Способ предварительной пробоподготовки белков для электрофореза


 


Владельцы патента RU 2550135:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Орловский государственный аграрный университет" (ФГБОУ ВПО Орел ГАУ) (RU)

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к технологии мяса и мясопродуктов, может быть использовано в ветеринарии. Изобретение представляет собой способ предварительной пробоподготовки белков для электрофореза, заключающийся в измельчении образцов мяса и мясных изделий до состояния фарша, гомогенизации, центрифугировании гомогенатов при температуре 20°C в течение 30 мин с последующим хранением полученных образцов, отличающийся тем, что гомогенизацию проводят с 10% раствором сахарозы, центрифугирование проводят со скоростью 10000 оборотов в мин, хранение при -4±2°C. Использование 10% р-ра сахарозы упрощает пробоподготовку белков. 2 табл.

 

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к технологии мяса и мясопродуктов, может быть использовано в ветеринарии.

Чтобы обеспечить наилучшие результаты для проявления активности гистохимически выявляемого фермента, необходимо, чтобы в среде поддерживалось значение pH, оптимальное для данного фермента. Это условие достигается введением в среду инкубации буферных растворов с заданными значениями pH. Наиболее распространенными буферными растворами являются фосфатный, ацетатный и трис-буфер.

Известен способ проведения электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия, в котором описана предварительная пробоподготовка белков для электрофореза с использованием буферного раствора 0,015 М Трис HCl+0,15 М NaCl (Усанова О.Е. / Диссертация. Изучение протеомных изменений мышечной ткани свинины под воздействием технологических факторов // О.Е. Усанова - М. 2011. - 138, с. - 68) [1]. Буферный раствор приготавливали следующим образом:

1. 0,2 г Триса растворили в небольшом количестве воды;

2. Добавили 0,2 мл (200 мкл) HCl и довели до 100 мл водой;

3. Для приготовления 2N HCl - 18,2 мл HCl довели до 100 мл водой;

4. К раствору 0,015 М Трис HCl прилили 0,3 мл (300 мкл) 0,15 М NaCl.

Образцы мяса и мясных изделий измельчали до состояния фарша в блендаре, 10-20 г полученной массы гомогенизировали при комнатной температуре в течение 2-3 мин в 50 мл буферного раствора 0,015 М Трис HCl+0,15 М NaCl. Полученные гомогенаты центрифугировали при 20°C со скоростью 15000 оборотов в течение 30 мин. После центрифугирования образцы полученных проб хранили в замороженном состоянии при -18°C.

Расход времени составил 3-4 часа.

Недостатком данного способа является сложность проведения пробоподготовки из-за длительного и дорогостоящего процесса приготовления буферного раствора.

Задачей предлагаемого способа является упрощение пробоподготовки белков для электрофореза, использование более дешевого реактива.

Техническим результатом является сокращение времени на приготовление раствора 0,015 М Трис HCl+0,15 М NaCl для подготовки белков для электрофореза путем замены на 10% р-р сахарозы.

Для решения поставленной задачи и указанного технического результата в известном способе предварительной пробоподготовки белков для электрофореза, заключающемся в измельчении образцов мяса и мясных изделий до состояния фарша, гомогенизации, центрифугировании гомогенатов при температуре 20°C в течение 30 мин и последующей заморозке полученных образцов, согласно изобретению гомогенизацию проводят с 10% раствором сахарозы, центрифугирование проводят со скоростью 10000 оборотов в мин и хранят полученные образцы при температуре -4°C±2°C.

Сущность метода заключается в следующем: мясо и мясные изделия измельчают в блендаре, полученную массу гомогенизируют при комнатной температуре 5 мин с 50 мл раствора -10 г сахарозы на 100 мл воды. Полученные гомогенаты центрифугируют при температуре 20°C со скоростью 10000 оборотов в мин в течение 30 мин. Подготовленные таким образом полученные образцы для последующего хранения охлаждают при температуре -4°C±2°C.

Пример. Сыровяленый продукт (Суджук) из говядины в количестве 20 г измельчали в блендаре, 10 г полученной массы гомогенизировали в 50 мл 10% р-ра сахарозы при комнатной температуре, далее центрифугировали при температуре 20°C в течение 30 мин со скоростью 10000 оборотов в мин. Подготовленные таким образом экстракты охлаждали при температуре -4°C± 2°C для последующего хранения. Результаты целесообразности применения 10% раствора сахарозы показана в таблице 1.

Таблица 1
Влияние различных концентраций сахарозы на разделение белковых фракций в процессе электрофореза
Наименование раствора Полученный результат
5% раствор сахарозы Белковые фракции выражены слабо, нет четко выделенных границ между зоной тяжелых белков, средних и легких белков.
10% раствор сахарозы Белковые фракции выражены четко, ясно прослеживаются границы между зонами тяжелых, средних и легких белков.
15% раствор сахарозы Белковые фракции сливаются, границы между зонами не выделены.

