Способ диагностики снижения поствакцинального иммунитета к дифтерии у детей, проживающих в условиях воздействия вредных химических факторов среды обитания



Способ диагностики снижения поствакцинального иммунитета к дифтерии у детей, проживающих в условиях воздействия вредных химических факторов среды обитания
Способ диагностики снижения поствакцинального иммунитета к дифтерии у детей, проживающих в условиях воздействия вредных химических факторов среды обитания

 


Владельцы патента RU 2524636:

Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения") (RU)

Изобретение относится к области медицины, в частности к способам оценки влияния неблагоприятных химических факторов антропогенного происхождения на изменение поствакцинального иммунитета у детей к дифтерии. Изобретение включает следующие стадии: на территории проживания определяют перечень химических веществ-загрязнителей среды обитания, для которых иммунная система является мишенью, далее для установленных веществ-загрязнителей осуществляют оценку риска развития нарушений со стороны иммунной системы по критерию индекса опасности HI более 1,0 и проводят отбор проживающих в указанных условиях детей, которым была выполнена плановая вакцинация и/или ревакцинация вакциной АКДС - адсорбированной коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакциной, и у которых отсутствуют заболевания иммунной системы. Затем у указанных детей выполняют отбор пробы крови, в пробе устанавливают количество выбранных химических веществ-загрязнителей среды обитания и выделяют лиц, у которых это количество превышает фоновый региональный уровень не менее чем на 20%, и в сыворотке крови выбранных лиц методом иммуноферментного анализа со специфическими тест-системами определяют количество поствакцинальных антител класса иммуноглобулина G IgG к дифтерийному анатоксину. Из них выделяют лиц, у которых это количество ниже протективного уровня, устанавливают для этих лиц корреляционную связь снижения количества указанных антител от содержания в крови выбранных химических веществ и при одновременном установлении достоверных зависимостей: повышенное содержание в крови ребенка свинца более 0,04 мг/дм3 и o-крезола более 0 мг/дм3 и пониженное по сравнению с протективным уровнем количество поствакциональных антител класса IgG к дифтерийному анатоксину, диагностируют снижение поствакцинального иммунитета ребенка к дифтерии. Применение изобретения позволяет обеспечить достоверную диагностику нарушения поствакционального иммунитета у детей, подверженных воздействию химических токсикантов среды обитания. 2 ил., 4 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к способам оценки влияния неблагоприятных химических факторов антропогенного происхождения на изменение поствакцинального иммунитета у детей к дифтерии. Метод может быть использован для проведения эпидемиологических исследований, расследований, экспертиз и направлен на объективную оценку иммунологической эффективности вакцинопрофилактики и выявление контингента детей, проживающих в условиях воздействия вредных химических факторов среды обитания, в отношении которых необходимо осуществление дополнительных мероприятий, направленных на повышение эффективности вакцинации вакциной АКДС - адсорбированной (цельноклеточной) коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакциной.

Для понимания существа вопроса ниже приведены следующие пояснения.

В 2011 г. вакцинопрофилактика дифтерии была осуществлена у 98,1% детей РФ. Ретроспективный анализ эпидемии дифтерии (1993-1996 гг.) показал, что среди заболевших высокий удельный вес составляли привитые лица (74-81%), что свидетельствует о недостаточном уровне поствакцинального иммунитета у отдельных категорий населения. Установлено, что антропогенное загрязнения среды обитания является одним из ведущих факторов риска формирования у 35-51,9% детей низкого уровня специфических поствакцинальных антител. На территориях антропогенного загрязнения среды обитания число детей с максимальным содержанием поствакцинальных антител в 7-8 раз ниже аналогичного показателя у лиц, проживающих в условиях относительного санитарно-гигиенического благополучия. По данным литературы у детей 10-14 лет, проживающих на территориях антропогенного загрязнения, установлено отсутствие защитных уровней антител к дифтерии в 20-25% случаев, несмотря на проведение плановой вакцинации.

Следует отметить, что в настоящее время отсутствуют методические подходы к оценке нарушений поствакцинального иммунитета у детей, проживающих в условиях антропогенного загрязнения среды обитания, не разработан алгоритм формирования доказательной базы роли химических токсикантов в развитии этих нарушений, наличие которой позволит разработать комплекс дополнительных мероприятий, направленных на повышение эффективности вакцинопрофилактики дифтерии у детей.

Из Методических указаний "МУ 3.1.2943-11. 3.1. Профилактика инфекционных болезней. Организация и проведение серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета к инфекциям, управляемым средствами специфической профилактики (дифтерия, столбняк, коклюш, корь, краснуха, эпидемический паротит, полиомиелит, гепатит В)" (утв. Роспотребнадзором 15.07.2011) известен способ определения количества антител к дифтерии методом РПГА (реакция непрямой гемагглютинации). Однако указанный известный метод дает определение не поствакцинальных антител, а всех антител к возбудителю дифтерии. Его результаты зачастую являются недостоверными и не выявляют детей с нарушениями именно поствакцинального иммунитета, т.к. защиту ребенка при встрече с возбудителем дифтерии обеспечивают не все антитела, а именно поствакцинальные. Кроме того, этот известный способ не учитывает влияния химических веществ-загрязнителей на количество антител к дифтерии, что также снижает достоверность выводов.

Также известен способ определения напряженности клеточного поствакцинального иммунитета in vitro (заявка на патент РФ №2008136596), согласно которому проводят инкубацию периферической крови пациента с физиологическим раствором в качестве контрольной пробы и водным раствором исследуемой вакцины в качестве опытной пробы, последующую обработку опытной и контрольной проб гемолизирующей смесью и определение в каждой пробе СрИФ с помощью лазерного проточного цитофлюориметра, при этом в тест-системе in vitro используют широкий спектр вакцин (АКДС, АДСМ, коревую, паротитную, полиомиелитную, гепатитную, против краснухи и др.), определяют коэффициент напряженности (КН) по формуле:

и если значение KH находится в пределах менее 20%, делают заключение об отсутствии защитного поствакцинального иммунитета, в пределах от 20 до 40% делают заключение о гипоэргической, в пределах от 40 до 60% - нормэргической, превышает 60% - гиперэргической напряженности клеточного поствакцинального иммунитета.

Однако указанный известный способ имеет следующие недостатки:

- не является селективным именно в отношении дифтерии;

- не принимает во внимание антропогенные характеристики среды обитания ребенка, что приводит к снижению точности.

