Способ оценки тяжести течения ретинобластомы у детей


 


Владельцы патента RU 2578952:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии и представляет собой способ оценки тяжести течения ретинобластомы у детей. Согласно изобретению в сыворотке крови определяют антитела к раннему антигену вируса Эпштейна-Барр и при их наличии оценивают течение как тяжелое. Осуществление изобретения обеспечивает повышение эффективности терапии за счет раннего определения тяжести течения ретинобластомы у детей. 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для оценки тяжести течения ретинобластомы у детей.

Ретинобластома (РБ) - злокачественная опухоль сетчатки у детей раннего возраста. В большинстве случаев оценку тяжести течения РБ проводят, основываясь на выявлении определенных клинических признаков и результатов различных методов обследования: биомикроскопии, офтальмоскопии, ультразвуковой эхографии, оптической когерентной томографии, флюоресцентной ангиографии, компьютерной томографии, молекулярно-генетического анализа, тонкоигольной аспирационной биопсии, иммунологических исследований [Бровкина А.Ф. Офтальмоонкология. М.: Медицина, 2002. - 421 с.; Нероев В.В., Саакян С.В., Мякошина Е.Б., Тацков Р.А., Зайцева О.В., Рябина М.В. Первый опыт применения оптической когерентной томографии в диагностике первичной и остаточной ретинобластомы // Вестник офтальмологии. - №2. - 2012. - С. 8-12]. Однако, несмотря на существующий арсенал диагностических методов, больные обращаются в высокоспециализированные учреждения с далекозашедшей стадией (D, E) РБ, осложненной кровоизлияниями, вторичной гипертензией, гипопионом. В таких случаях единственным методом лечения является энуклеация в комплексе с полихимиотерапией [Пантелеева О.Г. Ретинобластома: прогностическая значимость клинических симптомов, эффективность комбинированного лечения: Автореф. дис. канд. мед. наук. - М., 1997. - 185 с.; Саакян С.В. Ретинобластома (клиника, диагностика, лечение) / М.: Медицина, 2005. - 199 с.; Shields C.L. Retinoblastoma. Jaypee Brothers Medical Bublishers (P) Ltd., 2012. - 291 p.].

При A, B, C стадиях РБ возможно провести комбинированное органосохраняющее лечение, позволяющее сохранить не только жизнь, но и глаз ребенка как анатомический орган.

Онкогенное действие вирусов предполагалось давно, однако только в последние годы были получены прямые доказательства этиологической роли некоторых из них в генезе опухолей разной локализации. Среди возможных механизмов онкогенного действия вирусов выделяют нарушение клеточного цикла, ингибирование апоптоза [Goebel N., Mittelviefhaus А.Н., Reinhard Т., Bogdan С., Auw-Haedrich. Chlamydia psittaci, Helicobacter pylori and ocular adnexal lymphoma - is there an association? // Leukemia Research - 2007. - Vol. 31. - No 10. - P. 1450-1452].

Вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ) относят к порядку Herpesvirales, семейству Herpesviridae, подсемейству Gammaherpesvirinae, роду Lymphocryptovirus, виду герпесвирус человека 4 [Straus S.E. et al: Epstein-Barr virus infections: Biology, pathogenesis, and management // Ann. Intern. Med. - 1993. - Vol. 118. - P. 45; Okano M. et al: Epstein-Barr virus and human diseases: Recent advances in diagnosis // Clin. Microbiol. Rev. - 1988. - Vol. 1. - P. 300].

Развитие ВЭБ-ассоциированной карциномы желудка связывают с супрессивным влиянием вируса на белок ретинобластомы (РБ). Белок РБ играет важную регуляторную роль в клеточном росте и дифференцировке, его подавление - существенный, хотя и не единственный фактор, в развитии опухоли. Нарушение в транскрипции или экспрессии этого белка тесно коррелирует с возникновением и развитием опухоли желудка [Goebel N., Mittelviefhaus А.Н., Reinhard Т., Bogdan С., Auw-Haedrich. Chlamydia psittaci, Helicobacter pylori and ocular adnexal lymphoma-is there an association? // Leukemia Research - 2007. - Vol. 31. - No 10. - P. 1450-1452].

