Способ получения нонапептидов



Способ получения нонапептидов
Способ получения нонапептидов
Способ получения нонапептидов
Способ получения нонапептидов
Способ получения нонапептидов
Способ получения нонапептидов
Способ получения нонапептидов
Способ получения нонапептидов
Способ получения нонапептидов
Способ получения нонапептидов
Способ получения нонапептидов
Способ получения нонапептидов
Способ получения нонапептидов
Способ получения нонапептидов
Способ получения нонапептидов
Способ получения нонапептидов

 

C07K1/04 - Пептиды (пептиды в пищевых составах A23, например получение белковых композиций для пищевых составов A23J, препараты для медицинских целей A61K; пептиды, содержащие бета-лактамовые кольца, C07D; циклические дипептиды, не содержащие в молекуле любого другого пептидного звена, кроме образующего их кольцо, например пиперазин-2,5-дионы, C07D; алкалоиды спорыньи циклического пептидного типа C07D519/02; высокомолекулярные соединения, содержащие статистически распределенные аминокислотные единицы в молекулах, т.е. при получении предусматривается не специфическая, а случайная последовательность аминокислотных единиц, гомополиамиды и блоксополиамиды, полученные из аминокислот, C08G 69/00; высокомолекулярные продукты, полученные из протеинов, C08H 1/00; получение

Владельцы патента RU 2592282:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский кардиологический научно-производственный комплекс" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "РКНПК" Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к твердофазному способу получения нонапептидов формулы I-III:

R - A r g 1 - L y s 2 - L y s 3 - T y r 4 - L y s 5 - T y r 6 - A r g 7 - X a a 8 - L y s 9 - N H 2 , где R = Н, Хаа = L-Arg (I);R = Me, Хаа = L-Arg (II); R = H, Хаа = D-Axg (III). Синтез нонапептидов формулы I-III осуществляют путем последовательного наращивания пептидной цепи, начиная с С-концевой аминокислоты, ковалентно связанной с полимерной матрицей, с использованием Nα-защищенных производных аргинина, для блокирования гуанидиновой функции которых применяется протонирование. Для протонирования гуанидиновой функции используют 1-гидроксибензотриазол, гексафторфосфат или тетрафторборат. Полученный нонапептидилполимер обрабатывают деблокирующим агентом для отщепления защитных групп и полимерной матрицы и в 1 стадию выделяют конечный продукт с помощью ВЭЖХ. Способ позволяет повысить выход целевых продуктов, упростить и удешевить процесс их получения. 3 з.п. ф-лы, 5 ил., 5 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области физиологически активных пептидов, а именно к способу получения нонапептидов, содержащих в молекуле остатки L-, D- или L- Nα-метил-аргинина формулы I-III:

R-Arg1-Lys2-Lys3-Tyr4-Lys5-Tyr6-Arg7-Xaa8-Lys9-NH2,

где

R = Н, Хаа = L-Arg (I)

R = Me, Хаа = L-Arg (II)

R = Н, Хаа = D-Arg (III)

Соединения (I-III) являются пептидными ингибиторами киназы легких цепей миозина (КЛЦМ) и обладают способностью регулировать изменение проницаемости эпителия и эндотелия сосудов [Секридова А.В., Сидорова М.В., Азьмуко А.А., Молокоедов А.С., Бушуев В.Н., Марченко А.В., Щербакова О.В., Ширинский В.П., Беспалова Ж.Д. Пептидные ингибиторы киназы легких цепей миозина, устойчивые к действию протеиназ. Биоорганическая химия. - 2010, 36 (4), с. 498-504]. Пептид (I) in vitro способен оказывать влияние на эпителиальную проницаемость кишечника [Clayburgh D.R., Barrett Т.Α., Tang Y., Meddings J.В., Van Eldik L.J., Watterson D.M., Clarke L.L., Mrsny R.J., Turner J.R. Epithelial myosin light chain kinase-dependent barrier dysfunction mediates Τ cell activation-induced diarrhea in vivo. J. Clin. Invest. 115 (10): 2702-2715. 2005], пептид (II) [Патент РФ №2402565, МПК C07K 7/00, опубл. 27.10.2010 г.] и пептид (III) [Патент РФ №2493164, МПК C07K, опубл. 20.09.2013] обладают способностью предотвращать повышение проницаемости сосудистого эндотелия и могут найти применение в качестве средств снижения патологической гиперпроницаемости сосудистого эндотелия в различных областях медицины (в кардиологии, токсикологии, нейрохирургии, онкологии и др.).

