Способ прогнозирования прогрессирования первичной открытоугольной глаукомы


 


Владельцы патента RU 2517233:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии, и может быть использовано для прогнозирования прогрессирования глаукомы. Для этого в слезной жидкости и сыворотке крови определяют содержание антиапоптотического белка Всl-2. При отсутствии его в слезной жидкости и/или сыворотке прогнозируют прогрессирование глаукоматозного процесса. Способ позволяет прогнозировать прогрессирование глаукоматозного процесса с дальнейшим проведением соответствующих адекватных лечебных мероприятий. 1 ил., 2 табл., 5 пр.

 

Предлагаемое изобретение относится к офтальмологии и предназначено для прогнозирования прогрессирования глаукомы.

Актуальность проведения клинико-иммунологических исследований при первичной открытоугольной глаукоме (ПОУГ) диктуется неуклонным ростом числа больных с этой патологией, сложностью, неоднозначностью патогенеза заболевания, малой эффективностью лечения, а также современными представлениями о различных путях гибели клеток и возможности регулирования одного из них - апоптоза [Bredesen D.E., Rao R.V., Mehlen P. Cell death in the nervous system // Nature. - 2006. - Vol.443. - P.796-802].

Разработка данного аспекта проблемы имеет не только научное, но и практическое значение, связанное с прогнозированием прогрессирования глаукоматозной оптической нейропатии (ГОН), а также патогенетически обоснованным применением нейропротекции.

На сегодняшний день существуют различные способы прогнозирования прогрессирования глаукомы.

Установлено, что при ПОУГ прогностическое значение может иметь толщина слоя центральной роговицы: у больных с толщиной роговицы менее 500 мкм частота встречаемых далеко зашедших и терминальных стадий была намного выше, чем в группах с более высокими показателями толщины центральной роговицы [Алексеев В.Н., Литвин И.Б. Влияние толщины роговицы на уровень внутриглазного давления и прогноз при первичной открытоугольной глаукоме // Клин. Офтальмол. 2008. №4. С 143-148].

Однако этот критерий рассматривается преимущественно в ассоциации с повышенными показателями внутриглазного давления, не учитывая случаи нормотензивной глаукомы.

Известен способ прогнозирования течения глаукомы при помощи определения вязкоэластических свойств глаза. Выявлено, что снижение биомеханического показателя - корнеального гистерезиса (КГ) - происходит параллельно с развитием патологических структурных изменений диска зрительного нерва. При КГ<8,2 мм рт.ст. повышается риск прогрессирования глаукоматозного процесса [Патент RU 2008102209, 05.11.08].

Данный способ имеет ограничения для использования в связи с необходимостью оснащения специальной аппаратурой, трудоемкостью и сложностью исследования.

Известен способ прогнозирования глаукоматозной оптической нейропатии, согласно которому в процессе кластерного анализа кристаллограмм слезной жидкости у больных глаукомой определяют неблагоприятный прогноз течения глаукоматозной оптической нейропатии в тех случаях, когда длина преобладающих цепочек кристаллограмм превосходит 13 пикселей для периферической зоны кристаллограммы и 12 пикселей для центральной зоны, а перепад их световой интенсивности оказывается ниже 52 для периферической зоны и 44 для центральной зоны [Патент RU 2281023 10.08.2006].

Однако осуществление этого способа сопряжено с серьезными трудностями, обусловленными субъективностью оценки кристаллограмм слезы, а для объективизации получаемых результатов авторами предлагается специальная, нестандартизированная компьютерная программа ″ОБРАЗ″, что ограничивает внедрение данного способа в практику.

Известен способ прогнозирования прогрессирования глаукомы по показателям свободнорадикального окисления в слезной жидкости: определяют суммарную антиокислительную активность слезы и при снижении показателя ниже 70 мкМ прогнозируют прогрессирование глаукомы [Патент RU 2139538, 10.10.1999]. Этот способ принят за ближайший аналог.

Однако этот способ имеет свои ограничения в связи с тем, что в качестве тест-пробы предлагается использовать только слезную жидкость, забор которой у пациентов с ПОУГ в целом ряде случаев бывает затруднен, а иногда и невозможен.

В последнее десятилетие внимание исследователей, занимающихся изучением патогенеза оптической нейропатии при ПОУГ, привлекают процессы апоптоза (запрограммированной гибели клеток), которые могут быть обусловлены как закономерными инволюционными изменениями в организме, так и явиться следствием неблагоприятных внешних или внутренних воздействий [Пальцев М.А. Молекулярная медицина и прогресс фундаментальных наук // Вестник РАН. - 2002. - Т.72. - №1. - С.13-21.; Quigley Н.А. Neuronal death in glaucoma // Ophthalmic. Physiol. Opt. - 1998. Mar; Vol.18 (2). - P.133-139]. Показано, что при ПОУГ нарушение этого процесса может иметь место не только на уровне нейронов сетчатки, но и на уровне клеток периферической крови [Golubnitschaja-Labudova О., Liu R., Decker С. et al. Altered gene expression in lymphocytes of patients with normaltension glaucoma // Curr. Eye Res. - 2000. - Vol.21. - P. 867-876].

Предварительно, изучая роль Fas-опосредованного апоптоза в патогенезе глаукоматозной оптической нейропатии, мы обнаружили, что концентрации растворимых форм Fas-рецептора (sApo-1/Fas) и Fas-лиганда (sFasL) в слезной жидкости (СЖ) и в сыворотке крови (СК) изменяются в зависимости от стадии ПОУГ и могут служить иммунологическими маркерами развития заболевания и использоваться при прогнозировании его возникновения и прогрессирования [Слепова О.С., Фролов М.А. и др. Маркеры Fas - опосредованного апоптоза при первичной открытоугольной глаукоме и возможности их фармакологической коррекции // Вестник офтальмологии.- 2012. - Т.128. -№4. - С.27-31].

