Способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы у индивидуумов в зависимости от наличия/отсутствия сопутствующих неинфекционных заболеваний глаз



Способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы у индивидуумов в зависимости от наличия/отсутствия сопутствующих неинфекционных заболеваний глаз
Способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы у индивидуумов в зависимости от наличия/отсутствия сопутствующих неинфекционных заболеваний глаз
Способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы у индивидуумов в зависимости от наличия/отсутствия сопутствующих неинфекционных заболеваний глаз
Способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы у индивидуумов в зависимости от наличия/отсутствия сопутствующих неинфекционных заболеваний глаз

Владельцы патента RU 2580306:

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") (RU)

Изобретение относится к области медицинской диагностики и касается способа прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы в зависимости от наличия/отсутствия сопутствующей неинфекционной патологии глаз у индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России. Способ включает забор крови и выделение ДНК из периферической венозной крови с дальнейшим проведением анализа полиморфизмов генов - VEGF-A с.-958C>T, IGF-1 c.-1410T>C, TGFβ-1 c.-1347T>C, IGFR-1 g.99181663C>T. Прогнозируют повышенный риск развития первичной открытоугольной глаукомы у индивидуумов без сопутствующей неинфекционной патологии глаз в случае выявления аллеля T IGFR-1 либо комбинации аллеля С VEGF-A с аллелем Т IGFR-1 либо комбинации аллеля С VEGF-A с аллелем Т IGF-1 с аллелем Т TGFβ-1 либо комбинации аллеля Т VEGF-A с аллелем Т IGF-1 с аллелем С TGFβ-1. Прогнозируют низкий риск развития ПОУГ у индивидуумов без сопутствующей патологии глаз при выявлении генотипа CС IGFR-1 и сочетания генетических вариантов Т VEGF-A и СС IGF-1. Прогнозируют повышенный риск развития первичной открытоугольной глаукомы среди индивидуумов с сопутствующей патологией глаз в случае выявления комбинации аллелей С IGF-1 с С TGFβ-1 либо комбинации аллеля С VEGF-A с генотипом ТС IGF-1 с аллелем С TGFβ-1. Прогнозируют низкий риск развития данного заболевания у индивидуумов с сопутствующей патологией глаз при выявлении генотипа ТТ TGFβ-1. 6 ил.

 

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы в зависимости от наличия/отсутствия сопутствующей неинфекционной патологии глаз.

Глаукома - это хроническая патология глаз различной этиологии, характеризующаяся периодическим или постоянным повышением внутриглазного давления (далее ВГД) и сопровождающаяся прогрессирующей оптической нейропатией, которая проявляется атрофией зрительного нерва (с экскавацией) и характерными изменениями поля зрения [Eгoрoв E.А. Глаукoма. Нациoнальнoe рукoвoдствo /пoд рeд. E.А. Eгoрoва. - М.: ГЭOТАР-Мeдиа. - 2013. - 824 с.]. В настоящее время по данным ВОЗ в мире около 68 млн человек страдает глаукомой. Число ослепших вследствие глаукомы составляет 5,2 - 9,1 млн человек, и их число неуклонно увеличивается [Pаscolini D. Globаl estimаtes of visuаl impаirment: 2010 /Pаscolini D., Mаriotti S.P. //British Journаl of Ophthаlmology. - 2012. - Vol.96. - no. 5. - P. 614-618].

Первичная открытоугольная глаукома (ПОУГ) - это форма глаукоматозного процесса, встречающаяся наиболее часто (от 72,3 до 96,1% всех видов глауком) [Глаукома /А.П. Нестеров. - М.: ООО "Медицинское информационное агентство", 2008. - 360 с.]. ПОУГ является мультифакториальным заболеванием [Bаnerjee D. Comprehensive аnаlysis of myocilin vаriаnts in eаst Indiаn POАG pаtients /Bаnerjee D., Bhаttаchаrjee А., Pondа А., Rаy K. //Moleculаr Vision. - 2012. Vol.18. - P. 1548-1557], в этиопатогенезе которого важная роль принадлежит факторам роста: VEGF-A, IGF-1, TGFβ-1, IGFR-1, регулирующим продукцию внеклеточного матрикса, участвующим в процессах репарации, влияющим на ангиогенез, пролиферацию и апоптоз клеток [Fingert J. Primаry open-аngle glаucomа genes /Fingert J.H. //Eye. - 2011. Vol.25. - no. 5. - P. 587-595].

Глаукома, миопия, катаракта и их сочетания являются доминирующими в офтальмопатологии, все три этих неинфекционных заболевания взаимно отягощают друг друга, вызывая значительные изменения органа зрения [Eричeв В.П. Ранняя диагнoстика глаукoмы: нe сущeствуeт прoстых и надeжных рeшeний //Глаукoма: прoблeмы и рeшeния. Сб. научнo-практ. кoнф. МНИИ Гб им. Гeльмгoльца. - 2004. - С. 43-46]. Помутнение хрусталика - катаракта является наиболее частым (от 7 до 81%) сопутствующим патологическим состоянием при ПОУГ. Первичная открытоугольная глаукома и катаракта относятся к возрастзависимым заболеваниям, их частота растет по мере старения организма [Курышeва Н.И. Патoмoрфoлoгичeскиe oсoбeннoсти катарактальнoгo хрусталика у бoльных глаукoмoй /Н.И. Курышeва, А.А. Федoрoв, В.П. Eричeв //Вeстн. oфтальмoлoгии. - 2000. - №2. - С. 13-16]. Риск развития ПОУГ у индивидуумов с миопией в 2-3 раза выше, чем у лиц с немиопической рефракцией, вне зависимости от других факторов риска глаукомы [Пoдкoлoдная O.А. Испoльзoваниe кoмпьютeрнoй систeмы АNDCell для рeкoнструкции и анализа ассoциативных сeтeй пoтeнциальных мeханизмoв взаимoсвязи миoпии и глаукoмы /Пoдкoлoдная O.А., Яркoва E.Э., Дeмeнкoв П.С., Кoнoвалoва O.С. //Вeстник ВOГиС. - 2010. - Тoм 14. - №1. - С. 106-115].

