Способ количественного определения n-нитрозодиметиламина и n-нитрозодиэтиламина в крови методом капиллярной газовой хроматографии



Способ количественного определения n-нитрозодиметиламина и n-нитрозодиэтиламина в крови методом капиллярной газовой хроматографии
Способ количественного определения n-нитрозодиметиламина и n-нитрозодиэтиламина в крови методом капиллярной газовой хроматографии
Способ количественного определения n-нитрозодиметиламина и n-нитрозодиэтиламина в крови методом капиллярной газовой хроматографии
Способ количественного определения n-нитрозодиметиламина и n-нитрозодиэтиламина в крови методом капиллярной газовой хроматографии

 


Владельцы патента RU 2578026:

Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения") (RU)

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа количественного определения N-нитрозаминов (N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина) в крови. Сущность способа заключается в том, что производят отбор пробы крови, подготовку ее к анализу и количественное определение нитрозоамина в пробе методом газохроматографического анализа. При этом подготовку пробы производят путем добавления к ней гидроксида калия при соотношении 1 объемная часть пробы к 1,6 массовой части гидроксида калия, с последующей отгонкой дистиллята с помощью водяного пара и введением в дистиллят гидроксида калия при соотношении 1 объемная часть дистиллята к 1,6 массовой части гидроксида калия. Далее смесь дистиллята и гидроксида калия помещают в замкнутую систему дозатора равновесного пара, где в изотермических условиях осуществляют термостатирование, преимущественно в течение 20 мин, для установления фазового равновесия. Производят отбор газовой фазы над дистиллятом и вводят ее в капиллярную колонку газохроматографа, далее осуществляют газохроматографическое разделение N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина. Количество каждого указанного вещества устанавливают по градуировочному графику. 2 з.п. ф-лы, 4 табл.

 

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии, и может быть использовано для количественного определения N-нитрозаминов (N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина) в биологической жидкости - в крови.

Из Патента РФ №2159423 известен способ измерения количества нитрозосоединений в окружающей среде, в частности в крови, заключающийся в том, что готовят пробу, измеряют дозу γ-облучения, полученную пробой, отделяют азотсодержащие ионы, определяют концентрацию предшественников нитрозосоединений, при этом пробу предварительно очищают путем применения буфер-осадителя от компонентов, влияющих на оптическую плотность пробы, с возможностью получения пробы, содержащей только предшественников нитрозосоединений, затем определяют величину pH пробы, дополнительно измеряют дозу β-облучения и по содержанию предшественников нитрозосоединений, величинам доз γ и β облучений и величине pH определяют концентрацию S, O, N, C-нитрозосоединений. Причем после введения буфер-осадителя осуществляют центрифугирование с последующей фильтрацией пробы.

Недостатком известного способа являются высокие трудозатраты на пробоподготовку. А, кроме того, для этого известного способа характерна неспецифичность и неселективность, ввиду использования колориметрического метода.

Также известен способ определения нитрозаминов, заключающийся в обработке анализируемой пробы крови бромистым водородом в среде ледяной уксусной кислоты с последующей обработкой полученного раствора индикаторной смесью - [нафтил-(1)]-этилендиаммониумдихлоридом в сульфаниловой кислоте, и спектрофотометрировании образующихся при этом окрашенных продуктов. Недостатком известного способа является низкая чувствительность - 2-3 мкг/мл. Неспецифичность и неселективность колориметрического метода [Eisenbrand G, Prenssmann R. New methode zur. Kolorimetrischen Bestiming von Nitrosaminen nach Spaltung der Nitrogruppe mit wassewrstoff in Eisessig/Arrneimitt forschung, 1970, 20, 1513.]

Из уровня техники известен способ количественного определения нитрозаминов в пробе крови, заключающийся в последовательной обработке анализируемой пробы раствором пиридина, раствором сульфата меди (II), раствором гидрохинона, раствором перекиси водорода при pH среды 7,1-7,9 с последующим спектрофотометрированием интенсивности окраски образующихся при этом продуктов реакции [Авторское свидетельство СССР №615398]. Этот способ позволяет проводить определение нитрозоаминов в интервале 1*10-13-1*10-11 М с пределом обнаружения (1,0±0.7)*10-13 М.

Еще известен способ количественного определения нитрозоаминов путем последовательной обработки анализируемой пробы раствором 1,2,4-триацетоксибензола (пирогаллола «А»), раствором перекиси водорода при pH среды 8,0-10,0 с последующим измерением оптической плотности полученного раствора, который позволяет проводить определение нитрозоаминов в интервале 10*10-15-1*1011 М с пределом обнаружения ((1,0±0,6)*10-15 М [Авторское свидетельство СССР №979970]. Чувствительность известного способа возросла в 2,5 раза по сравнению с известными способами.