Также известен способ определения показания к проведению профилактической прививки против дифтерии (патент РФ №2414713), согласно которому в сыворотке венозной крови обследуемого и контрольном образце сыворотки венозной крови определяют уровни специфических IgG к дифтерийному анатоксину, соответственно и . В слюне обследуемого и контрольном образце слюны определяют уровни специфических секреторных IgA к дифтерийному диализатному антигену, соответственно и . Полученные значения и сравнивают между собой, полученные значения и также сравнивают между собой. При выполнении условий и проведение профилактической прививки против дифтерии считают показанной. Указанный известный способ позволяет более достоверно определять показания к проведению профилактической прививки против дифтерии. Однако этот способ также является недостаточно точным, т.к. не учитывает наличия химических веществ-загрязнителей среды обитания ребенка, которые оказывают существенное влияние на поствакцинальный иммунитет.

Известен способ определения сроков ревакцинации обследуемого против дифтерии (патент РФ №2463605). Сущность способа: предварительно определяют методом иммуноферментного анализа уровень защищенности от дифтерии и индекс авидности. Затем строят график изменения индекса авидности (%) во времени (мес), основанный на зависимости: IND_AVID=(14,5108)*T*exp(-(0,094)*(T+1)0,934)), где IND_AVID - индекс авидности, T - время в месяцах. На графике определяют время, когда индекс авидности снизится до критической отметки (10%). По разнице между определенным в этой точке временем и временем прошлой вакцинации определяют срок, через который следует пройти очередную ревакцинацию. Использование способа предполагает индивидуальный подход к обследуемым лицам и повышенное внимание к представителям из группы риска.

Недостатком этого способа также является недостаточная достоверность в определении нарушения поствакцинального иммунитета в условиях проживания обследуемых детей на неблагополучной в экологическом плане территории.

Технический результат, достигаемый предлагаемым способом, заключается в обеспечении диагностики нарушения поствакционального иммунитета у детей, подверженных воздействию химических токсикантов среды обитания.

Поставленный технический результат достигается предлагаемым способом диагностики снижения поствакцинального иммунитета к дифтерии у детей, проживающих в условиях воздействия вредных химических факторов среды обитания, согласно которому на территории проживания определяют перечень химических веществ-загрязнителей среды обитания, для которых иммунная система является мишенью, для установленных веществ-загрязнителей осуществляют оценку риска развития нарушений со стороны иммунной системы по критерию индекса опасности HI более 1,0, проводят отбор проживающих в указанных условиях детей, которым была выполнена плановая вакцинация и/или ревакцинация вакциной АКДС - адсорбированной коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакциной и у которых отсутствуют заболевания иммунной системы, у указанных детей выполняют отбор пробы крови, в пробе устанавливают количество выбранных химических веществ-загрязнителей среды обитания и выделяют лиц, у которых это количество превышает референтный или фоновый уровень не менее чем на 20%, в сыворотке крови выбранных лиц методом иммуноферментного анализа со специфическими тест-системами определяют количество поствакцинальных антител класса иммуноглобулина G IgG к дифтерийному анатоксину, выделяют лиц, у которых это количество ниже протективного уровня, устанавливают для этих лиц корреляционную связь снижения количества указанных антител от содержания в крови выбранных химических веществ-загрязнителей среды обитания, и при одновременном установлении достоверных зависимостей: повышенное содержание в крови ребенка свинца более 0,04 мг/дм3 и о-крезола более 0 мг/дм3 и пониженное по сравнению с протективным уровнем количество поствакциональных антител класса IgG к дифтерийному анатоксину, диагностируют снижение поствакцинального иммунитета ребенка к дифтерии.

Указанный технический результат обеспечивается за счет следующего.

Благодаря тому, что на территории проживания определяют перечень конкретных химических веществ-загрязнителей среды обитания, для которых иммунная система является мишенью, обеспечивается практически полный учет приоритетных химических факторов риска для формирования поствакцинального иммунитета к дифтерии ребенка, что позволяет учесть их негативное влияние и повысить достоверность определения. При этом из источника информации «Воздействие на организм человека опасных и вредных экологических факторов. Метрологические аспекты», (в 2-х томах) под редакцией Исаева Л.К. - М. - 1997. - Т.I. - 509 с. известно, что, например, такие вещества, как свинец, хром, марганец и ароматические углеводороды, негативно влияют на иммунную систему человека.

Благодаря тому, что для установленных веществ-загрязнителей осуществляют оценку риска развития нарушений со стороны иммунной системы по критерию индекса опасности HI более 1,0 («Руководство по оценке риска для здоровья населения при воздействии химических веществ, загрязняющих окружающую среду» Р 2.1.10.1920-04), обеспечивается определение селитебных территорий, на которых у детского населения развитие нарушений формирования поствакцинального иммунитета к дифтерии является наиболее вероятным.

Отбор вакцинированных детей, проживающих в указанных условиях, у которых отсутствуют заболевания иммунной системы, обусловлен тем, что важным фактором является выявление таких детей с низким поствакцинальным иммунитетом к дифтерии еще на ранней стадии без клинических проявлений, чтобы в дальнейшем была возможность провести профилактические мероприятия для этих детей с целью исключения их заболевания дифтерией.

Благодаря использованию в качестве исследуемого материала пробы венозной крови, обеспечиваются простота и надежность исследований, а также получение нужной информативности. Установление содержания химического контаминанта (вещества-загрязнителя) именно в крови обусловлено тем, что кровь является самой гомеостатичной средой (управляемость и регулируемость концентраций составляющих ее компонентов) и единственной, имеющей реферируемые константы в отношении техногенных химических веществ.

При дальнейшем отборе детей для проведения исследований использовали такой критерий, как: в пробе крови количество выбранных химических веществ-загрязнителей среды обитания, превышало референтный (для металлов) или фоновый региональный уровень (для ароматических углеводородов) не менее чем на 20%. Это обусловлено тем, что согласно источнику информации («Биомаркеры эффекта при воздействии техногенных химических факторов окружающей и производственной среды в системе санитарно-гигиенического анализа» О.В. Долгих, М.А. Землянова. Гигиенические и медико-профилактические технологии управления рисками здоровью населения в промышленно развитых регионах. Мат. Научно-практ. Конф. С международным участием (Пермь, 6-8 октября 2010 г., с.14-19), именно при таком превышении обеспечивается достоверное влияние химических токсикантов на основные показатели гомеостаза организма ребенка.

Использование для исследования метода иммуноферментного анализа (ИФА) со специфическими тест-системами, посредством которого определяют количество поствакцинальных антител класса иммуноглобулина G к дифтерийному анатоксину в сыворотке крови, обусловлено следующим. Основными преимуществами ИФА являются: высокая чувствительность и специфичность, возможность одновременного исследования большого количества проб с определением специфических антител различных классов, объективная оценка результатов с помощью спектрофотометра (автоматического ИФА-анализатора), простота постановки и возможность использования внутреннего контроля. В результате этого анализа выявляют лиц, у которых количество поствакцинальных антител к дифтерийному анатоксину ниже протективного уровня.

