способ позволяет уменьшить расход клеточного материала и сократить время обработки без снижения эффективности. 3 пр., 1 ил.

Способ выбора тактики лечения больных острым деструктивным панкреатитом // 2497119

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выбора тактики лечения деструктивной формы острого панкреатита. В сыворотке крови определяют концентрацию прокальцитонина (ПКТ) с помощью количественного иммуноферментного анализа. Дополнительно оценивают тяжесть состояния пациента по шкале SAPS. Если уровень ПКТ не превышает 2 мкг/л, а оценка по шкале SAPS не превышает 5 баллов выбирают консервативную лечебную тактику с использованием в полном объеме комплексной интенсивной терапии; если оценка по шкале SAPS превышает 5 баллов, наряду с комплексной интенсивной терапией осуществляют лечебно-диагностическую лапароскопию. Если уровень ПКТ превышает 2 мкг/л, а оценка по шкале SAPS не превышает 5 баллов выбирают в случае локального процесса инфицирования операцию мини-доступа, а в случае распространенного процесса - открытую лапаротомию; если оценка по шкале SAPS превышает 5 баллов выбирают хирургическое вмешательство, при этом в случае локального процесса инфицирования осуществляют пункционно-дренирующую операцию, затем операцию мини-доступа, а в случае распространенного процесса - пункционно-дренирующую операцию, затем открытую лапаротомию. Способ позволяет повысить точность выбора хирургической тактики при лечении пациентов со стерильной и инфицированной формами панкреонекроза. 8 пр.

Способ прогнозирования популяционных нарушений биотрансформации чужеродных веществ, обусловленных воздействием техногенных химических факторов среды обитания // 2497120

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования популяционных нарушений биотрансформации чужеродных веществ, обусловленных воздействием техногенных химических факторов среды обитания. Производят отбор группы одной этнической популяции, проживающей на территории воздействия вредных химических факторов, отбирают пробы буккального эпителия, осуществляют выделение ДНК, проводят генотипирование полиморфного варианта 9893A/G гена CYP1A1, 921А/С гена CPOX и G308A гена TNF-альфа, устанавливают одно из следующих состояний гена: гетерозиготное, нормальное гомозиготное или минорное гомозиготное, рассчитывают коэффициент распространенности минорных аллелей для изучаемых генов по формуле и прогнозируют популяционные нарушения. Изобретение позволяет точно и достоверно прогнозировать популяционные нарушения биотрансформации чужеродных веществ, обусловленных воздействием техногенных химических факторов среды обитания, и может быть использовано для профилактического обеспечения путей защиты и стабилизации генома этнической популяции в условиях возрастающего загрязнения окружающей среды. 2 табл., 1 пр.

Способ выявления инфекционных осложнений у больных острым лимфобластным лейкозом при нейтропении // 2497129

Изобретение относится к медицине и касается способа лабораторной диагностики развития инфекции у больных острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) в состоянии индуцированной нейтропении. Сущность способа состоит в том, что у больных в крови определяют количество С-реактивного белка (СРБ), и при отсутствии клинических проявлений инфекции и уровне СРБ<11 мг/л делают вывод об отсутствии инфекции, а>11 мг/л - диагностируют инфекционный процесс независимо от наличия лихорадки и/или очагов инфекции. Использование заявленного способа позволяет провести более точную и раннюю диагностику инфекционных осложнений, а также более четкий контроль эффективности антимикробной терапии у пациентов с ОЛЛ в состоянии нейтропении. 1 табл., 2 пр.

Способ определения содержания титана, алюминия в тканях сердечно-сосудистой системы // 2498304

Настоящее изобретение относится к медицине и описывает способ определения содержания в тканях сердечно-сосудистой системы Ti, Al, включающий помещение образца ткани в емкость с добавлением азотной кислоты и выдержкой в течение 3 час при 75°С, последующее приливание перекиси водорода с выдержкой в течение 2 часов при той же температуре, добавление новой порции азотной кислоты с выдержкой 2 часа при температуре 110°С, добавление плавиковой кислоты и выдерживание в течение 18 часов при 20°С с последующим нагревом в течение 6 часов при 75°С и помещением в микроволновую печь, выпариванием и выполнением измерений методикой масс-спектроскопии с индуктивно связанной плазмой, при следующем соотношении компонентов, мас.%: НNО3 35, Н2О2 5, HF 13,3, деионизированная вода - остальное. 1 пр., 1 таб.

