Способ выявления групп изоформ тканеспецифического транскрипционного фактора hnf4α в гепатоцеллюлярных карциномах человека

Авторы патента:

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Владельцы патента RU 2522859:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина" Российской академии медицинский наук (ФГБУ "РОНЦ им. Н.Н. Блохина" РАМН) (RU)

Изобретение относится к медицине и касается способа выявления групп изоформ тканеспецифического транскрипционного фактора HNF4α в гепатоцеллюлярных карциномах человека. Способ представляет собой иммуногистохимический способ исследования с использованием моноклональных антител к группам изоформ HNF4α и характеризуется тем, что для выявления антигенов используют двухступенчатую высокочувствительную полимерную пероксидазную систему. Демаскировку осуществляют в цитратном буфере при рН 6,0 и t=95°, при инкубации с первичными антителами используют высокое разведение антител HNF4αP2 и HNF4αP1 - 1,5 мкг/мл и 3 мкг/мл соответственно. Изобретение обеспечивает высокую специфичность и чувствительность способа, высокую точность оценки интенсивности окрашивания ядер опухолевых клеток, оценку степени дифференцировки опухолевых клеток и их злокачественности по уровню экспрессии групп изоформ HNF4α, сокращение времени исследования до 4 часов. 3 пр., 4 ил.

Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, и касается способа выявления групп изоформ тканеспецифического транскрипционного фактора Hepatocyte Nuclear Factor (HNF) 4α в гепатоцеллюлярных карциномах человека.

Транскрипционный фактор HNF4α - один из центральных регуляторов дифференцировки клеток печени, почек, кишечника и поджелудочной железы [Sladek F.M., Seidel S.D. Hepatocyte nuclear factor 4a. In "Nuclear Receptors and Genetic Diseases" (Burris, T.P., and McCabe, E., Eds.), 2001, pp.309-361. Academic Press, London]. Описано существование двух промоторов гена HNF4α, P1 и Р2, определяющих транскрипцию двух групп его изоформ - HNF4αP1 и HNF4αP2, соответственно, с разными спектрами тканевой экспрессии, активационными свойствами и спектром регулируемых генов [Torres-Padilla М.Е., Sladek F.M., Weiss M.C. Developmentally regulated N-terminal variants of the nuclear receptor hepatocyte nuclear factor 4alpha mediate multiple interactions through coactivator and corepressor-histone deacetylase complexes. J Biol. Chem. 2002, 277(47): 44677-44687]. Промотор P1 активен в гепатоцитах взрослой печени, активность промотора Р2 выявляется в клетках желчных протоков, эмбриональных клетках печени и трансформированных гепатоцитах [Tanaka Т., Jiang S., Hotta H., Takano K., Iwanari H., Sumi K., Daigo K., Ohashi R., Sugai M., Ikegame С., Umezu H., Hirayama Y., Midorikawa Y., Hippo Y., Watanabe A., Uchiyama Y., Hasegawa G., Reid P.C., Aburatani H., Hamakubo Т., Sakai J., Naito M., Kodama T. Dysregulated expression of P1 and Р2 promoter-driven hepatocyte nuclear factor-4α in the pathogenesis of human cancer. J. Path. 2006, 208(5): 662-672]. Большинство исследований по сопоставлению уровней синтеза изоформ HNF4α в нормальных и опухолевых клетках, проводимых с помощью различных способов, не позволяют определять изменения соотношения изоформ.

Прототипом заявляемого способа является способ выявления HNF4α с помощью иммуногистохимического окрашивания опухолевой ткани моноклональными антителами, специфичными к двум группам изоформ HNF4αP1 и HNF4αP2, с использованием стрептавидин-биотиновой системы детекции [Tanaka Т., Jiang S., Hotta H., Takano K., Iwanari H., Sumi K., Daigo K., Ohashi R., Sugai M., Ikegame С., Umezu H., Hirayama Y., Midorikawa Y., Hippo Y., Watanabe A., Uchiyama Y., Hasegawa G., Reid P.C., Aburatani H., Hamakubo T., Sakai J., Naito M., Kodama T. Dysregulated expression of P1 and Р2 promoter-driven hepatocyte nuclear factor-4α in the pathogenesis of human cancer. J. Path., 2006, 208(5): 662-672]. Моноклональные антитела окрашивали изоформы транскрипционного фактора HNF4α в ядрах гепатоцитов. Данный способ позволил исследовать тканевую специфичность экспрессии двух групп изоформ в нормальных тканях человека, а также продемонстрировать активацию экспрессии изоформ HNF4αP2 в нескольких образцах ткани гепатоцеллюлярных карцином человека.