Трансформирующий фактор роста бета TGFβ - это большое семейство структурно похожих многофункциональных цитокинов, имеющих широкий спектр биологической активности, включая влияние на рост и дифференцировку клеток, фиброгенез, ремоделирование внеклеточного матрикса, апоптоз [Mаssаgué J. How cells reаd TGF-β signаls /Mаssаgué J. //Nаture Rev. Mol. Cell. Biol. - 2000. - Vol.1, №3. - P. 169-178]. Наиболее изученной у человека является изоформа TGFβ-1, которая синтезируется конъюнтивальным и роговичным эпителием, лимбальной зоной, беспигментным эпителием цилиарного тела, радужной оболочкой, клетками трабекулярной сети и сетчаткой [Fuchshofer R. The role of TGF-β in the pаthogenesis of primаry open-аngle glаucomа. /Fuchshofer R., Tаmm E. //Cell аnd Tissue Reseаrch. - Jаnuаry 2012. - Volume 347, Issue 1. - P. 279-290].

Ген TGFβ-1 расположен на хромосоме 19. В генах изоформ TGFβ имеется одна основная последовательность нуклеотидов, обеспечивающая главную регуляторную функцию этого семейства цитокинов [Shi Y. Mechаnisms of TGF-β signаling from cell membrаne to the nucleus /Shi Y., Mаssаgué J. //Cell. - 2003. - Vol.113, №6. - P. 685-700].

Инсулиноподобный фактор роста-1 IGF-1 - один из важнейших членов семейства инсулиноподобных ФР, осуществляющих регуляцию процессов роста, дифференцировки, развития клеток и тканей. IGF-1 состоит из 70 аминокислот в одной цепочке с тремя внутримолекулярными дисульфидными мостиками [Cаppolа А. Insulin-like growth fаctor I аnd interleukin-6 contribute synergisticаlly to disаbility аnd mortаlity in older women /Cаppolа А., Xue Q., Ferrucci L. et аl. //J. Clin. Endocrinol. Metаb. - 2003. - Vol.88. №5. - P. 2019-2025].

Ген IGF-1 включает шесть экзонов, локализован на длинном плече хромосомы 12 человека [Zhаng H. Insulin-like growth fаctor binding protein-1 (IGFBP-1) inhibit breаst cаncer cell motility /Zhаng H., Yee D. //Cаncer Res. - 2002. - Vol.62. - P. 4369-4375].

Рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 IGFR-1 является продуктом экспрессии гена, расположенного у человека на дистальном участке длинного плеча 15 хромосомы (15 q25-26), структурно схож с геном рецептора инсулина и состоит из 22 экзонов. Ген рецептора IGF-1 экспрессируется практически во всех тканях [Bаsergа R. The IGF-1 receptor in cаncer biology. /Bаsergа R., Peruzzi F., Reiss K. //Int. J. Cаncer. - 2003. - Vol.107. - P. 873-877].

IGF-1 и его рецептор IGFR-1 регулируют процессы роста и дифференцировки во внутриглазной жидкости, эпителиоцитах роговицы и хрусталика, стекловидном теле, клетках сетчатки [Ko J. IGF-1 releаsed by corneаl epitheliаl cells induces up-regulаtion of N-cаdherin in corneаl fibroblаsts. /Ko J., Yаnаi R., Nishidа T. //J. Cell. Physiol. - 2009. - vol. 221(1). - P. 254-261].

Cосудистый эндотелиальный фактор роста VEGF - семейство биологически активных, главным образом гомодимерных белков, имеющих общую структурную архитектуру цистеинового узла (VEGF-A, -B, -C, -D, -E), оказывающих влияние на развитие кровеносных сосудов [Iyer S. The cystine signаture аnd moleculаr-recognition processes of the vаsculаr endotheliаl growth fаctor fаmily of аngiogenic cytokines. /Iyer S. et аl. //FEBS Journаl. - 2011. - Vol.278. - P. 4304-4322].

VEGF связывается с эндотелиальными клетками сосудов трансмембранными тирозинкиназными рецепторами, запуская сигнальный каскад, стимулирующий их рост и пролиферацию [Ferrаrа N. The biology of VEGF аnd its receptors /Ferrаrа N., Gerber H.P., Le Couter J. //Nаt. Med. - 2003. - Vol.9(6). - P. 669-76].

