Применение штамма бактерий bacillus cereus гиск №279 в качестве продуцента ингибитора цитокина фно - α

Изобретение относится к области микробиологии и касается применения штамма Bacillus cereus ГИСК №279 в качестве продуцента ингибитора цитокина ФНО-α. Штамм выделен из испражнений пациента с дисбактериозом кишечника и депонирован в Коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича под регистрационным номером 279. Изобретение может быть использовано для продуцирования ингибитора цитокина ФНО-α. 1 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к микробиологии. Штамм бактерий Bacillus cereus ГИСК №279 может быть использован для получения ингибитора цитокина ФНО-α.

Аналогов изобретения в патентной и научно-технической литературе не обнаружено.

Технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в получении средства для продуцирования ингибитора цитокина ФНО-α.

Указанный технический результат решается применением штамма бактерий Bacillus cereus ГИСК №279 в качестве продуцента ингибитора цитокина ФНО-α.

Штамм Bacillus cereus ГИСК №279 выделен из испражнений пациента с дисбактериозом кишечника при обследовании микробиоценоза дистального отдела толстого кишечника в 2004 году в лаборатории биомониторинга и молекулярно-генетических исследований Института клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской академии наук г. Оренбурга.

Полученный штамм Bacillus cereus ГИСК №279 депонирован в Коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича и имеет регистрационный номер 279.

Штамм Bacillus cereus ГИСК №279 характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.

Культурально-морфологические признаки.

Клетки представляют собой грамположительные, неподвижные палочки, образующие капсулу размером (0,3…1,0)×(0,6…6,0) мкм.

Мясопептонный агар (37°C, 48 часов). Образуют изолированные шероховатые колонии белого или серо-белого цвета.

Мясо-пептонный бульон (37°C, 48 часов). Без встряхивания вызывает равномерное помутнение и выпадение осадка при культивировании в течение 18-24 часов. При встряхивании на качалке среда приобретает равномерную мутность без осадка.

Физиолого-биохимические признаки.

Факультативный анаэроб.

Температурный диапазон роста 25-42°C. Оптимальная температура роста 28-39°C. Максимальная скорость роста при 37-39°C.

Оптимум pH 7,2-7,6.

Реакция Фогес - Проскауера - положительная, каталаза - положительный, маннит - отрицательный, ксилоза - отрицательный, арабиноза - отрицательный, глюкоза - положительный, желатина - положительный, крахмал - положительный, утилизация цитратов - положительный, уреаза - отрицательный, казеин - положительный, тирозин - положительный, редукция нитратов - положительная, лецитиназа - положительный, гемолиз - положительный.

Условия хранения культуры: при температуре 4°C после лиофильной сушки - срок хранения 12 месяцев; или выращенная в 0,3% МПА (pH 7,2-7,6) и залитая стерильным вазелиновым маслом - 3-5 месяцев.

Условия и состав среды для размножения - МПБ при Т 32-33°C (pH 7,2-7,6), 1,5% МПА при Т 37°C в течение 18-24 часов.

Штамм Bacillus cereus ГИСК №279 идентифицирован по «Определителю бактерий Берджи» (1997 г.) как штамм вида Bacillus cereus.

Известно использование штамма бактерий Bacillus cereus ГИСК №279 для исследования влияния алкилоксибензолов на ростовые и персистентные характеристики микроорганизмов (Гордеева С.В. Влияние алкилоксибензолов на ростовые и персистентные характеристики микроорганизмов. Автореферат. дисс., Оренбург, 2011, стр. 8-12).

Новое применение штамма бактерий Bacillus cereus ГИСК №279 стало возможным благодаря обнаруженному у него свойству продуцировать ингибитор цитокина ФНО-α. Новое свойство штамма бактерий Bacillus cereus ГИСК №279 было обнаружено авторами путем ряда экспериментов и его нельзя было предсказать заранее.

Уровень активности продуцируемого Bacillus cereus ГИСК №279 ингибитора цитокина ФНО-α определяли согласно известному способу определения антицитокиновой активности микроорганизмов (Бухарин О.В. и др. Антицитокиновая активность микроорганизмов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2011 - №4, с. 56-61).