Недостатками прототипа являются: 1) стрептавидин-биотиновая система, использованная в данном способе, не обладает достаточным уровнем чувствительности в тканях печени, т.к. биотин содержится в больших количествах в клетках печени, что приводит к неспецифическому связыванию вторичных антител с эндогенным биотином и появлению высокого уровня фоновой окраски, делая недостоверными исследования антигенов в тканях печени, 2) способ иммуногистохимического окрашивания в прототипе является трудоемким. Эти недостатки делают невозможным сопоставить уровень синтеза групп изоформ фактора HNF4α в нормальных и опухолевых клетках гепатокарцином человека с высокой точностью.

Задачей изобретения является разработка нового специфичного способа выявления групп изоформ тканеспецифического транскрипционного фактора HNF4α в гепатоцеллюлярных карциномах человека с использованием высокочувствительной полимерной пероксидазной системы.

Заявляемый способ, включающий несколько этапов, осуществляется следующим образом.

1. Подготовка образцов ткани к иммуногистохимическому окрашиванию.

Для дифференциального анализа экспрессии групп изоформ HNF4αP1 и HNF4α Р2 в гепатоцеллюлярных карциномах человека используют парафиновые блоки образцов гепатоцеллюлярной карциномы человека и неопухолевой ткани печени тех же пациентов. Образцы тканей гепатоцеллюлярной карциномы человека заливают в парафин, предварительно проведя обезвоживание тканей в батарее спиртов с восходящей концентрацией, проводят через промежуточный растворитель (ортоксилол) и пропитывают парафином при температуре 55-56°C, затем быстро охлаждают. Полученные парафиновые блоки нарезают на санном микротоме. Полученные образцы ткани печени толщиной в 5 мкм приклеивают на полилизиновые стекла (Menzel Glasses, Германия).

Затем проводят депарафинизацию образцов ткани гепатоцеллюлярной карциномы: помещают их в ксилол на 5 минут дважды, затем в этиловый спирт 96% и отмывают в дистиллированной воде в течение 5 минут дважды.

Далее для восстановления антигенов проводят их демаскировку в водяной бане при температуре 95°C в цитратном буфере с рН 6.0 (Dako; Дания), затем охлаждают при комнатной температуре в течение 25 минут, промывают дистиллированной водой дважды в течение 5 минут.

Затем проводят инактивацию эндогенной пероксидазы в коммерческом растворе 3% перекиси водорода (Peroxidase-Blocking Solution (Dako, Дания)) в течение 20 минут, после этого промывают в дистиллированной воде дважды в течение 5 минут.

2. Иммуногистохимическое определение уровней синтеза групп изоформ HNF4α P1 и HNF4αP2.

Иммуногистохимическое исследование уровня синтеза и локализации групп изоформ HNF4αP1 и HNF4αP2 проводят на серийных образцах ткани гепатоцеллюлярной карциномы человека для каждой изоформы отдельно.

Для получения иммуногистохимически окрашенных препаратов в качестве первичных антител используют моноклональные антитела мыши к HNF4αP2 (Н6939; R&D systems, США) или HNF4αP1 (К9218; R&D systems, США) человека в разведении 1,5 мкг/мл и 3 мкг/мл, соответственно. Антитела разводят на коммерческом буфере Antibody Diluent with Background Reducing Components (Dako, Дания). В качестве вторичных антител используют двухступенчатую пероксидазную систему детекции BioGenex (США).

На образец ткани гепатоцеллюлярной карциномы наносят предварительно разведенные антитела и инкубируют в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем его промывают в растворе Tris-HCl (50 мМ, рН 7-7.2) дважды в течение 5 минут. Образцы ткани гепатоцеллюлярной карциномы инкубируют со вторичными антителами Super enchancer (BioGenex, США) в течение 20 минут, после чего промывают раствором Tris-HCl дважды по 5 минут и инкубируют с полимерной пероксидазой хрена (HRP полимер) SS Label (BioGenex, США) в течение 30 минут. После инкубации с полимерной пероксидазой их промывают раствором Tris-HCl дважды в течение 5 минут, окрашивают 5-5′-диаминобензидином (ДАБ) (BioGenex, США) в течение 3-5 минут, промывают в дистиллированной воде дважды по 5 минут.

