Способ диагностики ранней стадии ревматоидного артрита



Способ диагностики ранней стадии ревматоидного артрита

 


Владельцы патента RU 2524616:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Владивостокский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГОУ ВПО ВГМУ Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к ревматологии, и может быть использовано для диагностики ранней стадии ревматоидного артрита. Для этого производят забор у пациента одновременно образцов костного мозга и синовиальной оболочки, из которых готовят препараты для иммуногистохимического и иммуноцитохимического исследований. После чего определяют долю клеток, синтезирующих белок Mdm2, по формуле:

А И M d m 2 = N M d m 2 100 N о б щ ,

где АИMdm2 - доля клеток, синтезирующих белок Mdm2, %; NMdm2 - количество клеток, синтезирующих белок Mdm2; Noбщ - общее число клеток в поле зрения. В случае, когда в образцах синовиальной оболочки АИMdm2=81,6-88,8%, а в образцах костного мозга АИMdm2=85,0-89,2%, у пациента диагностируют раннюю стадию ревматоидного артрита. Использование данного способа позволяет диагностировать заболевание на ранней стадии и назначить адекватную базисную терапию для лечения и замедления прогрессирования ревматоидного артрита. 3 пр., 1 табл., 1 ил.

 

Изобретение относится к области предиктивной (предсказательной) медицины и может быть использовано при диагностике ревматоидного артрита на ранней стадии заболевания.

Ревматические заболевания в последние годы привлекают все большее внимание ученых в силу своей высокой распространенности и социальной значимости. Среди ревматических заболеваний особое теоретическое и медико-социальное значение имеет ревматоидный артрит (РА). Распространенность РА в популяции составляет 0,5-1,5% [1]. Поражая преимущественно лиц трудоспособного возраста, РА приводит к ранней инвалидизации, около 50% больных теряют трудоспособность в течение первых 5 лет заболевания, продолжительность жизни пациентов сокращается на 8-10 лет. Согласно статистике, в России в 2002 году было зарегистрировано 280000 пациентов с РА, среди которых более 26000 человек заболевших впервые. Ежегодно в РФ регистрируется около 300000 больных [2].

РА в развернутой стадии характеризуется прогрессирующим течением с формированием деформаций суставов, развитием тяжелых функциональных нарушений и поражений внутренних органов. По данным эпидемиологических исследований, частота сердечно-сосудистых событий у пациентов с ревматоидным артритом в 3,96 раза выше, чем в популяции и на 30-60% выше, чем у больных с другой патологией суставов. Обзор исследований показал, что прямая стоимость РА составляла к 2000 г. около 6000 евро в год. Ухудшение функции суставов приносит обществу наибольшие финансовые потери, поскольку расходы на заболевание пропорциональны нарастанию функциональной недостаточности (ФН). Показано, что общие затраты возрастают с 5000 евро на пациента с минимальной ФН и до 20000 евро на пациента с тяжелой ФН. Общая стоимость РА в странах западной и восточной Европы на 2006 год составляет от 42 млрд. до 3,4 млрд. евро в год, соответственно [1].

В настоящее время разработаны диагностические критерии РА, включающие: суставной синдром, рентгенологические изменения. К лабораторным маркерам данного заболевания относят аутоантитела иммуноглобулинов класса М, реагирующих с Fc-фрагментом иммуноглобулина класса G, или ревматоидный фактор (РФ) - иммуноглобулин класса М и антитела к циклическому цитрулированному пептиду (анти-ЦЦП антитела).

К сожалению, ни один из разработанных в настоящее время критериев РА не является строго специфичными для данного заболевания. Более того, используя имеющиеся критерии очень сложно диагностировать РА на очень ранней и ранней стадиях заболевания. Например, у «условно» здоровых людей, в последующем заболевших РА, обнаруживают различные иммунологические нарушения, характерные для РА (увеличение уровня РФ, анти-ЦЦП антител, С - реактивного белка), задолго до появления первых клинических симптомов заболевания. У 2/3 пациентов структурные изменения (эрозии) суставов возникают очень быстро, уже в течение первых двух лет с момента начала болезни.

Установлено, что предотвращение структурных повреждений в дебюте РА способствует сохранению функциональной активности пациентов в долговременной перспективе. Однако промежуток времени, когда активная терапия базисными противовоспалительными препаратами может эффективно затормозить прогрессирование поражения суставов (так называемое «окно возможности») весьма короткий и иногда составляет всего несколько месяцев от начала болезни.

Очевидно, что РА - это заболевание, при котором отдаленный прогноз напрямую зависит от того, насколько рано был установлен диагноз и начата фармакотерапия [3]. Таким образом, разработка новых способов диагностики РА на ранней стадии заболевания является перспективным направлением предиктивной (предсказательной) медицины.

Известен способ доклинической диагностики ювенильного ревматоидного артрита (см. патент РФ 2195856, МПК А61В 3/10, дата публикации 10.01.2003) путем проведения биомикроскопии роговицы и радужной оболочки глаз с использованием щелевой лампы, согласно которому, потенциальный юношеский ревматоидный артрит выставляют при выявлении кератопатии, симптома Аксенфельда, светлой радужной оболочки, сужении или звездчатой формы зрачкового пояса, слабой дифференцировки линии Краузе, гипоплазии или дисплазии переднего листка, лакун в области наружных сегментов, «эмбрионального» типа радужки, «фестончатости» периферических отделов цилиарного пояса.