Уровень активности ингибитора ФНО-α, продуцируемого штаммом Bacillus cereus ГИСК №279 выражают в процентах (%) инактивации цитокинов в опыте по сравнению с контролем.

Примеры осуществления изобретения

Пример 1

Бульонную культуру Bacillus cereus ГИСК №279 получают выращиванием данного штамма в пробирках в жидкой питательной среде следующего состава: пептон - 10,0 г.; NaCl - 5,0 г.; вода мясная - 1000,0 мл, pH 7,2-7,4. Температура 37°C, время инкубации 18-24 часа. Полученную бульонную культуру Bacillus cereus ГИСК №279 центрифугируют при 3000 оборотах в минуту в течение 20 минут.

Культуральную жидкость отделяют от бактериальных клеток стеклянной стерильной пипеткой в отдельную емкость. Данная культуральная жидкость представляет собой неочищенный препарат ингибитора цитокина ФНО-α.

Наличие и уровень активности полученного неочищенного препарата ингибитора цитокина ФНО-α определяют следующим образом: супернатант Bacillus cereus ГИСК №279 соинкубируют с раствором рекомбинантного цитокина («Sigma», ФНО-α - T6674-10UG) в соотношении 1:1 (опытные пробы).

В качестве контроля используют раствор цитокинов, внесенный в Schaedler-бульон (BBL, США).

Конечная концентрация цитокинов в опытных и контрольных пробах составляла для ФНО-α: 5, 50, 100, 200, 500 пг/мл.

Опытные и контрольные пробы инкубируют в течение 2 часов (37°C), реакцию останавливают, снижая температуру пробирок до +4С°, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин (+4°C) и отбирают супернатант.

Определение концентрации цитокинов в опытных и контрольных пробах проводят общепринятым иммуноферментным анализом с использованием реагентов «Цитокин» (СП-б, Россия).

Учет результатов проводят на фотометре Multiskan Labsystems (Финляндия) при длине волны 492 нм.

О наличии продуцируемого штаммом Bacillus cereus ГИСК №279 ингибитора цитокина ФНО-α судили по способности его супернатанта снижать концентрацию рекомбинантного цитокина в опыте по сравнению с контролем.

Уровень активности продуцируемого Bacillus cereus ГИСК №279 ингибитора цитокина ФНО-α определяли согласно известному способу определения антицитокиновой активности микроорганизмов (Бухарин О.В. и др. Антицитокиновая активность микроорганизмов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2011 - №4, с. 56-61).

Уровень активности ингибитора ФНО-α, продуцируемого штаммом Bacillus cereus ГИСК №279, составил при концентрации цитокина в среде от 5 пг/мл до 100 пг/мл - 100%, при 200 пг/мл - 80% и 500 пг/мл - 55%.

Пример 2

Аналогично примеру 1 проводили эксперименты по определению наличия и уровня активности ингибитора цитокина ФНО-α, продуцируемого штаммом Bacillus cereus ГИСК №279 (В. cereus ГИСК №279) и клиническими изолятами Bacillus sp.(В. cereus 1-11), выделенных из кишечного биотопа.

Результаты исследований приведены в таблице.

Как видно из таблицы, штамм бактерий Bacillus cereus ГИСК №279 имеет 100% уровень активности ингибитора цитокина ФНО-α при концентрации цитокина в среде от 5 пг/мл до 100 пг/мл, а у клинических изолятов бацилл (В. cereus 1-11) уровень активности ингибитора цитокина ФНО-α в среднем составлял: при концентрации цитокина в среде 5 пг/мл - 65±5,6%, при 50 пг/мл - 40,8±6,6%, при 100 пг/мл -34,8±5,6%. При создании концентрации цитокина в среде 200 пг/мл среди клинических изолятов бацилл только 1 штамм ингибировал 24% цитокина, при 500 пг/мл активность отсутствовала у всех клинических культур.