Недостатками указанных выше способов являются следующие:

- большие затраты времени на исследования ввиду сложности выполнения пробоподготовки;

- высокая трудоемкость выделения N-нитрозодиметиламина из биосреды;

- неспецифичность и неселективность метода.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому изобретению является способ определения N-нитрозодиметиламина в биологической среде (крови) газохроматографическим методом с термоэнергетическим детектором, описанный Pylypiw НМ Jr., Zimmerman F, Harrington GW, et al. 1985. Apparatus for trace determination of volatile N-nitrosamines in small samples. Anal Chem 57:2996-2997. В пробу крови объемом 2 см3 добавляют серную кислоту и антивспениватель. Затем проводят экстракцию образцов крови хлористым метиленом в экстракторе. Биологические образцы концентрируют и анализируют методом газовой хроматографии с термоэнергетическим детектором. Предел обнаружения N-нитрозодиметиламина в биологической среде составил 0,1 мкг/л.

Недостатком указанного способа является высокая трудоемкость выделения N-нитрозодиметиламина из биосреды и невозможность определения N-нитрозодиэтиламина. При этом для осуществления этого процесса используется дорогостоящее оборудование - термоэнергетический детектор.

Технический результат, достигаемый предлагаемым способом, заключается в расширении спектра определения нитрозоаминов в крови, в повышении чувствительности и точности при одновременном упрощении стадии пробоподготовки.

Указанный технический результат достигается предлагаемым способом количественного определения N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина в крови методом капиллярной газовой хроматографии, включающим отбор пробы крови, подготовку ее к анализу и количественное определение нитрозоамина в пробе методом газохроматографического анализа, при этом новым является то, что подготовку пробы крови к анализу производят путем добавления к ней гидроксида калия при соотношении 1 объемная часть пробы к 1,6 массовой части гидроксида калия, с последующей отгонкой дистиллята с помощью водяного пара и введением в дистиллят гидроксида калия при соотношении 1 объемная часть дистиллята к 1,6 массовой части гидроксида калия, далее смесь дистиллята и гидроксида калия помещают в замкнутую систему дозатора равновесного пара, где в изотермических условиях осуществляют термостатирование для установления фазового равновесия, затем производят отбор газовой фазы над дистиллятом и выполняют введение этой фазы в капиллярную колонку газохроматографа, далее осуществляют газохроматографическое разделение N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина, а количество каждого указанного вещества устанавливают по градуировочному графику.

Газохроматографическое разделение N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина осуществляют с использованием газового хроматографа с термоионным детектором на капиллярной колонке DB-624 - 30m*0,32mm*0,25µm, при температурном режиме: колонка - от 50°C-200°C; испаритель - 200°C; детектор - 250°C; расход газа-носителя - азота - 20 см3/мин, с делением потока 1:14,3.

Термостатирование смеси в дозаторе равновесного пара осуществляют в течение 20 минут.

Поставленный технический результат достигается за счет следующего.

Следует пояснить, что для повышения полноты извлечения N-нитрозаминов из крови методом анализа равновесной паровой фазы были проведены исследования по изучению влияния различной массы щелочи на эффективность выщелачивающей способности изучаемых соединений из биосреды (кровь). Связывание азотсодержащих органических соединений с белками крови зависит от pH среды. Органические азотсодержащие вещества основного характера связываются с белками при pH выше их изоэлектрической точки (кровь имеет pH=7,35…7,40). N-нитрозоамины (N-нитрозодиметиламин и N-нитрозодиэтиламин) относятся к группе веществ с основными свойствами, поэтому хорошо экстрагируются из щелочной среды при pH=10-11. При этих значениях pH происходит разрушение связей белковых веществ крови с N-нитрозаминами [Токсикологическая химия: учебник для вузов / под ред. Плетеневой. 2-е изд., испр. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. - 512 с.].

Однако экспериментальным путем было установлено, что не все щелочи подходят для того, чтобы обеспечить полноту извлечения нитрозаминов из крови. И только гидроксид калия подходит больше всего для достижения этой цели. Но причем он должен быть введен в пробу крови в точно заявленной дозировке, чтобы обеспечить одновременно и высокую точность определения и высокую чувствительность.