Известно, что в процессе апоптоза наряду с sFas/Apo-1 и sFasL участвует целый комплекс факторов, как обладающих апоптогенным потенциалом, так и их антагонистов. Наше внимание привлек Всl-2, который является внутриклеточным мембраносвязанным белком, блокирующим программированную клеточную гибель. Ген Всl-2 выполняет функцию негативного регулятора апоптоза. Установлено, что уменьшение концентрации Всl-2 в клетке приводит ее к апоптотической гибели, тогда как сверхэкспрессия Всl-2 защищает клетки от смерти [Park J.R, Hockenbery D.M. BCL-2, a novel regulator of apoptosis // Journal of Cellular Biochemistry.-1996.- Vol.60, №1. - Р.23-32]. В офтальмологии этот белок изучался, в основном, с помощью иммуногистохимических методов, при исследовании образцов тканей глаза у пациентов с увеальной меланомой [Лихванцева В.Г. Роль цитокинов в патогенезе, прогнозе и лечении увеальной меланомы // Дисс… докт. мед. наук. Москва, 2001, С.208-223], а также при увеитах [Дроздова Е.А. Увеит при ревматических заболеваниях: особенности клиники, диагностика, иммунопатогенез и лечение // Дисс… докт. мед. наук. Москва, 2006. - 300 с] и травмах глаза [Reszec J., Zalewska R., Mariak Z., Sulkowski S. Bcl-xl and Bak protein expression in human optic nerve axons in eyeballs post-trauma and in the eyes with absolute glaucoma // Vision Res. - 2005 Jan. Vol.45 (2). - P.169-179.], экспериментально - при морфологических изменениях донорской роговицы [Стадников А.А., Канюков В.Н. и др. К вопросу о консервации донорской роговицы: современные направления, экспериментально-морфологические обоснования // Вестник ОГУ - 2011. - №14 (133). - С.349-351], амаврозе Лебера [Cottet S., Schorderet D.F. Triggering of Bcl-2-related pathway is associated with apoptosis of photoreceptors in Rpe65 - mouse model of Leber's congenital amaurosis // Cell Mol Neurobiol. 2008. - Vol.28(2). - P 263-275.], при экспериментальной глаукоме file:///Garcia-Valenzuela E., Shareef S., Walsh J. Programmed cell death of retinal ganglion cells during experimental glaucoma // Exp-Eye-Res. - 1995. - Vol.61. - P.33-44].

В литературе имеются лишь единичные сообщения об изучении Всl-2 у больных с глаукомой (абсолютной). Иммуногистохимические исследования энуклеированных глаз показали, что экспрессия Всl-2 в нейронах сетчатки у больных глаукомой (терминальной) была значительно ниже, чем в энуклеированных травмированных глазах [Reszec J., Zalewska R., Mariak Z., Sulkowski S. Bcl-xl and Bak protein expression in human optic nerve axons in eyeballs post-trauma and in the eyes with absolute glaucoma // Vision Res. - 2005 Jan. Vol.45 (2). - P.169-179].

Работы, посвященные определению Bcl-2 в слезной или внутриглазных жидкостях (растворимая форма) в норме или в условиях офтальмопатологии, а также в сыворотке крови при заболеваниях глаз, отсутствуют. Опубликованы данные, характеризующие содержание Всl-2 в сыворотке крови у пациентов с острым коронарным синдромом в сравнении с практически здоровыми людьми контрольной группы, в которой средний уровень составил 13,7±3,12 Ед/мл (Петрищев Н.Н., Васина Л.В., Луговая А.В. Вестник Санкт-Петербургского Университета, серия 11, 2008, Вып.1).

Мы предположили, что определение содержания растворимой формы Всl-2 в слезной жидкости и/или сыворотке крови может быть использовано в качестве прогностического теста развития глаукомотозного процесса. Нами были проведены клинико-иммунологические исследования у пациентов с различными стадиями ПОУГ. Всего наблюдались 28 пациентов (16 мужчин, 12 женщин) в возрасте от 59 до 75 лет (средний возраст 67±8,4 года), из них 2 чел. (4 глаза) с подозрением на глаукому на обоих глазах, 2 чел. (4 глаза) с подозрением на глаукому на одном глазу и I стадией ПОУГ на другом, 24 чел. с двусторонней ПОУГ (48 глаз, с компенсированным офтальмотонусом), в том числе: I стадия 8 глаз, II и III стадии по 9 глаз, IV стадия - 6 глаз. Диагноз ПОУГ был подтвержден характерными периметрическими изменениями и результатами ретинотомографии. Компенсация ВГД была достигнута местной гипотензивной терапией и/или антиглаукоматозным вмешательством. Офтальмологическое обследование проводилось в динамике: до назначения и по окончании курса терапии цитиколином и затем в течение года амбулаторного наблюдения и включало: визометрию, статическую автоматическую периметрию на периметре «Octopus» 101 фирмы Interzeag AG (Швейцария), с помощью которой оценивали динамику изменений поля зрения по двум показателям: общей светочувствительности сетчатки (индекс MS, дБ) и среднему дефекту (индекс MD, дБ). Средний уровень светочувствительности (индекс MS, дБ) для периферического поля зрения у пожилых пациентов составляет 28,0±0,9 дБ, для индекса MD от -2 до +2 дБ. Кроме этого проводилась ретинотомография на HRT III (Heigelberg Retina Tomograph III) с оценкой толщины слоя нервных волокон сетчатки (показатель RNFL, мм). В норме этот показатель составляет 0,20 - 0,22 мм.