Недостаток этого изобретения заключается в низкой эффективности и узкой области применения из-за возрастных ограничений пациентов.

В качестве ближайшего аналога взят способ тестирования на наличие ревматического заболевания (см. патент РФ 2173462, МПК G01N 33/48, G01N 33/68, дата публикации 10.09.2001), включающий исследование элементов сустава, анализ результатов исследования и диагностику ревматического заболевания по результатам исследования.

Недостатком ближайшего аналога является повышенная трудоемкость процесса и низкая эффективность анализа из-за субъективности морфологической оценки форм кристаллов, а также отсутствия количественной оценки диагностических показателей и их параметров.

Технической задачей заявляемого изобретения является разработка эффективного способа диагностики, позволяющего определить ревматоидный артрит на ранней стадии заболевания.

Технический результат, достигаемый при решении поставленной задачи, выражается в расширении области применения благодаря возможности диагностирования заболевания на его ранней стадии, а также повышении эффективности диагностики за счет следующих факторов:

- дополнительное исследование образцов костного мозга позволяет повысить информативность и достоверность способа;

- проведение иммуногистохимического и иммуноцитохимического исследований позволяет определить количество и локализацию клеток, синтезирующих белок Mdm2;

- выявление антиапоптотического белка, а именно Mdm2, позволяет установить диагностический показатель, специфичный для ревматоидного артрита на ранних стадиях.

Поставленная задача решается тем, что в способе диагностики ранней стадии ревматоидного артрита, включающем исследование элементов сустава, анализ результатов исследования и диагностику ревматического заболевания по результатам исследования, производят забор у пациента одновременно образцов костного мозга и синовиальной оболочки, из которых готовят препараты для иммуногистохимического и иммуноцитохимического исследований, после чего определяют долю клеток, синтезирующих белок Mdm2, по формуле:

А И M d m 2 = N M d m 2 100 N о б щ ,

где АИMdm2 - доля клеток, синтезирующих белок Mdm2, %;

NMdm2 - количество клеток, синтезирующих белок Mdm2;

Noбщ - общее число клеток в поле зрения;

причем в случае, когда в образцах синовиальной оболочки АИMdm2=81,6-88,8%, а в образцах костного мозга АИMdm2=85,0-89,2%, у пациента диагностируют раннюю стадию ревматоидного артрита.

На фиг.1 изображены клетки костного мозга пациента с ранней стадией ревматоидного артрита, синтезирующие белок Mdm2.

Мазок костного мозга окрашен иммуногистохимическим методом антителами к белку Mdm2 (зеленая иммунофлуоресценция) (показано стрелкой). Масштабная линейка соответствует 20 мкм.

Морфологически РА характеризуется гиперплазией синовиальной ткани и ее инвазией в хрящ и кость с последующей их деструкцией [4, 5]. Данные изменения являются следствием дисбаланса между размножением внутреннего слоя синовиальной оболочки путем деления, в частности, синовиальных макрофагов и фибробластов с одной стороны и программированной клеточной смертью (апоптозом) этих клеток с другой стороны [5]. Ключевым моментом в блокировании клеточного цикла и стимуляции апоптоза в клетках является синтез Р53-белка, отвечающего за синтез другого клеточного белка, а именно Р21. Белок Р21 тормозит G1-фазу клеточного цикла, а также влияет на синтез белка Mdm 2, отвечающего за блокирование апоптоза и белка PUMA, отвечающего за запуск апоптоза с участием митохондрий. [6]. Опухолеподобный рост синовиоцитов играет существенную роль в прогрессировании РА, а неадекватный апоптоз синовиальных фибробластов вносит весомый вклад в данные процессы. Таким образом, анти- и проапоптотические белки могут выступать диагностическими маркерами РА на разных стадиях.

При углубленном изучении роли апоптоза в патогенезе РА и зависимости активности программированной клеточной смерти от стадии РА рядом исследователей были получены следующие результаты. Оказалось, что распространенность апоптоза коррелирует с длительностью и выраженностью воспалительной инфильтрации синовиальной оболочки. На ранних стадиях РА зарегистрирована низкая интенсивность апоптоза. На поздней стадии выявлена значительная активизация апоптоза [1]. Соответственно определение антиапоптотического белка, а именно Mdm2, является достоверным способом диагностики РА на ранней стадии.

Способ осуществляют следующим образом.

На первоначальном этапе у пациента с РА производят забор биологического материала. Забор образцов костного мозга (КМ) проводят путем проведения стернальной пункции под местной анестезией; параллельно, в момент проведения артроскопии, производят забор образцов синовиальной оболочки (СО).

На втором этапе готовят препараты для дальнейших исследований.

Для этого подготавливают мазки костного мозга и подсушивают их при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем мазки костного мозга фиксируют в 4% параформе в течение 5 минут, после чего высушивают.