При пробоподготовке после отгонки дистиллята производился последующий нагрев смеси дистиллята с гидроксидом калия в дозаторе равновесного пара (преимущественно, в течение 20 минут) до установления фазового равновесия. При этом при отработке оптимальных условий подготовки биопробы (крови) к газофазному анализу учитывали такие параметры, как температура и давление, создаваемые в замкнутой гетерогенной системе жидкость-газ. Для исключения влияния изменений температуры и общего давления на точность газофазного анализа при количественных измерениях применяли технику пневматического парофазного дозирования биопроб в капиллярную колонку хроматографа дозатором DANI HSS 86.50 HEAD SPACE SAMPLER.

Цикл дозирования представляет собой механические операции, выполняемые дозатором DANI HSS 86.50 HEAD SPACE SAMPLER для переноса газовой фазы из дозатора равновесного пара (виалы) в газохроматографическую колонку. В процессе исследований были отработаны оптимальные параметры цикла дозирования газовой фазы в дозаторе (перед вколом в хроматографическую колонку): температура термостата - 80°C; узла дозирования - 130°C; переходной линии - 135°C; время инкубации - 25 мин; расход газа-носителя - 60 мл/мин; оптимальное давление наддува - 0,2 bar.

Кроме того, вышеуказанные операции, по-видимому, обеспечивают снижение нижнего предела обнаружения и повышение чувствительности определений N-нитрозодиметиламина (НДМА) и N-нитрозодиэтиламина (НДЭА) в крови за счет их концентрирования с помощью метода дистилляции летучих нитрозаминов из крови водяным паром и последующим газохроматографическим анализом равновесной паровой фазы, оптимально подобранных параметрах газохроматографического анализа равновесной паровой фазы (параметры цикла дозирования проб крови с помощью дозатора равновесного пара, масса щелочи), температуры нагрева парообразователя и колбы с биосредой.

Для повышения эффективности извлечения летучих N-нитрозоаминов из крови гидроксид калия массой 8 г добавляли и в биосреду и отогнанный дистиллят при температуре паробразователя t=100±5°C и круглодонной колбы с биосредой t=80±5°C.

Экспериментальным путем были также подобраны оптимальные условия хроматографического процесса для четкого разделения пиков НДМА и НДЭА от пиков других соединений на аппаратно-программном комплексе "Кристалл 5000" с применением стандартных образцов. В процессе исследований были апробированы следующие капиллярные колонки различной длины и толщины пленки неподвижной фазы: DB-624, HP-FFAP, HP-Plot/U, HP-VOC. Качественное разделение N-нитрозаминов (N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина) с близкими по физико-химическими свойствам соединениями было достигнуто на капиллярной колонке серии DB-624 - 30m*0,32mm*0,25µm, при температурном режиме: колонка - от 50-200°C; испаритель - 200°C; детектор - 250°C; расход газа-носителя - азота - 20 см3/мин, с делением потока 1:14,3. Это позволило расширить спектр определения нитрозоаминов в крови (два компонента вместо одного в прототипе) и повысить чувствительность и точность их определения.

Таким образом, благодаря совокупности и последовательности указанных операций предлагаемого способа, их режимам и обеспечивается высокая степень точности и чувствительности.

Для осуществления предлагаемого способа проводят следующие операции в нижеуказанной последовательности:

- проводят отбор пробы крови в количестве примерно 5 см3;

- в перегонную колбу объемом 100 см3 добавляли 5 см3 образца крови и сухого гидрооксида калия (8 г);

- с помощью водяного пара, образуемого в парообразователе, отгоняли дистиллят;

- дистиллят, сконденсированный в холодильнике, собирали в объеме 5 см3 в коническую колбу-приемник;

- в отогнанный объем дистиллята добавляли 8 г сухого гидроксида калия и помещали смесь в замкнутую систему (виала V=20 см3) дозатора равновесного пара, далее смесь нагревали до установления фазового равновесия, в частности, в течение 20 минут;

- после установления фазового равновесия при оптимальных параметрах цикла дозирования проб крови (температура термостата - 80°C, узла дозирования - 130°C, переходной линии - 135°C, время инкубации - 25 мин, расход газа-носителя - 60 мл/мин, оптимальное давление наддува - 0,2 bar) газовая фаза вводилась в капиллярную колонку газового хроматографа через испаритель и анализировалась в условиях: термоионный детектор (ТИД), капиллярная колонка DB-624 - 30m*0,32mm*0,25µm, температурный режим: колонка - от 50-200°C; испаритель - 200°C; детектор - 250°C; расход газа-носителя 1 (азот) - 1,4 см3/мин; расход газа-носителя 2 (азот) - 20 см3/мин;

- количественное содержание N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина устанавливали по градуировочным графикам, которые традиционно строятся посредством использования отобранных у контрольной группы детей проб крови (дети проживают на экологически безопасной территории и их пробы крови не содержат нитрозамины) и стандартных растворов N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина.