Параллельно с клиническими проводились иммунологические исследования. Всl-2 определяли в пробах сыворотки крови (СК) и слезной жидкости (СЖ) с помощью иммуноферментного анализа (в данной работе использовались тест-системы «Bender MedSystems»; Австрия, чувствительность 1 Ед/мл, диапазон измеряемых концентраций от 0 до 200 Ед/мл). Забор биологического материала осуществляли стандартными способами. Всего исследовано 54 пробы СК (28 до и 26 после лечения) и 100 проб СЖ (56 и 44, соответственно). В качестве контроля были исследованы пробы СК и СЖ, полученные у 10 добровольцев сопоставимого возраста и пола, не имевших признаков офтальмопатологии или сопутствующих заболеваний.

В контрольной группе средний уровень Всl-2 в сыворотке крови составил 7,8±5,3 Ед/мл, в слезной жидкости - не обнаружен (ниже чувствительности тест-системы).

Сравнительный анализ данных, полученных при исследовании Всl-2 у больных с разными стадиями ПОУГ (фиг.1 - Содержание белка Всl-2 (Ед /мл) в слезной жидкости и сыворотке крови у пациентов с разными стадиями ПОУГ), показал, что при подозрении на глаукому отмечалась тенденция к повышению его содержания в СЖ (по сравнению с контролем). Однако на 1-й стадии уровни белка в СЖ снижались (по сравнению с подозрением на ПОУГ) и после возвратного их всплеска на II-й стадии, по-видимому, отражавшего противодействие развитию апоптотического процесса, падали до минимума на IV-й стадии.

При исследовании СК также отмечалось значительное уменьшение содержания Всl-2, но только при развитой ПОУГ (III-IV-я стадии по сравнению с контролем и ранними стадиями).

Таким образом, переход в терминальную стадию заболевания ассоциировался с явным сочетанным (местным и системным) «дефицитом» этого фактора. Индивидуальный анализ подтвердил, что дефицит Всl-2 в СЖ (6 из 6 случаев; 100%) и в СК (4 из 6 случаев; 67%) был характерен главным образом для больных с IV-й и, в меньшей степени, III-й стадиями ПОУГ (8 из 18 случаев, 44,4% и 2 из 10 случаев, 20% соответственно). При подозрении на глаукому, как и на начальных стадиях ПОУГ (I-II), таких случаев фактически не отмечалось.

Неблагоприятное значение «дефицита» Вс1-2, причем как на локальном, так и системном уровнях, подтверждалось и результатами периметрии и ретинотомографии. Установлено, что низкий индекс MS (светочувствительность сетчатки) и высокий индекс MD (площадь скотом), а также низкий показатель RNFL (толщина слоя нервных волокон), сочетались с фактическим отсутствием Всl-2 в слезной жидкости (табл.1 - Показатели (M±m) периметрии (индексы MS и MD) и ретинотомографии (RNFL) при различных уровнях Всl-2 в слезной жидкости у пациентов с ПОУГ. Примечание: Достоверность различий по отношению к IV-й стадии ПОУГ: Сыворотка крови: контроль - p = 0,000; подозрение на глаукому - р=0,000; II-я стадия - р=0,000; Слезная жидкость: подозрение на глаукому - p = 0,004; I-я стадия - P = 0,025; II-я стадия - p = 0,003; III-я стадия - p = 0,002.) и в сыворотке крови (табл.2 - Показатели (M±m) периметрии (индексы MS и MD) и ретинотомографии (RNFL) при различных уровнях Всl-2 в сыворотке крови у пациентов с ПОУГ). При наличии и особенно при высоком содержании Всl-2 в обеих тест-пробах функциональные показатели оказались значительно лучше.

В целом полученные данные свидетельствуют о том, что исследование Всl-2 в слезной жидкости и в сыворотке крови может служить одним из индикаторов развития и прогрессирования ПОУГ. Исходя из выявленных клинико-иммунологических связей мы пришли к заключению о том, что отсутствие Всl-2 в слезной жидкости и/или сыворотке крови имеет негативное значение в плане прогноза течения ПОУГ.

Представленные данные определили актуальность разработки подходов к целенаправленному устранению нарушений секреции Всl-2 как на местном, так и системном уровнях, индикатором которых может служить содержание его в СЖ и СК.

Изучение возможностей медикаментозного воздействия на этот патогенетически значимый фактор было проведено в условиях применения ноотропного препарата цитиколина у больных с I - III-й стадиями ПОУГ (26 чел.).Препарат вводился в дозе 500 мг/сутки внутривенно в течение 10 дней; за 1,5 месяца до его назначения больным из лечения исключили вазоактивные и ноотропные препараты, а также витамины и антиоксиданты.

Обнаружено, что после парентерального курса терапии цитиколином у большинства пациентов возрастало содержание Всl-2 в СК (в 1,5 - 18 раз; 10 из 26 случаев; 76,9%) и в СЖ (в 1,3 - 10 раз; 36 из 44 случаев; 81,8%).

Сопоставление иммунологических и клинических данных, полученных до и после курса терапии цитиколином, показало, что увеличение содержания Bcl-2 в СЖ и в СК сочеталось с достоверным уменьшением площади скотом (снижение индекса MD) и улучшением светочувствительности сетчатки (повышение индекса MS), подтверждавшими защитную роль этого белка, информативность его исследования при прогнозировании прогрессирования ПОУГ, а также лечебный эффект препарата.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является возможность патогенетически обоснованного подхода к лечению и тактике ведения пациентов с ПОУГ.