Ген VEGF-А находится на коротком плече 6 хромосомы в локусе 6p21.3, состоит из восьми экзонов, разделенных семью интронами, имеющих альтернативный сплайсинг, и контролирует синтез целой группы белков. Экспрессия гена VEGF-А модулируется различными факторами, в частности цитокинами, липополисахаридами, гормонами и гипоксией. Экспрессия VEGF-А весьма вариативна, описано не менее 25 различных полиморфизмов, которые ее определяют [Heist R. VEGF polymorphisms аnd survivаl in eаrly-stаge non-smаll cell lung cаncer. /Heist R., Zhаi R., Liu G. //Journаl of clinicаl oncology. - 2008. - Vol.26. - P. 856-62].

Для оценки сложившейся патентной ситуации был выполнен поиск по охранным документам за период с 1990 по 2014 гг. Анализ документов производился по направлению: способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы в зависимости от сопутствующих неинфекционных заболеваний глаз на основе молекулярно-генетических данных в зависимости от полиморфных маркеров генов факторов роста.

Источники информации: сайты Федерального института промышленной собственности http://fips.ru.

За прототип выбран патент РФ №2483306 (опубликован 27.05.2013), в котором описан способ прогнозирования заболевания первичной открытоугольной глаукомы путем забора слезной жидкости и крови, исследования слезной жидкости и сыворотки крови методом иммуноферментного анализа с использованием специфических тест-систем. Повышенные уровни металлопротеиназы-9 (ММР-9), показатели которой превышают 52,5 нг/мл в слезной жидкости и 274,49 нг/мл в сыворотке крови; повышенные уровни комплекса металлопротеиназы-9 с ее тканевым ингибитором (MMP-9/TIMP-1), показатели которого превышают 0,19 нг/мл в слезной жидкости и 4,93 нг/мл в сыворотке крови, и повышенные уровни секреторного иммуноглобулина A (sIgA), показатели которого превышают 47,38 мг/л в слезной жидкости и 2,1 г/л в сыворотке крови, являются критериями, диагностирующими первичную открытоугольную глаукому. Этот способ может быть использован для ранней диагностики первичной открытоугольной глаукомы у пациентов, страдающих миопией, гипертонической болезнью, сахарным диабетом 2 типа и относящихся к группе риска развития заболевания.

К недостаткам данного способа относится то, что он не учитывает роль генетических полиморфизмов и кроме того предусматривает необходимость проводить исследования двух биологических проб: слезной жидкости и сыворотки крови.

Задачей настоящего исследования является расширение арсенала способов диагностики ПОУГ.

Технический результат использования изобретения - получение критериев оценки риска развития ПОУГ в зависимости от наличия/отсутствия сопутствующей неинфекционной патологии глаз, например миопия и/или катаракта, для индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, на основе данных о генетических полиморфизмах: VEGF-A с.-958C>T (rs 833061), IGF-1 c.-1410T>C (rs 35767), TGFβ-1 c.-1347T>C (rs 1800469), IGFR-1 g.99181663 C>T (rs 4965425).

В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы в зависимости от наличия/отсутствия сопутствующей патологии глаз, включающий:

• выделение ДНК из периферической венозной крови;

• анализ полиморфизмов генов VEGF-A с.-958C>T (rs 833061), IGF-1 c.-1410T>C (rs 35767), TGFβ-1 c.-1347T>C (rs 1800469), IGFR-1 g.99181663 C>T (rs 4965425);

• прогнозирование повышенного риска развития первичной открытоугольной глаукомы среди индивидуумов без сопутствующей патологии глаз в случае выявления генетического варианта T IGFR-1 либо комбинации аллеля С VEGF-A с аллелем Т IGFR-1 либо комбинации аллеля С VEGF-A с аллелем Т IGF-1 и с аллелем Т TGFβ-1 либо комбинации аллеля Т VEGF-A с аллелем Т IGF-1 и с аллелем С TGFβ-1;

• прогнозирование низкого риска развития данного заболевания у индивидуумов без сопутствующей патологии глаз при выявлении генотипа CС IGFR-1 и сочетания аллеля Т VEGF-A с генотипом СС IGF-1;

• прогнозирование повышенного риска развития первичной открытоугольной глаукомы среди индивидуумов с сопутствующей патологией глаз в случае выявления комбинации аллеля С IGF-1 с аллелем С TGFβ-1 либо комбинации аллеля С VEGF-A с генотипом ТС IGF-1 и с аллелем С TGFβ-1;

• прогнозирование низкого риска развития данного заболевания у индивидуумов с сопутствующей патологией глаз при выявлении генотипа ТТ TGFβ-1.

Новизна и изобретательский уровень заключается в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза риска развития первичной открытоугольной глаукомы у индивидумов в зависимости от наличия/отсутствия сопутствующей неинфекционной патологии глаз по данным о генетических вариантах локусов VEGF-A с.-958C>T (rs 833061), IGF-1 c.-1410T>C (rs 35767), TGFβ-1 c.-1347T>C (rs 1800469), IGFR-1 g.99181663 C>T (rs 4965425) и их сочетаний.

Изобретение охарактеризовано на следующих фигурах.

