Способ лечения глубоких дефектов роговицы


 

A61F9/00 - Способы и устройства для лечения глаз; приспособления для вставки контактных линз; устройства для исправления косоглазия; приспособления для вождения слепых; защитные устройства для глаз, носимые на теле или в руке (шапки, кепки с приспособлениями для защиты глаз A42B 1/06; смотровые стекла для шлемов A42B 3/22; приспособления для облегчения хождения больных A61H 3/00; ванночки для промывки глаз A61H 33/04; солнцезащитные и другие защитные очки с оптическими свойствами G02C)

Владельцы патента RU 2609253:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и предназначено для лечения глубоких дефектов роговицы. На роговицу накладывают биоконструкцию, состоящую из мягкой контактной линзы, заполненной смесью аутологичных прогениторных клеток буккального эпителия и густого коллагенового геля Аппликолл в объемном соотношении 1:1, до полной эпителизации дефекта роговицы. Способ обеспечивает закрытие дефекта стромы и полную эпителизацию роговицы с ускорением сроков эпителизации и без развития побочных эффектов в виде помутнения в области дефекта, токсической реакции, воспалительных процессов. 1 пр.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и предназначено для лечения глубоких дефектов роговицы, таких как ожоги, эрозии и язвы роговицы, десцеметоцеле и т.д.

Патология передней поверхности глаза занимает одно из ведущих мест в структуре глазной заболеваемости. По данным ВОЗ поражения роговицы составляют 5,1% из всех причин слепоты в мире [Grueterich M., Espana Е.М., Tseng S.C. // Surv. Ophthalmol. 2003. Vol. 48, N. 6. P. 631-646]. При глубоких дефектах роговицы наблюдаются такие осложнения, как снижение рецепторной вооруженности клеточных мембран, нарушение основных ферментативных взаимодействий, снижение продукции цитокинов, дефицит лимбальных клеток - основного источника регенерации роговицы. Все это способствует усилению деструктивных изменений пораженных тканей, замедлению внутри- и внеклеточных восстановительных процессов, что в конечном итоге приводит к неудовлетворительным структурным и функциональным результатам [Ченцова Е.В. Петриашвили Г.Г., Арутюнова И.Р. и др. // Офтальмохирургия. 1999. №4. С. 3-9].

При хирургическом лечении повреждений роговицы путем послойной или сквозной кератопластики отмечается высокая частота рецидивов, отторжения и некроза трансплантата, развитие иммунологического конфликта в организме реципиента с донорской тканью; кроме того, имеются трудности в получении материала для сквозной кератопластики.

В настоящее время перспективным направлением в лечении патологии роговицы считается трансплантация прогениторных клеток, как аллогенных, так и аутологичных, стимулирующих процессы регенерации и репарации. При этом неизбежно возникает проблема выбора нужного типа прогениторных клеток и их культивирования перед клиническим использованием, а также выбора биосовместимого носителя для клеток, пригодного для использования в офтальмохирургии.

Известен способ трансплантации культивированных аллогенных и аутогенных клеток лимбального эпителия на амниотической мембране в лечении патологии поверхности роговицы (Grueterich M., Espana Е.М., Tseng S.C.G., Ex Vivo Expansion of Limbal Epithelial Stem Cell: Amniotic Membrane Serving as a Stem Cell Niche / M. Grueterich, E.M Espana., S.С.G. Tseng // Survey of Ophthalmol. - 2003. - Vol. 48, Ν 6 - P. 631-646).

Амниотическая мембрана может быть успешно использована в качестве субстрата для культивирования эпителиальных СК и их последующего применения в лечении патологии поверхности роговицы, т.к. не содержит антигенов гистосовместимости и не является таким образом иммуногенной, поэтому ее применение не требует иммуносуппрессии, которая обычно применяется при трансплантации других тканей. Кроме того, амниотическая мембрана сама обладает выраженным репаративным действием в отношении дефекта ткани роговицы.

