Штамм "калуга-2014" вируса африканской чумы свиней для мониторинговых исследований и изучения патогенеза болезни



Штамм калуга-2014 вируса африканской чумы свиней для мониторинговых исследований и изучения патогенеза болезни
Штамм калуга-2014 вируса африканской чумы свиней для мониторинговых исследований и изучения патогенеза болезни
Штамм калуга-2014 вируса африканской чумы свиней для мониторинговых исследований и изучения патогенеза болезни
Штамм калуга-2014 вируса африканской чумы свиней для мониторинговых исследований и изучения патогенеза болезни
Штамм калуга-2014 вируса африканской чумы свиней для мониторинговых исследований и изучения патогенеза болезни

 


Владельцы патента RU 2577997:

Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук (RU)

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и касается штамма вируса африканской чумы свиней. Штамм выделен от убитого кабана в охотхозяйстве «Озерное» Медынского района Калужской области в 2014 г., паспортизирован с названием «Калуга-2014» и депонирован в Государственной Коллекции микроорганизмов ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3115. Штамм обладает высокой инфекционной активностью, накапливается в культурах клеток костного мозга свиней и лейкоцитах свиней в титре 6,0-7,0 lgГАЕ50/см3. Гибель зараженных свиней наступает с признаками острой формы АЧС через 6-8 суток после проявления клинических признаков болезни. Изобретение может быть использовано в качестве референс-штамма при проведении мониторинговых исследований в РФ с новыми изолятами вируса, циркулирующими в популяции кабанов, а также выделенными от домашних свиней. 3 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к штаммам вируса африканской чумы свиней, и может быть использовано при проведении мониторинговых исследований с новыми изолятами вируса, выделенными на территории РФ от кабанов и домашних свиней, а также при изучении патогенеза вызванной ими болезни.

Африканская чума свиней (АЧС) - контагиозная вирусная болезнь, характеризующаяся лихорадкой, геморрагическим диатезом, воспалительными, дистрофическими, некротическими изменениями в различных органах, а также высокой смертностью свиней всех пород и возрастных групп. Заболевание вызывает ДНК-содержащий вирус семейства Asfaviridae рода Asfavirus.

Впервые АЧС описал английский исследователь Р. Монтгомери, который в начале XX века наблюдал гибель европейских пород свиней, завезенных в Восточную Африку. До 1957 г. АЧС регистрировали только в африканских странах. В 1957 г. заболевание впервые было занесено на европейский континент - в Португалию, а затем в Испанию, которые оставались неблагополучными по АЧС около 30 лет. Вспышки этой болезни регистрировали и в других европейских странах - Франции, Италии, Мальте, Бельгии, Голландии и бывшем СССР. На острове Сардиния по настоящее время АЧС регистрируют у кабанов с признаками хронического и бессимптомного течения болезни [1].

Начало новой эпизоотии АЧС в Европе связано с заносом возбудителя болезни в 2007 году в Грузию, затем Армению, Абхазию и Россию (Чеченскую республику) [2]. Несмотря на жесткие меры борьбы с болезнью, связанные с убоем всех свиней в очаге болезни и первой угрожаемой зоне, АЧС была занесена и в другие регионы РФ, в т.ч. и в Центральный Федеральный округ, где в эпизоотический процесс в настоящее время вовлечены кабаны.

В странах Африканского, Американского и Европейского континентов выделены изоляты вируса АЧС, обладающих различными биологическими свойствами. Для их классификации используют реакцию задержки гемадсорбции (РЗГАд) в культуре клеток костного мозга свиней (KMC) или лейкоцитов свиней (ЛС), рестрикционный анализ ДНК, генотипирование вируса и др. [3, 4, 5].

На основании разработанной в ГНУ ВНИИВВиМ серотиповой классификации, имеющиеся в коллекции института паспортизированные штаммы вируса АЧС отнесены к 9 серотипам, а на основании секвенирования фрагментов гена, кодирующего структурный белок Р 72 к 5 генотипам - I, II, V, VIII и X [6, 7].

Циркулирующий в н.в. на территории России вирус АЧС отнесен к VIII серотипу и II генотипу, по этим показателям он отличается от вируса, вызвавшего эпизоотию АЧС в Европе в 1957 году [2].

Согласно данным Россельхознадзора в 2014 г. АЧС регистрировали в 13 регионах РФ в которых было выявлено 77 вспышек болезни (30 у домашних свиней и 47 у кабанов) [8]. Это указывает на возможность образования при пассировании в популяции кабанов слабопатогенных изолятов вируса АЧС, что существенно затруднит диагностику и борьбу с болезнью.