Также готовят замороженные срезы из образцов синовиальной оболочки. Предварительно образцы синовиальной оболочки фиксируют в 4% растворе параформа в течение 1 часа, а затем промывают в растворе фосфатно-солевого буфера. Далее фиксированный образец синовиальной оболочки помещают в 15% раствор сахарозы на фосфатно-солевом буфере на 24 часа, а затем помещают в среду Neg 50 (Thermo Scientific, USA) и замораживают на замораживающем столике. Из замороженных образцов синовиальной оболочки готовят срезы толщиной 10-15 мкм на криостате (Thermo Scientific, USA).

Затем кипятят мазки костного мозга и замороженные срезы синовиальной оболочки в цитратном буфере (рН 6,0) в течение 20 минут. Затем остывшие мазки костного мозга и срезы синовиальной оболочки трехкратно промывают в дистиллированной воде в течение 5 минут.

На третьем этапе проводят исследования.

Иммуногистохимическое исследование проводят путем окрашивания фиксированных мазков костного мозга и замороженных срезов синовиальной оболочки, которые предварительно отмывают в фосфатно-солевом буфере первичными антителами в разведении PUMA - 1:100, Р53 - 1:100, Mdm2 - 1:30, P21 - 1:30. После чего промывают трехкратно мазки костного мозга и замороженные срезы синовиальной оболочки, окрашенные первичными антителами PUMA, Р53, Mdm2 и P21 фосфатно-солевым буфером. Затем мазки, окрашенные первичными антителами обрабатывали вторичными антителами (анти-кроличьи или анти-мышиные в зависимости от первичных) меченные Alexa (488, 546, 594). Затем мазки, окрашенные первичными антителами, обрабатывают вторичными антителами (антикроличьи или антимышиные в зависимости от первичных) меченными Alexa (488, 546, 594).

Для проведения иммуногистохимического исследования мазков костного мозга и замороженных срезов синовиальной оболочки применялся биологический микроскоп биологический «Axio Imager Z2» (Carl Zeiss, Германия, 2009), который снабжен системой DIC, галогеновым осветителем 100 Вт, флуоресцентным осветителем с НХР лампой, а также высокочувствительными цифровыми камерами Axio Cam MRM и Axio Cam HRC. Объективы А-Plan: 10х/0.25, 40х/0.65, 100х/1.25 Oil, окуляры E-PL 10х/20.

Также проводят иммуноцитохимическое исследование мазков костного мозга и замороженных срезов синовиальной оболочки с применением трансмиссионного электронного микроскопа Libra 120 (Carl Zeiss, Германия, 2005) со следующими характеристиками: трансмиссионная электронная микроскопия, разгонное напряжение 120 кВ, макс. увеличение 630000, разрешение 3.2 А.

На заключительном этапе проводят анализ полученных результатов.

В процессе количественного анализа определяют долю клеток, синтезирующих белки, по формулам:

А И P 53 = N P 53 100 N о б щ ,

А И P 21 = N P 21 100 N о б щ ,

А И P U M A = N P U M A 100 N о б щ ,

А И M d m 2 = N M d m 2 100 N о б щ ,

где АИP53, АИP21, АИPUMA, АИMdm2 - доля клеток, синтезирующих соответственно белок Р53, Р21, PUMA и Mdm2, %;

NP53, NP21, NPUMA, NMdm2 - количество клеток, синтезирующих соответственно белок Р53, Р21, PUMA и Mdm2;

Nобщ - общее число клеток в поле зрения.

При этом количество клеток, синтезирующих изучаемые белки (NP53, NP21, NPUMA, NMdm2), определяют по свечению (флюоресценции) зеленым цветом. Полученные в результате исследований данные обрабатывают методом вариационной статистики с определением t-критерия достоверности по Стьюденту (Р<0,05).

В случае, когда в образцах синовиальной оболочки АИMdm2=81,6-88,8%, а в образцах костного мозга АИMdm2=85,0-89,2%, у пациента диагностируют раннюю стадию ревматоидного артрита.

Во Владивостокском государственном медицинском университете в течение трех лет проводились специальные научные исследования для разработки заявляемого способа.

Для исследований было сформировано 2 группы пациентов.

В контрольную группу вошло 20 женщин с диагностированным остеоартрозом (ОА), средний возраст которых составил 55,75 (38-70 лет). У 25% (5 человек) обследуемых стадия ОА соответствовала ранней стадии, у 75% (15 человек) поздней стадии ОА.

Авторами заявляемого способа обследовано 30 женщин, средний возраст которых составил 60,52 года (35-76 лет) с достоверным диагнозом РА (согласно диагностическим критериям ACR/EULAR 2010). У 35% обследуемых больных стадия РА соответствовала очень ранней и ранней стадиям, у 22% - развернутой и у 43% - поздней стадии РА.

У всех обследованных больных, независимо от стадии РА и степени активности заболевания, было выявлено присутствие в клетках изучаемых образцов ткани синовиальной оболочки ставов и мазков красного костного мозга белков Р53, Р21, PUMA и Mdm2 (таблица 1).