Однако применение известного способа связано с необходимостью заготовки амниотической мембраны и созданием специальных условий для ее хранения. Кроме того, следует использовать парный глаз при заборе аутоткани лимба, что нежелательно, либо аллогенный материал, что связано с проблемами совместимости со всеми вытекающими последствиями.

Известен способ хирургического лечения глубоких дефектов роговицы (Патент RU 2177284), заключающийся в том, что дефект роговицы заполняют коллагеновым гелем с включенными в него аллогенными постнатальными или эмбриональными фибробластами, полученными из кожного лоскута донора и культивированными в среде DMEM: F12 с добавлением эпидермального фактора роста (10 нг/мл), инсулина (5 мкг/мл), изопротеринола (10 М) в течение 2-7 суток. Затем дефект закрывают мягкой контактной линзой с нанесенными на внутреннюю поверхность ее аллогенными постнатальными или эмбриональными эпителиальными клетками после 7-23 суток культивирования в среде DMEM: F12 на поверхности линзы. Укладывание мягкой контактной линзы на поврежденную роговицу проводят без предварительной анестезии. Контактная линза остается на поверхности глазного яблока в течение 3-5 дней. В зависимости от результатов лечения через 3-5 дней трансплантацию повторяют до полного закрытия эпителиального дефекта роговицы. Данный способ принят за ближайший аналог.

Недостатки способа связаны с необходимостью заготовки эмбрионального материала; возможностью развития иммунологических реакций при использовании аллогенных клеток; вероятностью повреждения клеток под действием гидроксида натрия или уксусной кислоты во время изготовления коллагенового геля, насыщенного клетками.

Задачей предлагаемого изобретения является дальнейшая разработка способа лечения глубоких дефектов роговицы с помощью клеточных технологий.

Техническим результатом способа является закрытие дефекта стромы и полная эпителизация роговицы с ускорением сроков эпителизации и без развития побочных эффектов в виде помутнения в области дефекта, токсической реакции, воспалительных процессов.

Технический результат достигается за счет закрытия дефекта роговицы с помощью комбинированной биоконструкции, состоящей из мягкой контактной линзы, заполненной смесью аутологичных прогениторных клеток буккального эпителия и густого коллагенового геля Аппликолл в объемном соотношении 1:1.

Прогениторные клетки буккального эпителия взрослого человека отличаются высокой способностью к пролиферации и низкой иммуногенностью, оказывают стимулирующее воздействие на процессы репарации и регенерации в поврежденных тканях, при этом они легкодоступны для выделения. Таким образом, использование аутологичного буккального эпителия в качестве источника прогениторных клеток позволяет избежать многих технических и социально-этических трудностей.

Клеточный материал для культивирования получают из лоскута слизистой щеки. Как показали наши исследования, выделенные клетки буккального эпителия при культивировании в ростовой среде хорошо прикреплялись, сохраняли высокую жизнеспособность и пролиферацию. В течение 1-2 пассажей они сохраняли эпителиальный фенотип и экспрессировали маркеры эпителиальной дифференцировки (СК19). В качестве матрикса для клеток использовали коллагеновые носители 2 видов - коллагеновый гель Аппликолл и коллагеновый кератопротектор Аппликолл, разработанные компанией ООО «МакМеди». Анализ клеток в присутствии исследуемых коллагеновых носителей (кератопротектор коллагеновый Аппликолл, гель коллагеновый для заживления роговицы глаза (жидкий), гель коллагеновый для заживления роговицы глаза (густой) показал, что наиболее подходящим материалом для создания матрикса является густой гель Аппликолл (отсутствие токсичности, удобство в работе).

Способ осуществляют следующим образом.

