Способ гистохимического определения степени повреждения виноградных побегов морозами



Способ гистохимического определения степени повреждения виноградных побегов морозами
Способ гистохимического определения степени повреждения виноградных побегов морозами
Способ гистохимического определения степени повреждения виноградных побегов морозами

 


Владельцы патента RU 2549785:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение Высшего профессионального образования КАБАРДИНО-БАЛКАРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ В.М. КОКОВА (RU)

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к виноградарству. Способ включает окрашивание свежих поперечных срезов побегов винограда толуидиновым синим и синим Эванса. Оценивают степень повреждения и локализации участков неповрежденного камбия в баллах: 0-2 - считают побеги неповрежденными, частично и среднеповрежденными; 3 - поврежденные побеги в благоприятных условиях могут регенерировать; 4-5 - побеги считают очень сильно поврежденными, погибшими и требуют удаления. Способ обеспечивает простоту и быстроту процедуры окрашивания, длительный срок хранения растворов красителей, определение степени обрезки куста. 6 ил., 1 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к области виноградарства, и может быть использовано в хозяйствах для уточнения результатов полевой оценки повреждения виноградных растений морозами и сохранения наиболее ценных сортов винограда для изучения возможности их районирования.

Известен полевой метод оценки повреждения винограда морозами, основанный на визуальной оценке окраски глазков и древесины на продольных срезах, луба - на поперечных надрезах побегов [1]. Данный метод трудоемок и не точен, так как при повреждении луба камбий (образовательная ткань, обеспечивающая регенерацию побега) может остаться неповрежденным.

Известен способ определения степени повреждения виноградных побегов путем окрашивания поперечных срезов из средней части промороженных побегов солями тетразолия (2,3,6-три-фенилтетразолий хлоридом) [2]. Недостатком данного способа является сложность проведения и неточность результатов ввиду отсутствия информации о состоянии камбия.

Известен также способ оценки регенерации поврежденных тканей побегов винограда, основанный на выявлении живых и мертвых клеток тканей путем окрашивания свежеприготовленных срезов 0,1% раствором нейтрального красного в 60% спирте [3]. Недостатком данного способа является необходимость приготовления очень тонких срезов и невозможность дифференцированного окрашивания камбия.

Наиболее близким техническим решением (прототип) задачи определения степени повреждения виноградных побегов морозами является анализ структуры феллемного слоя перидермы. Этот способ основан на оценке интенсивности флуоресценции клеток феллемы побегов по пятибалльной шкале и определении степени вызревания побегов по цвету и интенсивности первичной флуоресценции [4]. Недостатком способа является отсутствие информации о возможной степени повреждения побегов после воздействия критических отрицательных температур.

Цель изобретения - повышение точности определения степени повреждения виноградных побегов после воздействия критических отрицательных температур.

Поставленная цель достигается окрашиванием свежих поперечных срезов побегов винограда толуидиновым синим и синим Эванса, оценкой степени повреждения и локализации участков неповрежденного камбия в баллах: 0-2 - считают побеги неповрежденными, частично и среднеповрежденными; 3 - поврежденные побеги в благоприятных условиях могут регенерировать; 4-5 - побеги считают очень сильно поврежденными, погибшими и требуют удаления.

Способ осуществляется путем окрашивания камбия цитоплазматическими витальными красителями - толуидиновым синим и синим Эванса, применяющимися в гистохимической практике для прижизненного окрашивания мукополисахаридно-протеиновых комплексов.

На фиг.1 показан поперечный срез стебля винограда, окрашенный толуидиновым синим, × 300 (к - камбий, л - луб): а) степень повреждения камбия 0 баллов, б) степень повреждения камбия 2 балла.

На фиг.2 показан поперечный срез стебля винограда, окрашенный синим Эванса: а) × 300: б) × 600.

На фиг.3 показан камбий и феллоген (ф) на поперечном срезе стебля винограда, × 300: а) толуидиновый синий; б) синий Эванса.

Для анализа производят бритвой поперечные срезы свежих побегов (одно- и двулетних). Средняя проба 20 побегов. Толщина срезов не более 0,1 мм. Окрашивание срезов толуидиновым синим проводят в следующей последовательности: 1) фиксация в смеси 4% уксусной кислоты и 70% спирта (1:1) в течение 1 часа; 2) окрашивание в течение 1 мин в растворе красителя (0,1% раствор в 2% уксусной кислоте). Результат: камбий окрашен в фиолетовый, луб - в желтый, древесина - в голубой цвет (фиг.1, фиг.3a).

Окрашивание срезов синим Эванса проводят в следующей последовательности: 1) фиксация в 70% спирте в течение 1 часа; 2) окрашивание в течение 1 мин в растворе красителя (0,1% раствор в кипяченой воде); 3) промывание в спирте. Результат: камбий окрашен в синий цвет, луб - в желтый, древесина - в голубой цвет (фиг.2, фиг.3б).