Градуировочный график строится следующим образом.

Сначала осуществляют приготовление исходного раствора. Для этого в мерную пробирку объемом 10 см3 дозатором добавляют бидистиллированную воду в объеме 2 см3, вводят микрошприцем по 2 мм3 N-нитрозаминов (N-нитрозодиметиламин, N-нитрозодиэтиламин) (вводят по отдельности в одну мерную колбу. Строят отдельно график для первого и для второго соединения). Весовое содержание компонентов в исходном растворе составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): N-нитрозодиметиламин - 1,005 мг/см3, N-нитрозодиэтиламин - 0,942 мг/см3. Срок хранения раствора 12 часов.

Затем готовят рабочий раствор. В мерную пробирку объемом 2 см3, содержащую бидистиллированную воду в объеме 1,0 см3, вводят дозатором 20 мм3 исходного раствора N-нитрозаминов. Массовая концентрация N-нитрозодиметиламина в рабочем растворе для градуировки составляет 0,02 мг/см3 и N-нитрозодиэтиламина - 0,0188 мг/см3. Срок хранения раствора 5 часов.

Приготовление градуировочных растворов. Градуировочные растворы N-нитрозаминов готовят в мерных пробирках объемом 5 см3. Для этого в каждую пробирку дозатором вносят по 5 см3 крови и добавляют исходный раствор для градуировки в соответствии с таблицей 1 и тщательно перемешивают.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади хроматографического пика (Гц·с) от массовой концентрации N-нитрозоаминов (мг/дм3) в крови, устанавливают по 5 сериям измерений по 5 концентрациям каждого вещества в каждой серии для каждого диапазона в соответствии с таблицей 1.

Исследуемый образец крови в объеме 5 см3 помещают в перегонную колбу объемом 100 см3, добавляют гидрооксид калия (8 г) и с помощью водяного пара, образуемого в парообразователе, отгоняют дистиллят. Дистиллят, сконденсированный в холодильнике, собирают в объеме 5 см3 в коническую колбу-приемник. Затем в отогнанный объем дистиллята добавляют щелочь-гидроксид калия и помещают в замкнутую систему (виала V=20 см3) дозатора равновесного пара. После установления фазового равновесия в изотермических условиях газохроматографически измеряют равновесную концентрацию N-нитрозоаминов в газовой фазе над исследуемым дистиллятом.

Для получения достоверных результатов анализ каждой градуировочной смеси проводят не менее 2-х раз. Процедуру повторяют аналогично для каждого градуировочного раствора. На полученной хроматограмме определяют площади пиков компонентов и по средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику.

Отработка оптимальных газохроматографических параметров для определения N-нитрозаминов в крови осуществлялась с использованием аппаратно-программного комплекса на базе газового хроматографа "Кристалл-5000" с термоионным детектором (ТИД). Высокая эффективность метода достигнута путем подбора оптимальных условий газохроматографического анализа: термоионный детектор (ТИД), капиллярная колонка DB-624 - 30m*0,32mm*0,25µm, температурный режим: колонка - от 50-200°C; испаритель - 200°C; детектор - 250°C; расход газа-носителя 1 (азот) - 1,4 см3/мин; расход газа-носителя 2 (азот) - 20 см3/мин.

В ходе лабораторных испытаний были проведены исследования по изучению полноты экстракции из образца крови изучаемых соединений с использованием различной массы щелочи-гидроксида калия. Полученные результаты представлены в таблице 2.

Экспериментальным путем установлено, что полнота извлечения N-нитрозоаминов из крови с добавлением гидроксида калия в количестве 8 г в объем крови 5 см3 (соотношение объема крови к массе щелочи 1:1,6 соответственно) и газохроматографическим анализом равновесной паровой фазы составила для N-нитрозодиметиламина - 98% и N-нитрозодиэтиламина - 77% (таблица 2).

С целью повышения степени экстракции N-нитрозоаминов из крови в процессе изучения полноты экстракции были проведены дополнительные исследования по выделению изучаемых соединений из биологической жидкости методом перегонки с водяным паром (отгон различного объема дистиллята V=5 см3 и 10 см3) и газохроматографическим анализом равновесной паровой фазы. В условиях сравнительно низкой температуры летучие N-нитрозоамины, имеющие основной характер, удается разделить перегонкой с водяным паром, меняя pH среды, и в щелочной среде эти соединения перегоняются без разложения, что позволяет получить их в чистом виде. Указанные опыты проводили следующим образом.