Близким аналогом предлагаемого изобретения является вирулентный штамм «Ставрополь 01/08», выделенный в 2008 году в начале эпизоотии АЧС в РФ от павшей домашней свиньи в Ставропольском крае. Патентуемый штамм отличается от аналога по ряду фенотипических признаков - длительности течения болезни, выраженности патологоанатомических изменений, характеру ГАд в культуре клеток и др., которые приведены в таблице 3.

Цель изобретения - получение нового со стабильными биологическими свойствами вирулентного штамма вируса АЧС, циркулирующего в Российской Федерации в популяции диких свиней - кабанов, который может быть использован в качестве референтного при проведении мониторинговых исследований с изолятами вируса, выделенными от кабанов и домашних свиней, а также при изучении патогенеза вызванной ими болезни.

Поставленная цель достигнута путем выделения вируса АЧС от убитого кабана в охотхозяйстве «Озерное» Медынского района Калужской области в 2014 г., который является новым, ранее не известным штаммом, длительно циркулирующим в популяции диких свиней - кабанов.

Полученный вирулентный штамм вируса АЧС получил название «Калуга-2014» и депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3115.

Новый вирулентный штамм характеризуется следующими основными характеристиками:

Морфологические и молекулярно-генетические свойства. При электронной микроскопии обнаруживают округлые вирионы диаметром 175-215 нм, состоящие из плотного нуклеотида, 2-слойного икосаэдрического капсида и наружной оболочки. Плавучая плотность вириона в CsCl составляет 1.19-1.24 г/см3, коэффициент седиментации 1800-8000 S. Нуклеотид содержит ДНК, белок и окружен электронно-прозрачным слоем.

Геном вируса представлен неинфекционной, двуспиральной, линейной молекулой ДНК, состоящей из 170-190 тыс. пар нуклеотидов.

На основании результатов секвенирования фрагментов гена, кодирующего структурный белок Р 72, штамм отнесен к 2 генотипу вируса АЧС. Нуклеотидные последовательности генов E183L(p54), EP402R(СД2v) и межгенного участка I17/1329RL штамма «Калуга-2014» идентичны указанным последовательностям генов референс-штамма «Ставрополь 01/08» вируса АЧС.

Антигенные свойства. Вирусспецифические антигены выявляются в реакциях преципитации, связывания комплемента, иммуноферментного анализа, иммунофлуоресценции, гемадсорбции и др.

Типовая принадлежность. По результатам РЗГАд с использованием имеющихся в Коллекции ВНИИВВиМ типовых референс-сывороток штамм «Калуга-2014» отнесен к вирусу АЧС VIII серотипа, что подтверждено постановкой биопробы на иммунных животных.

Культуральные свойства. Штамм размножается в первичных (KMC и ЛС) и перевиваемых (A4C2, A4C2/9к) культурах клеток, репродукция вируса сопровождается специфической адсорбцией эритроцитов свиней (феномен гемадсорбции) на инфицированных клетках на 3-5 сутки культивирования и их лизисом через 4-6 суток. Гемадсорбция (ГАд) имеет «плотный» и «рыхлый» характер, о чем свидетельствует соответственно многослойная и однослойная адсорбция эритроцитов свиней на инфицированных клетках. Это указывает на наличие в исходной вирусной популяции вирионов, обладающих различной патогенностью для свиней. Накопление вируса в эти сроки в культурах клеток KMC, ЛС составляет 6,0-7,0 lgГАЕ50/см3, A4C2 и A4C2/9к - 4,5 -5,5 lgГАЕ50/см3. В течение 10 серийных пассажей в культурах клеток (срок наблюдения) штамм «Калуга 2014» сохраняет эти свойства. Без предварительной адаптации штамм не репродуцируется в перевиваемых культурах клеток почки поросенка (РК-15, ПСГК), тестикул поросенка (ПТП), почки сайги (ПС), и почки африканской зеленой мартышки (CV-1).

Патогенные свойства. Штамм патогенен только для домашних и диких свиней всех пород и возрастных групп. При внутримышечном заражении в дозе 1000 ГАЕ50 и выше вызывает их гибель на 9-11 сутки после инфицирования с признаками острой формы болезни. У заболевших свиней на 4-8 сутки после заражения отмечают повышение температуры тела до 41,2-41,7°C, угнетение, отказ от корма, одышку, нарушение координации движений, парез задних конечностей.