Таблица 1
Экспрессия малых молекул (Р53, Р21, PUMA и Mdm2) у больных РА по результатам иммуногистохимического исследования
Апоптотические белки Исследуемый биоматериал (костный мозг - КМ, синовиальная оболочка - СО)
КМ СО KM CO
Ранняя стадия РА (n=30) Поздняя стадия РА (n=30)
Р53 11,5%±1,40 12,1%±2,80 90,9%±1,6* 90,4%±3,4*
Р21 9,6%±1,8 5,4%±1,9 15,8%±1,6 16,1%±2,7
PUMA 2,1%±1,10 5,4%±2,30 98,6%±1,5* 99,1%±3,1*
Mdm2 87,1%±2,1* 85,2%±3,6* 15,4%±2,40 13,6%±2,80
Примечание:
* - достоверность различия с группой контроля (р<0,05);
◇ - достоверность различия между группами раннего и позднего РА (р<0,05)

На ранней стадии РА определялось максимальное количество белка Mdm2 (достоверное различие с группой контроля), которое снижалось на поздней стадии РА (достоверное различие с группой раннего РА). В то же время число клеток, содержащих молекулы белков Р53 и PUMA, было низким на ранней стадии РА (не отличалось от контроля) и резко увеличивалось к поздней стадии РА, достоверно отличаясь от группы контроля и от группы раннего РА. Наличие в клетках изучаемых белков у пациентов из группы контроля не превышало 10%, что соответствует литературным данным [7].

В настоящее время феномен апоптоза рассматривается как одно из ведущих звеньев патогенеза аутоиммунных заболеваний, в частности РА. Проанализировав результаты данного исследования, можно утверждать, что количество клеток, экспрессирующих молекулу Mdm2 в клетках костного мозга и синовиальной оболочки (синовиоциты), превышает нормальные значения, а именно более 10% от общего количества клеток в препарате на ранней стадии РА.

Пример 1. Пациентка Н., 45 лет. Обратилась к ревматологу по поводу болей и припухания в суставах кистей, утренней скованности до двух часов. Вышеуказанные жалобы беспокоят пациентку около 6 месяцев. При объективном осмотре выявлено: болезненность 6 суставов, припухлость 4 суставов. При обследовании:

- клинический анализ крови: эритроциты 4,5·1012, гемоглобин 130 г/л, лейкоциты 8,7·109, тромбоциты 380·109, СОЭ 40 мм/час;

- ревматоидный фактор иммуноглобулин М=204,9 (RU/ml);

- антитела к ЦЦП=50,9 (RU/ml);

- рентгенография кистей и стоп: признаки околосуставного остеопороза.

По результатам клинико-лабораторных данных пациентке был выставлен предварительный диагноз: ревматоидный артрит, ранняя стадия, высокой степени активности, неэрозивный вариант, R I ст., серопозитивный по и РФ Ig М и антителам к ЦЦП, ФК-3 ст.

У пациентки был произведен забор костного мозга с целью проведения иммуногистохимического и иммуноцитохимического исследования и последующим определением количества клеток, синтезирующих белок Mdm2.

В результате проведенного анализа мазков костного мозга было обнаружено 87,4% клеток, синтезирующих белок Mdm2, от общего количества клеток в изучаемых мазках. Полученный результат позволяет выставить окончательный диагноз - ревматоидный артрит на ранней стадии заболевания и, соответственно, назначить адекватную базисную терапию для лечения и замедления прогрессирования ревматоидного артрита.

Пример 2. Пациентка П., 36 лет. Обратилась к ревматологу по поводу болей и припухания в коленных суставах, утренней скованности до одного часа. Вышеуказанные жалобы беспокоят пациентку около 4 месяцев. При объективном осмотре выявлено: болезненность и припухание обоих коленных суставов. При обследовании:

- клинический анализ крови: эритроциты 3,6·1012, гемоглобин 110 г/л, лейкоциты 10,4·109, тромбоциты 280,3·109, СОЭ 45 мм/час;

- ревматоидный фактор иммуноглобулин М=520,4 (RU/ml);

- антитела к ЦЦП=100,6 (RU/ml);

- рентгенография кистей и стоп: признаки околосуставного остеопороза;

- рентгенография коленных суставов: признаки синовита коленных суставов.

По результатам клинико-лабораторных данных пациентке был выставлен предварительный диагноз: ревматоидный артрит, ранняя стадия, высокой степени активности, неэрозивный вариант, R I ст., серопозитивный по и РФ Ig М и антителам к ЦЦП, ФК-3 ст.

У пациентки был произведен забор костного мозга и синовиальной оболочки при проведении артроскопии с целью проведения иммуногистохимического и иммуноцитохимического исследования и последующим определением количества клеток, синтезирующих белок Mdm2.

В результате проведенного анализа было обнаружено 87,4% клеток костного мозга и 82,9% клеток синовиальной оболочки, синтезирующих белок Mdm2, от общего количества клеток в изучаемых мазках. Полученный результат позволяет выставить окончательный диагноз - ревматоидный артрит на ранней стадии заболевания и, соответственно, назначить адекватную базисную терапию для лечения и замедления прогрессирования ревматоидного артрита.