Известен способ получения пептидов формулы (I-III) твердофазным методом. В процессе твердофазного синтеза пептидов (ТФС) синтезируемая цепь полипептида ковалентно закрепляется на нерастворимой инертной полимерной матрице. Выделение целевого продукта на каждой стадии ТФС проводится путем соответствующих промывок и фильтрации пептидилполимера. Синтетический протокол включает в себя несколько последовательных химических превращений - стадий, которые повторяются в каждом цикле синтеза (цикл синтеза - присоединение одной аминокислоты). Стандартный цикл синтеза включает следующие основные стадии: 1) деблокирование - удаление Nα-защитной гуппы (Fmoc) обработкой пептидилполимера раствором вторичного амина (пиперидина, 4-метилпиперидина, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ена и т.п.) в подходящем растворителе; 2) получение активированного производного присоединяемой аминокислоты; 3) конденсация - присоединение остатка Fmoc-защищенной аминокислоты к пептидилполимеру за счет образования амидной связи. Между основными стадиями проводятся промывки пептидилполимера органическим растворителем для удаления избытков соответствующих реагентов. Синтез пептидов (I-III) проведен путем ступенчатого наращивания пептидной цепи, начиная с С-концевой аминокислоты на полимерной матрице, с использованием 4-кратных избытков соответствующих защищенных Fmoc-аминокислот в присутствии конденсирующего агента с последующим деблокированием конечного пептидилполимера в 2 стадии: обработкой раствором вторичного основания (пиперидина или др.) для удаления Fmoc-защиты и затем трифторуксусной кислотой со специальными добавками в течение 16 часов с последующей очисткой полученного продукта с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). На Фиг. 1 показана схема синтеза нонапептидов, соответствующего известным способам. При ТФС пептидов (I-III) использована тактика максимальной защиты боковых функций аминокислот. При ТФС пептида (I) гуанидиновые группы остатков аргинина защищали с помощью 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-сульфонильной (Pmc) группы. Суммарный выход пептида (в расчете на стартовую аминокислоту) составил 54.8%. При синтезе пептидов II и III гуанидиновые группы N-концевого Nα-метилзамещенного остатка Arg1 защищали с помощью 4-метокси-2,3,6-триметилбензолсульфонильной (Mtr) защитой, боковые группы остатков Arg7,8 блокировали Pmc-защитой. При этом получали пептиды формулы II и III с выходами 38.8 и 47.1% соответственно в расчете на стартовую аминокислоту, присоединенную к полимеру. В таблице 1 приведена сравнительная оценка известных и заявленного способов твердофазного синтеза нонапептидов (I-III).

Недостатками известных способов являются использование дорогих и труднодоступных производных аргинина, сложность отщепления защит аргинина по окончании синтеза (длительное время 16 ч и побочные реакции, связанные с отщеплением арилсульфонильных защит гуанидиновой группы остатков Arg), недостаточно высокий выход целевого продукта и многостадийность процесса.

Вышеуказанные недостатки делают известный способ малопригодным для крупномасштабного синтеза нонапептидов формулы (I-III).

Задачей изобретения является создание способа получения нонапептидов, который упрощает процедуру синтеза граммовых количеств нонапептидов формулы I-III, приводящую к: 1) отсутствию побочных реакций при удалении арилсульфонильных защит гуанидиновой функции остатков аргинина, 2) сокращению времени заключительного деблокирования пептидов, 3) удешевлению используемых производных аминокислот, 4) упрощению очистки сырого продукта.