Технический результат достигается за счет определения в слезной жидкости и сыворотке крови белка Всl-2.

Способ осуществляют следующим образом. Материалом для проведения иммунологических исследований служат сыворотка, полученная обычным путем из периферической венозной крови и/или слезная жидкость. Взятие слезы осуществляют с помощью микропипетки из нижнего конъюнктивального свода. При необходимости пробы замораживают. Определение Всl-2 проводят с помощью иммуноферментного анализа (ИФА), согласно инструкции к используемой тест-системе. Для количественной оценки содержания Всl-2 в исследуемых пробах сыворотки и слезной жидкости используют, например, тест-системы «Protein Bcl-2 ELISA» фирмы «BenderMedSystems», Австрия.

Первые моноклональные антитела, специфичные к Всl-2, сорбированы в ячейках микропланшета. Всl-2, находящийся в сыворотке и слезе, связывается с иммобилизованными антителами. Добавляемые антиВсl-2 ФИТЦ-конъюгированные моноклональные антитела связывают Всl-2, захваченный первыми антителами. После инкубации и промывки из ячеек удаляется несвязавшийся конъюгат и в ячейки добавляются конъюгированные с пероксидазой анти-ФИТЦ-антитела, связывающие ФИТЦ, иммобилизованный в сэндвич-комплексе. Несвязавшийся пероксидазный конъюгат удаляется последующей промывкой. Затем субстратный раствор взаимодействует ферментным комплексом с образованием окрашенного раствора. Интенсивность окраски, измеренная на длине волны 450 нм, прямо пропорциональна концентрации Всl-2, присутствующего в образцах. Концентрация Всl-2 в исследуемых образцах определяется по стандартной кривой, построенной по 6 разведениям стандарта Всl-2.

Ход определения. Количественное определение Всl-2 и оценку результатов проводят согласно инструкции фирмы-производителя тест-систем. Фирма-изготовитель гарантирует следующие аналитические характеристики:

Чувствительность: 1 Ед/мл.

Диапазон измеряемых концентраций: 5,12-200 Е/мл.

Результаты оценивают следующим образом: отсутствие антиапотозного белка Всl-2 всыворотке крови и/или слезной жидкости свидетельствует о прогрессировании глаукомы.

Пример 1. Пациент К., 76 лет, диагноз: OD - IIIb, OS - IIIb стадия ПОУГ. Результаты исследования Всl-2: в слезной жидкости OD - трицательный (ниже чувствительности теста), в слезной жидкости OS - 8,66 Ед/мл. Bcl-2 в сыворотке крови отсутствует. Для выявления функциональных и структурных признаков изменений зрительного нерва проведено исследование на стандартном автоматизированном периметре с определением периметрических индексов MD, отражающем площадь скотом, и MS, отражающем среднюю светочувствительность сетчатки, и на ретинотомографе - показателя RNFL, отражающем толщину слоя нервных волокон сетчатки. Эти значения составили для правого глаза: MD = 8,2 дБ и MS = -19,3 дБ, RNFL=0,149 мм; для левого: MD = 6,7 дБ и MS = -17,9 дБ, RNFL = 0,159 мм. Эти данные соответствуют далеко зашедшей стадии глаукомы и свидетельствуют о наличии глаукоматозной оптической нейропатии (ГОН). Причем худшие функциональные показатели были отмечены со стороны OD, в слезной жидкости которого Всl-2 отсутствовал (более высокий MD, более низкие MS и RNFL - по сравнению с OS, в СЖ которого уровень Всl-2 составил 8,66 Ед/мл).

При контрольном осмотре этого пациента через 6 месяцев (в течение которых пациент использовал гипотензивные препараты местно, имел компенсированный уровень офтальмотонуса обоих глаз; нейропротекторная терапия в данном случае не применялась) была выявлена отрицательная динамика глаукоматозного процесса с явным ухудшением периметрических индексов (повышение MD = 11,3 дБ и снижение MS = 7,9 дБ) и уменьшением толщины слоя нервных волокон сетчатки (показатель RNFL составил 0,147 мм) на правом глазу. Показатели левого глаза изменились меньше (MD = 10,9 дБ, MS = 17,2 дБ, RNFL = 0,157 мм), в основном - повышением индекса MD.

Данный пример свидетельствует о работоспособности предложенного способа, показывая, что отсутствие Всl-2 в сыворотке крови и/или в слезной жидкости (OD) сопровождается прогрессированием глаукоматозного процесса.

Пример 2. Пациентка Е., 82 года. Диагноз: ПОУГ OU, OD - IIa, OS -IIIа стадии. Всl-2 в слезной жидкости правого глаза не обнаружен, показатели ИФА при исследовании слезной жидкости левого глаза оказались на уровне нижней границы чувствительности тест-системы (практически - отрицательные); в сыворотке крови выявлен низкий уровень Всl-2 (1,85 Ед/мл). Клинико-функциональные показатели для правого глаза составили: MD = 17,0 дБ, MS = 8,9 дБ, RNFL = 0,142 мм, для левого глаза: MD = 27,5 дБ, MS = 3,7 дБ, RNFL = 0,113 мм, что соответствовало стадиям заболевания и свидетельствовало о наличии глаукоматозной оптической нейропатии (ГОН).