Риск развития РБ у детей с мутацией в гене RB1 повышается более чем на 90%. В последние годы высказана гипотеза о роли онкопротеина вируса папилломы человека Е7 в инактивации белка РБ и развитии спонтанной односторонней ретинобластомы [Orjuela М., Castaneda V.P., Ridaura С., et al Presence of human papillomavirus in tumor tissue from children with retinoblastoma: an alternative mechanism for tumor development // Clin. Cancer Res. - 2000. - Vol. 161. - Р. 4010-16]. Известна роль ВЭБ в этиопатогенезе ряда лимфом, саркомы Капоши [Cohen J.I. Epstein-Barr virus lymphoproliferative disease associated with acquired immunodeficiency // Medicine. - 1991. - Vol. 70. - P. 137; Pathmanathan R. et al. Clonal proliferations of cells infected with Epstein-Barr virus in preinvasive lesions related to nasopharyngeal carcinoma // N. Engl. J. Med. - 1995. - Vol. 333. - P. 693; Shin M.K., Sage J., Lambert P.F. Inactivating all three rb family pocket proteins is insufficient to initiate cervical cancer // Cancer Res. - 2012. - Vol. 15. - No 72. - P. 5418-27], однако связь ВЭБ-инфекции с тяжестью течения РБЛ до настоящего времени не была установлена.

Ранее проводили оценку тяжести течения РБ с помощью ультразвукового исследования. При этом выявляли локализацию, проминенцию, диаметр основания опухоли, наличие кальцинатов и при больших параметрах опухоли, юкстапапиллярной локализации и отсутствии кальцинатов оценивали течение как тяжелое [Саакян С.В. Ретинобластома (клиника, диагностика, лечение) / М.: Медицина, 2005. - 199 с.]. Этот способ принят за ближайший аналог. Однако указанный способ описывает лишь локализацию и размеры опухоли, не учитывает роль этиопатогенетических факторов в клиническом течении РБ.

Задачей настоящего изобретения является разработка способа выявления тяжелого течения РБ у детей, характеризующегося переходом из стадии С в стадию D или Е, при котором отмечают появление на глазном дне новых узлов РБ, продолженного опухолевого роста, вторичной гипертензии и/или гемофтальма, несмотря на проводимое лечение.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является возможность выбора соответствующей адекватной тактики лечения РБ у детей с учетом раннего определения индивидуальных особенностей клинического течения заболевания путем выявления серологических маркеров инфицированности онкогенным ВЭБ.

Технический результат достигается путем выявления уровня IgG-антител к раннему антигену вируса Эпштейна-Барр в сыворотке крови.

Сущность изобретения состоит в следующем.

Для оценки (выявления) тяжести течения ретинобластомы у детей в сыворотке крови определяют антитела к раннему антигену вируса Эпштейна-Барр и при их наличии оценивают течение как тяжелое.

Пациентам проведены все общеофтальмологические методы исследования, включая исследование сыворотки крови с выявлением в ней уровня IgG-антител к раннему антигену вируса Эпштейна-Барр.

В Российской Федерации вирусами группы герпеса инфицировано 82-98% популяции. Для этих микроорганизмов характерно длительное персистирование в организме инфицированного человека и склонность к реактивации под влиянием разнообразных неблагоприятных экзо- и эндогенных факторов.

В настоящее время доказано, что около 20% всех опухолей человека индуцируются вирусами или развиваются при их активном участии. Так доказано, что вирус Эпштейна-Барр, воздействуя на лимфоидную, эпителиальную и мышечную ткани человека, вызывает возникновение новообразований (лимфомы Беркитта, В-клеточных лимфобластных лимфом, Т-клеточных лимфом, болезни Ходжкина, NK-лимфомы, назофарингеальной карциномы, карциномы околоушных слюнных желез, желудка, лейомиосаркомы).

Вышесказанное послужило поводом для установления наличия или отсутствия активации ВЭБ при злокачественной опухоли - ретинобластоме.

Нами впервые была установлена связь между тяжестью течения РБ и наличием антител к раннему антигену вируса Эпштейна-Барр.

Способ осуществляется следующим образом.

Все дети обследованы под наркозом в условиях масимального медикаментозного мидриаза. В условиях медикаментозного сна с помощью анестезиологической бригады взята кровь из вены ребенка. В сухую пробирку берут 4 мл крови, дают отстояться форменным элементам крови и аккуратно (не захватывая эритроциты) отсасывают сыворотку. Сыворотку разливают по 0,3 мл, пробы хранят при -10-14°C до использования. Размораживают образцы однократно в день постановки анализа, повторное замораживание и размораживание проб не допускается.

Сыворотку исследуют в твердофазном иммуноферментном анализе (ИФА) с коммерческими наборами согласно инструкции производителя (в настоящее время несколько фирм выпускают коммерческие тест-системы для выявления IgG-, IgA- и IgM-антител к исследуемым нами возбудителям).