Благодаря тому, что при реализации предлагаемого способа устанавливают для этих лиц корреляционную связь снижения количества указанных антител от содержания в крови выбранных химических веществ-загрязнителей среды обитания, обеспечивается доказательство влияния повышенного содержания химических токсикантов на формирование поствакцинального иммунитета к дифтерии.

А достоверное прогнозирование снижения поствакцинального иммунитета ребенка к дифтерии при реализации предлагаемого способа обеспечивается в том случае, если выявлены одновременно достоверные зависимости: повышенное содержание в крови ребенка свинца более 0,04 мг/дм3 и о-крезола более 0 мг/дм3 и пониженное количество поствакциональных антител класса IgG к дифтерийному анатоксину по сравнению с протективным уровнем. Числовые значения количества свинца и о-крезола были установлены экспериментальным путем (рис.1 и рис.2). На рис.1 показана связь снижения содержания поствакцинального IgG к дифтерийному анатоксину при увеличении в крови концентрации свинца. На рис.2 показана связь снижения содержания поствакцинального IgG к дифтерийному анатоксину при увеличении в крови концентрации о-крезола. И как неожиданно оказалось, они характеризуют максимально недействующую концентрацию этих веществ на организм ребенка. При этом указанную максимально недействующую концентрацию определяли согласно методике количественной оценки неканцерогенного риска факторов среды обитания (Шур П.З., Зубарев А.Ю., Шарифов А.Т. Методические подходы к разработке критериев для количественной оценки неканцерогенного риска факторов среды обитания по результатам эпидемиологических исследований // Сборник материалов Всероссийской конференции с международным участием, посвященная 140-летию образования первой гигиенической кафедры в России «Профилактическая медицины в России: истоки и современность». - Казань: ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет Росздрава». - 2009. - Т.2. - С.105-106). И эти данные о концентрации были подтверждены и нижеприведенными исследованиями, характеризующими пример реализации предлагаемого способа.

Предлагаемый способ реализуется следующим образом.

1. Выбирают территорию экологического риска, характеризующуюся наличием вредных химических факторов, обусловленных экологической средой обитания. На выбранной территории проживания детей группы наблюдения (крупный промышленный центр с многопрофильным производством) ежегодно в атмосферный воздух от стационарных источников поступает более 900 тонн загрязняющих веществ (в том числе соединения хрома, марганца, свинца, фенола и крезолов), среди которых вещества 1-3 классов опасности составляют более 77% (759,6 т/год). Натурные исследования атмосферного воздуха в зонах экспозиции позволили идентифицировать в отобранных пробах хром, свинец, марганец в концентрациях до 1,5 ПДКс.с. и о-крезолы, фенол - до 2,3-4,0 ПДКс.с. Все эти вещества в концентрациях выше 1 ПДКс.с. способны вызывать нарушения со стороны иммунной системы согласно «Руководство по оценке риска для здоровья населения при воздействии химических веществ, загрязняющих окружающую среду» (Руководство Р 2.1.10.1920-04). - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004. - 143 с.

Одновременно выбирали территорию экологического благополучия на территории проживания детей группы сравнения (поселок городского типа), качество атмосферного воздуха в котором соответствовало гигиеническим нормативам как по данным мониторинговых наблюдений, так и по результатам натурных исследований. Факторы антропогенного происхождения в концентрациях менее 1 ПДКс.с.

2. Далее проводили оценку риска развития у детского населения нарушений со стороны иммунной системы по критерию индекса опасности (HI>1,0) (Оценка риска развития нарушений со стороны иммунной системы осуществляется по стандартизованной методике в соответствии с «Руководство по оценке риска для здоровья населения при воздействии химических веществ, загрязняющих окружающую среду». (Руководство Р 2.1.10.1920-04). - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004. - 143 с.).

В ходе исследований, проведенных на указанной выбранной территории проживания детей группы наблюдения, установлен неприемлемый риск развития иммунных нарушений (HI>1,0) при ингаляционном поступлении установленных соединений (хром, свинец, марганец, о-крезолы, фенол). Результаты эпидемиологических исследований выявили причинно-следственную связь между изучаемыми химическими факторами риска и возникновением иммунных нарушений (ОШ - отношение шансов = 2,56; ДИ - доверительный интервал = 1,05-6,26). Поэтому все установленные вещества принимаются во внимание при установлении нарушения поствакцинального иммунитета к дифтерии.

Оценка риска развития иммунных нарушений, связанных с неблагоприятным воздействием химических факторов среды обитания, выполненная на территории проживания детей группы сравнения, показала отсутствие риска (HI<1,0).

3. Проводят отбор детей, проживающих на указанной территории. В исследование были включены 276 детей (219 - группа наблюдения, 57 - группа сравнения) в возрасте 4-6 лет, у которых, в соответствии с «Национальным календарем прививок», была выполнена плановая вакцинация вакциной АКДС (базовая вакцинация в возрасте 3; 4,5 и 6 месяцев жизни и первая ревакцинация в 18 месяцев) и не имевших поствакцинальных реакций. Из исследования исключены дети с патологией, сопровождающейся развитием иммунных нарушений.

4. Далее у указанных детей были взяты пробы крови, в которых устанавливали количество выбранных вредных химических веществ среды обитания (хром, свинец, марганец, o-крезолы, фенол). Химико-аналитические исследования содержания металлов (марганец, свинец, хром) в биосубстратах (кровь) проводится методом атомно-абсорбционной спектрофотометрии на спектрофотометре PERKIN-ELMER-3110 (США) (регистрационный номер в Государственном реестре №14427-95) с атомизацией в пламени и масс-спектрометре с индуктивно-связанной плазмой ICP-MS фирмы Agilent 7500сх (США) (регистрационный номер в Государственном реестре №24863-08). Исследование содержания фенола и о-крезола в биосубстратах (кровь) проводится методом капиллярной газовой хроматографии и парафазного анализа в соответствии с методическими указаниями (МУК 4.1.763-4.1.779-99; МУК 4.1.2102-4.1.2116-06). Все исследования выполняются с использованием газового хроматографа (модели 6890, 6890N, 6850, 7890А, Рег. №15118-07, страна-производитель США), аппаратно-программного комплекса «Хроматэк-Кристалл-5000» (№ ФСР 2009/04091, ТУ 9443-004-12908609-99). Данные, полученные в ходе испытаний, приведены в таблице 1.