Слизистую оболочку щеки отслаивают путем введения 2,0 мл физ. раствора, затем скальпелем проводят выкраивание лоскута 3×3 мм2. Лоскут отсекают от подлежащей ткани и затем помещают в питательную среду. В месте выкраивания лоскута производят гомеостаз. Биоптат помещают в 0,25% раствор диспазы на 18 часов при +4°C для отделения эпителия. Отделившуюся пленку измельчают ножницами, и полученный материал помещают в 0,25% трипсина на 30 минут при 37°C, затем пипетируют его в течение 1-2 минут, после чего добавляют эмбриональную сыворотку для нейтрализации действия фермента и полученную взвесь центрифугируют 10 минут при 1000 об/мин. Супернатант удаляют, а осадок ресуспендируют в среде ДМЕМ/Р12 с добавлением глютамина, гентамицина и 20% эмбриональной сыворотки. Полученную первичную клеточную взвесь переносят в чашку Петри диаметром 90 мм и инкубируют в CO2-инкубаторе при 37°C и содержанием CO2 в атмосфере 5%. Через 4 недели после формирования монослойной культуры проводят первый пассаж. Клетки отделяют от поверхности роста механическим способом, после чего собирают отделившиеся клетки и фрагменты монослоя и пипетируют с добавлением трипсина, подогретого до 37°C в течение 2-3 минут, инактивируют действие трипсина эмбриональной сывороткой и центрифугируют. Осадок ресуспендируют в питательной среде, указанной выше, и расселяют клетки по другим чашкам Петри диаметром 35 мм, получают культуру клеток, используемую в изобретении. Мягкую контактную линзу заполняют полученной смесью клеток-предшественников буккального эпителия и густого коллагенового геля Аппликолл в объемном соотношении 1:1. Наблюдают за процессом регенерации поврежденной роговицы через контактную линзу. После достижения полной эпителизации линзу удаляют.

Пример 1

Кролик №1 породы шиншилла весом 2,5 кг. Забор биоптата проводили в состоянии медикаментозного сна животного (Sol. Ketamini 5% в дозе 1 мг/кг, 2% раствор ксилазина гидрохлорида (рометара) в дозе 5,0 мг/кг в/м). Мягкую контактную линзу iWear dr Comfort заполнили полученной смесью прогениторных клеток буккального эпителия и густого коллагенового геля Аппликолл в объемном соотношении 1:1. Затем в контейнер с контактной линзой добавляли физиологический раствор хлорида натрия 0,9%, закрывали его и помещали в чашку Петри с физиологическим раствором. Чашку оставляли в инкубаторе при 37°C и 5% CO2 в атмосфере в течение 24 часов.

В результате получали комбинированную биоконструкцию, содержащую клетки буккального эпителия на коллагеновом носителе, в качестве подложки для коллагенового носителя использована контактная линза iWear dr Comfort. Для изучения влияния трансплантации полученной комбинированной биоконструкции на поврежденную ткань роговицы использовали экспериментальную модель кератэктомии. Наркоз Sol. Rometari 2,0 Sol. Ketamini 2,0. OD - опытный глаз. Удалено третье веко. Проведена кератэктомия трепаном 8,1 мм. Глубина дефекта 1/3 роговицы. На дефект уложена полученная биоконструкция. Проведена некровавая блефарорафия.

OS - контроль. Удалено третье веко. Проведена кератэктомия трепаном 8,1 мм. Глубина дефекта 1/3 роговицы. Блефарорафия. На контрольном глазу проводили только общепринятое консервативное лечение дефекта роговицы. На 1-7 сутки в оба глаза проводили инсталляции а/б капель - Офтаквикс по 1 кап. 3 раза для профилактики вторичного инфицирования.

На 5 сутки сняты швы с контрольного глаза. На опытном глазу наблюдалась эпителизация дефекта роговицы с остаточной зоной эпителиопатии. На контрольном глазу сохранялся дефект эпителия и верхних слоев стромы 2×3 мм. В ходе дальнейшего наблюдения отмечали полную эпителизацию дефекта на опытном глазу на 6 сутки, на контрольным глазу эпителизация наступила на 8 сутки.