Постановка ИФА включает несколько этапов:

1. Внесение сыворотки пациента в лунки полистироллового планшета, на дне которого сорбирован известный антиген; контакт; отмывание. При наличии в сыворотке антител, гомологичных сорбированному антигену, образуется прочный иммунный комплекс, который не удаляется при последующем отмывании.

2. Внесение в лунки конъюгата антивидовых антител с пероксидазой хрена, контакт, отмывание. Если на этапе 1 произошло образование иммунного комплекса антиген-антитело, конъюгат связывается с ним и не удаляется при отмывании.

3. Внесение хромогена, контакт. Под воздействием хромогена происходит изменение окраски лунок, в которых присутствует комплекс антиген-антитело-конъюгат. Раствор из бесцветного становится окрашенным.

4. Внесение стоп-реагента для окончания реакции.

5. Учет результатов на спектрофотометре (определение оптической плотности). Уровень антител выражают в разнице оптической плотности (ΔОП) исследуемой сыворотки по сравнению с контрольным образцом, в МЕ/мл или титре антител (в зависимости от инструкции фирмы, производящей наборы).

Производитель указывает значение cut off (отсекающей), выше которого показатели ОП оцениваются как положительные (антитела обнаружены), ниже - как отрицательные (антитела не выявлены). При выявлении в сыворотке крови серопозитивности к ВЭБ оценивают тяжелое течение РБ.

Пример 1

При диспансерном осмотре у ребенка Н., 4 мес., на глазном дне выявили серый проминирующий фокус в левом глазу.

Ребенка обследовали в условиях медикаментозного сна с максимальным медикаментозным мидриазом.

Проведенные офтальмологические исследования:

1. Визометрия: Visus OD - предметное зрение,

Visus OS - предметное зрение (эксцентрично).

2. Тонометрия: ВГД OD - 18 мм рт.ст., OS - 18 мм рт.ст.

3. Биомикроскопия: OU - спокойны, среды прозрачны.

4. Прямая офтальмоскопия и Ret Cam II:

OD - На глазном дне - ДЗН бледно-розовый, границы четкие. В макулярной зоне рефлекс четкий. На периферии очаговой патологии не выявлено.

OS - диск зрительного нерва бледно-розовый, границы четкие, в 2 PD от ДЗН с 5 до 6 определяется беспигментный очаг, серого цвета, овальной формы, с нечеткими и неровными границами, с гладкой поверхностью.

5. Эхография:

OD - «+» - ткань не определяется,

OS - «+» - ткань с проминенцией 5,2 мм, основание - 12,4 мм.

6. Результаты исследования в сыворотке крови:

Уровень IgG-антител к ранним (неструктурным) антигенам онкогенного вируса Эпштейна-Барр составил 0,9 Δ оп.

Диагноз - ретинобластома, группа С.

Проведено 3 курса системной полихимиотерапии, после чего ребенка обследовали в условиях медикаментозного сна с максимальным медикаментозным мидриазом.

Проведенные офтальмологические исследования после 3 курсов системной полихимиотерапии:

1. Визометрия: Visus OD - предметное зрение,

Visus OS - предметное зрение (эксцентрично).

2. Тонометрия: ВГД OD - 18 мм рт.ст., OS - 28 мм рт.ст.

3. Биомикроскопия: OU - спокойны, среды прозрачны.

4. Прямая офтальмоскопия и Ret Cam II:

OD - На глазном дне - ДЗН бледно-розовый, границы четкие. В макулярной зоне рефлекс четкий. На периферии очаговой патологии не выявлено.

OS - диск зрительного нерва бледно-розовый, границы четкие, в парамакулярной зоне, распространяясь к крайней периферии определяется рыхлая диффузная ткань серого цвета. На крайней периферии множественные мелкие узлы опухоли.

5. Эхография:

OD - «+» - ткань не определяется,

OS - «+» - ткань с максимальной проминенцией 4,2 мм, основание - больше 22 мм.

Отмечается неблагоприятное, тяжелое течение РБ, несмотря на проводимое лечение. Рекомендована энуклеация левого глаза с проведением 4 курсов системной полихимиотерапии с дальнейшим наблюдением обоих глаз.

Пример 2

При диспансерном осмотре у ребенка Ж., 9 мес., на глазном дне выявили серый проминирующий фокус в левом глазу.

Ребенка обследовали в условиях медикаментозного сна с максимальным медикаментозным мидриазом.

Проведенные офтальмологические исследования:

1. Визометрия: Visus OU - предметное зрение.

2. Тонометрия: ВГД OU - 18 мм рт.ст.

3. Биомикроскопия: OU - спокойны, среды прозрачны.

4. Прямая офтальмоскопия и Ret Cam II:

OD - На глазном дне - ДЗН бледно-розовый, границы четкие. В макулярной зоне рефлекс четкий. На периферии очаговой патологии не выявлено.