Согласно результатам, приведенным в таблице 1, можно сделать следующие выводы: использование 10% раствора сахарозы для предварительной пробоподготовки белков для электрофореза более целесообразно, чем 5 и 15% растворы сахарозы.

Таблица 2
Сравнение способов при использовании различных методов исследований (использование раствора 0,015 М Трис HCl+0,15 М NaCl, 10% р-ра сахарозы, центрифугирования, хранения, расхода времени)
Наименование способа Наименование методов исследований
Используемые растворы Центрифугирование Хранение Расход времени
Известный способ 1.В растворе 0,015 М Трис HCl+0,15 М NaCl идет экстрагирование веществ. При ценрифугировании со скоростью 15000 об/мин полученные гомогенаты располагаются в надосадочной зоне в количестве 35-40 мл. 1. Требуется размораживание полученных образцов. 3-4 ч
2. Требуется проводить дополнительное центрифугирование образцов.
Предлагаемый способ 1. В растворе идет экстрагирование веществ. При центрифугировании со скоростью 10000 об/мин полученные гомогенаты располагаются в надосадочной зоне в количестве 37-42 мл. 1. He требуется размораживание образцов. 1-1,5 ч
2. Не требуется проводить дополнительное центрифугирование.
2. Используется как катализатор в процессе солюбилизации.

Согласно данным, приведенным в таблице 2, можно сделать следующий вывод:

1. При использовании буферного раствора 015 М Трис HCl+0,15 М NaCl и 10% р-ра сахарозы идет экстрагирование веществ, а раствор сахарозы используется и как катализатор процессов;

2. При центрифугировании в известном способе количество гомогенатов на 2 мл меньше, чем в предлагаемом способе;

3. В известном способе полученные гомогенаты хранят в замороженном виде и образцы нужно размораживать и дополнительно центрифугировать;

4. Предлагаемый способ не требует размораживания и центрифугирования, что значительно сокращает время приготовления раствора в целом на 1,5 ч;

5. Кроме того, экспериментальные данные показали, что при использовании 10% раствора сахарозы в среде поддерживается требуемый уровень pH для электрофоретических исследований.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет упростить пробоподготовку белков для электрофореза и использовать более дешевые реактивы.

Способ предварительной пробоподготовки белков для электрофореза, заключающийся в измельчении образцов мяса и мясных изделий до состояния фарша, гомогенизации, центрифугировании гомогенатов при температуре 20°C в течение 30 мин с последующим хранением полученных образцов, отличающийся тем, что гомогенизацию проводят с 10% раствором сахарозы, центрифугирование проводят со скоростью 10000 оборотов в мин, полученные образцы хранят при температуре -4°C±2°C.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области пищевой промышленности и предназначено для оценки зараженности лососеобразных рыб метацеркариями N.s.schikhobalowi. Способ включает взятие биопробы и подготовку ее компрессионным методом или методом переваривания в искусственном желудочном соке, и подсчет количества личинок с использованием микроскопа.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано при анализе сыворотки венозной крови человека и животных методом жидкостной хроматографии, а также любым другим методом, непосредственным объектом исследования которого может являться водно-метанольный экстракт, получаемый из высушенной сыворотки крови.

Заявленное изобретение относится к области птицеводства. Способ включает разделку и обвалку потрошеных тушек птицы на 11 базовых частей 1) грудная (в т.ч.

Изобретение относится к области мясной промышленности и предназначено для определения видовой принадлежности, свежести и термического состояния мясного сырья. .
Изобретение относится к области животноводства и технологии производства говядины и предназначено для оценки и классификации говядины по качеству на группы PSE, RSE, DFD и NOR при жизни убойных животных.
Изобретение относится к области животноводства и технологии производства говядины и предназначено для оценки и классификации говядины по качеству на группы: PSE, DFD и NOR при жизни убойных животных.

Изобретение относится к мясной отрасти для производства мясных полуфабрикатов. .

Изобретение относится к методам определения качественных показателей мясного сырья, в частности оценки количества инъецированного рассола в отдельные части отрубов (далее уровня инжекции) мясного сырья.

Изобретение относится к аналитической химии и контролю качества мясных продуктов. .