Технический результат заключается в упрощении способа.

Технический результат достигается тем, что твердофазный синтез нонапептидов формулы I-III:

R-Arg1-Lys2-Lys3-Tyr4-Lys5-Tyr6-Arg7-Xaa8-Lys9-NH2,

где

R = Н, Хаа = L-Arg (I)

R = Me Xaa = L-Arg (II)

R = H, Хаа = D-Arg (III)

осуществляют путем последовательного наращивания пептидной цепи на полимерной матрице до получения соответствующего нонапептидилполимера с использованием производных аргинина с незащищенной гуанидиновой функцией.

Осуществление способа

При получении нонапептидов заявляемым способом iV-концевой остаток аргинина присоединяют в виде Nα- Вос(трет-бутилоксикарбонил)-Х-Arg-ОН, где X = H(I), X = СН3 (II), (III). Остатки Z-Arg7 и L-Arg8 (I) и (II) или D-Arg8 (III) вводят в пептидную цепь в виде соответствующих Fmoc-производных. На Фиг. 2 показана схема синтеза нонапептидов (II)-(III) в соответствии с заявляемым способом. Используемые производные аргинина являются недорогими коммерчески доступными продуктами, которые могут быть получены в одну стадию обычными методами органической химии в растворе. В ходе ТФС на стадии присоединения соответствующих остатков L-, D- и Nα-Ме-L-аргинина осуществляется временное блокирование его боковой гуанидиновой функции протонированием (солеобразованием).

Для протежирования гуанидиновой группы при синтезе пептидов в растворе используют хлор- и бромгидраты.

1-гидроксибензотриазол эффективно протонирует гуанидиновую группу с образованием солей, хорошо растворимых в применяемых для ТФС растворителях. В заявляемом способе присоединение Nα-Fmoc-L-Arg-OH или Nα-Fmoc-D-Arg-OH проводят в присутствии 2-3 эквивалентов HOBt по отношению к Fmoc-аминокислоте и эквивалентного количества Ν,Ν′-диизопропилкарбодиимида. Применение 1-гидроксибензотриазола (HOBt) в твердофазном синтезе (ТФС) пептидов широко известно. HOBt существенно увеличивает скорость реакции ацилирования с помощью карбодиимидов, эффективно подавляет рацемизацию и образование N-ацилмочевины.

Другим важным преимуществом предлагаемого способа является возможность использования конденсирующих агентов на основе солей фосфония/урония, таких как бензотриазол-1-илокси-трис(диметиламино)фосфония гексафторфосфат (ВОР), 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU) или тетрафторборат (TBTU) без применения органического основания. Обычно при использовании этих реагентов в ТФС для активации карбоксильной группы применяют 2-3 эквивалента органического основания (диизопропилэтиламина или N-метилморфолина), необходимого для связывания кислых противоионов - гексафторфосфата или тетрафторбората. Известно, что избытки оснований способны привести к рацемизации присоединяемой аминокислоты. Оказалось, что свободная гуанидиновая группа эффективно выполняет роль акцептора кислых противоионов и при этом происходит ее блокирование. Таким образом в случае активации карбоксильной группы Fmoc-Arg-OH с помощью солей фосфония/урония его гуанидиновая группа (рКа 12,5) играет роль органического основания. Дополнительным преимуществом заявленного способа является тот факт, что активированное производное аргинина получают in situ в условиях непрерывного технологического процесса, не требующего введения дополнительной стадии приготовления активированных производных аргинина.

Так как нонапептиды I-III содержат по три остатка аргинина в молекуле, в ходе деблокирования α-аминогруппы в аргининсодержащих пептидилполимерах, начиная с дипептидилполимера, освобождается не только α-аминогруппа, но происходит и депротонирование гуанидиновой функции уже имеющихся в растущей на полимере цепи остатков аргинина. В дальнейшем при присоединении следующей аминокислоты, независимо от выбранного способа конденсации, в реакцию ацилирования вступает не только α-аминогруппа, но и гуанидиновая группа аргинина. В результате образуются побочные продукты, которые не только понижают выход целевого вещества, но и существенно осложняют его очистку.