Срезы помещают на предметное стекло, микроскопируют в световом биологическом микроскопе при × 200-400. При осуществлении способа необходимо пользоваться предлагаемой шкалой определения степени повреждения побегов по сохранности камбия в баллах.

Балльная оценка степени повреждения побега морозами по сохранности камбия
Балл Степень повреждения и интенсивность окрашивания камбия Степень повреждения побега
0 Сплошное широкое или местами суженное кольцо камбия, клетки окрашены интенсивно и равномерно. Нет повреждения
1 Кольцо камбия узкое, с небольшими разрывами. Повреждено до 10% общей площади ткани. Клетки окрашены интенсивно, неравномерно. Частичное повреждение
2 Повреждение камбия 11-40%. Неповрежденные участки камбия расположены в зоне сердцевинных и радиальных лучей. Клетки окрашены интенсивно, неравномерно. Среднее повреждение
3 Повреждение камбия 41-50%. Камбий выявляется в виде небольших островков, расположенных местами в непосредственной близости друг от друга. Клетки окрашены слабо. Сильное повреждение
4 Повреждение камбия 51-75%. Неповрежденные небольшие участки камбия изолированы друг от друга. Клетки окрашены слабо. Очень сильное повреждение.
5 Камбий поврежден на 100% Погиб

Пример 1. После сильных морозов в третьей декаде ноября 2011 г. и в феврале 2012 г. (-25,8°C) у изучаемого винограда сорта Бианка в предгорной зоне Кабардино-Балкарской Республики весной по результатам полевой оценки 70% учтенных побегов имели признаки повреждения глазков, луба, древесины и требовали удаления. Гистохимическое окрашивание срезов побегов толуидиновым синим и синим Эванса позволило выявить камбий со средней степенью повреждения (до 40%) у 30% учтенных побегов с признаками повреждения. При этом неповрежденные участки камбия расположены в зоне сердцевинных и радиальных лучей. Клетки окрашены интенсивно, неравномерно (оценка 2 балла). Данные побеги рекомендуется сохранить. Остальные побеги имели камбий с сильным и очень сильным повреждением и требуют удаления.

Пример 2. После сильных зимних морозов у районированного винограда сорта Подарок Магарача по результатам полевой оценки 20% учтенных побегов имели признаки повреждения глазков, луба и древесины. Гистохимическое окрашивание срезов побегов толуидиновым синим и синим Эванса выявило очень сильное повреждение камбия (более 50%). Неповрежденные небольшие участки камбия изолированы друг от друга. Клетки окрашены слабо (оценка 4 балла). Такие побеги следует обрезать.

Таким образом, способ позволяет уточнить результаты полевой оценки повреждения виноградных побегов после воздействия критических отрицательных температур, определить степень обрезки куста. Кроме того, способ обеспечивает удобство визуальной оценки степени жизнеспособности камбия в результате дифференцированной окраски тканей, простоту и быстроту процедуры окрашивания, низкую затратность, длительный срок хранения растворов красителей (3 месяца).

Источники информации

1. Мишуренко А.Г., Шерер В.А., Овчинникова Л.Ф. Зимостойкость винограда / Под ред. Мишуренко А.Г. - Киев: Урожай, 1975. - 176 с.

2. Тюрина М.М., Гоголева Г.А. Комплексная оценка устойчивости плодовых растений к морозу // Методы оценки устойчивости растений к неблагоприятным условиям среды. - Л., 1973. - С.381.

3. Физиологические основы адаптации многолетних культур к неблагоприятным факторам среды: Сб. тр. / Отв. ред. С.И. Тома. - Кишинев: Штиинца, 1984. - 296 с.

4. SU №1172488 А, 15.08.1985. А.И. Литвак. Способ определения степени вызревания побегов винограда. Бюл. №30.

Способ гистохимического определения степени повреждения виноградных побегов морозами, включающий окрашивание свежих поперечных срезов побегов винограда толуидиновым синим и синим Эванса, оценку степени повреждения и локализации участков неповрежденного камбия в баллах: 0-2 - считают побеги неповрежденными, частично и среднеповрежденными; 3 - поврежденные побеги в благоприятных условиях могут регенерировать; 4-5 - побеги считают очень сильно поврежденными, погибшими и требуют удаления.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области сельского хозяйства и биотехнологии. В способе готовят картофельно-декстрозный агар (PDA), выделяют гриб в чистую культуру, подготавливают инокулюм для инфекционного фона, выделяют нематоды (A.
Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к виноградарству. Способ включает ежегодное прищипывание зеленых основных побегов при достижении ими длины 10-15 см до начала образования побегов второго порядка.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к экологическому мониторингу. Способ включает выделение на малой реке или ее притоке визуально по карте или натурно участка пойменного луга.