Таблица 1
Содержание химических веществ антропогенного происхождения в крови детей исследуемых групп, мг/дм3
Вещество Группа наблюдения Группа сравнения Референтный (p)/фоновый (ф) уровень [Тиц, 2003] p
Марганец 0,021±0,003 0,013±0,0024 1,09·10-2-6,0·10-4 (p) 0,0001
Свинец 0,131±0,013 0,109±0,009 0,1 (p) 0,006
Хром 0,0191±0,0035 0,0107±0,0020 0,007-0,028 (p) 0,03
Фенол 0,0494±0,0071 0,0087±0,0004 0,01±0,005 (ф) 0,0001
O-крезол 0,0143±0,0046 0,0033±0,0012 0(ф) 0,0001
p - достоверность различий группы наблюдения и группы сравнения.

Статистическая обработка материала проводится с использованием пакета прикладных программ «Microsoft Office Excel 2010» и Statistica 6.0. При оценке содержания в крови химических веществ и соединений рассчитываются средние величины и ошибки средних. Статистическую достоверность различий оценивают по непарному t-критерию Стьюдента. Для отклонения нулевой гипотезы (отсутствие различий) принимают уровни статистической значимости p<0,05.

Результаты исследования крови (таблица 1) детей группы наблюдения показали, что содержание марганца (0,021±0,003 мг/дм3), свинца (0,131±0,013 мг/дм3), хрома (0,0191±0,0035 мг/дм3), фенола (0,0494±0,0071 мг/дм3) и о-крезола (0,0143±0,0046 мг/дм3) достоверно (р=0,01-0,0001) в 1,4-4 раз превышало референтные/фоновые уровни. Кроме того, содержание данных химических веществ было в 1,2-4,9 раза выше аналогичных показателей детей группы сравнения (марганец - 0,013±0,0024 мг/дм3, свинец - 0,109±0,009 мг/дм3, хром - 0,0107±0,0020 мг/дм3, фенол - 0,0087±0,0004 мг/дм3, o-крезол - 0,0033±0,0012 мг/дм3; р=0,03-0,0001).

5. Для дальнейшего исследования из числа детей в группе наблюдения были выбраны дети, у которых количество вредных веществ превышало референтный (по металлам) или фоновый (по органическим соединениям) уровень не менее чем на 20%. Такой подход обусловлен установленным порогом развития нарушений реакций поддержания гомеостаза у детей при повышении концентрации химических веществ техногенного происхождения в крови относительно референтных/фоновых («Биомаркеры эффекта при воздействии техногенных химических факторов окружающей и производственной среды в системе санитарно-гигиенического анализа» О.В. Долгих, М.А. Землянова. Гигиенические и медико-профилактические технологии управления рисками здоровью населения в промышленно развитых регионах. - Мат. Научно-практ. Конф. С международным участием (Пермь, 6-8 октября 2010 г., с.14-19).

6. Далее в сыворотке крови выбранных лиц определяют количество поствакцинальных антител класса IgG к дифтерийному анатоксину. Для этого использовали метод иммуноферментного анализа на полуавтоматическом иммуноанализаторе «ELx808» с использованием тест-системы «Anti-Diphtheria Toxoid ELISA», предназначенной для количественного определения in vitro антител класса IgG к дифтерийному анатоксину (Diphtheria Toxoid) в сыворотке крови. Набор «Anti-Diphtheria Toxoid ELISA» откалиброван в Международных единицах (МЕд) с использованием международной референсной сыворотки NIBSC 91|534 (National Institute for Biological Standards Control, Hertfordshire, England).

Оценка состояния поствакцинального иммунитета к дифтерии проведена через три, четыре и пять лет после первой ревакцинации АКДС на основании исследования содержания циркулирующих специфических поствакцинальных антител. Данные, полученные в ходе испытаний, приведены в таблице 2.

Анализ среднегрупповых показателей содержания поствакцинальных антител к дифтерии показал, что их уровень в обеих исследуемых группах в анализируемые сроки после первой ревакцинации/вакцинации соответствует протективному. В группе наблюдения уровень поствакцинальных антител к токсину дифтерии составлял: min - 0,089 Мед/мл (протективный уровень - 0,1-2,0 Мед/мл, p=0,82), max - 0,365 Мед/мл (p≤0,001). В то же время у детей группы наблюдения через 3 года после первой ревакцинации АКДС уровень антител к токсину дифтерии (0,089±0,096 Мед/мл) в 4,8-10,4 раза ниже показателей группы сравнения (0,429±0,131 Мед/мл p=0,002-0,0001).

Для углубленной оценки иммунологической эффективности вакцины АКДС в изучаемых группах была проанализирована частота нарушений формирования поствакцинального иммунитета (таблица 3).

Результаты исследования, приведенные в таблице 3, показали, что у 50-67% детей группы наблюдения и 21-46% детей группы сравнения содержание поствакцинальных антител не обеспечивало протективного уровня иммунитета к дифтерии, при этом частота случаев формирования у привитых детей группы наблюдения низких титров поствакцинальных антител была в 1,8-2,0 раза выше группы сравнения (p=0,03-0,0001).

В группе наблюдения в исследуемые сроки поствакцинального периода протективный уровень противодифтерийных антител имело только 33-48% привитых детей, что достоверно в 1,5-2,0 раза меньше группы сравнения (67-71%, p=0,003-0,0001). В целом в группе наблюдения количество детей, имеющих низкое содержание поствакцинальных противодифтерийных антител, в 1,8-2,0 раза (p=0,001-0,003) превышало показатель группы сравнения. Кроме того, в анализируемые сроки поствакцинального периода (с 3-х лет до 5) число детей с содержанием противодифтерийных антител ниже протективного уровня в группе наблюдения увеличивается на 28,9%, в то время как в группе сравнения только на 13,8% (p=0,03).

7. Выделяют лиц, у которых количество поствакцинальных антител класса IgG к дифтерийному анатоксину ниже протективного уровня, и устанавливают для этих лиц корреляционную связь снижения количества указанных антител от содержания в крови выбранных химических веществ-загрязнителей среды обитания. Статистическая обработка материала проводится с использованием пакета прикладных программ «Microsoft Office Excel 2010» и Statistica 6.0. При оценке содержания в крови химических веществ и соединений рассчитываются средние величины и ошибки средних. Статистическую достоверность различий оценивают по непарному t-критерию Стьюдента. Для отклонения нулевой гипотезы (отсутствие различий) принимают уровни статистической значимости p<0,05. Математическое моделирование включает анализ отношения шансов изменения показателей поствакцинального иммунитета при возрастании концентрации химических веществ в биологических средах.