Пример 3. Пациентка В., 54 года. Обратилась к ревматологу по поводу болей и припухания в суставах кистей, утренней скованности до четырех часов, слабости и повышения температуры тела до 37,8°С. Вышеуказанные жалобы беспокоят пациентку около 7 месяцев. При объективном осмотре выявлено: болезненность 10 суставов, припухлость 6 суставов. При обследовании:

- клинический анализ крови: эритроциты 3,8·1012, гемоглобин 98 г/л, лейкоциты 10,6·109, тромбоциты 306·109, СОЭ 35 мм/час;

- ревматоидный фактор иммуноглобулин М=102,5 (RU/ml);

- антитела к ЦЦП=3 0,4 (RU/ml);

- рентгенография кистей и стоп: признаки эрозивного артрита.

По результатам клинико-лабораторных данных пациентке был выставлен предварительный диагноз: ревматоидный артрит, ранняя стадия, высокой степени активности, эрозивный вариант, R I ст., серопозитивный по и РФ Ig М и антителам к ЦЦП, ФК-3 ст.

У пациентки был произведен забор костного мозга с целью проведения иммуногистохимического и иммуноцитохимического исследования и последующим определением количества клеток, синтезирующих белок Mdm2.

В результате проведенного анализа мазков костного мозга было обнаружено 88,9% клеток, синтезирующих белок Mdm2, от общего количества клеток в изучаемых мазках. Полученный результат позволяет выставить окончательный диагноз - ревматоидный артрит на ранней стадии заболевания и, соответственно, назначить адекватную базисную терапию для лечения и замедления прогрессирования ревматоидного артрита.

Таким образом, заявляемое изобретение отличается широкой областью применения и повышенной эффективностью диагностики.

Список литературы

1. Дубиков А.И. Ревматоидный артрит, апоптоз, оксид азота: новые аспекты патогенеза: Монография. - Владивосток: - Изд-во Дальневост. Ун-та, 2004.

2. Чичасова Н.В., Владимиров С.А., Иголкина Е.В., Имаметдинова Г.Р. Бремя ревматоидного артрита: медицинские и социальные проблемы. Научно-практическая ревматология 2009; 1: 105-108.

3. Ревматология: национальное руководство / под ред. Е.Л. Насонова, В.А. Насоновой. - М.: ГОЭТАР-Медиа, 2008. - 720 с.

4. You X., Boyle D.L., Hammaker D., Firestein G.S. PUMA-mediated apoptosis in fibroblast-like synoviocytes does not require p53. Arthritis Research & Therapy 2006: Vol.8 No 6: 1-7.

5. Cha H.S., Bae Е.К., Ahn J.K., Lee J., Ahn K.S., Koh Е.М. Slug suppression induces apoptosis via Puma transactivation in rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes treated with hydrogen peroxide. Experimental and molecular medicine 2010; Vol.42, No. 6: 428-436.

6. Castedo М., Perfettini J. Z., Roumier Т., Andreau K., Medema R., Kroemer G. Cell death by mitotic catastrophe: a molecular definition. Oncogene 2004: 23: 2825-2837.

7. Tu Y., Xue H., Xia Z., Cai М., Liu X., Ma Т., Zhang C. Effect of different concentrations of dexamethasone on apoptosis and expression of Fas/FasL in human osteoarthritis chondrocytes. Zhongguo Xiu Fu Chong Jian Wai Ke ZaZhi. 2012 May; 26 (5): 536-41.

Способ диагностики ранней стадии ревматоидного артрита, включающий исследование элементов сустава, анализ результатов исследования и диагностику ревматического заболевания по результатам исследования, отличающийся тем, что производят забор у пациента одновременно образцов костного мозга и синовиальной оболочки, из которых готовят препараты для иммуногистохимического и иммуноцитохимического исследований, после чего определяют долю клеток, синтезирующих белок Mdm2, по формуле:
,
где АИMdm2 - доля клеток, синтезирующих белок Mdm2, %;
NMdm2 - количество клеток, синтезирующих белок Mdm2;
Noбщ - общее число клеток в поле зрения;
причем в случае, когда в образцах синовиальной оболочки АИMdm2=81,6-88,8%, а в образцах костного мозга АИMdm2=85,0-89,2%, у пациента диагностируют раннюю стадию ревматоидного артрита.



 

Похожие патенты:
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. Описан химерный пестивирус, где указанный химерный пестивирус включает вирус диареи крупного рогатого скота, который не экспрессирует его гомологичный Erns белок.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен L-фукоза α1→6-специфичный лектин, экстрагируемый из базидиального гриба или сумчатого гриба, характеризующийся пиковым значением молекулярной массы около 4500 m/z, определяемым при масс-спектрометрическом анализе MALDI-TOF.
Изобретение относится к медицине, в частности к области лабораторной диагностики рака молочной железы, и описывает набор реагентов для иммунногистохимической диагностики рака молочной железы, который позволяет одновременно или раздельно выявлять рецепторы эстрогена, прогестерона и HER2-рецепторы.
Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии, и может быть использовано для лечения респираторного дистресс-синдрома у новорожденных детей, находящихся на искусственной вентиляции легких (ИВЛ).