Образцы ткани гепатоцеллюлярной карциномы докрашивают в растворе гематоксилина Майера (Dako, Дания) в разведении 1:4 на дистиллированной воде в течение 1 минуты, затем отмывают сначала в проточной водопроводной воде, а потом в дистиллированной воде в течение 1 минуты. Далее их заключают в специальный состав Glycergel Mounting Medium (Dako, Дания) и накрывают покровным стеклом.

3. Оценка уровня синтеза двух групп изоформ HNF4α на образцах ткани гепатоцеллюлярной карциномы после иммуногистохимического окрашивания.

При анализе образцов ткани гепатоцеллюлярной карциномы человека, окрашенных антителами на HNF4αP1 или HNF4αP2 группы изоформ, исследуют весь образец ткани за исключением краевых зон при увеличении 200×. При учете результатов иммуногистохимического окрашивания учитывают процент окрашенных опухолевых клеток антителами к каждой из групп изоформ, а также интенсивность окрашивания и внутриклеточную локализацию исследуемого белка. Интенсивность окрашивания опухолевых клеток оценивают по системе: «+» - слабое окрашивание, «++» - средняя интенсивность окрашивания, «+++» - сильное окрашивание. Негативно окрашенными считают срезы гепатокарцином, в которых доля окрашенных ядер опухолевых клеток составляет менее 10%; срезы гепатокарцином, в которых доля окрашенных ядер опухолевых клеток составляет 10-50%, квалифицируют как умеренно окрашенные; срезы гепатокарцином, в которых доля окрашенных ядер опухолевых клеток составляет 50-100%, - как интенсивно окрашенные. При наличии на образцах ткани гепатоцеллюлярной карциномы участка неопухолевой ткани дополнительно проводят учет перечисленных параметров для нетрансформированных гепатоцитов. При окраске антителами к группе изоформ HNF4αP1 положительным контролем служит окраска ядер гепатоцитов, составляющих окружающую опухоль ткань на том же образце ткани гепатоцеллюлярной карциномы, для группы изоформ HNF4αP2 положительным контролем служит окраска антителами ядер холангиоцитов.

Изобретение иллюстрировано фиг.1-4(А-Б), на которых изображены образцы ткани гепатоцеллюлярной карциномы человека, окрашенные антителами к группам изоформ HNF4αP1 и HNF4αP2. На фиг.1А-1Б представлены образцы ткани, на которых выявлено окрашивание ядер опухолевых клеток антителами к изоформам группы HNF4αP1 и HNF4αP2. На фиг.2А-2Б представлены образцы ткани, на которых выявлено окрашивание ядер опухолевых клеток только антителами к изоформам группы HNF4αP2. На фиг.3А-3Б представлены образцы ткани, на которых выявлено окрашивание ядер опухолевых клеток только антителами к изоформам группы HNF4αP1. На фиг.4А-4Б представлены образцы ткани, на которых не выявлено окрашивания ядер опухолевых клеток ни к одной из групп изоформ HNF4α. Стрелками под номером 1 указаны ядра опухолевых клеток на образцах ткани гепатоцеллюлярной карциномы человека, окрашенные антителами к группам изоформ HNF4αP1 или HNF4αP2 в коричневый цвет. Стрелками под номером 2 указаны ядра опухолевых клеток, окрашенные в синий цвет гепатоксилином Майера, в которых отсутствует окрашивание ядер опухолевых клеток антителами к изоформам HNF4α.

Таким образом, при применении заявляемого способа показано, что на ранних стадиях гепатоканцерогенеза в дифференцированных опухолях активируется экспрессия нехарактерных для нормальной печени изоформ HNF4αP2, на более поздних стадиях опухолевой прогрессии в гепатоцеллюлярных карциномах последовательно подавляется экспрессия всех изоформ HNF4α.