Кролик №2 породы шиншилла вес 2,0 кг. Забор биоптата проводили в состоянии медикаментозного сна животного (Sol. Ketamini 5% в дозе 1 мг/кг, 2% раствор ксилазина гидрохлорида (рометара) в дозе 5,0 мг/кг в/м). Мягкую контактную линзу iWear dr Comfort заполнили полученной смесью клеток-предшественников буккального эпителия в среде DMEM/F12 с 10% эмбриональной сывороткой «Gibco» и густого коллагенового геля Аппликолл в объемном соотношении 1:1. Затем в контейнер с контактной линзой добавляли физиологический раствор хлорида натрия 0,9%, закрывали его и помещали в чашку Петри с физиологическим раствором. Чашку оставляли в СO2 инкубаторе при 37°C и 5% CO2 в атмосфере в течение 24 часов.

В результате получали комбинированную биоконструкцию, содержащую клетки буккального эпителия на коллагеновом носителе, в качестве подложки для коллагенового носителя использована контактная линза iWear dr Comfort. Для изучения влияния трансплантации полученной комбинированной биоконструкции на поврежденную ткань роговицы использовали экспериментальную модель кератэктомии. Наркоз Sol. Rometari 2,0 Sol. Ketamini 2,0. OD - опытный глаз. Удалено третье веко. Проведена кератэктомия трепаном 8,1 мм. Глубина дефекта 1/3 роговицы. На дефект уложена полученная биоконструкция. Проведена некровавая блефароррафия.

OS - контроль. Удалено третье веко. Проведена кератэктомия трепаном 8,1 мм. Глубина дефекта 1/3 роговицы. Блефарорафия. На контрольном глазу проводили только общепринятое консервативное лечение дефекта роговицы. На 1-7 сутки в оба глаза проводили инсталляции а/б капель - Офтаквикс по 1 кап. 3 раза для профилактики вторичного инфицирования.

На 3 сутки швы на опытном глазу сняты. Наблюдается сокращение дефекта до 6,5×6,0 мм. На контрольном глазу дефект - 7,0×7,1 мм. Полную эпителизацию дефекта на опытном глазу отмечали на 7 сутки, а на контрольном глазу - на 9 сутки наблюдения.

Общеизвестно, что моделирование патологических процессов, в частности, на роговице у кроликов является адекватным патологическим процессам в клинических условиях, а экстраполяция разработанного способа для клинических условий является обоснованной.

Таким образом, предложенный способ обеспечивает возможность получения ускоренной эпителизации глубоких роговичных дефектов с помощью клеточной технологии при отсутствии нежелательных осложнений.

Способ лечения глубоких дефектов роговицы, отличающийся тем, что на роговицу накладывают биоконструкцию, состоящую из мягкой контактной линзы, заполненной смесью аутологичных прогениторных клеток буккального эпителия и густого коллагенового геля Аппликолл в объемном соотношении 1:1 до полной эпителизации дефекта роговицы.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к фармацевтической композиции для местного применения, предназначенной для профилактики или лечения инфекции вируса герпеса у человека. Указанная композиция содержит 2,3-диметил-6-(N,N-диметиламиноэтил)-6Н-индоло-(2,3-b)хиноксалин (В-220) или его фармацевтически приемлемую соль в количестве 0,1-10% вес/вес в фармацевтически приемлемом носителе.

Группа изобретений относится к медицине, конкретно к продукту для доставки никотина через ротовую полость, который содержит внутреннюю часть, содержащую порошок по меньшей мере одной свободной соли никотина, по меньшей мере одного средства для регулирования pН и по меньшей мере одного наполнителя, и нерастворимый в воде пакетик, где указанный пакетик является проницаемым для слюны и растворенных в ней частиц порошка, где указанный продукт при контакте с очищенной водой дает pН по меньшей мере 6.

Изобретение относится к твердым фармацевтическим композициям даптомицина для лечения бактериальной инфекции. Указанные композиции получают путем лиофилизации или распылительной сушки водного раствора даптомицина или буферного состава даптомицина, содержащих даптомицин и по меньшей мере один эксципиент, выбранный из сахарозы или трегалозы, при этом молярное отношение даптомицина к эксципиенту составляет от 1:1,12 до 1:21,32.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии. Изготавливают интравагинальное устройство, содержащее резервуар одного или более вагинально применимого лекарственного средства.