На фиг. 1 представлена дискриминация аллелей по локусу VEGF-A с. -958C>T (rs 833061), где - CС VEGF-A, - ТТ VEGF-A, - СТ VEGF-A, - отрицательный контроль;

На фиг. 2 представлена дискриминация аллелей по локусу IGF-1 c.-1410T>C (rs 35767), где - СC IGF-1, - TТ IGF-1, - ТС IGF-1, - отрицательный контроль;

На фиг. 3 представлена дискриминация аллелей по локусу TGFβ-1 c.-1347T>C (rs 1800469), где - СC TGFβ-1, - TТ TGFβ-1, - ТС TGFβ-1, - отрицательный контроль;

На фиг. 4 представлена дискриминация аллелей по локусу IGFR-1 g.99181663C>T (rs 4965425), где - CС IGFR-1, - ТT IGFR-1, - СТ IGFR-1, - отрицательный контроль;

На фиг. 5 в таблице 1 представлен сравнительный анализ сочетаний аллелей и генотипов полиморфных маркеров факторов роста у пациентов ПОУГ и в контрольной группе без сопутствующей патологии глаз;

На фиг. 6 в таблице 2 представлен сравнительный анализ сочетаний аллелей и генотипов полиморфных маркеров факторов роста у пациентов ПОУГ и в контрольной группе с сопутствующей патологией глаз.

На фигурах 1-4 две полосы, вертикальная и горизонтальная, делят график на четыре секции: одна для каждого гомозиготного состояния, одна для гетерозиготного состояния и секция без реакции. Присвоение генотипов неизвестным образцам определяется вычерчиванием уровня относительной флуоресценции (далее УОФ) для одного флуорофора на оси x, относительно УОФ для другого флуорофора на оси y на диаграмме дискриминации аллелей. Зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю Т, зонд с красителем FAM - аллелю С.

• Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и правее вертикальной полосы, генотип гетерозиготен (СТ).

• Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и левее вертикальной полосы, генотип гомозиготен по аллелю Т (УОФ аллеля Т отложены по оси y).

• Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и правее вертикальной, генотип гомозиготен по аллелю С (УОФ аллеля С отложены по оси x).

• Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и левее вертикальной, определение генотипа невозможно: в данном случае неопределенный образец - отрицательный контроль.

Способ осуществляют следующим образом.

ДНК выделяют из образцов периферической венозной крови индивидуумов в 2 этапа. На первом этапе 4 мл крови смешивают с лизирующим буфером, в котором содержится 320 г сахарозы, 1% тритон Х - 100, 5 мл MgCl2, 10 мл трис - HCl (pH=7,6), центрифугируют 20 минут при температуре 4°С на 4000 об/мин. Далее добавляют 4 мл ЭДТА - Soline, 400 мкл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10 мг/мл) и инкубируют в течение 16 часов при 40°С.

На втором этапе из уже очищенного лизата производят экстракцию ДНК равными долями фенола, фенол-хлороформа, хлороформа и центрифугирование в течение 10 минут при 4000 об/мин. После центрифугирования водный слой удаляют и добавляют два объема охлажденного этанола 96%. Полученную ДНК растворяют в деионизованной, бидистиллированной воде, хранят при температуре -20°С и в дальнейшем используют для проведения полимеразной цепной реакции.

Анализ генетических полиморфизмов VEGF-A с.-958C>T, IGF-1 c.-1410T>C, TGFβ-1 c.-1347T>C, IGFR-1 g.99181663C>T осуществляют методом ПЦР синтеза ДНК, которую проводят на амплификаторе CFX96 (Bio-Rad Laboratories, USA) с использованием олигонуклеотидных зондов и праймеров для ПЦР фирмы «Синтол» (фиг. 1-4). Генотипирование осуществляют с использованием программного обеспечения «CFX Manager™».

Возможность использования предложенного способа для оценки риска развития первичной открытоугольной глаукомы в зависимости от наличия/отсутствия миопии и катаракты у индивидуумов подтверждает анализ результатов наблюдений 252 человек (450 глаз) с ПОУГ и 191 человек (382 глаза) контрольной группы. Формирование выборок больных и контроля осуществлялись на базе офтальмологического отделения Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа и медицинского центра микрохирургии глаза ООО «Ковчег».

Исследуемые группы были сформированы из индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья РФ и не имеющих родства между собой. В группу больных включались пациенты с ранее установленным или впервые выявленным диагнозом ПОУГ, подтвержденного клиническими, инструментальными и лабораторными методами обследования. Диагноз глаукома устанавливался по основным диагностическим критериям: повышенное ВГД, наличие глаукоматозной экскавации ДЗН, характерные изменения ППЗ [Eгoрoв E.А. Глаукoма. Нациoнальнoe рукoвoдствo /пoд рeд. E.А. Eгoрoва. - М.: ГЭOТАР-Мeдиа. - 2013. - 824 с.].

Группа контроля была сформирована из индивидуумов, не имеющих острых и хронических заболеваний глаз, у которых отсутствовали какие-либо признаки глаукомы, а также они не имели тяжелых соматических патологий, в том числе приводящих к поражениям глаз.

Распределение выборки больных ПОУГ (450 глаз) и группы контроля (382 глаза) по наличию или отсутствию анализируемого признака показало, что среди больных ПОУГ сопутствующая неинфекционная патология глаз встречалась в 72% случаев, тогда как в контроле этот показатель был в 3,2 раза меньше и составлял 22,51% (р=0,0005). Сопутствующая патология глаз при ПОУГ (296 глаз) и в контрольной группе (126 глаз) наиболее часто была представлена начальной катарактой - 29,11% и 6,28%, соответственно, и миопией слабой степени - 8,89% и 8,38% соответственно.