Технический результат изобретения заключается в том, что заявляемый способ обладает высокой специфичностью и чувствительностью, позволяет с высокой точностью оценивать интенсивность окрашивания ядер опухолевых клеток и локализацию двух дифференциально экспрессирующихся групп изоформ HNF4α на образцах ткани гепатоцеллюлярной карциномы человека, а также оценить степень дифференцировки опухолевых клеток и их злокачественности по уровню экспрессии групп изоформ HNF4α, сократить время исследования до 4 часов.

Способ выявления групп изоформ тканеспецифического транскрипционного фактора HNF4α в гепатоцеллюлярных карциномах человека, представляющий собой иммуногистохимический способ исследования с использованием моноклональных антител к группам изоформ HNF4α, отличающийся тем, что для выявления антигенов используют двухступенчатую высокочувствительную полимерную пероксидазную систему, демаскировку осуществляют в цитратном буфере при рН 6,0 и t=95°, при инкубации с первичными антителами применяют высокий титр антител к HNF4αP2 и HNF4αP1 - 1,5 мкг/мл и 3 мкг/мл соответственно.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гепатологии, и может использоваться для прогнозирования эффективности противовирусной терапии у взрослых больных хроническим гепатитом C с генотипом 1b.

Способ прогнозирования обострения бронхиальной астмы и/или муковисцидоза при гриппе у детей // 2522276

Изобретение относится к области медицины, а именно к инфекционным болезням и пульмонологии, и может быть использовано для прогнозирования обострения бронхиальной астмы и муковисцидоза у детей при гриппе.

Способ диагностики нефротического синдрома с минимальными изменениями у детей // 2522238

Изобретение относится к медицине, а именно, к области биохимических исследований в нефрологии и может быть использовано для диагностики нефротического синдрома с минимальными изменениями (НСМИ).

Способ диагностики онкологических заболеваний и иммуноферментный набор для его осуществления // 2522231

Группа изобретений относится к области медицинской диагностики, иммунологии и онкологии, в частности к новым онкомаркерам и способам диагностики онкологических заболеваний.

Способ диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований костной системы // 2522223

Изобретение относится к области медицины, а именно онкологии и ортопедии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований костной системы.

Способ иммунологического анализа белка cxcl1 человека // 2521669

Изобретение относится к биохимии. Описан способ иммунологического анализа белка CXCL1 человека.

Способ прогнозирования развития инфекционного синдрома у больных острым лейкозом // 2521372

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии и иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования развития инфекционного синдрома у больных острым лейкозом.

Способ прогнозирования развития плацентарной недостаточности // 2521367

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике и касается способа прогнозирования развития плацентарной недостаточности с ранних сроков беременности.

Способ ранней диагностики аутоиммунного оофорита у девочек-подростков с нормогонадотропной гипофункцией яичников // 2521331

Изобретение относится к медицине, а именно к способу ранней диагностики аутоиммунного оофорита у девочек-подростков с нормогонадотропной гипофункцией яичников. Сущность способа состоит в том, что у девочек-подростков с нормогонадотропной гипофункцией яичников и неуточненной олигоменореей определяют методом ИФА в сыворотке крови уровень неоптерина.

Способ получения референс-панели образцов сывороток, предназначенной для оценки специфичности результатов серологической диагностики социально значимых заболеваний // 2521232

Изобретение относится к медицине и касается способа получения референс-панели образцов сывороток, предназначенной для оценки специфичности результатов серологической диагностики социально значимых заболеваний, включающего: исследование образцов доноров и пациентов на наличие инфекционного материала, отбор для отрицательной части референс-панели образцов, не содержащих антитела к вирусу гепатита С (ВГС), поверхностного антигена HBsAg вируса гепатита В (ВГВ), раннего белка р24 и антител к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ), а также антитела к Treponema pallidum, отбор для положительной части референс-панели образцов, содержащих антитела к ВИЧ, ВГС, HBsAg и Treponema pallidum и введение в отобранные образцы стабилизирующего состава.