Для предотвращения побочной реакции ацилирования гуанидиновой функции остатков аргинина после каждой стадии деблокирования аргининсодержащих пептидилполимеров нужно проводить дополнительное протонирование аргинина. Дополнительная обработка пептидилполимера 5% раствором HOBt в Ν,Ν-диметилформамиде, Ν,Ν-диметилацетамиде или N-метипирролидоне в течение 5 мин перед конденсацией исчерпывающе защищает гуанидиновую группу остатков аргинина протонированием и при этом не препятствует ацилированию α-аминогруппы пептида, растущего на полимере. HOBt - нейтральная молекула, хорошо растворимая в органических растворителях, причем эти растворы устойчивы при хранении.

С практической точки зрения эта дополнительная промывка органично вписывается в технологический процесс ТФС, что важно при масштабировании синтеза для получения пептидов в укрупненных количествах.

По окончании синтеза полученный нонапептидилполимер обрабатывают деблокирующей смесью, в одну стадию отщепляют все защитные группы и полимерную матрицу и выделяют целевой продукт с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии. Чистоту полученных пептидов определяют с помощью ВЭЖХ на обращенной фазе, структуру пептидов подтверждают данными спектроскопии 1Н-ЯМР и масс-спектрометрии. Сравнительная оценка выходов и чистоты пептидов, полученных описанными и заявляемым способами, представлена графическими материалами. В таблице 1 представлена сравнительная оценка известных и заявленного способов твердофазного синтеза нонапептидов (I-III). На Фиг. 3 показан профиль аналитической ВЭЖХ сырого продукта твердофазного синтеза нонапептида (I) H-Arg-Lys-Lys-Tyr-Lys-Tyr-Arg-Arg-Lys-NH2 (а) - известным способом, (б) - заявленным способом. Содержание целевого пептида (I) составляет 55% (а) и 70% (б) соответственно. Колонка Kromasil C18 (4.6×250 мм), размер частиц 5 мкм, подвижная фаза: буфер А 0.05 M KH2PO4, рН 3, буфер Б 70% ацетонитрила + 30% буфера А, градиент Б от 0 до 60% за 30 мин, скорость элюции 1 мл/мин. На Фиг. 4 показан профиль аналитической ВЭЖХ сырого продукта твердофазного синтеза нонапептида (III) H-MeArg-Lys-Lys-Tyr-Lys-Tyr-Arg-DArg-Lys-NH2 (а) - известным способом, (б) - заявленным способом. Содержание пептида (III) составляет 76% (а) и 83% (б) соответственно. Колонка Kromasil C18 (4.6×250 мм), размер частиц 5 мкм, подвижная фаза: буфер А 01% TFA, буфер Б - 80% ацетонитрила + 20 буфера А, градиент Б от 0 до 60% за 30 мин, скорость элюции 1 мл/мин.

Способ иллюстрируется приведенными ниже примерами.

Пример 1. Синтез пептида H-Arg1-Lys2-Lys3-Tyr4-Lys5-Tyr6-Arg7-Arg8-Lys9-NH2 (I)