Патологоанатомические изменения. На серозных оболочках внутренних органов имеются кровоизлияния, в грудной и брюшной полостях скопление серозно-геморрагического экссудата, междольковая ткань легких отечна с признаками серозно-геморрагической пневмонии. Лимфоузлы: подчелюстные, средостенные мезентериальные не увеличены или увеличены незначительно, с кровоизлияниями, желудочные и портальные - сильно увеличены, геморрагически воспалены, темного цвета, имеют вид сгустка крови, «дряблые». Селезенка незначительно увеличена, естественного цвета, под капсулой единичные точечные кровоизлияния. Печень и почки без выраженных патологических изменений, характерных для АЧС.

Контагиозность. Штамм контагиозен для свиней. Интактные свиньи заболевают АЧС при совместном содержании с инфицированными штаммом «Калуга - 2014» животными.

Контаминация бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.

Штамм не контаминирован бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.

Способ получения и условия хранения. Штамм хранят при минус 50°C в виде лиофилизированной или гепаринизированной вируссодержащей крови, которую получают от внутримышечно зараженных свиней, находящихся в атональном состоянии. Периодичность освежения штамма - один раз в 10 лет, при активности штамма выше 4,5 lg ГАЕ50/см3 срок хранения продлевается.

Сущность изобретения поясняется следующими примерами.

Пример 1.

В таблице 1 приведены сведения по культивированию штамма «Калуга -2014» вируса АЧС в культурах клеток ЛС, A4C2/9к, РК - 15, и CV-1 в течение 10 последовательных пассажей.

Как видно из табл. 1, в течение 10 последовательных пассажей (срок наблюдения) штамм «Калуга -2014» вируса АЧС стабильно размножается в монослое культур клеток ЛС и A4C2/9к с образованием специфической ГАд и накапливается в них в титрах 6,0-7,0 lg ГАЕ50/см3 и 4,0-5,5 lg ГАЕ50/см3 соответственно. В монослое перевиваемых культур клеток РК-15 и CV-1 вирус не размножался.

Пример 2.

Результаты определения типовой принадлежность штамма в РЗГАд со специфическими референс-сыворотками I-IX серотипов приведены в таблице 2.

Как видно из таблицы 2, специфическая ЗГАд - сыворотка, полученная на референс-штамм «Ставрополь 01/08» вируса АЧС VIII серотипа, вызывает задержку гемадсорбции штамма «Калуга-2014». На основании этих результатов штамм «Калуга - 2014» отнесен к VIII серотипу вируса АЧС.

Пример 3

Основные биологические свойства штамма «Калуга-2014», которые должны использоваться при проведении мониторинговых исследований с новыми изолятами вируса АЧС, циркулирующими на территории РФ, приведены в таблице 3.

Биологические характеристики штамма «Калуга 2014» вируса АЧС приведены в сравнительном аспекте с аналогичными свойствами референс-штамма «Ставрополь 01/08», выделенного в 2008 г. от павшей домашней свиньи в Ставропольском крае, и штаммом «Чечня 02/07», выделенным от павшего кабана в 2007 г. в Республике Чечня.

Как видно из представленных в таблице 3 результатов, штамм «Калуга-2014» вируса АЧС по некоторым биологическим характеристика отличается от референс-штамма «Ставрополь 01/08» и штамма «Чечня 02/07» - по срокам гибели свиней после внутримышечного заражения, характеру ГАд на инфицированных клетках и выраженности патологоанатомических изменений у павших свиней.

Эти и другие представленные в таблице 3 характеристики штамма «Калуга 2014», должны учитываться при проведении мониторинговых исследований с новыми изолятами вируса АЧС, циркулирующими среди кабанов, а также выделенными от домашних свиней в РФ.

Источники информации

1. Инфекционная патология животных. А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев, Е.А. Непоклонов и др. - Москва, 2005. - С. 806-821.

2. Балышев В.М., Калантаенко Ю.Ф., Болгова М.В., Прудникова Е.Ю. Сероиммунологическая принадлежность вируса африканской чумы свиней, выделенного в российской Федерации // Доклады РАСХН. 2011. 54. С. 52-53.

3. Диагностика африканской чумы свиней. И.Ф. Вишняков, Н.И. Митин, А.Н. Курносов, В.М. Колосов, Ф.А. Бадаев, И.В. Федорищев, В.А. Бурлаков // Материалы научной конференции ВНИИВВиМ. - Покров, 1992. - С. 57-70.