Уровень активности ингибитора ФНО-α у штамма Bacillus cereus ГИСК №279 сохранялся и при более высокой концентрации цитокинов: при 200 пг/мл его активность составляла 80%, а при 500 пг/мл уровень активности был равен 55%. Проведенные исследования свидетельствуют о большей продуктивности ингибитора ФНО-α штаммом Bacillus cereus ГИСК №279 по сравнению с клиническими изолятами Bacillus spp.

Таким образом, заявляемое изобретение позволяет применять штамм бактерий Bacillus cereus ГИСК №279 в качестве продуцента ингибитора цитокина ФНО-α.

Применение штамма бактерий Bacillus cereus ГИСК №279 в качестве продуцента ингибитора цитокина ФНО-α.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой вариант субтилизина для применения в очистке, представляющий собой последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 5.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой выделенный вариант субтилизина Bacillus. Изобретение относится также к выделенной нуклеиновой кислоте, кодирующей вариант субтилизина, вектору экспрессии, содержащему нуклеиновую кислоту, клетке-хозяину, способной экспрессировать вариант субтилизина, а также к чистящей композиции, содержащей вариант субтилизина и способу очистки.

Настоящее изобретение относится к биохимии и представляет собой детергентную композицию, которая включает вариант субтилизина, имеющий аминокислотную последовательность, которая приведена в SEQ ID NO 1, и по меньшей мере один дополнительный ингредиент, выбранный из: i) средств для отбеливания, которые выбраны из перкарбонатов, персульфатов и органических надкислот, ii) аминокарбоксилатов, или iii) сульфированных полимеров, или iv) фосфорорганических кислот или их солей и их смесей.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой варианты субтилизина, сохраняющие его активность. Изобретение относится также к чистящей композиции, содержащей вариант субтилизина, и к способу очистки поверхности и/или изделия, включающего ткань, с помощью указанной композиции.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен вариант термолизина, обладающий повышенной эффективностью по сравнению с термолизином дикого типа.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа мытья посуды. Охарактеризованный способ заключается в обеспечении композиции для мытья посуды и посуды, нуждающейся в очистке, приведении указанной посуды в контакт с указанной композицией для мытья посуды при условиях, эффективно обеспечивающих очистку указанной посуды, где указанная композиция для мытья посуды содержит модифицированный субтилизин, где указанный модифицированный субтилизин, по меньшей мере, на 70% гомологичен последовательности AQSVPWGISRVQAPAAHNRGLTGSGVKVAVLDTGISTHPDLNIRGGASFVPGEPSTQDGNGHGTHVAGTIAALNNSIGVLGVAPNAELYAVKVLGASGSGSVSSIAQGLEWAGNNGMHVANLSLGSPSPSATLEQAVNSATSRGVLVVAASGNSGAGSISYPARYANAMAVGATDQNNNRASFSQYGAGLDIVAPGVNVQSTYPGSTYASLNGTSMATPHVAGAAALVKQKNPSWSNVQIRNHLKNTATSLGSTNLYGSGLVNAEAATR и содержит (i) замену G116V и, по меньшей мере, одну дополнительную мутацию или (ii) замену S126R.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой выделенный модифицированный полинуклеотид, кодирующий модифицированную полноразмерную протеазу. При этом часть указанного модифицированного полинуклеотида, которая кодирует про-участок указанной полноразмерной протеазы, содержит мутацию, кодирующую замену в одном аминокислотном положении, выбранном из положений, эквивалентных аминокислотным положениям 28-108 и 109 SEQ ID NO:5, 13 или 244, где указанный полинуклеотид имеет нуклеотидную последовательность, идентичную, по меньшей мере, приблизительно на 95% полинуклеотидной последовательности SEQ ID NО:4, 12 или 243 с учетом вырожденности генетического кода, где указанная модифицированная полноразмерная протеаза представляет собой сериновую протеазу, где указанная модифицированная полноразмерная протеаза представляет собой щелочную сериновую протеазу, полученную из предшественника щелочной сериновой протеазы дикого типа, где указанный предшественник щелочной сериновой протеазы представляет собой щелочную сериновую протеазу В.