Способ оценки риска развития канцерогенеза шейки матки у женщин, инфицированных вирусами папилломы // 2522908

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, гинекологии, биофизике, и касается способа оценки риска развития папилломавирус-ассоциированного канцерогенеза шейки матки. Сущность способа: в тканях биоптата шейки матки, взятых при кольпоскопическом исследовании, исследуют тип вируса папилломы человека (ВПЧ), показатели апоптоза (sFAS, TRAIL), генетических особенностей экспрессии генов, регулирующих процессы апоптоза, а также процессы радикалообразования (активность пиелопероксидазы, уровень нитрат-нитритов, общая антиоксидантная емкость ткани по реакции Фентона). Рассчитывают суммирующий коэффициент риска развития канцерогенеза шейки матки по формуле. Если суммарный коэффициент K менее 3, то прогнозируют низкий уровень риска канцерогенеза, если коэффициент K равен или более 3, то уровень риска канцерогенеза прогнозируют высокий. Изобретение обеспечивает возможность применения данного метода до формирования патологических процессов в тканях, что позволяет врачам назначить профилактический курс и предотвратить развитие РШМ при выявленной предрасположенности или при наличии одного из факторов риска. Также возможно применение данного метода у пациентов с выявленной патологией шейки матки с целью прогноза заболевания и мониторинга эффективности проводимой терапии. 2 пр.

Комплексный способ определения циркулирующих опухолевых клеток в крови больных раком молочной железы // 2522923

Изобретение относится к диагностическим методам в медицине и может быть использовано в онкологии при адъювантной терапии опухолей, а также при длительном наблюдении за пациентами после оперативного удаления опухолей. Способ описывает определение циркулирующих раковых клеток, чувствительных к адъювантной гормональной терапии, в крови больных раком молочной железы, включает выделение и обогащение циркулирующих опухолевых клеток с использованием антител с магнитными метками, получение лизатов циркулирующих опухолевых клеток, извлечение мРНК из лизатов циркулирующих опухолевых клеток, получение кДНК, получение амплифицированной ДНК, определение экспрессии маркерных генов, при этом в случае наличия одного из маркеров GA733-2, MUC-1, HER2 делается заключение о наличии циркулирующих опухолевых клеток, и при обнаружении маркеров ESR1, PGR делается заключение о наличии циркулирующих опухолевых клеток, чувствительных к гормональной терапии. Способ позволяет значительно увеличить вероятность обнаружения циркулирующих опухолевых клеток, чувствительных к адъювантной гормональной терапии, повысить точность измерений и увеличить число анализируемых характеристик циркулирующих опухолевых клеток, повысить чувствительность методов анализа и эффективность диагностики при работе с больными раком молочной железы для оценки прогноза и эффективности терапии, улучшить эффективность лечения и выживаемость онкологических больных. 5 ил., 1 пр.

Однодоменное мини-антитело aher2/askbr3-1, специфически связывающее рецептор эпидермального фактора роста her2/erbb2/neu и способное через это взаимодействие проникать внутрь клетки-мишени (интернализоваться), способ получения данного антитела и способ детекции белка her2/erbb2/neu и клеток, экспрессирующих этот белок в повышенном количестве, с помощью мини-антитела aher2/askbr3-1 // 2522929

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено однодоменное мини-антитело, специфически связывающее белок-рецептор эпидермального фактора роста HER2/ERBB2/neu человека, полученное при иммунизации двугорбого верблюда (Camelus bactrianus) препаратом опухолевых клеток SKBR3, и охарактеризованное аминокислотной последовательностью. Также рассмотрен способ детекции белка HER2/ERBB2/neu и экспрессирующих его клеток. Антитело по настоящему изобретению способно проникать внутрь клетки-мишени, на поверхности которой экспонирован HER2/ERBB2/neu, и может найти дальнейшее применение в диагностике и терапии заболеваний, связанных с повышенной экспрессией HER2/ERBB2/neu. 2 н.п. ф-лы, 6 ил., 5 пр.

Тест-полоска для высокочувствительного иммунохроматографического анализа // 2523393