Типирование молекулярно-генетических маркеров осуществлялось в лаборатории «Молекулярной генетики человека» медицинского института Белгородского государственного национального исследовательского университета.

Формирование базы данных и статистические расчеты осуществлялись с использованием программы «STATISTICA 6.0».

Выявление ассоциаций генетических вариантов анализируемых локусов с формированием ПОУГ проводили с помощью таблиц сопряженности 2×2, на основе вычисления критерия χ2 (хи-квадрат) с поправкой Йетса на непрерывность.

Характер ассоциаций различных аллелей и генотипов с ПОУГ оценивали при помощи показателя отношения шансов (OR) [Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA /О.Ю. Реброва. - [3-е изд.]. - Москва: Медиа Сфера, 2006. - 305 с.]. При проведении множественных сравнений использовали поправку Бонферрони - производили перерасчет уровня значимости р для множественных парных сравнений по формуле: рcor=р×n, где р - полученный уровень статистической значимости, n - количество парных сравнений. За статистически значимый уровень принимали рbonf ≤ 0,05.

Изучение роли комбинаций генетических вариантов VEGF-A с.-958C>T, IGF-1 c.-1410T>C, TGFβ-1 c.-1347T>C, IGFR-1 g.99181663C>T в формирование ПОУГ в зависимости от наличия сопутствующей неинфекционной патологии глаз проводилось с помощью программного обеспечения АРSampler [http://sources.redhat.com/cygwin/], использующего метод Монте-Карло марковскими цепями и байесовскую непараметрическую статистику. Для валидации найденных ассоциаций использовался точный критерий Фишера (Pf) и пермутационный анализ (Pperm). Значение Pperm для аллеля или аллельного сочетания определяется как вероятность того, что после сбалансированного перемешивания меток «больной ПОУГ» - «контроль» (100 пермутаций) и нового поиска с помощью APSampler оценка значимости ассоциации с ПОУГ произвольно найденного аллеля или аллельного сочетания будет не хуже, чем эта оценка для исходного [Царева E.Ю. Фармакoгeнoмныe исслeдoвания эффeктивнoсти лeчeния рассeяннoгo склeрoза иммунoмoдулирующими прeпаратами: диссeртация... кандидата биoлoгичeских наук: 03.01.03 /Царева Eкатeрина Юрьeвна //- Мoсква, 2012. - 140 с.]. Значимыми считали различия сравниваемых частот если Pf<0,05 и Pperm ≤ 0,005, при условии, что значения 95% CI для OR не пересекают 1.

Установлено, что генетический вариант T IGFR-1 (64,63%) и комбинации аллелей С VEGF-A, Т IGFR-1 (75,73%) либо аллелей С VEGF-A, Т IGF-1, Т TGFβ-1 (17,09%) либо аллелей Т VEGF-A, Т IGF-1, С TGFβ-1 (29,06%) встречаются среди больных ПОУГ чаще, чем в контроле (54,47%, χ2=4,78, p=0,03, ОR=1,53, 95%CI 1,10-2,20; 49,58%, pperm=0,000001, ОR=3,17, 95%CI 1,89-5,32; 7,02%, pperm=0,003, ОR=2,72, 95%CI 1,37-5,43 и 16,11%, pperm=0,003, ОR=2,13, 95%CI 1,26-3,61, соответственно) и являются факторами риска формирования ПОУГ у индивидуумов без сопутствующей патологии глаз (ОR>1,0). Наоборот, среди пациентов контрольной группы наблюдается более высокая частота генотипа CС IGFR-1 (22,18%) и сочетания аллеля Т VEGF-A и генотипа СС IGF-1 (58,54%) по сравнению с группой больных ПОУГ без сопутствующей патологии глаз (9,43%, χ2=7,28, p=0,01, рbonf=0,03, ОR=0,36; 95%CI 0,17-0,78 и 43,70%, pperm=0,003, ОR=0,55; 95%CI 0,35-0,85) (фиг. 5).

Сочетание генетических вариантов С IGF-1 и С TGFβ-1 встречается среди больных ПОУГ с сопутствующей патологией глаз с наибольшей частотой (85,99%) по сравнению с группой контроля (72,31%, pperm=0,003, ОR=2,72, 95%CI 1,25-4,42) и является фактором риска развития ПОУГ у индивидуумов с сопутствующей патологией глаз. Обращает внимание то, что комбинация из трех генетических вариантов С VEGF-A, ТС IGF-1 и С TGFβ-1 встречается среди больных ПОУГ (17,59%) в 11,3 раз чаще, чем в контроле (1,56%, pperm=0,0002, ОR=13,44, 95%CI 1,82-99,08). Данное сочетание исследуемых полиморфизмов также повышает риск развития ПОУГ у индивидуумов с сопутствующей патологией глаз. Выявлена более низкая частота генотипа ТТ TGFβ-1 (9,49%) у пациентов с ПОУГ по сравнению с группой контроля (21,54%, χ2=6,52, p=0,01, рbonf=0,03, ОR=0,38; 95%CI 0,18-0,82) (фиг. 6), что свидетельствует о низком риске развития данного заболевания у индивидуумов с сопутствующей патологией глаз.