В работе использованы производные аминокислот (АА) и гексафторфосфат(бензотриазол-1-ил)окси-трис(диметиламино)фосфония (ВОР) NovaBiochem, Bachem, Швейцария), Ν,Ν′-диизопропилкарбодиимид (DIC), Ν,Ν-диизопропилэтиламин (DIPEA), гидроксибензотриазол (HOBt), триизобутилсилан (TIBS) компании Fluka, Швейцария, 4-метилпиперидин (4-MePip, Aldrich, США). Для синтеза применяли N-метилпирролидон, дихлорметан (DCM), трифторуксусную кислоту (TFA) компании Fluka, Швейцария, для хроматографии - ацетонитрил (Panreac, Испания). Аналитическую высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) проводили на хроматографе (Gilson, Франция), использовали колонку Kromasil C18, 5 мкм, (4.6×250 мм) (Akzo Nobel, США), в качестве элюентов использовали буфер А - 0.05М KH2HO4, рН 3, буфер Б - 70% ацетонитрила в буфере А (условия 1) или буфер А - 0.1% TFA, буфер Б - 80% ацетонитрила в буфере А (условия 2), элюция проводилась градиентом концентрации буфера Б в буфере А от 0% до 60% за 30 мин. Скорость потока 1 мл/мин, детекция при 220 нм. Структура полученных пептидов доказана спектрами 1Н-ЯМР и данными масс-спектрометрии. 1Н-ЯМР-спектры снимали на спектрометре WM-500 (Bruker) 500 МГц (ФРГ) в дейтерированном диметилсульфоксиде (DMSO-d6) при 300 K, концентрация пептидов составляла 2-3 мг/мл. Химические (δ, м.д.) сдвиги измерялись относительно тетраметилсилана. Масс-спектры регистрировали на приборе UltraflexTOF/TOF (Bruker Daltonics, ФРГ) с времяпролетной базой методом MALDI. Для твердофазного синтеза использовали сополимер стирола с 1% дивинилбензола с 4-(2,4-диметоксифенил)-9-флуоренилметоксикарбонил-аминометилфенокси - якорной группой (Rink-amide-полимер) фирмы Nova BioChem, Швейцария, предназначенный для получения амидов пептидов, содержащий 0.64 ммоль/г аминогрупп. Синтез амида нонапептида проводили с С-конца, ступенчато (присоединяя по одной аминокислоте), исходя из 1.0 г (0.64 ммоль) Rink-amide-полимера в соответствии с протоколом. Для присоединения всех аминокислот, за исключением аргинина, использовали 4-кратные избытки ацилирующих агентов однократно. Гуанидиновые группы остатков Arg1,7,8 блокировали с помощью протонирования. В таблице 2 представлен протокол твердофазного синтеза пептида (I). При присоединении остатков аргинина конденсацию проводили дважды с использованием 2-кратных избытков ацилирующих агентов. Полноту протекания реакции контролировали с помощью теста на свободные аминогруппы в пептидилполимерах с нингидрином.

Заключительное деблокирование и отщепление нонапептида от полимера проводили в одну стадию путем обработки соответствующего нонапептидилполимера смесью 20 мл TFA, 0.5 мл деионизованной воды и 0.5 мл TIBS в течение 2 ч. Затем полимер отфильтровывали, промывали 2×5 мл деблокирующей смеси, фильтрат упаривали и к остатку прибавляли сухой эфир. Осадок отфильтровывали, промывали DCM (3×10 мл), эфиром (3×10 мл), сушили в вакуум-эксикаторе. Получено 0.82 г сырого продукта твердофазного синтеза с содержанием основного вещества 72%. Вещество очищали порциями с помощью препаративной ВЭЖХ на приборе Beckman (США), используя колонку Диасорб С16 130Т (25×250 мм), размер частиц сорбента 10 мкм. В качестве элюентов использовали буфер А - 0.01 M раствор ацетата аммония и буфер Б - 80% ацетонитрила в воде. Элюцию проводили градиентом 0.5% в минуту буфера Б в буфере А от 100% буфера А со скоростью 10 мл/мин. Пептиды детектировали при длине волны 220 нм. Фракции, содержащие целевой продукт, объединяли, ацетонитрил упаривали и лиофилизовали. В итоге получили 0.51 г (61.2% в расчете на стартовую аминокислоту) амида нонапептида (I). Гомогенность продукта, определенная с помощью аналитической ВЭЖХ, составляет 97.4%. Масс-спектр: 1325.1, вычислено 1324.6.