Изобретение относится к иммунологии, аналитической биохимии и диагностике и представляет собой тест-полоску для высокочувствительного иммунохроматографического анализа. В основе метода лежит контакт мембранной тест-полоски с анализируемой жидкой пробой и инициируемое этим контактом движение по мембранам тест-полоски реагентов, которые содержатся в пробе или нанесены на мембрану и в ходе взаимодействий в порах мембраны или на ее поверхности формируют иммунные комплексы. Интенсивность окраски метки, связавшейся в аналитической зоне, детектируется визуально. Предложенная система предназначена для иммунохроматографического определения в жидких пробах антител или антигенов. Отличительной особенностью предлагаемого способа проведения иммунохроматографического анализа является то, что мультимембранный композит тест-полоски содержит дополнительную мембрану с нанесенным на нее веществом, медленно растворяющимся в воде, например бычьим сывороточным альбумином (БСА), которая прикрепляется к тест-полоске сразу за мембраной с нанесенным коллоидным конъюгатом. Фронт жидкой пробы, преодолевая мембрану с коллоидным золотом, конъюгированным с реагентом для связывания аналита, останавливается, попадая на мембрану с БСА, до тех пор, пока БСА не растворится. В течение этого времени проба инкубируется с коллоидным конъюгатом, что приближает реакцию связывания аналита к положению равновесия и, таким образом, приводит к снижению предела обнаружения анализа. 2 ил., 1 пр.

Способ прогнозирования наступления беременности у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием в программе экстракорпорального оплодотворения // 2523401

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования наступления беременности у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием в результате лечения методом экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Сущность способа заключается в том, что перед программой ЭКО у пациентки в лютеиновую фазу цикла проводят биопсию эндометрия и определяют относительное содержание CD95+макрофагов в лейкоцитарном инфильтрате эндометрия. При значении относительного содержания CD95+макрофагов, равном 48,8% или более, прогнозируют наступление беременности, а при значении менее 48,8% - отсутствие наступления беременности. Заявляемый способ расширяет арсенал прогностических средств, повышает точность, чувствительность и специфичность прогнозирования наступления беременности у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием перед проведением программы ЭКО. Использование способа позволит определять дальнейшую тактику ведения пациентки, своевременно назначить дополнительные лечебные мероприятия. 1 табл., 3 пр.,

Способ диагностики ревматоидного артирита по наличию антител к модифицированному цинтруллинированному виментину (anti-mcv) в ротовой жидкости // 2523413

Изобретение относится к медицине. Более подробно изобретение относится к диагностике ревматоидного артрита. Способ диагностики по настоящему изобретению заключается в определении содержания Anti-MCV в ротовой жидкости (в смешанной слюне), использовании для обработки полученных показателей Anti-MCV в ротовой жидкости математического выражения: F=0,17×Anti-MCV-0,2537, диагностировании при положительном значении F наличия ревматоидного артрита, при отрицательном значении функции F ревматоидный артрит сомнителен. Заявленное изобретение предлагает малоинвазивный и достоверный способ диагностики ревматоидного артрита.

Способ оценки нарушений клеточного иммунитета при воздействии фенола // 2523418

Изобретение относится к биологическим исследованиям и медицине и предназначено для идентификации неблагоприятного воздействия фенола, поступающего из среды обитания, на здоровье населения. Для оценки нарушений клеточного иммунитета при воздействии фенола производят отбор пробы крови и ее исследование с использованием опытного и контрольного образцов с предварительным введением в опытный образец токсиканта - фенола в концентрации, соответствующей его региональному фоновому уровню. В качестве критериальных показателей в способе используют индекс специфической чувствительности клеток для цитокина фактора некроза опухолей ФНО-α и индекс специфической чувствительности клеток для цитокина Интерлейкина-10 ИЛ-10, которые определяют следующим образом: опытную и контрольную пробы крови вносят во флакон со стерильной питательной средой ДМЕМ с гепарином и гентамицином в объемном соотношении 1:4 соответственно (в преимущественном варианте содержание в стерильной питательной среде ДМЕМ гепарина составляет 2,5 Ед/мл и гентамицина - 100 мкг/мл), осуществляют при 37°C в течение суток инкубацию этих проб, а затем центрифугирование в течение 3 минут при 1000 об/мин и в отобранном супернатанте опытной пробы определяют уровень фенол-индуцированной продукции цитокинов, а именно уровень ИПЦИЛ-10 фенол-индуцированной продукции цитокина ИЛ-10 и уровень ИПЦФНО-α фенол-индуцированной продукции цитокина - фактора некроза опухолей ФНО-α, а в отобранном супернатанте контрольной пробы определяют уровень спонтанной продукции цитокинов, а именно уровень СПЦИЛ-10 спонтанной продукции цитокина ИЛ-10 и уровень СПЦФНО-α спонтанной продукции цитокина ФНО-α, далее рассчитывают индекс ИСЧфно-α специфической чувствительности клеток для цитокина ФНО-α, а также рассчитывают индекс ИСЧИЛ-10 специфической чувствительности клеток для цитокина ИЛ-10 по следующим формулам: ИСЧФНО-α=(ИПЦФНО-α-СПЦФНО-α):СПЦФНО-α, ИСЧИЛ-10=(ИПЦИЛ-10-СПЦИЛ-10):СПЦИЛ-10, где ИПЦИЛ-10 - уровень фенол-индуцированной продукции цитокина ИЛ-10; ИПЦФНО-α - уровень фенол-индуцированной продукции цитокина ФНО-α; СПЦИЛ-10 - уровень спонтанной продукции цитокина ИЛ-10; СПЦФНО-α - уровень спонтанной продукции цитокина ФНО-α; и при выполнении одновременного условия ИСЧФНО-α более 10 и ИСЧИЛ-10 более 2 судят о нарушении клеточного иммунитета организма под воздействием фенола. Изобретение обеспечивает повышение достоверности установления оценки влияния фенола на нарушение клеточного иммунитета организма человека. 1 з.п. ф-лы, 8 табл.