Группа изобретений относится к области медицины и может быть использована для получения костного мозга (КМ) от доноров-трупов. Для этого пунктируют крылья подвздошных костей в передней и задней трети крыльев, устанавливая в каждое по два троакара.

Изобретение относится к биологическим исследованиям и медицине и предназначено для идентификации неблагоприятного воздействия фенола, поступающего из среды обитания, на здоровье населения.
Изобретение относится к медицине. Более подробно изобретение относится к диагностике ревматоидного артрита.
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования наступления беременности у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием в результате лечения методом экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).

Изобретение относится к иммунологии, аналитической биохимии и диагностике и представляет собой тест-полоску для высокочувствительного иммунохроматографического анализа.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено однодоменное мини-антитело, специфически связывающее белок-рецептор эпидермального фактора роста HER2/ERBB2/neu человека, полученное при иммунизации двугорбого верблюда (Camelus bactrianus) препаратом опухолевых клеток SKBR3, и охарактеризованное аминокислотной последовательностью.

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимии, и может быть использовано для оценки чувствительности сосудистого эндотелия к напряжению сдвига. Способ заключается в следующем: до и после окклюзионной пробы определяют уровень нитритов и эндотелина в крови. Чувствительность сосудистого эндотелия к напряжению сдвига определяют по величине коэффициента index(e), который вычисляют по формуле. При величине коэффициента index(e) меньше или равной 0,5 чувствительность сосудистого эндотелия к напряжению сдвига оценивают сниженной, а при величине index(e) больше 0,5 - нормальной. Способ позволяет определить реальное соотношение продуцируемых сосудистым эндотелием вазоактивных факторов (нитритов и эндотелина) при изменении напряжения сдвига, что дает возможность оценить эффективность лечения больных сосудистой патологией непосредственно в процессе лечения. 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к способам оценки влияния неблагоприятных химических факторов антропогенного происхождения на изменение поствакцинального иммунитета у детей к дифтерии. Изобретение включает следующие стадии: на территории проживания определяют перечень химических веществ-загрязнителей среды обитания, для которых иммунная система является мишенью, далее для установленных веществ-загрязнителей осуществляют оценку риска развития нарушений со стороны иммунной системы по критерию индекса опасности HI более 1,0 и проводят отбор проживающих в указанных условиях детей, которым была выполнена плановая вакцинация и/или ревакцинация вакциной АКДС - адсорбированной коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакциной, и у которых отсутствуют заболевания иммунной системы. Затем у указанных детей выполняют отбор пробы крови, в пробе устанавливают количество выбранных химических веществ-загрязнителей среды обитания и выделяют лиц, у которых это количество превышает фоновый региональный уровень не менее чем на 20%, и в сыворотке крови выбранных лиц методом иммуноферментного анализа со специфическими тест-системами определяют количество поствакцинальных антител класса иммуноглобулина G IgG к дифтерийному анатоксину. Из них выделяют лиц, у которых это количество ниже протективного уровня, устанавливают для этих лиц корреляционную связь снижения количества указанных антител от содержания в крови выбранных химических веществ и при одновременном установлении достоверных зависимостей: повышенное содержание в крови ребенка свинца более 0,04 мг/дм3 и o-крезола более 0 мг/дм3 и пониженное по сравнению с протективным уровнем количество поствакциональных антител класса IgG к дифтерийному анатоксину, диагностируют снижение поствакцинального иммунитета ребенка к дифтерии. Применение изобретения позволяет обеспечить достоверную диагностику нарушения поствакционального иммунитета у детей, подверженных воздействию химических токсикантов среды обитания. 2 ил., 4 табл.

Изобретение относится к способу ранней детекции мышечных дегенеративных заболеваний и к способу прогнозирования и/или определения терапевтической эффективности терапевтического средства и/или способа терапии заболеваний посредством измерения тетранор-PGDM (11,15-диоксо-9α-гидрокси-2,3,4,5-тетранорпростан-1,20-диовой кислоты) в образце мочи субъекта и сравнения его содержания относительно образца, выделенного у здорового индивидуума. Мышечное дегенеративное заболевание у пациента обнаружено, если концентрация или содержание тетранор-PGDM в образце, выделенном у пациента, превышает концентрацию или содержание тетранор-PGDM в образце, выделенном у здорового индивидуума. Определяют эффективность терапевтического средства и/или способа терапии мышечного дегенеративного заболевания путем сравнения содержания тетранор-PGDM в образце, выделенном у пациента с мышечным дегенеративным заболеванием до и после введения терапевтического средства. Если измеренное содержание тетранор-PGDM в образце значительно или незначительно уменьшается после введения терапевтического средства, то способ терапии является эффективным. Изобретение также относится к набору для диагностики мышечных дегенеративных заболеваний, который включает антитело к тетранор-PGDM, меченный тетранор-PGDM и, необязательно, по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из антитела к иммуноглобулину, разбавляющего раствора для образца, разбавляющего раствора для антитела и меченного тетранор-PGDM, стандарта тетранор-PGDM известной концентрации, субстрата для иммуноферментного анализа и останавливающего раствора для иммуноферментного анализа. Изобретение является эффективным и простым в исполнении. 4 н. и 3 з.п. ф-лы, 1 табл., 1 пр., 2 ил.