4. Селянинов Ю.О. Вирус африканской чумы свиней: физическое картирование генома штаммов / Ю.О. Селянинов, В.М. Балышев, С.Ж. Цыбанов // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2000. - №5. - С. 75-76.

5. Genotyping fielstraing of African swine fever by partial p72 gene characterization. A.D.S. Bastos [et al.] // Arch. Virol - 2003, vol. 148, - P. 693-706.

6. Паспортизация изолята «Девис» вируса африканской чумы свиней / Болгова М.В., Балышев В.М., Пономарев В.Н., Неверовская Н.С. // Материалы междунар. научно.-практической конференции, посвященной 55-летию ВНИИВВиМ, часть 1, Покров 2014. - С. 43-47.

7. Биологические свойства вируса африканской чумы свиней, выделенного в Российской Федерации / Балышев В.М., Куриннов В.В., Цыбанов С.Ж. и др. // Ветеринария - 2010. - №7. - С. 25-27.

8. Эпизоотическая ситуация по АЧС на территории Российской Федерации в 2014 г. [Электронный ресурс]. Режим доступа: www fsvps/ru/ - Загл. с экрана/

Штамм «Калуга-2014» вируса АЧС семейства Asfarviridae рода Asfivirus, депонированный в Государственной Коллекции микроорганизмов ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3115, для проведения мониторинговых исследований и изучения патогенеза болезни.



 

Похожие патенты:

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ идентификации антитела, которое специфически связывается с интересующим антигеном на клеточной поверхности, предусматривающий иммунизацию животного вектором экспрессии, кодирующим антиген клеточной поверхности; приведение в контакт клеток, содержащих на своей поверхности антитела и выделенных из животного, подвергнутого иммунизации, причем антитела связаны с первой сортируемой меткой, с клетками, экспрессирующими антиген, связанный со второй сортируемой меткой; определение специфического связывания с использованием клеточного сортера по наличию первой и второй сортируемой метки в клеточном комплексе; а также идентификацию участков, определяющих комплементарность с антигеном (CDR), у идентифицированного антитела и прививку CDR на каркасную область акцепторного антитела.

Изобретение относится к области методов молекулярно-генетической диагностики в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) и касается прогнозирования качества получаемых эмбрионов.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки эффективности терапии генитального туберкулеза, включающий контрольные иммунологические обследования, отличающийся тем, что по окончании интенсивной фазы терапии проводят 1-й контроль, который включает определение индекса стимуляции интерферона-гамма (ИФН-γ) с туберкулином очищенным (ППД-Л), определение уровней специфических иммуноглобулинов (IgA, IgM) к микобактерии туберкулеза (МБТ) методом иммуноферментного анализа (ИФА), а 2-й контроль проводят через 6-11 месяцев после окончания основного курса терапии, при этом в случае если индекс стимуляции ИФН-γ с ППД-Л по окончании интенсивной фазы противотуберкулезной терапии был выше 7, 8 - только по ИФН-γ с ППД-Л, в случае если оптическая плотность IgM к МБТ была более 0,600 - только по IgM к МБТ, в случае если оптическая плотность при IgA к МБТ была более 0,450 - контроль проводят только по IgA к МБТ; при этом по результатам контрольных исследований рекомендуют продление, или коррекцию, или окончание терапии.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной биологии, экологии, токсикологии, и касается диагностики клеточного иммунодефицита у экспериментальных животных в условиях экспозиции стронцием.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к биотехнологии, и может быть использована для выявления in vitro антитела, обладающего эффекторной функцией. Для этого смешивают естественные клетки-киллеры и опухолевые клетки, добавляют примерно по 104 клеток на 200 мкл в лунки многолуночного планшета.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования раннего токсикоза тяжелой степени, включающий определение в крови беременных женщин концентрации лептина и фактора роста плаценты (ФРП), отличающийся тем, что дополнительно производят определение значения максимальной амплитуды агрегации тромбоцитов (МААТ), содержания лимфоцитов CD95+ (Л CD95+), уровня общего IgE и концентрации C-реактивного белка (СРБ), и при значении этих показателей в сроки 6-8 недель и 9-12 недель беременности соответственно: концентрации лептина (нг/мл) - 18,9±2,8 и 23,4±3,2; концентрации ФРП (пг/мл) - 55±4,1 и 91±6,2; значении МААТ (%) - 42,6±1,4 и 45,1±1,5; содержании Л CD95+ (%) - 44,2±3,5 и 49,7±3,8; уровня общего IgE (пг/мл) - 295±19 и 322±16; концентрации СРБ (мкг/мл) - 96±4,2 и 108±5,3 прогнозируют ранний токсикоз тяжелой степени.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу проведения иммунохроматографического анализа. Способ включает регистрацию окрашенных коллоидным маркером специфических комплексов антиген-антитело на поверхности рабочей мембраны.