8. Далее устанавливают причинно-следственную связь снижения количества антител класса IgG к дифтерийному анатоксину от содержания в крови выбранных химических веществ-загрязнителей среды обитания. Анализ показателя отношения шансов изменения уровня поствакцинального специфического иммунитета при различном уровне токсикантной нагрузки позволил установить достоверную связь: повышенное содержание в крови ребенка свинца более 0,04 мг/дм3 и о-крезола более 0 мг/дм3 и пониженное количество поствакциональных антител класса IgG к дифтерийному анатоксину. Результаты приведены на рис.1 и рис.2. С другими химическими токсикантами (марганец, хром, фенол) причинно-следственная связь снижения количества антител класса IgG к дифтерийному анатоксину не выявлена.

Данные, приведенные на рис.1 и рис.2, доказывают установление причинно-следственной связи нарушения поствакцинального иммунитета к дифтерии от влияния таких токсикантов антропогенного происхождения, как свинца и o-крезола, при указанном их количественном содержании (достоверно значимое снижение содержания JgG к дифтерийному анатоксину при увеличении в крови концентрации свинца (недействующий уровень - 0,04 мг/дм3; R2=0,09; p<0,0001) и о-крезола (недействующий уровень - 0,0 мг/дм3; R2=0,48; p<0,0001). Из всего спектра установленных вредных веществ-загрязнителей в крови ребенка именно эти два вещества оказывают влияние на снижение поствакцинального иммунитета к дифтерии.

Для доказательства того, что у детей из группы наблюдения, по сравнению с детьми из группы сравнения, снижен поствакцинальный иммунитет, было проведено изучение показателей системного иммунитета. При этом было установлено, что у детей, проживающих в условиях антропогенного загрязнения среды обитания, достоверно более низкое, относительно группы сравнения, абсолютное содержание лимфоцитов СД19+ и CD16+56+ (р=0,01-0,001) и сывороточного иммуноглобулина А (р=0,02) (таблица 4). Данные, приведенные в таблице 4, показывают, что у детей группы наблюдения по сравнению с детьми группы сравнения достоверно на 30% ниже содержание антителопродуцирующих клеток (СД19+) (p≤0,01), в 1,8 раза выше содержание клеток-киллеров (CD16+56+) (p≤0,001) и более чем на 10% ниже уровень иммуноглобулина А (p≤0,02). Эти показатели как раз и характеризуют снижение именно поствакцинального иммунитета к дифтерии.

Предлагаемый способ позволяет оценить влияние неблагоприятных химических факторов антропогенного происхождения на адекватность поствакцинального иммунитета к дифтерии с целью выявления контингента детей, в отношении которых необходимо осуществление дополнительных мероприятий, направленных на повышение эффективности вакцинопрофилактики. При этом рекомендуется диспансерное наблюдение таких детей у аллерголога-иммунолога с проведением специализированных программ, например контроль уровня поствакцинального иммунитета - 2 раза в год, иммунограмма - 2 раза в год, разработка индивидуальных программ вакцинопрофилактики.

Таблица 2
Содержание поствакцинальных антител к дифтерии в крови детей, проживающих в различных условиях антропогенного загрязнения среды обитания
Нозология Период после последней вакцинации/ревакцинации (годы) Содержание антител Протективный уровень антител
Группа наблюдения Группа сравнения Достоверность различий Группа наблюдения Группа сравнения Достоверность различий группы наблюдения
с группой сравнения с защитным уровнем антител
Дифтерия (Мед/мл) 3,22±1,18 3,40±0,68 0,79 0,089±0,016 0,429±0,131 0,0001 0,82 0,1-2,0
4,50±0,26 4,24±0,22 0,13 0,365±0,084 0,264±0,154 0,25 <0,001
5,16±0,38 5,10±0,20 0,83 0,289±0,089 0,261±0,120 0,71 <0,001
Таблица 3
Частота нарушений формирования защитного уровня поствакцинального иммунитета к дифтерии у детей, проживающих в различных условиях антропогенного загрязнения среды обитания (%)
Нозология Период после последней вакцинации/ревакцинации (годы) Группа наблюдения Группа сравнения Достоверность различий
Группа наблюдения Группа сравнения Достоверность различий Ниже протективного уровня Соответствует протективному уровню Выше протективного уровня Ниже протективного уровня Соответствует протективному уровню Выше протективного уровня p1 p2 p3
Дифтерия 3,22±1,18 3,40±0,68 0,79 52 46 2 29 71 0 0,003 0,001 -
4,50±0,26 4,24±0,22 0,13 52 48 0 46 54 0 0,44 0,44 -
5,16±0,38 5,10±0,20 0,83 67 33 0 33 67 0 0,001 0,001 -
p1 - достоверность различий частоты формирования поствакцинального иммунитета ниже протективного уровня у детей группы наблюдения и группы сравнения
p2 - достоверность различий частоты встречаемости протективного уровня поствакцинальных антител у детей группы наблюдения с группой сравнения
p3 - достоверность различий частоты формирования поствакцинального иммунитета выше протективного уровня у детей группы наблюдения и группы сравнения
Таблица 4
Показатели системного иммунитета у детей, проживающих в различных условиях антропогенного загрязнения среды обитания (%)
Показатель Физиологический уровень Группа наблюдения Группа сравнения P
Процент фагоцитоза (%) 35-60 56,0±2,5 56,5±4,5 0,92
Фагоцитарное число (у.е.) 0,8-1,2 1,05±0,08 1,0±0,09 0,40
Фагоцитарный индекс (у.е.) 1,5-2,0 1,85±0,08 1,70±0,12 0,06
Абсолютный фагоцитоз (109/дм3) 0,964-2,988 2,541±0,247 2,170±0,323 0,07
CD3+-лимфоциты отн. (%) 55-84 67,5±2,0 66,5±6,5 0,89
CD3+-лимфоциты абс. (109/дм3) 0,690-2,540 2,037±0,213 2,160±0,276 0,48
CD3+CD4+-лимфоциты отн. (%) 31-60 34,5±2,5 38,0±4,0 0,64
CD3+CD4+-лимфоциты абс. (109/дм3) 0,410-1,590 1,047±0,132 1,233±0,166 0,08
CD3+CD8+-лимфоциты отн. (%) 13-41 25,5±2,0 23,0±3,0 0,71
CD3+CD8+-лимфоциты абс. (109/дм3) 0,190-1,140 0,773±0,089 0,757±0,112 0,82
CD19+-лимфоциты отн. (%) 6-25 13,5±1,5 17,0±2,5 0,52
CD19+-лимфоциты абс. (109/дм3) 0,090-0,660 0,417±0,065 0,545±0,079 0,01
CD16+56+-лимфоциты отн. (%) 5-27 15,5±2,5 8,0±1,5 0,16
CD16+56+-лимфоциты абс. (109/дм3) 0,090-0,590 0,463±0,084 0,253±0,05 0,001
CD3+CD25+-лимфоциты отн. (%) 5,5 4,5±0,5 4,5±0,5 1,0
CD3+CD25+-лимфоциты абс. (109/дм3) 0,155 0,136±0,023 0,154±0,021 0,26
IgA (г/дм3) 2,0-2,8 1,14±0,07 1,29±0,11 0,02
IgM (г/дм3) 1,0-1,6 1,09±0,04 1,17±0,09 0,1
IgG (г/дм3) 12,0-16,0 10,01±0,33 10,25±0,73 0,35
p - достоверность различий показателей системного иммунитета у детей группы наблюдения и группы сравнения.