Изобретение относится к медицине, в частности к области медицинской диагностики, и описывает способ диагностики туберкулеза путем проведения иммуноцитогистохимического исследования и выявления экспрессии антигена микобактерии туберкулеза. Способ характеризуется тем, что исследование биологического материала, нанесенного на предметное стекло, проводится с помощью модифицированного иммуноцитогистохимического метода и включает следующие стадии: получение биологического материала: мазков/соскобов, клеточных осадков биологических жидкостей, фиксацию их в ацетоне; обработку 1% раствором бихромата калия; обработку 3% раствором перекиси водорода; нанесение моноклональных антител к РАВ-антигену микобактерии туберкулеза в разведении 1:20; инкубацию при температуре 3-5 градусов Цельсия в течение 12 часов; нанесение системы детекции EnVision и инкубацию при комнатной температуре; нанесение диаминобензидина; докрашивание гематоксилином; заключение в бальзам или другую среду, микроскопирование, диагностирование заболевания при выявлении антигена микобактерии туберкулез. Способ обеспечивает повышение точности выявления антигена микобактерии туберкулеза, уменьшение стоимости диагностики и возможность его применения в практическом здравоохранении. 2 ил.
Изобретение относится к области медицины, а именно к травматологии и ортопедии, и описывает способ прогнозирования послеоперационной регенерации у пациентов с ложными суставами длинных трубчатых костей, включающий исследования венозной крови пациента, анализ результатов ее исследования с выдачей прогноза послеоперационной регенерации по выбранным показателям, в плазме крови пациента определяют уровень содержания диеновых конъюгатов (ДК) и двойных связей (ДС) в липидах плазмы крови, количество липидов в плазме крови пациента, количество белка «острой фазы» - церулоплазмина, а также определяют процентное содержание высоко стойких эритроцитов в крови пациента, оценивают интегральные показатели изменения состояния молекулярно-биологических процессов в системе равновесия перекисного окисления липидов (ПОЛ) плазмы крови пациента и ее антиоксидантной защиты (АОЗ), при этом критерием возникновения дисбаланса в системе «ПОЛ-АОЗ» плазмы крови пациента выбирают в качестве интегрального показателя произведение содержания диеновых конъюгатов (ДК) и двойных связей (ДС) в липидах плазмы крови пациента, затем в случае, если измеренный показатель содержания двойных связей (ДС) составляет (29,6-37)10-7 М/мг липидов, измеренный показатель содержания диеновых конъюгатов (ДК) составляет (2,34-2,76)10-1 условных единиц, вычисленный по результатам измерений интегральный показатель в виде произведения ДС×ДК составляет (69,3-102,1)10-8 условных единиц, количество липидов в плазме крови пациента составляет 6,2-8,6 мг/мл, количество белка «острой фазы» - церулоплазмина в плазме крови пациента составляет 29,6-36,8 условных единиц, а процентное содержание высоко стойких эритроцитов в популяции эритроцитов в плазме крови пациента составляет (14,3-17,3)%, то прогнозируют прохождение процессов, сопровождающихся нарушением структуры мембран эритроцитов с проявлением замедленной консолидации поврежденного элемента опорно-двигательного аппарата с образованием не осложненного воспалительными процессами ложного сустава, а в случае, если измеренный показатель содержания двойных связей (ДС) составляет (41,6-49,4)10-7 М/мг липидов, измеренный показатель содержания диеновых конъюгатов (ДК) составляет (3,16-3,54)10-1 условных единиц, вычисленный по результатам измерений интегральный показатель в виде произведения ДС×ДК составляет (131,5-174,9)10-8 условных единиц, количество липидов в плазме крови пациента составляет 2,6-5,8 мг/мл, количество белка «острой фазы» - церулоплазмина в плазме крови пациента составляет 41,6-49,4 условных единиц, а процентное содержание высоко стойких эритроцитов в популяции эритроцитов в плазме крови пациента составляет (4,6-6,0)%, то прогнозируют прохождение процесса нарушения структуры мембран эритроцитов с проявлением замедленной консолидации поврежденного элемента опорно-двигательного аппарата с образованием отягощенного нагноением осложненного ложного сустава. Способ обеспечивает значительное повышение эффективности и информативности, объективности прогнозирования у пациентов с ложными суставами длинных трубчатых костей. 1 з.п. ф-лы, 4 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования течения и исходов бактериальных гнойных менингитов (БГМ) различной этиологии у детей. Для этого определяют в цереброспинальной жидкости иммуноцитохимическим методом наличие CD31 и S100 позитивных клеток в 1-2 день заболевания. При содержании CD31 более 0,5% и наличии S100 позитивных клеток прогнозируют неблагоприятное течение БГМ. При содержании CD31 менее 0,5% и отсутствии S100 позитивных клеток прогнозируют благоприятное течение заболевания. Применение предложенного способа ликворо-цитологического прогноза течения БГМ у детей позволяет прогнозировать на ранних сроках болезни благоприятное и неблагоприятное течение заболевания, проводить мониторинг состояния сосудов микроциркуляторного русла головного мозга в ходе заболевания и корректировать терапию. 