Пример 2. H-(N-Me)-Arg1-Lys-Lys-Tyr-Lys-Tyr-Arg7-Arg8-Lys-NH2 (II)

Синтез амида нонапептида (II) проводили аналогично синтезу пептида (I) по схеме 2, ступенчато (присоединяя по одной аминокислоте), исходя из 1.56 г (1.0 ммоль) Rink-amide-полимера. В таблице 3 представлен протокол твердофазного синтеза пептида (II). Для присоединения всех аминокислот, за исключением аргинина, использовали 3-кратные избытки ацилирующих агентов однократно. Гуанидиновые группы остатков Arg блокировали с помощью протонирования (см. протокол). При присоединении остатков аргинина конденсацию проводили дважды с использованием 1.5-кратных избытков ацилирующих агентов. Полноту протекания реакции контролировали с помощью теста на свободные аминогруппы в пептидилполимерах с нингидрином.

Заключительное деблокирование нонапептида (II) проводили в одну стадию путем обработки соответствующего нонапептидилполимера смесью 30 мл TFA, 0.75 мл деионизованной воды и 0.75 мл TIBS в течение 2 ч. Затем полимер отфильтровывали, промывали 2×7 мл деблокирующей смеси, фильтрат упаривали и к остатку прибавляли сухой эфир. Осадок отфильтровывали, промывали DCM (3×10 мл), эфиром (3×15 мл), сушили в вакуум-эксикаторе. 1.24 г сырого продукта твердофазного синтеза с содержанием основного вещества 70% очищали порциями с помощью препаративной ВЭЖХ, как описано в примере 1. В итоге получили 0.715 г (53.4% в расчете на стартовую аминокислоту) амида нонапептида (II). Гомогенность продукта, определенная с помощью аналитической ВЭЖХ в условиях 1 и 2, составляет 97.5%. Масс-спектр: 1338.9, вычислено 1338.7.

Пример 3. H-(N-Me)-Arg1-Lys-Lys-Tyr-Lys-Tyr-Arg7-D-Arg8-Lys9-NH2 (III)

Синтез амида нонапептида (III) проводили аналогично синтезу пептида (I) по схеме 2, ступенчато (присоединяя по одной аминокислоте), исходя из 3.12 г (2.0 ммоль) Rink-amide-полимера. В таблице 4 представлен протокол твердофазного синтеза пептида (III). Для присоединения всех аминокислот, за исключением аргинина, использовали 3-кратные избытки ацилирующих агентов однократно. Гуанидиновые группы остатков Arg блокировали с помощью протонирования (см. протокол). При присоединении остатков аргинина конденсацию проводили дважды с использованием 1.5-кратных избытков ацилирующих агентов. Полноту протекания реакции контролировали с помощью теста на свободные аминогруппы в пептидилполимерах с нингидрином.

Заключительное деблокирование и отщепление нонапептида от полимера проводили в одну стадию путем обработки соответствующего нонапептидилполимера смесью 60 мл TFA, 1.5 мл деионизованной воды и 1.5 мл TIBS в течение 2 ч. Затем полимер отфильтровывали, промывали 2×15 мл деблокирующей смеси, фильтрат упаривали и к остатку прибавляли сухой эфир. Осадок отфильтровывали, промывали DCM (3×20 мл), эфиром (3×30 мл), сушили в вакуум-эксикаторе. Сырой продукт твердофазного синтеза (2.48 г) с содержанием основного вещества 83% очищали порциями. В итоге получили 1.62 г (60.5% в расчете на стартовую аминокислоту) амида нонапептида (III). Гомогенность продукта, определенная с помощью аналитической ВЭЖХ в условиях 1 и 2, составляет 97.9%. Масс-спектр: 1339.0, вычислено 1338.7. На Фиг. 5 приведены данные спектроскопии 1Н-ЯМР. В таблице 5 показаны химические сдвиги (δ, м.д.) сигналов протонов амида нонапептида (III).