Технология получения костного мозга от доноров-трупов с бьющимся и не бьющимся сердцем // 2523563

Группа изобретений относится к области медицины и может быть использована для получения костного мозга (КМ) от доноров-трупов. Для этого пунктируют крылья подвздошных костей в передней и задней трети крыльев, устанавливая в каждое по два троакара. Сбор КМ выполняют методом простой аспирации, аспирации-промыванием или их комбинированием при разряжении 0,6 Атм при помощи устройства. Устройство для заготовки КМ включает одноразовую многоканальную закрытую систему, модуль аспирации-накопления и модуль перфузии. Группа изобретений также относится к способу оценки заготовленного костного мозга. Использование данного способа получения костного мозга (КМ) обеспечивает заготовку стерильного богатого жизнеспособными мультипотентными мезенхимальными стромальными и гемопоэтическими прогенеторными клетками КМ, при этом результат достигается за счет автоматизации миелоаспирации, путем заготовки биоматериала специальным разработанным устройством для сбора КМ. 3 н. и 4 з.п. ф-лы, 1 пр., 1 ил., 1табл.

Способ лечения респираторного дистресс-синдрома новорожденных, находящихся на ивл // 2523573

Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии, и может быть использовано для лечения респираторного дистресс-синдрома у новорожденных детей, находящихся на искусственной вентиляции легких (ИВЛ). Для этого на фоне медикаментозной терапии дополнительно определяют уровень глютатионпероксидазы (GSH-Px-3) и, если ее значение менее 2,41 мкмоль/л, в комплекс лечения включают препарат «Селеназа» из расчета 10 мкг/кг/сут, 1 раз/день внутривенно струйно медленно, в течение 10 дней. Способ позволяет повысить выживаемость при снижении числа осложнений и сокращении сроков лечения за счет снижения тяжести течения оксидативного стресса и повышения антиоксидантной защиты организма.1 табл.,3 пр.

Набор реагентов для одновременного или раздельного иммунногистохимического выявления рецепторов эстрогена, прогестерона и her2 при диагностике рака молочной железы // 2523899

Изобретение относится к медицине, в частности к области лабораторной диагностики рака молочной железы, и описывает набор реагентов для иммунногистохимической диагностики рака молочной железы, который позволяет одновременно или раздельно выявлять рецепторы эстрогена, прогестерона и HER2-рецепторы. Набор реагентов включает в себя раствор для обеспечения биодоступности антигена, блокирующий раствор пероксидазы хрена, белковый блокирующий раствор, промывочный раствор, раствор первичных антител HER2-рецепторам, раствор первичных антител к рецепторам эстрогена, раствор первичных антител к рецепторам прогестерона, раствор антивидовых вторичных антител к первичным антителам, раствор стрептавидин-пероксидазы хрена, диаминбензидин, субстратный раствор, отрицательный контрольный образец, три положительных контрольных образца рака молочной железы для определения HER2, рецепторов эстрогена, рецепторов прогестерона. Набор реагентов по данному изобретению обладает повышенной чувствительностью и специфичностью. Изобретение может быть использовано в медицинских лабораториях и научно-исследовательских институтах. 3 пр., 4 табл.