1 табл., 2 ил., 3 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования задержки внутриутробного роста плода. Для этого в венозной крови женщины на ранних сроках беременности определяют относительное содержание CD3+CD16+56+-лимфоцитов, уровня С3-компонента комплемента и растворимого рецептора фактора некроза опухоли (sTNF-R). Вычисляют прогностический индекс (PI) по формуле: PI=-0,8911X1-0,0321Х2-2,3669Х3+11,0779, где X1 - относительное содержание CD3+CD16+CD56+-лимфоцитов, %; X2 - концентрация С3-компонента комплемента, мг/дл; Х3 - концентрация sTNF-R, нг/мл. При PI<0 прогнозируют задержку внутриутробного роста плода во второй половине беременности, а при PI>0 делают заключение о низком риске развития данного патологического состояния. Предлагаемый способ является малоинвазивным, позволяет с ранних сроков гестации выявить группу риска по формированию задержки внутриутробного роста плода, что дает возможность осуществления превентивных мероприятий, направленных на профилактику данного патологического состояния. 5 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для дифференциальной морфометрической диагностики эритродермической формы грибовидного микоза и синдрома псевдолимфомы кожи. Для этого проводят гистологическое исследование биоптатов пораженной кожи путем световой микроскопии, иммунофенотипирование клеток инфильтрата, дополнительные морфометрические исследования базальных кератиноцитов в гистологических препаратах биоптатов пораженной кожи. При этом при схожей гистологической картине, описываемой при эритродермической форме грибовидного микоза и синдроме псевдолимфомы кожи как акантоз, гиперкератоз, паракератоз, отек и расширение сосудов дермы, лимфогистиоцитарные инфильтраты, расположенные в верхней трети дермы, одинаковом иммунофенотипе клеток инфильтрата при эритродермической форме грибовидного микоза и синдроме псевдолимфомы кожи, представленном CD2+, CD3+, CD4+, CD5+, CD43+, CD45RO+ лимфоцитами, проводят дополнительно морфометрические исследования всех клеток эпидермиса. Далее рассчитывают относительный объем эпидермиса и митотический индекс эпидермальных клеток. При увеличении относительного объема эпидермиса в 2,2 и более раза по сравнению с нормальной кожей и увеличении митотического индекса эпидермальных клеток в 2,7 и более раза по сравнению с нормальной кожей диагностируют эритродермическую форму грибовидного микоза, а при неизмененных по сравнению с нормальной кожей относительном объеме эпидермиса и митотическом индексе эпидермальных клеток диагностируют синдром псевдолимфомы кожи. Изобретение обеспечивает ускорение и точность дифференциальной диагностики указанных видов лимфом кожи, что позволяет выбрать тактику раннего адекватного рационального лечения пациента. 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу определения интерферон-γ-продуцирующих Т-лимфоцитов при хроническом лимфолейкозе. Сущность способа состоит в том, что осуществляют ингибирование внутриклеточного транспорта - брефелдином А в клеточной культуре, далее подвергают немедленной обработке флуоресцеинизотиоционат-меченными анти-СD3 антителами, затем проводят стимуляцию синтеза интерферона-γ, фиксацию, пермеабилизацию, окраску фикоэритрин-меченными анти-интерферон-γ моноклональными антителами и осуществляют цитометрию, наблюдают совпадение флуоресцентной метки СD3-маркера в клеточной культуре с таковой, определяемой на основании контролируемого метода. Использование заявленного способа позволяет устранить воздействие химических агентов, активирующих синтез интерферона-γ, таких как форбол-12-миристат-13-ацетата и кальциевой соли иономицина на экспрессию молекулы CD3 на мембране лимфоцитов, что повышает точность определения интерферон-γ-продуцирующих T-лимфоцитов в организме человека. 3 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине и описывает способ детекции поврежденных влажностью влагочувствительных реагентов, где указанные реагенты приводят в контакт с образцом, содержащим воду, и далее выявляется присутствие в образце анализируемого вещества, по его реакции с указанными влагочувствительными реагентами, причем указанный способ включает: (a) измерение отражения света при длине волны, характерной для продуктов указанной реакции указанных влагочувствительных реагентов с анализируемым веществом в двух заданных временных точках после контакта указанных реагентов с указанным образцом; (b) измерение в тех же двух заданных временных точках отражения света при длине волны, характерной для эталонного инфракрасного красителя, причем указанный краситель объединен с указанными влагочувствительными реагентами и имеет характерную длину волны, отличающуюся от длины волны, измеряемой в п.(a), по меньшей мере на 120 нм; (c) расчет соотношения показателей отражения, измеренных при длинах волн согласно пп.(a) и (b), и заключение о том, что реагенты имеют сниженную, чем ожидалось, активность и повреждены влажностью, на основании различия в указанном соотношении для указанных двух заданных временных точек. Способ обеспечивает более точное идентифицирование качества индикаторных полосок. 2 н. и 20 з.п. ф-лы, 3 табл., 1 ил.
Наверх