1. Способ получения нонапептидов формулы I-III:
R-Arg1-Lys2-Lys3-Tyr4-Lys5-Tyr6-Arg7-Xaa8-Lys9-NH2,
где
R = Н, Хаа = L-Arg (I)
R = Me, Хаа = L-Arg (II)
R = H, Хаа = D-Arg (III)
твердофазным методом путем последовательного наращивания пептидной цепи, начиная с С-концевой аминокислоты, ковалентно связанной с полимерной матрицей, последующей обработки полученных нонапептидилполимеров деблокирующим агентом для отщепления защитных групп и полимерной матрицы и выделения конечного продукта с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), отличающийся тем, что для блокирования гуанидиновой функции остатков L-, D- и Me- L-аргинина применяют протонирование.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для протонирования гуанидиновой группы в пептидилполимерах применяют дополнительную промывку 5% раствором 1-гидроксибензотриазола.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что конденсации остатков аргинина повторяют дважды с использованием половинного количества ацилирующих агентов, а в качестве конденсирующего агента применяют ВОР, HBTU или TBTU без использования органического основания.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что конденсации остатков аргинина повторяют дважды с использованием 2-кратных избытков производных аминокислоты, 2-кратных избытков Ν,Ν′-диизопропилкарбодиимида и 4-6-кратных избытков HOBt по отношению к содержанию аминогрупп в пептидилполимерах.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к получению рекомбинантного белка, содержащего в своем составе последовательности миелопептидов, и может быть использовано для лечения вторичных иммунодефицитов.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммуногенным эпитопам MELK, и может быть использовано в медицине для лечения пациента, страдающего раком или эндометриозом.

Изобретение относится к новым молекулам-ингибиторам JNK, способам получения антител к указанным молекулам-ингибиторам JNK, а также к соответствующим антителам и клеткам, продуцирующим указанные антитела.

Изобретение относится к пептидам, включающим фикоцианобилин (PCB), и медицинскому применению указанных пептидов и PCB, благодаря идентифицированному у них нейропротекторному и/или нейрорегенеративному действию.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложен выделенный пептид, представляющий собой фрагмент белка CDC45L и обладающий способностью индуцировать цитотоксические Т-лимфоциты в форме комплекса с молекулой HLA-A*2402 или HLA-A*0201.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложен выделенный пептид, обладающий способностью индуцировать цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТЛ) в присутствии антигенпредставляющих клеток (АПК), несущих HLA-A*2402, и представляющий собой фрагмент белка FOXM1.

Изобретение относится к соединениям, обладающим активностью, снижающей уровни паратиреоидного гормона. Соединение содержит пептид и конъюгирующую группу, где пептид имеет аминокислотную последовательность формулы: Х1-Х2-Х3-Х4-Х5-X6 _Х7, в которой X1 представляет собой D-цистеин; Х2 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из D-аргинина и некатионной аминокислоты; Х3 представляет собой D-аргинин; Х4 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из D-аргинина и некатионной аминокислоты; Х5 представляет собой D-аргинин; Х6 представляет собой некатионную аминокислоту; Х7 представляет собой D-аргинин; и где пептид связан с конъюгирующей группой посредством дисульфидной связи.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к пептиду для стимуляции синтеза Hsp70 (белок теплового шока 70) или для защиты кожи от ультрафиолетового излучения. Пептид может быть представлен пептидом с общей формулой R1-AA1-AA2-AA3-AA4-R2, его стереоизомерами, их смесью и/или их косметически или фармацевтически приемлемой солью.

Изобретение относится к новым пептидам, их фармацевтическим композициям и применению в способе снижения внутриглазного давления и способе лечения или профилактики офтальмологических заболеваний, опосредованных натрийуретическими пептидами или белками.

Изобретение относится к гексапептиду формулы Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2, обладающему нейропротекторной и ноотропной активностью. Предложен новый состав фармацевтической композиции на основе пептида, который высокоэффективен в низких дозах и используется в виде капель в нос.