Способ диагностики снижения поствакцинального иммунитета к дифтерии у детей, проживающих в условиях воздействия вредных химических факторов среды обитания, характеризующийся тем, что на территории проживания определяют перечень химических веществ-загрязнителей среды обитания, для которых иммунная система является мишенью, для установленных веществ-загрязнителей осуществляют оценку риска развития нарушений со стороны иммунной системы по критерию индекса опасности HI более 1,0, проводят отбор проживающих в указанных условиях детей, которым была выполнена плановая вакцинация и/или ревакцинация вакциной АКДС - адсорбированной коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакциной и у которых отсутствуют заболевания иммунной системы, у указанных детей выполняют отбор пробы крови, в пробе устанавливают количество выбранных химических веществ-загрязнителей среды обитания, и выделяют лиц, у которых это количество превышает референтный или фоновый уровень не менее чем на 20%, в сыворотке крови выбранных лиц методом иммуноферментного анализа со специфическими тест-системами определяют количество поствакцинальных антител класса иммуноглобулина G IgG к дифтерийному анатоксину, выделяют лиц, у которых это количество ниже протективного уровня, устанавливают для этих лиц корреляционную связь снижения количества указанных антител от содержания в крови выбранных химических веществ-загрязнителей среды обитания, и при одновременном установлении достоверных зависимостей: повышенное содержание в крови ребенка свинца более 0,04 мг/дм3 и o-крезола более 0 мг/дм3 и пониженное по сравнению с протективным уровнем количество поствакциональных антител класса IgG к дифтерийному анатоксину, диагностируют снижение поствакцинального иммунитета ребенка к дифтерии.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимии, и может быть использовано для оценки чувствительности сосудистого эндотелия к напряжению сдвига. Способ заключается в следующем: до и после окклюзионной пробы определяют уровень нитритов и эндотелина в крови.

Изобретение относится к медицине, а именно к ревматологии, и может быть использовано для диагностики ранней стадии ревматоидного артрита. Для этого производят забор у пациента одновременно образцов костного мозга и синовиальной оболочки, из которых готовят препараты для иммуногистохимического и иммуноцитохимического исследований.
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. Описан химерный пестивирус, где указанный химерный пестивирус включает вирус диареи крупного рогатого скота, который не экспрессирует его гомологичный Erns белок.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен L-фукоза α1→6-специфичный лектин, экстрагируемый из базидиального гриба или сумчатого гриба, характеризующийся пиковым значением молекулярной массы около 4500 m/z, определяемым при масс-спектрометрическом анализе MALDI-TOF.
Изобретение относится к медицине, в частности к области лабораторной диагностики рака молочной железы, и описывает набор реагентов для иммунногистохимической диагностики рака молочной железы, который позволяет одновременно или раздельно выявлять рецепторы эстрогена, прогестерона и HER2-рецепторы.
Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии, и может быть использовано для лечения респираторного дистресс-синдрома у новорожденных детей, находящихся на искусственной вентиляции легких (ИВЛ).

Группа изобретений относится к области медицины и может быть использована для получения костного мозга (КМ) от доноров-трупов. Для этого пунктируют крылья подвздошных костей в передней и задней трети крыльев, устанавливая в каждое по два троакара.

Изобретение относится к биологическим исследованиям и медицине и предназначено для идентификации неблагоприятного воздействия фенола, поступающего из среды обитания, на здоровье населения.
Изобретение относится к медицине. Более подробно изобретение относится к диагностике ревматоидного артрита.
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования наступления беременности у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием в результате лечения методом экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).

Изобретение относится к способу ранней детекции мышечных дегенеративных заболеваний и к способу прогнозирования и/или определения терапевтической эффективности терапевтического средства и/или способа терапии заболеваний посредством измерения тетранор-PGDM (11,15-диоксо-9α-гидрокси-2,3,4,5-тетранорпростан-1,20-диовой кислоты) в образце мочи субъекта и сравнения его содержания относительно образца, выделенного у здорового индивидуума. Мышечное дегенеративное заболевание у пациента обнаружено, если концентрация или содержание тетранор-PGDM в образце, выделенном у пациента, превышает концентрацию или содержание тетранор-PGDM в образце, выделенном у здорового индивидуума. Определяют эффективность терапевтического средства и/или способа терапии мышечного дегенеративного заболевания путем сравнения содержания тетранор-PGDM в образце, выделенном у пациента с мышечным дегенеративным заболеванием до и после введения терапевтического средства. Если измеренное содержание тетранор-PGDM в образце значительно или незначительно уменьшается после введения терапевтического средства, то способ терапии является эффективным. Изобретение также относится к набору для диагностики мышечных дегенеративных заболеваний, который включает антитело к тетранор-PGDM, меченный тетранор-PGDM и, необязательно, по меньшей мере одно соединение, выбранное из группы, состоящей из антитела к иммуноглобулину, разбавляющего раствора для образца, разбавляющего раствора для антитела и меченного тетранор-PGDM, стандарта тетранор-PGDM известной концентрации, субстрата для иммуноферментного анализа и останавливающего раствора для иммуноферментного анализа. Изобретение является эффективным и простым в исполнении. 4 н. и 3 з.п. ф-лы, 1 табл., 1 пр., 2 ил.