Изобретение относится к области медицины, а именно к средствам, обладающим антимикробным, сорбционным, обезболивающим и ранозаживляющим действием на местные гнойно-воспалительные процессы мягких тканей и слизистых оболочек, используемым в хирургии, дерматологии, акушерстве и гинекологии, оториноларингологии.
Настоящее изобретение относится к способу лечения дерматита у животного, включающему введение животному, имеющему дерматит, терапевтически эффективного количества комбинации: одного или нескольких антиоксидантов, где антиоксиданты вводят животному в количествах от приблизительно 0,001 до приблизительно 1000 мг/кг/день; одного или нескольких средств, предотвращающих гликирование, где средства, предотвращающие гликирование, вводят животному в количествах от приблизительно 0,01 до приблизительно 1000 мг/кг/день; одного или нескольких сжигателей жира тела, где сжигатели жира тела вводят животному в количествах в диапазоне от приблизительно 0,001 до приблизительно 1000 мг/кг/день; и одного или нескольких средств для повышения чувствительности к инсулину, где средства для повышения чувствительности к инсулину вводят животному в количествах от приблизительно 0,001 до приблизительно 1000 мг/кг/день.

Группа изобретений относится к медицине. Описаны производные децитабина с более высокими химической стабильностью и сроком годности, обладающие аналогичной физиологической активностью.

Изобретение относится к области медицины, а именно к средствам, обладающим антимикробным, сорбционным, обезболивающим и ранозаживляющим действием на местные гнойно-воспалительные процессы мягких тканей и слизистых оболочек, используемым в хирургии, дерматологии, акушерстве и гинекологии, оториноларингологии. Техническим результатом изобретения является создание эффективного средства в форме двухслойной пленки, обладающего противомикробным, сорбционным, обезболивающим и ранозаживляющим действием. Средство для лечения гнойно-воспалительных процессов мягких тканей и слизистых оболочек является двухслойной пленкой и содержит в качестве лечебных компонентов комбинацию антисептика бензалкония хлорида и метронидазола, в качестве основы используется натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы (Na-КМЦ), в качестве анестетика - лидокаина гидрохлорид, в качестве ускорителя трансдермального переноса действующего вещества - диметилсульфоксид, в качестве стабилизатора - глицерин.

Группа изобретений относится к области фармацевтики и медицины и касается фармацевтической композиции для лечения рака предстательной железы или рака молочной железы, содержащей водорастворимую матрицу, содержащую эффективное количество фармацевтически активного вещества и усилитель абсорбции, имеющий ГЛБ от 8 до 16, где активное вещество выбирают из группы, состоящей из диэтилстильбестрола и фармацевтически приемлемых солей диэтилстильбестрола, причем матрица представляет собой пленку и усилитель абсорбции представляет собой один или несколько сложных эфиров жирной кислоты и сахарозы.
Группа изобретений относится к медицине, а именно к офтальмологии, и предназначена для местного введения офтальмологической многодозовой водной композиции в глаз млекопитающего.
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано в диагностике и лечении глаукомы. Определяют состояние угла передней камеры (УПК) глаза и состояние хрусталика.

Группа изобретений относится к медицине. Устройство для обнаружения функциональных расстройств зрения образовано очковым устройством, снабженным двумя функциональными сборочными модулями, предназначенными для размещения перед глазами пользователя.

Изобретение относится к медицинской технике. Интраокулярно имплантируемое устройство для аккомодации глаза содержит электрическую часть, механический узел изменения оптической силы глаза и интраокулярную линзу.