Через 6 месяцев (в течение которых пациентка использовала гипотензивные препараты местно и имела компенсацию ВГД; нейропротекторная терапия не применялась) была выявлена отрицательная динамика глаукоматозного процесса в обоих глазах. Клинико-функциональные показатели ухудшились и составили для правого глаза: MD = 20,8 дБ (повышение, свидетельствуюшее об увеличении площади скотом), MS = 6,0 дБ (снижение, свидетельствуюшее об ослаблении светочувствительности), RNFL = 0,140 мм (тенденция к снижению, отражающая уменьшение толщины слоя нервных волокон сетчатки); для левого глаза: MD = 28,8 дБ (повышение, свидетельствуюшее об увеличении площади скотом), MS = 3,2 дБ (снижение, свидетельствуюшее об ослаблении светочувствительности), RNFL = 0,111 мм (тенденция к снижению, отражающая уменьшение толщины слоя нервных волокон сетчатки).

Данный пример свидетельствует о работоспособности предложенного способа, показывая, что при отсутствии Всl-2 в слезной жидкости, несмотря на наличие его в сыворотке крови (низкий уровень), глаукоматозный процесс прогрессирует.

Пример 3. Пациент Н., 76 лет. Диагноз: ПОУГ OU, OD - IIа, OS -IIIа стадии. Всl-2 в слезной жидкости правого глаза - 12,7 Ед/мл, левого - 7,04 Ед/мл; в сыворотке - не обнаружен (показатель ниже чувствительности тест-системы).

Клинико - функциональные показатели для правого глаза составили: MD = 9,1 дБ, MS = 22,3 дБ, RNFL = 0,144 мм; для левого глаза: MD = 18,2 дБ, MS = 23,9 дБ, RNFL = 0,131 мм, что соответствовало стадиям заболевания и свидетельствовало о наличии глаукоматозной оптической нейропатии (ГОН).

Через 6 месяцев (в течение которых больной использовал гипотензивные препараты местно и уровень офтальмотонуса был компенсирован; нейропротекторная терапия не применялась) у пациента была выявлена отрицательная динамика глаукоматозного процесса, особенно заметная на левом глазу. Для правого глаза периметрические индексы составили: MD = 9,1 дБ (практически не изменился) и MS = 18,6 дБ (снижение, свидетельствующее об ослаблении светочувствительности), показатель RNFL = 0,143 мм (практически не изменился); для левого глаза: MD дБ = 21,7 (повышение, свидетельствуюшее об увеличении площади скотом), MS = 11,8 дБ (снижение, свидетельствующее об ослаблении светочувствительности), RNFL = 0,129 мм (тенденция к снижению, отражающая уменьшение толщины слоя нервных волокон сетчатки).

Данный пример свидетельствует о работоспособности предложенного способа, показывая, что более низкий уровень Всl-2 в слезной жидкости и отсутствие этого показателя в сывототке крови сопровождалось прогрессированием глаукоматозного процесса.

Пример 4. Пациент Н., 62 года, диагноз: ПОУГ стадия IIа на обоих глазах. Уровни Всl-2 составили: в слезной жидкости OD - 4,3 Ед/мл, OS - 18,1 Ед/мл, в сыворотке крови - 7,85 Ед/мл. Клинико-функциональные показатели: MD = 6,7 дБ и MS = 22,6 дБ, RNFL = 0,198 мм для правого глаза; MD = 3,9 дБ и MS = 21,9 дБ, RNFL = 0,182 мм для левого глаза соответствовали стадии заболевания и свидетельствовали о наличии глаукоматозной оптической нейропатии (ГОН).

Через 6 месяцев (в течение которых больной использовал гипотензивные препараты местно с зарегистрированной компенсацией офтальмотонуса, витаминные препараты, антиоксиданты; ноотропные средства не применялись) у этого пациента сохранились все структурные и функциональные показатели с тенденцией к улучшению, наиболее выраженной на OD. Для правого глаза: периметрические индексы MD = 2,3 дБ (снижение, свидетельствующее об уменьшении площади скотом) и MS = 24,8 дБ (повышение, свидетельствующее об улучшении светочувствительности), показатель = RNFL 0,198 мм (на прежнем уровне); для левого глаза: периметрический индекс MD = 3,3 дБ (тенденция к снижению, свидетельствующая об уменьшении площади скотом), остальные параметры не изменились: индекс MS = 22,0 дБ и показатель RNFL = 0,182 мм.

Данный пример свидетельствует о работоспособности предложенного способа, подтверждая, что наличие Всl-2 в сыворотке крови и слезной жидкости обоих глаз способствовало сохранению стабильного состояния зрительных функций с тенденцией к улучшению перимерических показателей правого глаза (снижение индекса MD в динамике наблюдения).

Пример 5. Пациент П., 74 года. Диагноз: ПОУГ стадия IIIа на обоих глазах. Всl-2 в слезной жидкости обоих глаз и в сыворотке крови не обнаружен (показатели ИФА ниже чувствительности тест-системы). Клинико-функциональные показатели для правого глаза составили: MD = 9,1 дБ, MS = 20,3 дБ, RNFL = 0,144 мм; для левого - MD = 8,2 дБ, MS = 24,9 дБ, RNFL = 0,149 мм, что соответствовало стадии заболевания и свидетельствовало о наличии глаукоматозной оптической нейропатии (ГОН).