Изобретение относится к промежуточному соединению формулы (I) для синтеза каспофунгина в котором R1 представляет собой C(=O)NH2, CN или CH2NR3R4; R2 представляет собой CN, CO2R5, C(=O)NR6R7 или фенил; R3 и R4 независимо друг от друга являются атомами водорода; R5 представляет собой атом водорода, линейную или разветвленную C1-6 алкильную группу, С3-8 циклоалкильную группу или фенил; R6 и R7 независимо друг от друга являются атомами водорода, линейными или разветвленными C1-6 алкильными группами, возможно замещенными амино группами, С3-8 циклоалкильными группами или фенилом; или R6 и R7 вместе с атомом азота формируют гетероцикл, кольцо которого включает пять атомов.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к модифицированному тамавидину, и может быть использовано для детекции связанной с биотином субстанции. Получают модифицированный биотин-связывающий белок на основе тамавидина с последовательностью SEQ ID NO: 2, который содержит до 7 мутаций и при этом остаток аспарагина в 115 положении заменен на цистеин.

Изобретение относится к области биохимии. Описано изобретение, включающее способ получения антитела против IGF-1R при помощи катионной хроматографии.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ очистки коагуляционного фактора IX (FIX).

Группа изобретений относится к способам синтеза гликопептида, имеющего сиалированную сахарную цепь. Путем реакции этерификации осуществляют связывание смолы, имеющей гидроксильную группу с аминокислотой, у которой азот аминогруппы защищен Вос-группой.

Изобретения относятся к области биохимии. Описана группа изобретений, включающая способ получения обогащенного изоформами препарата антител (варианты).

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и медицины. Способ очистки трипторелина, заключающийся в том, что растворяют трипторелин в 0,6% водном растворе уксусной кислоты, фильтруют методом ультрафильтрации, к раствору добавляют изопропиловый спирт до концентрации 2% по объему и перемешивают, проводят жидкостную хроматографию низкого давления на колонке с сферическим полистиролом, сшитым дивинилбензолом типа LPS-500, используя градиентное элюирование водным раствором изопропилового спирта (ИПС) и уксусной кислоты (УК), затем полученный раствор полупродукта подвергают ионообменной хроматографии на колонне с сульфоэтильными группами на сшитом полиакрилате марки типа СПС-Био SP Сульфопропил (SPS-bio) с размером частиц 75 мкм, используя градиентное элюирование, проводят высокоэффективную жидкостную хроматографию на колонке с обращенно-фазным сорбентом на основе силикагеля с частицами сферической формы и размером 5 мкм типа Kromasil С18, используя в качестве элюента водный раствор, содержащий 5% ИПС и 0,25% УК, полученные фракции очищенного продукта с содержанием трипторелина более 98% подвергают концентрированию на гидрофобном сорбенте с последующим элюированием раствором, содержащим смесь изопропилового спирта и уксусной кислоты, упариванием элюата и его лиофильным высушиванием.

Изобретение относится к биотехнологии и медицинской промышленности. Предложен способ получения террилитина.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу выделения очищенного концентрата тромбина. Способ получения концентрата тромбин, свободного от вирусов, заключающийся в криофракционировании свежезамороженной плазмы донорской крови человека, выделении протромбинового комплекса на анионообменном сорбенте DEAE Sepharose Fast Flow, активации протромбина раствором СаСl2 в составе протромбинового комплекса с получением тромбина, вирусной инактивации сольвент-детергентным методом и очистке полученного тромбина на катионообменном сорбенте Fractogel EMD-SO3 с последующей стерильной фильтрацией и лиофилизацией.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантному получению антител, и может быть использовано для снижения гетерогенности антител во время культивирования.

Изобретение относится к новым соединениям формулы I, или к их фармацевтически приемлемым солям, энантиомерам или стереоизомерам; в которой значения для групп W1, W2, R3, L, Z, a, b, m, c, d и т.д.
Наверх