Исследуемый образец крови в объеме 5 см3 помещали в перегонную колбу объемом 100 см3, добавляли гидрооксид калия (8 г) и с помощью водяного пара, образуемого в парообразователе, отгоняли дистиллят. Дистиллят, сконденсированный в холодильнике, собирали в объеме 5 см3 или 10 см3 в коническую колбу-приемник. Затем в отогнанный объем дистиллята добавляли щелочь - гидроксид калия (4 г или 8 г) и помещали в замкнутую систему (виала V=20 см3) дозатора равновесного пара. После установления фазового равновесия в изотермических условиях газохроматографически измеряли равновесную концентрацию N-нитрозоаминов в газовой фазе над исследуемым дистиллятом.

Средние значения полноты экстракции N-нитрозоаминов с добавлением различной массы гидроксида калия в объем дистиллята представлены в таблице 3.

Экспериментальным путем установлено, что при извлечении летучих N-нитрозоаминов (N-нитрозодиметиламин, N-нитрозодиэтиламин) из биологической среды - крови, с добавлением гидрооксида калия массой 8 г в 5 см3 крови методом дистилляции с водяным паром и добавлением 8 г щелочи в объем дистиллята 5 см3 при температуре паробразователя t=100±5°C и круглодонной колбы с кровью t=80±5°C и последующим газохроматографическим анализом равновесной паровой фазы, степень экстракции для N-нитрозодиметиламина составила 98,5% и N-нитрозодиэтиламина - 79,8% (таблица 3). Это доказывает, что только при выдерживании соотношения 1 объемная часть пробы крови к 1,6 массовой части гидроксида калия и при одновременном соотношении 1 объемная часть дистиллята к 1,6 массовой части гидроксида калия будет обеспечена высокая степень экстракции нитрозоаминов из пробы крови, а значит высокая точность и чувствительность.

Учитывая, что не любая щелочь пригодна для определения N-нитрозоаминов в крови, в процессе исследований для извлечения N-нитрозоаминов из крови предлагаемым способом при выборе щелочи применяли гидроксид калия и гидроксид натрия. Прецизионность анализа и эффективность извлечения N-нитрозаминов из крови устанавливали экспериментально способом «введено-найдено» с применением стандартных растворов. Средние значения полноты экстракции N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина из крови методом анализа равновесной паровой фазы при п=5 (п - число проб) и с вероятностью р=0,95 показали, что при использовании гидроксида калия полнота извлечения составила для N-нитрозодиметиламина - 98,5% и N-нитрозодиэтиламина - 79,8%; а при использовании гидроксида натрия лишь для N-нитрозодиметиламина - 35% и N-нитрозодиэтиламина - 29%.

Таким образом, результаты исследований доказывают, что благодаря совокупности и последовательности операций предлагаемого способа, их режимам и достигается высокая степень точности и чувствительности определения N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина в крови методом дистилляции с водяным паром и газохроматографическим анализом равновесной паровой фазы.

При проведении исследований также проводили анализы проб крови у детей (группа обследования), проживающих в условиях экологического неблагополучия с возможным влиянием N-нитрозаминов на организм ребенка. Пробы крови обрабатывали предлагаемым способом и по калибровочному (градуировочному) графику определяли содержание компонентов в пробах крови детей. Полученные результаты приведены в таблице 4.

Исследования показали, что предлагаемый способ позволяет с высокой степенью точности и чувствительности выполнять определение N-нитрозоаминов (N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина) в крови в диапазоне концентраций от 0,002 до 0,1 мкг/см3 (концентрация N-нитрозодиэтиламина в крови детей (таблица 4) определена на уровне нижнего предела определения, который составляет для предлагаемого способа 0,00048 мкг/см3), при погрешности способа 23,4% и при оптимальных параметрах газохроматографического анализа и пробоподготовки. Установлено, что наибольшая степень извлечения N-нитрозоаминов из крови достигается при использовании при реализации предлагаемого способа дистилляции летучих N-нитрозаминов из биологической среды (кровь) с водяным паром и последующим газохроматографическим анализом равновесной паровой фазы в щелочной среде при рН=10-11 и составила для N-нитрозодиметиламина 98,5%, для N-нитрозодиэтиламина - 79,8%.