Таким образом, резюмируя полученные данные, можно сделать вывод о значимом вкладе комбинаций полиморфных вариантов генов факторов роста в формирование ПОУГ в зависимости от наличия или отсутствия сопутствующих неинфекционных заболеваний глаз. Подверженность к формированию ПОУГ среди индивидуумов без сопутствующей патологии глаз определяют генетический вариант T IGFR-1 (OR=1,53) и комбинации С VEGF-A, Т IGFR-1 (ОR=3,17), С VEGF-A, Т IGF-1, Т TGFβ-1 (ОR=2,72) и Т VEGF-A, Т IGF-1, С TGFβ-1 (ОR=2,13). Генотип CС IGFR-1 (OR=0,36) и комбинация генетических маркеров Т VEGF-A с СС IGF-1 (ОR=0,55) оказывают протективное влияние на формирование ПОУГ у индивидуумов без сопутствующей патологии глаз. Предрасположенность к развитию ПОУГ у индивидуумов с сопутствующей патологией глаз определяют комбинации С IGF-1 с С TGFβ-1 (ОR=2,72) и С VEGF-A, ТС IGF-1, С TGFβ-1 (ОR=13,44). Выявлено, что генотип ТТ TGFβ-1 снижает риск развития ПОУГ у индивидуумов с сопутствующей патологией глаз (OR=0,38).

Примеры, подтверждающие осуществимость предложенного изобретения.

1. Сочетание генетических вариантов С IGF-1 с С TGFβ-1 и С VEGF-A с ТС IGF-1 и С TGFβ-1 было выявлено у пациента А., страдающего миопией слабой степени, и у пациента Б., имеющего возрастную катаракту. При дальнейшем детальном офтальмологическом обследовании у пациентов была обнаружена ПОУГ.

2. Генотип ТТ TGFβ-1 был выявлен у пациента В., имеющего миопию средней степени и возрастную катаракту. При дальнейшем динамическом наблюдении ПОУГ у него не обнаружена.

3. Генетический вариант T IGFR-1 был выявлен у 106 индивидуумов без сопутствующей неинфекционной патологии глаз. При дальнейшем детальном офтальмологическом обследовании у них была обнаружена ПОУГ.

4. Комбинации аллелей С VEGF-A с Т IGFR-1; комбинации аллеля С VEGF-A с аллелем Т IGF-1 и с аллелем Т TGFβ-1; комбинации аллеля Т VEGF-A с аллелем Т IGF-1 и с аллелем С TGFβ-1 были выявлены у 78 индивидуумов без сопутствующей миопии и катаракты. При дальнейшем детальном офтальмологическом обследовании у них была обнаружена ПОУГ.

5. Генотип CС IGFR-1 был выявлен у пациента Д., не имеющего сопутствующих неинфекционных заболеваний глаз. При дальнейшем динамическом наблюдении ПОУГ у него не обнаружена.

6. Сочетание генетических вариантов Т VEGF-A и СС IGF-1 было обнаружено у 52 индивидуумов без сопутствующей неинфекционной патологии глаз. При дальнейшем офтальмологическом обследовании ПОУГ у них не обнаружена.

Использование данного способа позволяет прогнозировать риск возникновения ПОУГ у индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, в зависимости от наличия или отсутствия сопутствующей неинфекционной патологии глаз, а именно миопии и катаракты, что будет способствовать более эффективной реализации лечебно-профилактических мероприятий по предупреждению развития ПОУГ.

Способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы в зависимости от наличия сопутствующей неинфекционной патологии глаз у индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, включающий забор крови, отличающийся тем, что после выделения ДНК из периферической венозной крови проводят анализ полиморфизмов генов - VEGF-A с. -958C>T, IGF-1 c.-1410T>C, TGFβ-1 c.-1347T>C, IGFR-1 g.99181663C>T и прогнозируют повышенный риск развития первичной открытоугольной глаукомы у индивидуумов без сопутствующей неинфекционной патологии глаз в случае выявления аллеля T IGFR-1 либо комбинации аллеля С VEGF-A с аллелем Т IGFR-1 либо комбинации аллеля С VEGF-A с аллелем Т IGF-1 с аллелем Т TGFβ-1 либо комбинации аллеля Т VEGF-A с аллелем Т IGF-1 с аллелем С TGFβ-1; прогнозируют низкий риск развития ПОУГ у индивидуумов без сопутствующей патологии глаз при выявлении генотипа CС IGFR-1 и сочетания генетических вариантов Т VEGF-A и СС IGF-1; прогнозируют повышенный риск развития первичной открытоугольной глаукомы среди индивидуумов с сопутствующей патологией глаз в случае выявления комбинации аллелей С IGF-1 с С TGFβ-1 либо комбинации аллеля С VEGF-A с генотипом ТС IGF-1 с аллелем С TGFβ-1; прогнозируют низкий риск развития данного заболевания у индивидуумов с сопутствующей патологией глаз при выявлении генотипа ТТ TGFβ-1.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложены диагностический инструмент для анализа образца и способ подготовки и анализа образца.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, пульмонологии и может быть использовано для оценки степени нарушения энергетического метаболизма лимфоцитов крови у детей с внебольничной пневмонией (ВП).

Группа изобретений относится к медицине и касается способа иммунологического анализа образца крови или компонентов крови на 25-гидроксивитамин D, при котором для высвобождения витамина D из эндогенных связывающих белков добавляют к образцу перфторалкильную кислоту с длиной углеродной цепи от 4 до 12 атомов углерода или ее соли.