Способ прогнозирования возникновения рецидивов при немелкоклеточном раке легкого // 2498305

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способа прогнозирования возникновения рецидивов при немелкоклеточном раке легкого (НМРЛ). Сущность способа состоит в том, что проводят гистологическое исследование фрагментов ткани удаленного легкого с главным, промежуточным или сегментарным бронхами, находящимися на расстоянии 4-5 см от опухоли, в респираторном эпителии бронхов определяют варианты дисрегенераторных изменений: базальноклеточную гиперплазию (БКГ), плоскоклеточную метаплазию (ПМ) и при наличии в смежном с опухолью эпителии бронхов сочетания базальноклеточной гиперплазии с плоскоклеточной метаплазией (БКГ+ПМ+) прогнозируют риск развития рецидива немелкоклеточного рака легкого. Использование заявленного способа позволяет повысить точность и информативность прогнозирования возникновения рецидивов при НМРЛ. 1 табл., 4 пр.

Способ раннего выявления высокого риска развития нарушения толерантности к глюкозе на фоне приема метопролола у больных стабильной стенокардией напряжения // 2498306

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для выявления высокого риска развития нарушения толерантности к глюкозе на фоне приема метопролола у больных стабильной стенокардией напряжения. Для этого до начала лечения метопрололом больному в один и тот же день проводят 2 теста с физической нагрузкой до достижения пороговой мощности нагрузки по одинаковому протоколу, исходно и через 2 часа после приема разовой дозы метопролола 50 мг. Если при выявлении при 2-й нагрузке по сравнению с 1-й нагрузкой увеличения на 120 секунд и более интервала времени от начала нагрузки до появления приступа стенокардии и/или снижения на электрокардиограмме сегмента ST ишемического типа глубиной не менее 1 мм, риск развития нарушения толерантности к глюкозе считают высоким. В таком случае через 4-5 недель регулярного приема метопролола проводят тест на толерантность к глюкозе. При выявлении нарушения толерантности к глюкозе лечение метопрололом прекращают. Если при 2-й нагрузке по сравнению с 1-й нагрузкой интервал времени до появления приступа стенокардии и/или снижения на электрокардиограмме сегмента ST ишемического типа глубиной не менее 1 мм увеличивается менее чем на 120 секунд, риск развития нарушения толерантности к глюкозе считают незначительным. В таком случае лечение метопрололом продолжают без дополнительного проведения теста на толерантность к глюкозе. Способ обеспечивает профилактику нарушений углеводного обмена у заявленной группы больных на фоне приема метопролола и возможность своевременной коррекции терапии за счет выявления компенсаторного увеличения использования глюкозы в условиях инсулинорезистентности и сниженной доступности свободных жирных кислот для обеспечения энергетических потребностей миокарда. 4 пр.

Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина в эритроцитах периферической крови беременных на третьем триместре гестации // 2499260

Изобретение применяют для оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина в эритроцитах периферической крови беременной на третьем триместре гестации. Сущность способа: в периферической крови беременных с цитомегаловирусной инфекцией на третьем триместре гестации определяют количество эритроцитов, окрашенных 0,1% раствором метиленового синего, выполняющего роль переносчика электронов, и содержание метгемоглобина в эритроцитах. Если при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600 будет наблюдаться увеличение числа окрашенных эритроцитов до 12,0±0,9%, а увеличение метгемоглобина до 1,5±0,42%, то оценивают нарушение восстановления метгемоглобина и угрозу насыщения гемоглобина эритроцитов кислородом. 2 ил.