Изобретение относится к области растениеводства, а именно к средствам контроля геометрических параметров растений, используемых для оценки их качества, преимущественно укорененных черенков и саженцев садовых культур.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к растениеводству. Способ включает листовую диагностику путем определения откликов в виде разницы фотохимической активности суспензии хлоропластов при добавлении в нее диагностируемых элементов на уровнях их наличия и отсутствия смесями.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к круглогодичному выращиванию овощей с ротацией культур. Способ включает выращивание рассады, посадку рассады в теплицу, уход за высаженными растениями и сбор урожая.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к садоводству. Способ включает нарезку черенков, обработку нижней части черенков перед укоренением слабоконцентрированным водным раствором регулятора роста в течение 12-24 ч и укоренение.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, лесоводству и экологии. Способ включает определение индекса ветвления как отношения числа особей с отклонениями к числу всех особей в выборке мха.

Изобретение относится к области ландшафтоведения и сельского хозяйства. Способ включает выбор пробных площадок, их закладку и взвешивание срезанных растений.
Изобретение относится к области фитопатологии, сельского хозяйства и экологии. Способ включает предпосевную обработку семян пшеницы мягкой диспергированной суспензией.

Изобретение относится к области сельского хозяйства. Способ включает обработку почвы в междурядьях и уход за растениями почвообрабатывающими орудиями в агрегате с колесными тракторами.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к виноградарству. Способ включает выведение горизонтального рукава с рожками.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к виноградарству. Способ включает формирование горизонтальных рукавов с рожками и плодовыми лозами.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к виноградарству. Способ включает рядовую посадку, выведение штамба, создание из развившихся побегов в верхней части штамба двух рожков, ежегодное формирование на них по одному вызревшему плодовому побегу, с последующей подвязкой их в виде дуги к колу, направляя каждый в сторону, противоположную отхождению рожка, образуя сердцевидную форму с плоскостью вдоль линии ряда.
Изобретение относится к области пищевой промышленности, а именно к получению обогащенных магнием плодов и ягод для профилактики дефицита магния. В способе проводят однократную внекорневую обработку листьев растений путем опрыскивания рано утром, в вечернее время или днем в пасмурную, но не дождливую погоду растений во время массового налива плодов и ягод водным раствором сульфата магния с концентрацией 20 г/л с добавлением гашеной извести.
Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к растениеводству. В способе при выращивании плодово-ягодных и лекарственных культур на мерзлотных почвах в качестве парозанимающей культуры используют ранние сорта картофеля.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к виноградарству. Способ включает установку вертикальных опор рядами в виде пластиковых труб, в которых выполнены отверстия, вставлена проволока.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к виноградарству. Способ включает установку вертикальной опоры, вокруг которой до уровня формирования кроны формируют один спиралевидный ствол винограда или несколько последовательных спиралевидных стволов винограда.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к виноградарству. Способ включает установку вертикальных опор в виде пластиковых труб, в которых выполняют отверстия, вставляют проволоку и внутрь пластиковых труб заливают цементный раствор.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к плодоводству. В способе проводят окулировку в побег текущего года.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, преимущественно к промышленному виноградарству и садоводству. Способ включает обработку почвы агроугодий, высев растений-галофитов и сидератов. При этом в мае первого года высевают зерновой солеустойчивый сорго нормой 50 кг/га. В августе его подкашивают и поливают скошенную массу сорго раствором концентрации 1/100 микробиологического удобрения «Тамир ЭМ-1» расходом 800 л/га. Выдерживают на стерне поля мульчирующий слой скошенного сорго до октября. В октябре разбрасывают фосфогипс нормой 4 т/га и запахивают его в почву на глубину 25-30 см. В ноябре высевают озимый зернокормовой тритикале сорта «Гренадер» нормой 130 кг/га. В мае второго года подкашивают тритикале и поливают скошенную массу раствором концентрации 1/100 микробиологического удобрения «Тамир ЭМ-1» расходом 800 л/га. В июле дискуют с заделкой в почву тритикале с озерненными колосьями. В августе разбрасывают фосфогипс нормой 4 т/га и поливают раствором концентрации 1/100 микробиологического удобрения «Тамир ЭМ-1» расходом 800 л/га. В сентябре вспахивают почву на глубину 25-30 см. В мае третьего года высевают зерновой сорго нормой 50 кг/га. В августе подкашивают сорго и поливают раствором концентрации 1/100 микробиологического удобрения «Тамир ЭМ-1» расходом 800 л/га. Выдерживают на стерне поля мульчирующий слой скошенного сорго до октября. В октябре разбрасывают фосфогипс нормой 4 т/га, в ноябре выполняют плантажную вспашку на глубину 60-70 см. Способ позволяет достичь высокой степени рассоления почвы под виноградники, получить экологически оптимальные и безопасные урожаи винограда. 3 табл., 3 пр.
Наверх