Изобретение относится к области пищевой промышленности и предназначено для экспресс-контроля качества мяса и для классификации мяса и мясного сырья по группам PSE, DFD и NOR. Способ оценки качества мяса путем подготовки пробы исследуемого образца; предварительного получения трех монотонно убывающих функциональных зависимостей модуля полного электрического сопротивления мяса от частоты в диапазоне от низких до высоких частот для образцов мяса с признаками NOR, DFD и PSE и выбора из полученных зависимостей первой и второй фиксированных частот; измерения модулей полного электрического сопротивления образца на двух выбранных частотах и определения показателей качества по отношению измеренных значений модулей полного электрического сопротивления, отличается тем, что выбор первой и второй фиксированных частот измерения осуществляют путем определения общих интервалов функциональных зависимостей с выраженными динамическими изменениями модуля полного электрического сопротивления в зависимости от частоты, при условии, что хотя бы на одном из определенных интервалов зависимость не удовлетворяет условиям монотонности функции, что характеризует течение реакций с нарушением окислительно-восстановительных процессов, а о качестве мяса судят по формуле где k - безразмерный коэффициент; (Zf1)п - модуль полного электрического сопротивления образца мяса с поперечным расположением волокон, измеренный на первой частоте f1; (Zf1)в - модуль полного электрического сопротивления образца мяса с продольным расположением волокон, измеренный на первой частоте f1; (Zf2)п - модуль полного электрического сопротивления образца мяса с поперечным расположением волокон, измеренный на второй частоте f2; (Zf2)в - модуль полного электрического сопротивления образца мяса с продольным расположением волокон, измеренный на второй частоте, f2. При этом первую частоту выбирают из диапазона от 27 до 32 кГц, характеризующего процесс разрушения клеточных мембран и развитие окислительных процессов, ускоряющих дальнейшую деградацию клеточных культур, который проявляет себя в гармоническом колебании значений модулей полного электрического сопротивления исследуемого образца с нарастающей амплитудой в зависимости от частоты. Вторую частоту - из диапазона от 115 до 118 кГц, характеризующего интенсивность гликолитических превращений в процессе автолиза мышечной ткани, которая проявляется в динамике изменения значений модулей полного электрического сопротивлений исследуемого образца в зависимости от частоты. Вторая частота отличается по размеру от первой частоты не более чем в 4 раза. При этом при значении безразмерного коэффициента k≤1,3 устанавливают принадлежность мяса к качественной группе PSE, при значении k=1,4÷4,8 - качественной группе DFD, а при значении k≥1,9 - к качественной группе NOR. Использование заявленного изобретения обеспечивает достоверную классификацию мяса по группам NOR, PSE и DFD и снижение трудоемкости. 9 ил., 10 табл., 1 пр.

Изобретение относится к областям животноводства, экологии и ветеринарии, предлагается для использования в качестве прижизненного неинвазивного теста оценки степени содержания меди в мышечной ткани рыб. Способ заключается в определении в чешуе концентрации Mn и/или Cu методом атомно-эмиссионной спектрометрии. Рассчитывают уравнение регрессии, и по содержанию Mn и/или Cu в чешуе устанавливают концентрацию меди. Способ точен, атравматичен и неинвазивен, прост и удобен в использовании. 3 табл., 1 пр. .

Изобретение относится к рыбоводству, а именно к способу забора крови у рыб небольшой массы для последующего проведения физиолого-биохимических анализов. Для этого применяют дополнительные меры, основанные на стимулирующем воздействии на систему кровотока рыбы. Увеличение объема крови достигается за счет того, что перед отсечением хвостового стебля у рыбы проводят стимуляцию ее сердечной деятельности. Стимуляцию осуществляют путем регулярных массирующих и сдавливающих движений пальцев исследователя в области сердца изучаемой особи. Рыбу удерживают на весу головой вверх, покачивают вверх и вниз, вправо и влево. Это оказывает воздействие на движение крови к хвостовой артерии и объем забираемой крови увеличивается в 2 раза. Изобретение позволяет получить достаточное количество биологического материала для проведения обширного перечня физиолого-биохимических анализов крови рыб. 2 з.п. ф-лы, 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа определения остаточных количеств трифенилметановых красителей в мышечной ткани рыб. Сущность способа заключается в том, что производят извлечение аналитов из ткани смесью ацетонитрила и буфера с получением экстракта в результате центрифугирования, введение дихлорметана в полученный экстракт и перевод органической части экстракта в слой дихлорметана при перемешивании и центрифугировании с отделением надосадочного раствора. Перевод метаболитов в начальные формы красителей осуществляют путем введения в надосадочный раствор окислителя на основе 2,3-дихлоро-5,6-дициано-пара-бензохинона (ДДБ) с последующей очисткой смеси методом твердофазной экстракции. В качестве буфера при извлечении аналитов используют смесь раствора лимонной кислоты и натрия фосфорнокислого двузамещенного; перед введением дихлорметана в полученный экстракт добавляют расслаивающий агент; в качестве окислителя используют смесь ДДБ и 2,3,5,6-тетрахлор-п-бензохинона в молярном соотношении 1:3, процесс перевода метаболитов проводят в потоке азота, а при твердофазной экстракции используют гидрофильно-липофильный сбалансированный обращеннофазный сорбент. Использование способа позволяет с высокой точностью определить содержание остаточных количеств трифенилметановых красителей в мышечной ткани рыб. 1 з.п. ф-лы, 3 ил., 5 табл.

Изобретение относится к области мясной промышленности и предназначено для исследования мяса по показателю структуроформирования. Способ предусматривает измерение предельного напряжения сдвига θo, модуля упругости на сдвиг G и определение безразмерного показателя структуроформирования К как частного от деления предельного напряжения θo на сдвиг к модулю упругости на сдвиг G измельченного мяса говядины при переработке. Изобретение позволяет быстро и точно определить структуру мяса. 4 табл., 1 пр.
Наверх