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для лечения острых нарушений кровообращения сетчатки и зрительного нерва. Способ включает локальное лазерное воздействие на диск зрительного нерва и пораженные ретинальные сосуды.
Изобретение относится к медицине, к офтальмологии, а именно к способам лечения первичной глаукомы у больных с сопутствующей артериальной гипертензией (АГ). Дополнительно проводят обследование больного глаукомой у кардиолога и при выявлении артериальной гипертензии в качестве бета-блокатора назначают внутрь селективный бета-блокатор Беталок ЗОК от 25 мг до 100 мг 1 раз в сутки, у больного до и через неделю после каждого увеличения дозы определяют артериальное давление (АД), частоту сердечных сокращений (ЧСС) и внутриглазное давление, при АД в пределах возрастной нормы, ЧСС не менее 50 уд./мин, внутриглазном давлении 22 мм рт.ст.
Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и предназначено для хирургического лечения дефектов роговицы различного генеза. Размещают на деэпителизированной поверхности роговицы силиковысушенную пластифицированную амниотическую мембрану.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к офтальмологии. Аппарат для офтальмологической хирургии содержит: источник оптического излучения, сконфигурированный для генерирования пучка излучения с длиной волны от 17 до 1900 нм; фокусирующую линзу, оптически сопряженную с указанным источником и сконфигурированную для преобразования пучка излучения в сфокусированный пучок излучения; стеклянный контактный элемент, имеющий для сфокусированного пучка излучения коэффициент пропускания не менее 90%.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к офтальмологии. Аппарат для офтальмологической хирургии содержит: источник оптического излучения, сконфигурированный для генерирования пучка излучения с длиной волны от 17 до 1900 нм; фокусирующую линзу, оптически сопряженную с указанным источником и сконфигурированную для преобразования пучка излучения в сфокусированный пучок излучения; стеклянный контактный элемент, имеющий для сфокусированного пучка излучения коэффициент пропускания не менее 90%.
Группа изобретений относится к области медицины, а именно к офтальмохирургии, и может быть использована при хирургическом лечении идиопатических макулярных разрывов сетчатки путем блокирования разрыва аутологичной обогащенной тромбоцитами плазмой.
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для лечения и профилактики миопии и спазма аккомодации. Способ включает занятия бадминтоном, которые проводят 3 раза в неделю по 1-2 часа в течение от 6 месяцев и более, причем до начала регулярных занятий проводят оптометрическое обследование с назначением по необходимости индивидуальной очковой коррекции, а одновременно с началом регулярных занятий проводят рефлексогенное воздействие на биологически активные точки путем их массажа, или иглоукалывания, или инъекций диспергированного биоматериала «Аллоплант» для акупунктурного введения, разведенного в физиологическом растворе в соотношении 30-50 мг биоматериала на 5-10 мл физиологического раствора, причем рефлексогенное воздействие проводят курсом длительностью 2-4 недели, при этом массаж биологически активных точек осуществляют ежедневно в течение 5-15 минут 1-2 раза в день, иглоукалывание осуществляют ежедневно или через день в количестве 10 сеансов, а инъекции осуществляют в количестве 3-7 сеансов за курс, по 0,5-1,0 мл раствора биоматериала на 1 инъекцию.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и предназначено для хирургического лечения глаукомы путем дренирующей аутоклапанной лимбосклерэктомии. Проводят формирование конъюнктивального и поверхностного П-образного склерального лоскута в виде полоски основанием к лимбу, иссечение дистального участка глубокого лоскута склеры до супрацилиарного пространства и формирование лимбэктомического отверстия под основанием склерального лоскута и иридэктомию, введение через него сформированного поверхностного лоскута склеры в супрацилиарное пространство. Толщина поверхностного склерального лоскута составляет 350 мкм, длина 6-6.5 мм. После формирования поверхностного склерального лоскута в угол передней камеры глаза в зоне проекции склерального лоскута вводят 0,1 мл рассасываемого вискоэластика. После введения поверхностного склерального лоскута в супрацилиарное пространство в проксимальном отделе дна склерального ложа наносят 3 параллельных вертикальных надреза глубоких слоев склеры от лимбэктомического отверстия. При этом средний надрез - по центру ложа имеет длину 1,0-1,2 мм и два боковых - по краям ложа 0,5-0,6 мм. Способ обеспечивает повышение стабильности и глубины гипотензивного эффекта с предупреждением рецидивов повышения ВГД и с соответствующей стабилизацией зрительных функций, предупреждение повреждений зоны оптически деятельной сетчатки. 1 ил., 3 пр.
Наверх