1. Способ количественного определения N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина в крови методом капиллярной газовой хроматографии, включающий отбор пробы крови, подготовку ее к анализу и количественное определение нитрозоамина в пробе методом газохроматографического анализа, отличающийся тем, что подготовку пробы крови к анализу производят путем добавления к ней гидроксида калия при соотношении 1 объемная часть пробы к 1,6 массовой части гидроксида калия, с последующей отгонкой дистиллята с помощью водяного пара и введением в дистиллят гидроксида калия при соотношении 1 объемная часть дистиллята к 1,6 массовой части гидроксида калия, далее смесь дистиллята и гидроксида калия помещают в замкнутую систему дозатора равновесного пара, где в изотермических условиях осуществляют термостатирование для установления фазового равновесия, затем производят отбор газовой фазы над дистиллятом и выполняют введение этой фазы в капиллярную колонку газохроматографа, далее осуществляют газохроматографическое разделение N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина, а количество каждого указанного вещества устанавливают по градуировочному графику.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что газохроматографическое разделение N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина осуществляют с использованием газового хроматографа с термоионным детектором на капиллярной колонке DB-624 - 30m*0,32mm*0,25µm, при температурном режиме: колонка - от 50°C-200°C; испаритель - 200°C; детектор - 250°C; расход газа-носителя - азота - 20 см3/мин, с делением потока 1:14,3.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что термостатирование смеси в дозаторе равновесного пара осуществляют в течение 20 минут.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и касается штамма вируса африканской чумы свиней. Штамм выделен от убитого кабана в охотхозяйстве «Озерное» Медынского района Калужской области в 2014 г., паспортизирован с названием «Калуга-2014» и депонирован в Государственной Коллекции микроорганизмов ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3115.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ идентификации антитела, которое специфически связывается с интересующим антигеном на клеточной поверхности, предусматривающий иммунизацию животного вектором экспрессии, кодирующим антиген клеточной поверхности; приведение в контакт клеток, содержащих на своей поверхности антитела и выделенных из животного, подвергнутого иммунизации, причем антитела связаны с первой сортируемой меткой, с клетками, экспрессирующими антиген, связанный со второй сортируемой меткой; определение специфического связывания с использованием клеточного сортера по наличию первой и второй сортируемой метки в клеточном комплексе; а также идентификацию участков, определяющих комплементарность с антигеном (CDR), у идентифицированного антитела и прививку CDR на каркасную область акцепторного антитела.

Изобретение относится к области методов молекулярно-генетической диагностики в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) и касается прогнозирования качества получаемых эмбрионов.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки эффективности терапии генитального туберкулеза, включающий контрольные иммунологические обследования, отличающийся тем, что по окончании интенсивной фазы терапии проводят 1-й контроль, который включает определение индекса стимуляции интерферона-гамма (ИФН-γ) с туберкулином очищенным (ППД-Л), определение уровней специфических иммуноглобулинов (IgA, IgM) к микобактерии туберкулеза (МБТ) методом иммуноферментного анализа (ИФА), а 2-й контроль проводят через 6-11 месяцев после окончания основного курса терапии, при этом в случае если индекс стимуляции ИФН-γ с ППД-Л по окончании интенсивной фазы противотуберкулезной терапии был выше 7, 8 - только по ИФН-γ с ППД-Л, в случае если оптическая плотность IgM к МБТ была более 0,600 - только по IgM к МБТ, в случае если оптическая плотность при IgA к МБТ была более 0,450 - контроль проводят только по IgA к МБТ; при этом по результатам контрольных исследований рекомендуют продление, или коррекцию, или окончание терапии.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной биологии, экологии, токсикологии, и касается диагностики клеточного иммунодефицита у экспериментальных животных в условиях экспозиции стронцием.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к биотехнологии, и может быть использована для выявления in vitro антитела, обладающего эффекторной функцией. Для этого смешивают естественные клетки-киллеры и опухолевые клетки, добавляют примерно по 104 клеток на 200 мкл в лунки многолуночного планшета.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования раннего токсикоза тяжелой степени, включающий определение в крови беременных женщин концентрации лептина и фактора роста плаценты (ФРП), отличающийся тем, что дополнительно производят определение значения максимальной амплитуды агрегации тромбоцитов (МААТ), содержания лимфоцитов CD95+ (Л CD95+), уровня общего IgE и концентрации C-реактивного белка (СРБ), и при значении этих показателей в сроки 6-8 недель и 9-12 недель беременности соответственно: концентрации лептина (нг/мл) - 18,9±2,8 и 23,4±3,2; концентрации ФРП (пг/мл) - 55±4,1 и 91±6,2; значении МААТ (%) - 42,6±1,4 и 45,1±1,5; содержании Л CD95+ (%) - 44,2±3,5 и 49,7±3,8; уровня общего IgE (пг/мл) - 295±19 и 322±16; концентрации СРБ (мкг/мл) - 96±4,2 и 108±5,3 прогнозируют ранний токсикоз тяжелой степени.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу проведения иммунохроматографического анализа. Способ включает регистрацию окрашенных коллоидным маркером специфических комплексов антиген-антитело на поверхности рабочей мембраны.