Изобретение относится к области биотехнологии. .
Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и касается получения нового штамма бактерий, устойчивого к стрептомицину продуценту щелочной внеклеточной рибонуклеазы.

Изобретение относится к области энзимологии и белковой инженерии и может быть использовано в различных отраслях народного хозяйства, которые производят продукцию, содержащую добавки фермента с протеолитической активностью.

Предложены штамм Lactobacillus plantarum ВКПМ В-12076 и штамм Lactobacillus brevis ВКПМ В-12077, способные к синтезу гамма-аминомасляной кислоты и обладающие пробиотическими свойствами. Штаммы выделены из желудочно-кишечного тракта человека и депонированы в ВКПМ.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для рекомбинантного получения α5-интерферона. Клетку E.

Изобретение относится к применению штамма Lactococcus lactis NCC 2287 (SL131; CNCM-I4154) и/или Lactococcus lactis NCC 2180 (SL60; CNCM-I4199) для производства полноценной пищевой композиции. Упомянутая композиция уменьшает симптомы аллергических реакций, возникающих в результате воздействия пищевых, находящихся в воздухе или кожных аллергенов у пациентов с аллергиями, вызванными соответственно пищевыми, находящимися в воздухе или кожными аллергенами.

Изобретение относится к области микробиологии. Предложен бактериальный штамм Pseudomonas denitrificans ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» В-1299.

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Предложен новый бактериальный штамм Pseudomonas delhiensis KТ-13 ВКПМ В-11400 - деструктор нефти и нефтепродуктов.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения левана микробиологическим способом. Способ предусматривает внесение штамма микроорганизма Azotobacter vinelandii штамм Д-08 в питательную среду, приготовленную путем разведения мелассы дистиллированной водой до концентрации 7 или 10% с последующим культивированием при температуре 28-30°C в течение 72 часов в термостатируемом шейкере при 250 об/мин.

Изобретение относится к клинической и санитарной микробиологии и может быть использовано при исследовании различного биологического материала, а также объектов окружающей среды на наличие как патогенных, так и условно-патогенных энтеробактерий.

Изобретение относится к микробиологии, а именно к санитарно-гигиеническому контролю за инфицированностью Listeria monocytogenes морской воды и морепродуктов. Способ определения сапрофитных бактерий, стимулирующих рост Listeria monocytogenes в морских микробных сообществах, предусматривает засев «газоном» одной половины чашки Петри с агаризованной средой СММ испытуемыми культурами, а другой половины чашки с ГРМ-агаром - тест-культурами листерий.

Заявленная группа изобретений относится к биотехнологии. Штамм Lactobacillus jensenii депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов ИБФМ им Г.К.
Изобретение относится к области биохимии, в частности к биологически активным соединениям, проявляющим антибактериальную активность. Заявлен природный гликопептидный антибиотик ИНА 5812, который может быть применен в качестве лекарственного препарата в медицинской практике.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ борьбы с размножением Listeria monocytogenes, а также применение дезинфицирующего средства. Способ включает добавление штамма Willaertia magna, депонированного под номером РТА 7824 в АТСС, или штамма Willaertia magna, депонированного под номером РТА 7825 в АТСС, к потоку газа, потоку жидкости или твердой поверхности. Дезинфицирующее средство содержит штамм Willaertia magna, депонированный под номером РТА 7824 в АТСС, или штамм Willaertia magna, депонированный под номером РТА 7825 в АТСС, применяемого в качестве биоцида к Listeria для обработки потока газа, потока жидкости или твердой поверхности. Изобретения обеспечивают эффективную борьбу с размножением и контаминацией листериоза. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области микробиологии и касается применения штамма Bacillus cereus ГИСК №279 в качестве продуцента ингибитора цитокина ФНО-α. Штамм выделен из испражнений пациента с дисбактериозом кишечника и депонирован в Коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича под регистрационным номером 279. Изобретение может быть использовано для продуцирования ингибитора цитокина ФНО-α. 1 табл., 2 пр.

Наверх