Изобретение относится к медицине, а именно к психиатрии, и может быть использовано для прогноза формирования затяжного течения соматоформных расстройств. Для этого проводится иммунологическое обследование и при одновременном содержании в крови Т-лимфоцитов (CD3+) 59% и менее, цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8+) 19% и менее, лимфоцитов с маркерами поздней активации (HLADR+) 20% и более прогнозируют затяжное течение соматоформных расстройств.
Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии и представляет собой способ оценки тяжести течения ретинобластомы у детей. Согласно изобретению в сыворотке крови определяют антитела к раннему антигену вируса Эпштейна-Барр и при их наличии оценивают течение как тяжелое.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использована для определения общего периостина. Антитело против периостина содержит последовательности гипервариабельного участка ("HVR") SEQ ID NO: 1 и последовательности HVR SEQ ID NO: 2 или последовательности HVR SEQ ID NO: 3 и последовательности HVR SEQ ID NO: 4.

Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии, и может быть использовано в качестве способа прогнозирования риска прогрессирования стенокардии напряжения, развития гипертрофии левого желудочка и ожирения у больных ишемической болезнью сердца, сочетанной с сахарным диабетом 2-го типа.

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для диагностики нагноившейся постнекротической псевдокисты поджелудочной железы.

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа количественного определения N-нитрозаминов (N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина) в крови.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и касается штамма вируса африканской чумы свиней. Штамм выделен от убитого кабана в охотхозяйстве «Озерное» Медынского района Калужской области в 2014 г., паспортизирован с названием «Калуга-2014» и депонирован в Государственной Коллекции микроорганизмов ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3115.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики метастазов рака и неходжкинских лимфом. Клеточный материал из образцов лимфатических узлов помещают в питательную среду накопления, состоящую из раствора Хенкса, реоплиглюкина и альбумина, смешанных в равных объемах. Клеточную суспензию вносят по 100 мл на дно двух пробирок, добавляют 5 мкл моноклонального антитела Ber ЕР4 FITC в одну пробирку и 5 мкл моноклонального антитела CD45, Leucocyte Common Antigen/FITC в другую пробирку, материал 5 с перемешивают, инкубируют 20 мин при t° 2-8°C. Затем взвесь клеток распределяют по 50-100 мкл и центрифугируют при 1000 об./мин в течение 5 мин, из осадка готовят препарат, которые окрашивают ядерным флюоресцентным красителем Dapi и осуществляют их флуоресцентную микроскопию. При положительной экспрессии на мембранах клеток эпителиального маркера Ber ЕР4 FITC - диагностируют метастазы рака, а в случае положительной экспрессии на мембранах клеток общего лейкоцитарного антигена CD45, Leucocyte Common Antigen/FITC и отсутствия экспрессии на мембранах клеток эпителиального маркера Ber ЕР4 FITC - диагностируют неходжкинскую лимфому. Использование данного метода позволяет быстро проводить дифференциальную диагностику метастазов рака и лимфом лимфатических узлов с целью установления распространенности опухолевого процесса. 2 ил., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования рецептивности эндометрия при бесплодии у женщин с повторными неудачами программ ЭКО. Для этого определяют уровень экспрессии эзрина и его внутриклеточную локализацию в биоптате эндометрия средней стадии фазы секреции. В период «окна имплантации» рецепторный эндометрий характеризуется средней стадией фазы секреции, зрелыми пиноподиями более чем на 20% поверхностного эпителия и высоким уровнем экспрессии эзрина и в эпителии, и пиноподиях. Изобретение позволяет прогнозировать наступления беременности в программах ЭКО и естественных циклах у женщин с бесплодием. 6 ил., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для прогнозирования развития безрецидивной выживаемости у больных множественной миеломой после аутологической трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. Целью изобретения является упрощение способа прогнозирования безрецидивной выживаемости у больных множественной миеломой после АТГСК. Способ прогнозирования безрецидивной выживаемости у больных множественной миеломой после аутологичной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (АТГСК), включает проточную цитометрию и оценку относительного содержания одной из популяций лимфоцитов с использованием ее порогового значения. В предложенном способе после процедуры афереза, перед трансплантацией в продукте афереза больного определяют относительное количество CD45+CD19+ В-клеток, и при содержании CD45+CD19+ В-клеток более 2,5% прогнозируют более короткий период безрецидивной выживаемости после АТГСК, а при содержании CD45+CD19+ В-клеток менее 2,5% прогнозируют более продолжительный период безрецидивной выживаемости после АТГСК. 1 ил.

Изобретение относится к медицине и касается способа оценки эффективности лечения больных хроническим бруцеллезом. Сущность способа заключается в том, что у больных хроническим бруцеллезом в фазе обострения до начала терапии и по ее окончании проводится определение сывороточного уровня ФНО α, ИФН γ, ИЛ 10, рассчитывается соотношение ИФН γ / ИЛ 10. При сохраняющейся после курса терапии высокой экспрессии в крови ФНО α и ИЛ 10 в 1,5 раза выше, чем в группе здоровых лиц и более; пониженном в 2 раза и более сывороточным уровне ИФН γ; и сниженном в 2,5 раза и более по сравнению со здоровыми лицами соотношении ИФН γ / ИЛ 10, лечение оценивается как недостаточно эффективное. Способ позволяет определить необходимость в дополнительных лечебных мероприятиях и, таким образом, повысить качество лечения больных хроническим бруцеллезом. 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для диагностики формирования фетоплацентарной недостаточности при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации. Для этого измеряют в периферической крови титр антител к ЦМВ, а также активность аденилатциклазы и фосфодиэстеразы в мембране синцитиотрофобласта и содержание эстриола в гомогенате плаценты, и при титре антител к ЦМВ 1:1600, снижении аденилатциклазы в мембране синцитиотрофобласта до 10,0±0,2 усл. ед., повышении активности в мембране синцитиотрофобласта фосфодиэстеразы до 18,00±0,31 усл. ед. и снижении содержания эстриола в гомогенате плаценты до 177,50±7,80 нмоль/л создается угроза формирования фетоплацентарной недостаточности. 2 ил.