Больному был проведен курс консервативной терапии с применением ноотропного препарата цитиколин (500 мг/сут внутривенно ежедневно в течение 10 дней). После курса терапии уровень белка Всl-2 в слезной жидкости составил 16,7 Ед/мл для правого глаза, 14,3 Ед/мл - для левого, в сыворотке крови - 5,12 Ед/мл. Функциональные показатели для правого глаза составили: MD = 3,9 дБ (снижение, свидетельствующее об уменьшении площади скотом) и MS = 22,9 дБ (повышение, свидетельствующее об улучшении светочувствительности), RNFL = 0,144 мм (без изменений); для левого глаза: MD = 6,1 дБ (снижение, свидетельствующее об уменьшении площади скотом), MS = 24,6 дБ и RNFL = 0,149 мм практически без изменений.

Данный пример свидетельствует о работоспособности предложенного способа, показывая, что достигнутое с помощью патогенетически-ориентированной системной терапии устранение исходного «дефицита» Всl-2 (отсутствие во всех тест-пробах до лечения и повышение содержания в сыворотке крови и слезной жидкости обоих глаз по окончании курса цитиколина) сочеталось с улучшением перимерических показателей левого (снижение MD) и особенно правого глаза (снижение MD и повышение MS), что свидетельствовало о стабилизации глаукоматозного процесса.

Таким образом, предложенный способ позволяет прогнозировать прогрессирование глаукоматозного процесса и, следовательно, провести соответствующие адекватные лечебные мероприятия.

Таблица 1
Bcl-2 (Ед/мл) Число глаз/проб (n=44) Индекс MS (ДБ) Индекс MD (ДБ) RNFL (мм)
Интервалы уровней Средний уровень
Отрицат. <0,50 8 17,28±0,97 7,47±0,22 0,149±0,01
0,50 - 1,50 0,97±0,12 10 23,3±0,74
р=0,000
4,48±0,38
р=0,000
0,199±0,006
р=0,000
2,0 - 6,50 4,37±0,37 12 21,65±0,52
р=0,000
5,87±0,57
р=0,042
0,17±0,007
р=0,045
7,0 - 10,0 8,05±0,39 8 20,25±1,19 7,45±0,4 0,1663±0,008
12,0 - 18,0 14,23±1,23 6 20,7±0,38
р=0,013
6,86±0,97 0,1747±0,01
р=0,014
Примечание: p - достоверность различий по сравнению с показателями у больных с отсутствием Всl-2
Таблица 2
Bcl-2 (Ед/мл) Число проб (n=30) Индекс MS (ДБ) Индекс MD (ДБ) RNFL (мм)
Интервалы уровней Средний уровень
отрицат. <0,50 14 17,37±1,25 7,53±0,63 0,15±0,006
1,80-3,00 2,41±0,32 4 16,85±2,97 6,8±0,4 0,13±0,009
4,50-5,50 5,01±0,23 4 19,95±0,6 7,45±0,43 0,1725±0,002
7,00 - 9,50 7,77±0,40 8 23,35±0,62
р=0,003
3,6±0,1
р=0,000
0,2117±0,007
р=0,000
Примечание: p - достоверность различий по сравнению с показателями у больных с отсутствием Всl-2

Способ прогнозирования прогрессирования первичной открытоугольной глаукомы путем исследования слезной жидкости и сыворотки крови пациента, отличающийся тем, что в слезной жидкости и сыворотке крови определяют содержание антиапоптотического белка Всl-2 и при отсутствии его в слезной жидкости и/или сыворотке прогнозируют прогрессирование глаукоматозного процесса.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и неонатологии, и может быть использовано для профилактики развития перинатального поражения ЦНС гипоксически-ишемического генеза у детей из группы риска.
Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики нарушений в системе гемостаза. Определяют показатели R1, MA1, G1, LY301, LY302, ΔR, ΔK, ΔAngle, ΔMA, ΔG и ΔLY30.
Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения простат-специфического антигена (ПСА) в жидкой среде.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования риска развития рецидива воспалительных заболеваний кишечника. Сущность способа состоит в том, что у больных с воспалительными заболеваниями кишечника с помощью иммуноферментного анализа в крови определяют уровень α-дефензина (αД) в нг/мл в плазме крови и содержание β-дефензина (βД) в нг/г и кальпротектина (ФК) в мкг/г в кале, рассчитывают вероятность развития рецидива воспалительного заболевания кишечника (p) в % по формуле.

Изобретение относится к области животноводства, в частности к скотоводству. Этот способ позволяет оценить скорость роста бычков по характеру регулирующего влияния тиреотропных гормонов на процессы обмена свободных аминокислот.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения оптимальных сроков дренирования желчных протоков у больных с патологией билиарного тракта различной этиологии.
Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для дифференциальной диагностики хронической формы простого герпеса (ПГ) и субклинического «носительства» противогерпетических антител.

Изобретение относится к медицинскому контейнеру для сбора и хранения проб, в частности к модифицированному многофункциональному пробоотборному контейнеру. Контейнер содержит корпус (1), крышку (2), расположенную на отверстии корпуса (1), фиксированный вращаемый стержень (4), установленный на крышке (2) с возможностью свободного вращения относительно крышки (2), и заборную ложку (5), расположенную в нижней части указанного фиксированного вращаемого стержня (4).