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии, и может быть использовано для диагностики стационарной миопии высокой степени. Для этого при хирургии выделяют фрагмент теноновой капсулы, который измельчают и замораживают в парах жидкого азота до -180°С.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики in vitro повышенной чувствительности к псевдоаллергенам и подбору противоаллергических препаратов. Для этого формируют образцы, содержащие 0,95-1,05×106 лейкоцитов, и доводят их раствором Хенкса до объема 0,69 мл с получением проб крови.

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для диагностики нагноившейся постнекротической псевдокисты поджелудочной железы. Для этого в крови больного определяют активность фагоцитов по уровню экспрессии CD 14+/HLA-DR+ методом проточной цитометрии и статистического ROC-анализа. При содержании CD14+/HLA-DR+ ниже 85% диагностируют нагноившуюся постнекротическую псевдокисту поджелудочной железы. Использование данного способа позволяет диагностировать нагноившуюся постнекротическую псевдокисту поджелудочной железы, что позволяет определять тактику ведения таких больных и осуществлять выбор оперативного вмешательства. 2 пр., 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии, и может быть использовано в качестве способа прогнозирования риска прогрессирования стенокардии напряжения, развития гипертрофии левого желудочка и ожирения у больных ишемической болезнью сердца, сочетанной с сахарным диабетом 2-го типа. Сущность способа: выявляют генетический полиморфизм Т1565С гена ITGB3 у пациентов с ИБС, протекающей на фоне сахарного диабета 2-го типа. При обнаружении у больных аллеля С гена ITGB3 прогнозируют повышенный риск прогрессирования стенокардии напряжения, развития гипертрофии левого желудочка и ожирения. Использование изобретения в медицине позволяет прогнозировать с высокой вероятностью развитие осложнений при ишемической болезни сердца, ассоциированной с сахарным диабетом 2-го типа. 1 табл., 4 пр.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использована для определения общего периостина. Антитело против периостина содержит последовательности гипервариабельного участка ("HVR") SEQ ID NO: 1 и последовательности HVR SEQ ID NO: 2 или последовательности HVR SEQ ID NO: 3 и последовательности HVR SEQ ID NO: 4. Группа изобретений относится также к способу определения общего периостина и к композиции для его определения. Использование данной группы изобретений позволяет распознавать изоформы периостина с высокой чувствительностью для диагностики астмы у пациента. 6 н. и 14 з.п. ф-лы, 23 ил., 8 табл., 8 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии и представляет собой способ оценки тяжести течения ретинобластомы у детей. Согласно изобретению в сыворотке крови определяют антитела к раннему антигену вируса Эпштейна-Барр и при их наличии оценивают течение как тяжелое. Осуществление изобретения обеспечивает повышение эффективности терапии за счет раннего определения тяжести течения ретинобластомы у детей. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к психиатрии, и может быть использовано для прогноза формирования затяжного течения соматоформных расстройств. Для этого проводится иммунологическое обследование и при одновременном содержании в крови Т-лимфоцитов (CD3+) 59% и менее, цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8+) 19% и менее, лимфоцитов с маркерами поздней активации (HLADR+) 20% и более прогнозируют затяжное течение соматоформных расстройств. Использование данного изобретения позволяет прогнозировать течение соматоформных расстройств на более ранних этапах заболевания и целенаправленно проводить психофармакологические мероприятия с включением методов иммунокоррекции. 1 табл., 2 пр.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа иммунологического анализа образца крови или компонентов крови на 25-гидроксивитамин D, при котором для высвобождения витамина D из эндогенных связывающих белков добавляют к образцу перфторалкильную кислоту с длиной углеродной цепи от 4 до 12 атомов углерода или ее соли. Группа изобретений также касается набора для проведения иммунологического анализа с применением указанного способа; применения в иммунологическом анализе образца крови или компонентов крови на 25-гидроксивитамин D перфторалкильной кислоты или ее соли с длиной углеродной цепи от 4 до 12 атомов углерода для высвобождения витамина D из эндогенных связывающих белков. Группа изобретений обеспечивает анализ образца крови или компонентов крови на 25-гидроксивитамин D. 3 н. и 9 з.п. ф-лы, 1 пр., 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, пульмонологии и может быть использовано для оценки степени нарушения энергетического метаболизма лимфоцитов крови у детей с внебольничной пневмонией (ВП). Для этого методом проточной цитометрии проводят учет лимфоцитов со сниженным мембранным потенциалом митохондрий. При показателях от 0 до 35% диагностируют уровень нормы, 36 до 75% - субкомпенсированные нарушения, не требующие специфической терапии, 76% и более - декомпенсированные нарушения, требующие в комплексном лечении внебольничных пневмоний назначения энерготропных препаратов. Использование данного способа позволяет определить нарушения энергообеспеченности клеток на более раннем этапе, при отсутствии изменений активности сукцинатдегидрогеназы, что позволяет использовать его в клинической практике для выделения групп риска детей с ВП, требующих метаболической коррекции. 1 табл., 4 пр. .