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и предназначено для прогнозирования течения вакцинального процесса у детей, имеющих неврологические нарушения ЦНС. Для этого до вакцинации определяют в сыворотке крови содержание лимфоцитов и их субпопуляций CD3, CD4, CD20, интерлейкина 4, интерферона γ IFN-γ и общего пула иммуноглобулина IgG. Затем на основании полученных данных определяют группу иммунологической реактивности. При значениях: содержания лимфоцитов ≥50%, субпопуляций CD3 - ≥60%, CD4 - ≥35%, CD20 - ≥25%, ИЛ4≥50 пкг/мл, IFN-γ≥50 пкг/мл, общего пула IgG≥9,5 г/л - прогнозируют развитие сильных вакцинальных реакций, соответствующих гиперреактивной группе. При содержании лимфоцитов ≤45%, CD3 - ≤60%, CD4 - ≤35%, CD20 - ≤21%, ИЛ4≤20 пкг/мл, IFN - γ≤50 пкг/мл, общего пула IgG≤5,5 г/л - прогнозируют осложненное течение вакцинального процесса, соответствующее гипореактивной группе. При содержании лимфоцитов ≥50%, CD3 - ≤60%, CD4 - ≤35%, CD20 - ≥25%, ИЛ4≤20 пкг/мл, IFN-γ≤50 пкг/мл, общего пула IgG≤5,5 г/л - прогнозируют развитие как вакцинальных реакций, так и осложненное течение вакцинального периода, соответствующих смешанной группе. Использование данного способа позволяет установить точные прогностические критерии течения вакцинального периода, что способствует своевременному применению индивидуальных схем вакцинации и ревакцинации и обеспечивает безопасность прививок у детей с патологией ЦНС. 5 пр., 1 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к малоинвазивным методам в хирургической эндокринологии, и касается дифференциальной диагностики образований шеи. Способ включает ультразвук-контролируемую тонкоигольную аспирационную пункционную биопсию, которую выполняют однократно одной иглой через один прокол. Полученный материал выдавливают из иглы для выполнения цитологического исследования. После этого проводят смыв из аспирационной иглы оставшегося материала для определения уровня паратиреоидного гормона и тиреоглобулина. Смыв из иглы при этом осуществляют предварительно подготовленной сывороткой, в качестве которой используют смесь сывороток от здоровых доноров с заведомо известным уровнем паратиреоидного гормона и уровнем тиреоглобулина. Способ уменьшает травматичность диагностических манипуляций, сокращает время для уточнения диагноза при планировании объема оперативного лечения, экономичен и прост в выполнении, применим в стационарных и амбулаторных условиях, без обезболивания. 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к антителу или его функциональному фрагменту, которые способны связывается с cMet. Также раскрыты мышиная гибридома, способная секретировать указное антитело, нуклеиновая кислота, которая экспрессирует указанное антитело и набор для прогнозирования эффективности лечения онкогенного расстройства, включающий указанное антитело. Раскрыты способ обнаружения cMet-экспрессирующей опухоли, способ диагностики cMet-экспрессирующей опухоли, способ определения прогноза развития cMet-экспрессирующей опухоли и способ прогнозировая эффективности лечения онкогенного расстройства, с помощью заявленного анти-cMet-антитела. Изобретение обладает способностью специфически связывается с c-Met, что позволяет эффективно лечить заболевания, ассоциированные с экспрессией полипептида c-Met. 10 н. и 12 з.п. ф-лы, 12 ил., 6 табл., 4 пр.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для патоморфологической диагностики хронического аппендицита. Способ заключается в следующем: образец ткани фиксируют, изготавливают срезы, инкубируют с реагентом и проводят обработку проявляющим агентом, дегидратацию и заключение в среду. В качестве реагента используют антитела к р44 МАРК (Erkl) (МАРК3) в разведении 1:100 - 1:250, длительность инкубации с реагентом во влажной камере при температуре 25°C составляет 60 минут. Способ позволяет по выявлению в препарате специфической окраски в субсерозном и мышечном слоях стенки аппендикса диагностировать хронический аппендицит. 1 пр., 4 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики меланомы хориоидеи. Сущность способа состоит в том, что у пациента с подозрением на меланому хориоидеи осуществляют забор слезной жидкости из обоих глаз, далее определяют концентрацию в слезной жидкости интерлейкина-8 и при значении этого показателя выше 17,7 пг/мл диагностируют меланому хориоидеи. Сущность способа состоит в упрощении способа и повышении его точности. 1 з.п. ф-лы, 2 пр.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2016-04-10 2016-04-11T10:56:51
Наверх