Изобретение относится к измерительной технике, а точнее к оптическим методам регистрации агрегации частиц при проведении иммунохимических реакций, например, с применением частиц микронного размера с иммобилизованными на них реагентами.
Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, кардиологии и генетике, и может быть использовано для прогнозирования риска развития протромботических изменений у подростков с эссенциальной артериальной гипертензией.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и предназначено для выбора тактики ведения беременных с плацентарной недостаточностью (ПН) и синдромом задержки роста плода (СЗРП). Для этого в крови определяют уровень ангиогенных факторов, а именно растворимой fms-подобной тирозинкиназы (sFlt-1) и плацентарного фактора роста (PIGF). Рассчитывают ангиогенный коэффициент (Ka) по формуле: Ka=sFlt-1/PlGF×10. Если Ka меньше или равен 10, беременной не нужна госпитализация, не требуется динамическое наблюдение, посещение врача женской консультации осуществляется по плану. В случае если Ка больше 10, но меньше 50, то беременную госпитализируют в стационар, где проводят кардиотокографию (КТГ), допплерометрию, определение индекса амниотической жидкости (ИАЖ), осуществляют лечение, направленное на улучшение маточно-плацентарного кровотока, в течение 10 дней. При этом объём инфузии составляет 400 мл в сутки. Препаратами выбора являются актовегин, трентал, инстенон, карнитина хлорид. Далее через 2 недели осуществляют контрольные ультразвуковое, допплеровское исследование, КТГ, ИАЖ, контроль Ка. При отсутствии отрицательной динамики беременную выписывают. Если Ka больше или равен 50, но меньше 100, то беременную госпитализируют в стационар, где проводят КТГ, допплерометрию, ИАЖ и осуществляют лечение, направленное на улучшение маточно-плацентарного кровотока, в течение 14 дней. При этом объем инфузии составляет 800 мл в сутки. Препаратами выбора являются актовегин, трентал, инстенон, карнитина хлорид. При этом осуществляют контрольную допплерометрию и КТГ 1 раз в 3 дня, через 2 недели проводят контроль Ka. При положительной динамике возможна выписка, при отсутствии динамики - лечение продолжают в течение 2 недель. При значениях Ka больше или равном 100, но меньше 150, беременную госпитализируют в стационар, где проводят КТГ, допплерометрию, ИАЖ и осуществляют лечение, направленное на улучшение маточно-плацентарного кровотока, в течение 14 дней. При этом объем инфузии составляет не менее 800 мл в сутки, препараты выбора те же. Дополнительно вводят препараты, направленные на коррекцию гемостаза, а именно фраксипарин, фрагмин, клексан на выбор. Контроль допплерометрии и КТГ осуществляют ежедневно. При маловодии также ежедневно проводят контроль ИАЖ. При сроке беременности до 34 недель в таком случае осуществляют профилактику респираторного дистресс-синдрома (РДС) плода путем введения препарата Дексон 24 мг по схеме: 6 мг каждые 12 часов 4 раза. При этом через 2 недели лечения осуществляют обязательный контроль Ka. При положительной динамике возможна выписка, при отсутствии динамики лечение продолжают в течение 2 недель. В том случае если Ka больше или равен 150, то при сроке беременности до 34 недель тактика лечения такая же, как при Ka от 100 до 150, но контроль допплерометрии, КТГ, ИАЖ осуществляют 2 раза в день. При отсутствии динамики прибавки веса плода в течение 2 недель лечения или при ухудшении функционального состояния плода производят кесарево сечение. При сроке беременности 34-36 недель тактика лечения и наблюдения такая же, как при сроке до 34 недель, кроме профилактики РДС плода. Однако при ухудшении характера шевелений плода или ухудшении функционального состояния плода по данным КТГ или допплерометрии производят кесарево сечение. При сроке беременности более 36 недель и значениях Ka больше или равных 150 проводят досрочное родоразрешение. Способ обеспечивает оптимальный выбор тактики ведения беременности за счёт определения показателей, отражающих тяжесть сосудистых нарушений непосредственно в маточно-плацентарном комплексе и компенсаторные возможности организма плода и матери. 5 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования исхода абдоминального сепсиса. Сущность способа состоит в том, что у больного с абдоминальным сепсисом исследуют венозную кровь дважды с интервалом от 1 до 7 суток, определяют уровень васкулярного эндотелиального фактора роста (VEGF) в пг/мл с помощью иммуноферментного анализа, вычисляют индекс прогноза (ИП) исхода абдоминального сепсиса по формуле. При величине ИП меньше 100% прогнозируют неблагоприятный исход абдоминального сепсиса. Использование заявленного способа позволяет повысить точность и упростить прогнозирование исхода абдоминального сепсиса. 4 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для диагностики течения злокачественного роста. Способ включает получение сыворотки крови; подготовку, по крайней мере, 10 проб сыворотки путем ее нанесения на предметное стекло; их одновременное высушивание под покровным стеклом при комнатной температуре и относительной влажности 70-75% в течение 7-10 суток; последующее исследование при микроскопии в поляризованном свете и выявление анизотропных сферолитов. Причем при выявлении анизотропных микросферолитов с волнистой структурой диагностируют генерализацию злокачественного новообразования. При выявлении анизотропных микросферолитов с зернистой структурой или комбинации сферолита с включенным в него микросферолитом с зернистой структурой диагностируют отсутствие генерализации. Предлагаемый способ позволяет на разных стадиях заболевания своевременно диагностировать генерализацию опухолевого процесса и осуществлять целенаправленную коррекцию терапии, что повышает эффективность лечения больных и продолжительность их жизни. 13 ил., 4 пр.