OS - диск зрительного нерва бледно-розовый, границы четкие, в 1,5 PD от ДЗН с 6 до 7 имеется беспигментный очаг, серого цвета, овальной формы, с нечеткими и неровными границами, с гладкой поверхностью.

5. Эхография:

OD - «+» - ткань не определяется,

OS - «+» - ткань с проминенцией 3,7 мм, основание - 14,6 мм.

6. Результаты исследования в сыворотке крови:

IgG-антител к ранним (неструктурным) антигенам онкогенного вируса Эпштейна-Барр не выявлены.

Окончательный диагноз - ретинобластома, группа С.

Рекомендовано 3 курса полихимиотерапии с дальнейшим осмотром под наркозом для определения тактики лечения.

Проведено 3 курса системной полихимиотерапии, после чего ребенка обследовали в условиях медикаментозного сна с максимальным медикаментозным мидриазом.

Проведенные офтальмологические исследования после 3 курсов системной полихимиотерапии:

1. Визометрия: Visus OU - предметное зрение,

2. Тонометрия: ВГД OD - 18 мм рт.ст., OS - 18 мм рт.ст.

3. Биомикроскопия: OU - спокойны, среды прозрачны.

4. Прямая офтальмоскопия и Ret Cam II:

OD - На глазном дне - ДЗН бледно-розовый, границы четкие. В макулярной зоне рефлекс четкий. На периферии очаговой патологии не выявлено.

OS - диск зрительного нерва бледно-розовый, границы четкие, в 1,5 PD от ДЗН с 6 до 7 определяется белесоватый очаг, неправильной формы, с четкими и неровными границами, с неровной поверхностью

5. Эхография:

OD - «+» - ткань не определяется,

OS - кальцинат с проминенцией 2,2 мм, диаметром основания - больше 10 мм.

Отмечается благоприятное, нетяжелое течение РБ. Рекомендовано продолжить 4 курса системной полихимиотерапии с дальнейшим динамическим наблюдением обоих глаз.

Способ оценки тяжести течения ретинобластомы у детей, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют антитела к раннему антигену вируса Эпштейна-Барр и при их наличии оценивают течение как тяжелое.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использована для определения общего периостина. Антитело против периостина содержит последовательности гипервариабельного участка ("HVR") SEQ ID NO: 1 и последовательности HVR SEQ ID NO: 2 или последовательности HVR SEQ ID NO: 3 и последовательности HVR SEQ ID NO: 4.

Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии, и может быть использовано в качестве способа прогнозирования риска прогрессирования стенокардии напряжения, развития гипертрофии левого желудочка и ожирения у больных ишемической болезнью сердца, сочетанной с сахарным диабетом 2-го типа.

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для диагностики нагноившейся постнекротической псевдокисты поджелудочной железы.

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа количественного определения N-нитрозаминов (N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина) в крови.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и касается штамма вируса африканской чумы свиней. Штамм выделен от убитого кабана в охотхозяйстве «Озерное» Медынского района Калужской области в 2014 г., паспортизирован с названием «Калуга-2014» и депонирован в Государственной Коллекции микроорганизмов ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3115.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ идентификации антитела, которое специфически связывается с интересующим антигеном на клеточной поверхности, предусматривающий иммунизацию животного вектором экспрессии, кодирующим антиген клеточной поверхности; приведение в контакт клеток, содержащих на своей поверхности антитела и выделенных из животного, подвергнутого иммунизации, причем антитела связаны с первой сортируемой меткой, с клетками, экспрессирующими антиген, связанный со второй сортируемой меткой; определение специфического связывания с использованием клеточного сортера по наличию первой и второй сортируемой метки в клеточном комплексе; а также идентификацию участков, определяющих комплементарность с антигеном (CDR), у идентифицированного антитела и прививку CDR на каркасную область акцепторного антитела.