Изобретение относится к медицине, в частности к области медицинской диагностики, и описывает способ диагностики туберкулеза путем проведения иммуноцитогистохимического исследования и выявления экспрессии антигена микобактерии туберкулеза. Способ характеризуется тем, что исследование биологического материала, нанесенного на предметное стекло, проводится с помощью модифицированного иммуноцитогистохимического метода и включает следующие стадии: получение биологического материала: мазков/соскобов, клеточных осадков биологических жидкостей, фиксацию их в ацетоне; обработку 1% раствором бихромата калия; обработку 3% раствором перекиси водорода; нанесение моноклональных антител к РАВ-антигену микобактерии туберкулеза в разведении 1:20; инкубацию при температуре 3-5 градусов Цельсия в течение 12 часов; нанесение системы детекции EnVision и инкубацию при комнатной температуре; нанесение диаминобензидина; докрашивание гематоксилином; заключение в бальзам или другую среду, микроскопирование, диагностирование заболевания при выявлении антигена микобактерии туберкулез. Способ обеспечивает повышение точности выявления антигена микобактерии туберкулеза, уменьшение стоимости диагностики и возможность его применения в практическом здравоохранении. 2 ил.
Изобретение относится к области медицины, а именно к травматологии и ортопедии, и описывает способ прогнозирования послеоперационной регенерации у пациентов с ложными суставами длинных трубчатых костей, включающий исследования венозной крови пациента, анализ результатов ее исследования с выдачей прогноза послеоперационной регенерации по выбранным показателям, в плазме крови пациента определяют уровень содержания диеновых конъюгатов (ДК) и двойных связей (ДС) в липидах плазмы крови, количество липидов в плазме крови пациента, количество белка «острой фазы» - церулоплазмина, а также определяют процентное содержание высоко стойких эритроцитов в крови пациента, оценивают интегральные показатели изменения состояния молекулярно-биологических процессов в системе равновесия перекисного окисления липидов (ПОЛ) плазмы крови пациента и ее антиоксидантной защиты (АОЗ), при этом критерием возникновения дисбаланса в системе «ПОЛ-АОЗ» плазмы крови пациента выбирают в качестве интегрального показателя произведение содержания диеновых конъюгатов (ДК) и двойных связей (ДС) в липидах плазмы крови пациента, затем в случае, если измеренный показатель содержания двойных связей (ДС) составляет (29,6-37)10-7 М/мг липидов, измеренный показатель содержания диеновых конъюгатов (ДК) составляет (2,34-2,76)10-1 условных единиц, вычисленный по результатам измерений интегральный показатель в виде произведения ДС×ДК составляет (69,3-102,1)10-8 условных единиц, количество липидов в плазме крови пациента составляет 6,2-8,6 мг/мл, количество белка «острой фазы» - церулоплазмина в плазме крови пациента составляет 29,6-36,8 условных единиц, а процентное содержание высоко стойких эритроцитов в популяции эритроцитов в плазме крови пациента составляет (14,3-17,3)%, то прогнозируют прохождение процессов, сопровождающихся нарушением структуры мембран эритроцитов с проявлением замедленной консолидации поврежденного элемента опорно-двигательного аппарата с образованием не осложненного воспалительными процессами ложного сустава, а в случае, если измеренный показатель содержания двойных связей (ДС) составляет (41,6-49,4)10-7 М/мг липидов, измеренный показатель содержания диеновых конъюгатов (ДК) составляет (3,16-3,54)10-1 условных единиц, вычисленный по результатам измерений интегральный показатель в виде произведения ДС×ДК составляет (131,5-174,9)10-8 условных единиц, количество липидов в плазме крови пациента составляет 2,6-5,8 мг/мл, количество белка «острой фазы» - церулоплазмина в плазме крови пациента составляет 41,6-49,4 условных единиц, а процентное содержание высоко стойких эритроцитов в популяции эритроцитов в плазме крови пациента составляет (4,6-6,0)%, то прогнозируют прохождение процесса нарушения структуры мембран эритроцитов с проявлением замедленной консолидации поврежденного элемента опорно-двигательного аппарата с образованием отягощенного нагноением осложненного ложного сустава. Способ обеспечивает значительное повышение эффективности и информативности, объективности прогнозирования у пациентов с ложными суставами длинных трубчатых костей. 1 з.п. ф-лы, 4 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования течения и исходов бактериальных гнойных менингитов (БГМ) различной этиологии у детей. Для этого определяют в цереброспинальной жидкости иммуноцитохимическим методом наличие CD31 и S100 позитивных клеток в 1-2 день заболевания. При содержании CD31 более 0,5% и наличии S100 позитивных клеток прогнозируют неблагоприятное течение БГМ. При содержании CD31 менее 0,5% и отсутствии S100 позитивных клеток прогнозируют благоприятное течение заболевания. Применение предложенного способа ликворо-цитологического прогноза течения БГМ у детей позволяет прогнозировать на ранних сроках болезни благоприятное и неблагоприятное течение заболевания, проводить мониторинг состояния сосудов микроциркуляторного русла головного мозга в ходе заболевания и корректировать терапию. 1 табл., 2 ил., 3 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования задержки внутриутробного роста плода. Для этого в венозной крови женщины на ранних сроках беременности определяют относительное содержание CD3+CD16+56+-лимфоцитов, уровня С3-компонента комплемента и растворимого рецептора фактора некроза опухоли (sTNF-R). Вычисляют прогностический индекс (PI) по формуле: PI=-0,8911X1-0,0321Х2-2,3669Х3+11,0779, где X1 - относительное содержание CD3+CD16+CD56+-лимфоцитов, %; X2 - концентрация С3-компонента комплемента, мг/дл; Х3 - концентрация sTNF-R, нг/мл. При PI<0 прогнозируют задержку внутриутробного роста плода во второй половине беременности, а при PI>0 делают заключение о низком риске развития данного патологического состояния. Предлагаемый способ является малоинвазивным, позволяет с ранних сроков гестации выявить группу риска по формированию задержки внутриутробного роста плода, что дает возможность осуществления превентивных мероприятий, направленных на профилактику данного патологического состояния. 