Настоящее изобретение относится к области биофизики. Предложены способы определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, в соответствии с которыми обеспечивают систему in vitro, которая содержит образец плазмы крови, цельной крови, воды, лимфы, коллоидного раствора, кристаллоидного раствора или геля, и протеолитический фермент или его предшественник, добавляют флуорогенный, хромогенный или люминесцентный субстрат для упомянутого фермента, регистрируют в заданные моменты времени пространственное распределение сигнала высвобождающейся метки субстрата и получают пространственно-временное распределение активности протеолитического фермента путем решения обратной задачи типа «реакция - диффузия - конвекция» с учетом связывания метки с компонентами среды. Также рассмотрено устройство для реализации способов по настоящему изобретению и способ диагностики нарушений гемостаза, основанный на их применении. Настоящее изобретение может найти дальнейшее применение в исследованиях системы свертывания крови и диагностике заболеваний, связанных с нарушениями свертывания крови. 5 н. и 17 з.п. ф-лы, 6 ил.
Изобретение относится к трансфузиологии, а именно к физико-химическим способам исследования биологического материала, и предназначено для определения годности и/или готовности консервированной эритроцитарной массы к переливанию. Для осуществления способа пробу консервированной крови - 2 мл перед трансфузией смешивают с озонированным раствором натрия хлорида 0,9% с концентрацией озона 2 мг/л в эквивалентном объеме. Затем через 15 минут экспозиции в полученной эритроцитарной взвеси определяют концентрацию 2,3 дифосфоглицерата. Концентрация 2,3 дифосфоглицерата в эритроцитарной взвеси выше 6 мкмоль/л свидетельствует о высокой эффективности планируемой гемотрансфузии. Использование изобретения повышает точность определения годности консервированной эритроцитарной массы к трансфузии, что обеспечивает повышение эффективности лечения тяжелых больных за счет быстрой и устойчивой коррекции показателей доставки и потребления кислорода преимущественно функционально полноценными эритроцитами. 2 пр.

Изобретение относится к медицине и биологии, касается способа активизации роста лейкоцитарной массы и комплексной коррекции состава крови в акустическом поле in vitro. Осуществляют акустическое воздействие на кровь или ее фракции при температуре от 4оC до 38оC, широкополосными колеблющимися акустическими сигналами в частотном диапазоне 16-20000 Гц с доминирующим уровнем звукового давления более 45 дБ, но менее 60 дБ и темпом 60-80 уд/мин, или последовательным чередованием акустических сигналов с доминирующим уровнем звукового давления ≤45 дБ, темпом <60 уд/мин с акустическими сигналами, характеризующимися доминирующим уровнем звукового давления более 65 дБ, но менее 90 дБ и темпом >80 уд/мин. Предлагаемый способ позволяет активизировать рост лейкоцитарной массы и осуществить комплексную коррекцию состава крови. 4 з.п. ф-лы, 4 табл., 2 ил.
Изобретение относится к области медицины, в частности к оздоровительной нейрогормональной коррекции и омоложению с использованием музыкально-акустических воздействий и может использоваться в различных лечебно-профилактических учреждениях. На основании выявленного уровня содержания гормонов в крови, осуществляют воздействие подобранной с учетом в том числе жанровых музыкальных предпочтений пациента, музыкальной программой. Для воздействия используют три алгоритма: с доминирующим уровнем звукового давления ≤45 дБ и темпом <60 уд/мин (S-алгоритм); с доминирующим уровнем звукового давления более 65 дБ, но менее 90 дБ и темпом >80 уд/мин (Т-алгоритм); доминирующим уровнем звукового давления более 45 дБ, но менее 60 дБ, с темпом 60-80 уд/мин., или последовательным чередованием S- и Т-алгоритмов. Способ позволяет оптимизировать содержание уровня гормонов в крови, повышая резервные возможности организма и уровень здоровья с помощью возникающих реакций адаптации, что оказывает благоприятное воздействие на психологическое и физическое состояние обследуемых, в том числе на внешний вид пациента. 4 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования развития атопического дерматита у детей грудного возраста. Сущность способа состоит в том, что в мембранах эритроцитов пуповинной крови новорожденного с помощью газовой хроматографии определяют уровень гамма-линоленовой кислоты. При содержании кислоты в пределах от 0,01 до 4,63 мг/л прогнозируют развитие атопического дерматита у детей грудного возраста. Использование заявленного способа позволяет повысить точность прогнозирования развития атопического дерматита у детей. 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, андрологии и репродуктологии, и может быть использовано для прогнозирования нормализации репродуктивной функции мужчин после варикоцелэктомии. Для этого проводят дооперационную оценку следующих показателей эякулята: концентрация сперматозоидов, процент подвижных сперматозоидов, покрытых антиспермальными антителами, продукция в сперме активных форм кислорода. При этом прогностически благоприятными считают: концентрацию сперматозоидов 0,01-45 млн/мл, процент сперматозоидов, покрытых антиспермальными антителами, менее 50%, продукцию в сперме активных форм кислорода больше нормативных значений. Способ позволяет с большей вероятностью прогнозировать восстановление репродуктивной функции мужчины. 1 пр., 2 табл.
Изобретение касается способа диагностики травматического и нетравматического происхождения гнилостно измененных спаек на гистологических срезах спаек. Способ заключается в окраске по методу Перлса путем последовательной обработки гистологических срезов метанолом или солянокислым спиртом, ополаскивания в дистиллированной воде, обработки 1 N раствором соляной кислоты в течение 30 минут, окрашивания в течение 10 минут раствором, содержащим равное количество 2% раствора гексацианоферрата тригидрата (желтой кровяной соли) и 1 N раствора соляной кислоты, ополаскивания в дистиллированной воде, высушивания. Выявляют следы кровоизлияний в области спаек на наличие соединений трехвалентного железа. В случае накопления красителя сине-зеленого цвета в виде гранул в спайке и мягких тканях из места прикрепления или в виде пропитывания красителем соединительной ткани и гнилостно измененных мышечных волокон диагностируют травматическое происхождение гнилостно измененных спаек, а при отсутствии положительной реакции диагностируют их нетравматическое происхождение.
Наверх