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии, и может быть использовано для диагностики стационарной миопии высокой степени. Для этого при хирургии выделяют фрагмент теноновой капсулы, который измельчают и замораживают в парах жидкого азота до -180°С.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики in vitro повышенной чувствительности к псевдоаллергенам и подбору противоаллергических препаратов. Для этого формируют образцы, содержащие 0,95-1,05×106 лейкоцитов, и доводят их раствором Хенкса до объема 0,69 мл с получением проб крови.
Изобретение касается способа выявления пациента с риском развития расстройства щитовидной железы в результате лечения в режиме, который истощает лимфоциты. Способ включает определение до лечения наличия антител, направленных против пероксидазы щитовидной железы или микросом щитовидной железы, у пациента.
Способ относится к областям микробиологии и биотехнологии. Способ выделения бактериофага Bordetella bronchiseptica включает индуцирующее мутагенное воздействие ультрафиолетового излучения с длиной волны 250-260 нм на клетки лизогенных бактериальных культур Bordetella bronchiseptica, выращенных на плотной агаровой среде.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к ветеринарии, и может быть использована для получения одноразовой поливалентной комбинированной вакцины. Вакцина содержит антиген цирковируса свиней тип 2, являющийся белком, кодируемым последовательностью ДНК, которая по меньшей мере на 80% идентична ORF2 цирковируса свиней тип 2, и один вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается нового штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа О сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, депонированного в коллекции ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером вирус ящура штамм О №2108/Забайкальский/2010.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложена биодобавка в питательную среду для культивирования клеток животных и репродукции на них вирусов, представляющая собой экстракт из кабачков и мышц щуки.

Изобретение относится к области вирусологии и касается штамма вируса африканской чумы свиней. Представленный штамм вируса африканской чумы свиней 8-го серотипа, семейства Asfarviridae, род Asfivirus, адаптирован к перевиваемой культуре клеток COS-1 и депонирован в Коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии под №.3096.

Изобретение относится к медицине, ветеринарии, санитарии и предназначено для дезодорации помещений. Дезодорирующее средство для помещений содержит концентрат селекционированных высокоспецифичных бактериофагов видов Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Salmonella enterica, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae, Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia enterocolitica, Pseudomonas aeruginosa.

Группа изобретений относится к способу определения штамма бактериофага, вариантам штамма бактериофага и их применению. Способ предусматривает получение коллекции штаммов бактериофагов, культивирование штамма Salmonella spp на стерильной культуральной среде, нанесение образцов культур на планшет, добавление суспензии испытываемого штамма бактериофага в концентрации 6,5 х 109 БОЕ при соотношении бактериальной суспензии к суспензии с фагом 1:1, 1:1,5 или 1:3 и инкубирование при 37°C в течение 4 ч.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложены применение живого метапневмовируса птиц (AMPV) и фармацевтической композиции, содержащей цитотоксическое количество такого вируса, в терапии злокачественных опухолей, а также способ терапии злокачественных опухолей с использованием указанной фармацевтической композиции.

Изобретение относится к области биотехнологии, генной инженерии и вирусологии. Предложен способ получения в растении или в его части химерных вирусоподобных частиц (VLP).

Настоящее изобретение относится к фармацевтической промышленности. Предложены способ получения вирусного антигена из оболочечного вируса и применение этого способа в производстве вакцинного препарата, содержащего указанный вирусный антиген.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу выделения вирусоподобных частиц VLP. Получают растения или растительный материал, содержащий VLP, локализованные в апопласте. Получают смесь протопластов/сферопластов и апопластов посредством обработки растения или растительного материала мультикомпонентной ферментной смесью, разрушающей клеточные стенки, содержащей целлюлазу. Получают фракцию протопласта/сферопласта и фракцию апопласта из смеси протопластов/сферопластов и апопластов. Выделяют фракцию апопласта, причем фракция апопласта содержит VLP. Выделяют VLP из фракции апопласта. Предложенное изобретение позволяет с высокой эффективностью выделить вирусоподобные частицы. 3 н. и 40 з.п. ф-лы, 12 ил., 15 табл., 9 пр.
Наверх