Изобретение относится к области методов молекулярно-генетической диагностики в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) и касается прогнозирования качества получаемых эмбрионов.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки эффективности терапии генитального туберкулеза, включающий контрольные иммунологические обследования, отличающийся тем, что по окончании интенсивной фазы терапии проводят 1-й контроль, который включает определение индекса стимуляции интерферона-гамма (ИФН-γ) с туберкулином очищенным (ППД-Л), определение уровней специфических иммуноглобулинов (IgA, IgM) к микобактерии туберкулеза (МБТ) методом иммуноферментного анализа (ИФА), а 2-й контроль проводят через 6-11 месяцев после окончания основного курса терапии, при этом в случае если индекс стимуляции ИФН-γ с ППД-Л по окончании интенсивной фазы противотуберкулезной терапии был выше 7, 8 - только по ИФН-γ с ППД-Л, в случае если оптическая плотность IgM к МБТ была более 0,600 - только по IgM к МБТ, в случае если оптическая плотность при IgA к МБТ была более 0,450 - контроль проводят только по IgA к МБТ; при этом по результатам контрольных исследований рекомендуют продление, или коррекцию, или окончание терапии.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной биологии, экологии, токсикологии, и касается диагностики клеточного иммунодефицита у экспериментальных животных в условиях экспозиции стронцием.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к биотехнологии, и может быть использована для выявления in vitro антитела, обладающего эффекторной функцией. Для этого смешивают естественные клетки-киллеры и опухолевые клетки, добавляют примерно по 104 клеток на 200 мкл в лунки многолуночного планшета.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования риска возникновения лимфогенного метастазирования при двухсторонней синхронной инвазивной карциноме неспецифического типа молочных желез.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогинекологии, гематологии и генетике, и предназначено для прогнозирования риска возникновения злокачественных новообразований шейки и тела матки, яичников, молочных желез.
Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования риска развития осложнений ХИЭ у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья РФ, отличающийся тем, что способ включает выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ генетического полиморфизма лимфотоксина α(+250A/G Ltα) в сочетании с такими предикторами, как наличие очагов хронической инфекции и уровень лейкоцитов, прогноз риска развития осложнений по уравнениям линейной дискриминантной функции следующего вида: у1=-114,015+108,475x1+1,267x2+2,743x3 у2=-114,720+103,793x1+2,370x2+3,399x3, где x1 - наличие очагов хронической инфекции (да - 1; нет - 2), x2 - уровень лейкоцитов (1012/л), x3 - генетический вариант по локусу+250 A/G Ltα: AA - x3=1; AG - x3=2; GG - x3=3.
Изобретение относится к области медицины и касается способа прогнозирования риска развития среднетяжелого течения хронической истинной экземы у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья РФ.

Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии, и описывает способ определения индивидуальной реактивности митохондрий человека под действием метаболических корректоров в пробах in vitro.

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики болезни Альцгеймера, сосудистой и смешанной деменции.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования ответа на стандартную двухкомпонентную противовирусную терапию у пациентов с хроническим гепатитом С (ХГС), генотипом 1в.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики синдрома неалкогольного стеатогепатита, включающий исследование слюны больного, отличающийся тем, что к капле слюны больного добавляют каплю кристаллообразующего вещества - 3% спиртового раствора хлорида меди, выдерживают полученный препарат в течение 24 часов в горизонтальном положении при температуре 20-25°C, влажности 50-70%, вдали от прямых солнечных лучей и нагревательных приборов и исследуют под микроскопом, при этом наличие и выраженность неалкогольного стеатогепатита определяют присутствием и количеством в микроскопическом препарате аморфных темно-желтых масс с наложением на кристаллы в виде «метелок» или «пучков», а отсутствие неалкогольного стеатогепатита определяют наличием в микроскопическом препарате кристаллов в виде «метелок» или «пучков» без наложения аморфных темно-желтых масс.

Изобретение относится к микроэкологии и иммунологии и может использоваться для интегральной оценки состояния здоровья женщин при прогнозировании физиологического и осложненного течения беременности на ранних сроках гестации.

Изобретение относится к клинической биохимии и представляет собой способ экспресс-определения резистентности к окислению липопротеинов низкой плотности сыворотки крови путем обработки буфером, содержащим поливинилпирролидон (ПВП) с последующей турбидиметрической регистрацией смеси, отличающийся тем, что обработку сыворотки или плазмы крови человека ведут 15% раствором ПВП-12600 в 0,01М Трис-HCl-буфере, pH 7,4, содержащем 0,15М NaCl, при объемном соотношении сыворотка : ПВП (1 : 6), инкубируют 10 и 20 мин при комнатной температуре, измеряют светопоглощение спектрофотометрически при длине волны 450 нм в опытной и контрольной пробах, вычисляют разность между ними и при отсутствии разницы констатируют нормальную резистентность к окислению ЛНП в сыворотке крови человека.
Изобретение относится к медицине, а именно к психиатрии, и касается лабораторной диагностики ведущей негативной симптоматики у больных шизофренией. Для этого определяют содержание глутамата в сыворотке крови больного шизофренией, и при концентрации его выше 48,6 нмоль/мл диагностируют ведущую негативную симптоматику. Способ обеспечивает повышение точности диагностики у данной группы больных. 2 пр.
Наверх