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложены диагностический инструмент для анализа образца и способ подготовки и анализа образца. Диагностический инструмент содержит носитель зонда, зонд, множество кассет пробирок, изоляционную зону, проточный цитометр. Способ подготовки и анализа образца включает загрузку кассет с пробирками, перемещение зонда вдоль одноосевого трека для отбора проб из одной из выбранных пробирок, перемещение зонда вдоль одноосевого трека для внесения проб в пробирки, перемещение зонда вдоль одноосевого трека для отбора реагента для проточного цитометра, внесение реагента в лунку или пробирку в изоляционной зоне для подготовки пробы для теста, анализ подготовленных комбинаций пробы/реагента посредством проточного цитометра. Изобретения обеспечивают автоматизацию анализа и повышение производительности анализа. 2 н. и 13 з.п. ф-лы, 6 ил.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и касается способа прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы в зависимости от наличия/отсутствия сопутствующей неинфекционной патологии глаз у индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России. Способ включает забор крови и выделение ДНК из периферической венозной крови с дальнейшим проведением анализа полиморфизмов генов - VEGF-A с.-958C>T, IGF-1 c.-1410T>C, TGFβ-1 c.-1347T>C, IGFR-1 g.99181663C>T. Прогнозируют повышенный риск развития первичной открытоугольной глаукомы у индивидуумов без сопутствующей неинфекционной патологии глаз в случае выявления аллеля T IGFR-1 либо комбинации аллеля С VEGF-A с аллелем Т IGFR-1 либо комбинации аллеля С VEGF-A с аллелем Т IGF-1 с аллелем Т TGFβ-1 либо комбинации аллеля Т VEGF-A с аллелем Т IGF-1 с аллелем С TGFβ-1. Прогнозируют низкий риск развития ПОУГ у индивидуумов без сопутствующей патологии глаз при выявлении генотипа CС IGFR-1 и сочетания генетических вариантов Т VEGF-A и СС IGF-1. Прогнозируют повышенный риск развития первичной открытоугольной глаукомы среди индивидуумов с сопутствующей патологией глаз в случае выявления комбинации аллелей С IGF-1 с С TGFβ-1 либо комбинации аллеля С VEGF-A с генотипом ТС IGF-1 с аллелем С TGFβ-1. Прогнозируют низкий риск развития данного заболевания у индивидуумов с сопутствующей патологией глаз при выявлении генотипа ТТ TGFβ-1. 6 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики метастазов рака и неходжкинских лимфом. Клеточный материал из образцов лимфатических узлов помещают в питательную среду накопления, состоящую из раствора Хенкса, реоплиглюкина и альбумина, смешанных в равных объемах. Клеточную суспензию вносят по 100 мл на дно двух пробирок, добавляют 5 мкл моноклонального антитела Ber ЕР4 FITC в одну пробирку и 5 мкл моноклонального антитела CD45, Leucocyte Common Antigen/FITC в другую пробирку, материал 5 с перемешивают, инкубируют 20 мин при t° 2-8°C. Затем взвесь клеток распределяют по 50-100 мкл и центрифугируют при 1000 об./мин в течение 5 мин, из осадка готовят препарат, которые окрашивают ядерным флюоресцентным красителем Dapi и осуществляют их флуоресцентную микроскопию. При положительной экспрессии на мембранах клеток эпителиального маркера Ber ЕР4 FITC - диагностируют метастазы рака, а в случае положительной экспрессии на мембранах клеток общего лейкоцитарного антигена CD45, Leucocyte Common Antigen/FITC и отсутствия экспрессии на мембранах клеток эпителиального маркера Ber ЕР4 FITC - диагностируют неходжкинскую лимфому. Использование данного метода позволяет быстро проводить дифференциальную диагностику метастазов рака и лимфом лимфатических узлов с целью установления распространенности опухолевого процесса. 2 ил., 2 пр.
Наверх