5 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для дифференциальной морфометрической диагностики эритродермической формы грибовидного микоза и синдрома псевдолимфомы кожи. Для этого проводят гистологическое исследование биоптатов пораженной кожи путем световой микроскопии, иммунофенотипирование клеток инфильтрата, дополнительные морфометрические исследования базальных кератиноцитов в гистологических препаратах биоптатов пораженной кожи. При этом при схожей гистологической картине, описываемой при эритродермической форме грибовидного микоза и синдроме псевдолимфомы кожи как акантоз, гиперкератоз, паракератоз, отек и расширение сосудов дермы, лимфогистиоцитарные инфильтраты, расположенные в верхней трети дермы, одинаковом иммунофенотипе клеток инфильтрата при эритродермической форме грибовидного микоза и синдроме псевдолимфомы кожи, представленном CD2+, CD3+, CD4+, CD5+, CD43+, CD45RO+ лимфоцитами, проводят дополнительно морфометрические исследования всех клеток эпидермиса. Далее рассчитывают относительный объем эпидермиса и митотический индекс эпидермальных клеток. При увеличении относительного объема эпидермиса в 2,2 и более раза по сравнению с нормальной кожей и увеличении митотического индекса эпидермальных клеток в 2,7 и более раза по сравнению с нормальной кожей диагностируют эритродермическую форму грибовидного микоза, а при неизмененных по сравнению с нормальной кожей относительном объеме эпидермиса и митотическом индексе эпидермальных клеток диагностируют синдром псевдолимфомы кожи. Изобретение обеспечивает ускорение и точность дифференциальной диагностики указанных видов лимфом кожи, что позволяет выбрать тактику раннего адекватного рационального лечения пациента. 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу определения интерферон-γ-продуцирующих Т-лимфоцитов при хроническом лимфолейкозе. Сущность способа состоит в том, что осуществляют ингибирование внутриклеточного транспорта - брефелдином А в клеточной культуре, далее подвергают немедленной обработке флуоресцеинизотиоционат-меченными анти-СD3 антителами, затем проводят стимуляцию синтеза интерферона-γ, фиксацию, пермеабилизацию, окраску фикоэритрин-меченными анти-интерферон-γ моноклональными антителами и осуществляют цитометрию, наблюдают совпадение флуоресцентной метки СD3-маркера в клеточной культуре с таковой, определяемой на основании контролируемого метода. Использование заявленного способа позволяет устранить воздействие химических агентов, активирующих синтез интерферона-γ, таких как форбол-12-миристат-13-ацетата и кальциевой соли иономицина на экспрессию молекулы CD3 на мембране лимфоцитов, что повышает точность определения интерферон-γ-продуцирующих T-лимфоцитов в организме человека. 3 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине и описывает способ детекции поврежденных влажностью влагочувствительных реагентов, где указанные реагенты приводят в контакт с образцом, содержащим воду, и далее выявляется присутствие в образце анализируемого вещества, по его реакции с указанными влагочувствительными реагентами, причем указанный способ включает: (a) измерение отражения света при длине волны, характерной для продуктов указанной реакции указанных влагочувствительных реагентов с анализируемым веществом в двух заданных временных точках после контакта указанных реагентов с указанным образцом; (b) измерение в тех же двух заданных временных точках отражения света при длине волны, характерной для эталонного инфракрасного красителя, причем указанный краситель объединен с указанными влагочувствительными реагентами и имеет характерную длину волны, отличающуюся от длины волны, измеряемой в п.(a), по меньшей мере на 120 нм; (c) расчет соотношения показателей отражения, измеренных при длинах волн согласно пп.(a) и (b), и заключение о том, что реагенты имеют сниженную, чем ожидалось, активность и повреждены влажностью, на основании различия в указанном соотношении для указанных двух заданных временных точек. Способ обеспечивает более точное идентифицирование качества индикаторных полосок. 2 н. и 20 з.п. ф-лы, 3 табл., 1 ил.
Изобретение относится к области медицины, а именно к неврологии и гастроэнтерологии, и может быть использовано для диагностики аутоиммунного поражения различных структур вегетативной нервной системы (ВИС), регулирующих моторику желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Диагностику аутоиммунного поражения вегетативных структур желудочно-кишечного тракта проводят путем исследования сыворотки крови больного. При этом в образце сыворотки крови определяют антитела к α3-субъединице нейронального ацетилхолинового рецептора (α3-АХР) и рилизинг-гормону гонадолиберину (GnRH) методом твердофазного иммуноферментного анализа (тИФА) по взаимодействию с экстрацеллюлярным участком α3-субъединицы нейронального АХР и рилизинг-гормоном GnRH, а уровень антител к α3-АХР и GnRH определяют окрашиванием, используя в качестве хромогена тетраметилбензидин. Оптическое поглощение света измеряют на ИФА-анализаторе при длине волны 450 нм в единицах оптической плотности (OD). При повышении уровня антител к α3-АХР более 0,24 OD, a к GnRH менее 0,25 OD вплоть до полного их отсутствия относительно контроля диагностируют аутоиммунное поражение периферического отдела вегетативной нервной системы на уровне парасимпатических интрамуральных ганглиев и микроганглиев желудочно-кишечного тракта, а при уровне антител к GnRH более 0,25 OD и к α3-АХР менее 0,24 вплоть до полного их отсутствия диагностируют аутоиммунное поражение интрамуральных ганглиев и микроганглиев метасимпатического отдела желудочно-кишечного тракта. Способ обеспечивает определение вовлечения в аутоиммунный процесс с высокой точностью структур вегетативной нервной системы, регулирующих моторику ЖКТ, и выявление поражаемой молекулярной мишени, в частности парасимпатических и/или метасимпатических структур ВНС желудочно-кишечного тракта.
Изобретение относится к медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике, может быть использовано для титрования групповых антител системы АВО. Для определения титра естественных антител в каждую колонку нейтральной гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений сыворотки крови. Инкубируют полученные смеси 20-25 минут при температуре 21-23°C. Далее центрифугируют и определяют титр по предельному разведению, при котором выявляется видимая агглютинация в толще колонки гелевой карты. Для определения титра полных иммунных антител используют 100-200 мкл сыворотки крови, разводя ее в четыре раза. Затем прогревают сыворотку в разведении 1:4 в течение 10 минут при температуре 70°. Готовят последующие разведения прогретой сыворотки с разведением 1:4. Далее в каждую колонку нейтральной гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений. Инкубируют полученные смеси 20-25 минут при температуре 21-23°C, центрифугируют и определяют титр исследуемых антител. Для определения титра неполных иммунных антител используют 100-200 мкл сыворотки крови, разводят ее в четыре раза. Затем прогревают разведенную сыворотку крови в течение 10 минут при температуре 70°C. Готовят последующие разведения прогретой сыворотки с разведением 1:4. Далее в каждую колонку гелевой карты с реактивом Кумбса вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений. Инкубируют полученные смеси, оставляя гелевую карту или карты с реактивом Кумбса на 20-25 минут при температуре 37°C. После чего гелевую карту или карты с реактивом Кумбса центрифугируют и определяют титр исследуемых антител по предельному разведению, при котором выявляется видимая агглютинация в толще колонки гелевой карты. Использование ланного способа позволяет предотвращать антитело-опосредованной реакции отторжения при проведении АВО-несовместимых трансплантаций органов. 2 пр.
Наверх