Способ изготовления биомеханического сенсора для измерения сил адгезии в системе "клетка-клетка"

Изобретение касается способа изготовления биомеханического сенсора для измерения сил адгезии в системе «клетка-клетка». Сущность способа заключается в том, что используют влажную камеру, стандартный tipless кантилевер, суспензию лимфоцитов. Суспензию лимфоцитов готовят путем центрифугирования цельной гепаринизированной крови без отмывки в фосфатном буфере, проверяют жизнеспособность лейкоцитов в тестах in vitro. В центр стеклянной поверхности наносят каплю 2% раствора желатина, а на противоположные края помещают каплю лейкосуспензии и каплю эритроцитарной суспензии, после чего погружают tipless кантилевер в каплю 2% раствора желатина, затем переводят область сканирования на край стеклянной поверхности, где находится капля лейкосуспензии, под контролем оптической системы микроскопа выбирают участок с расположенными на нем отдельно лежащими лимфоцитами, осуществляют подвод tipless кантилевера к отдельному лимфоциту, после прилипания лимфоцита к tipless кантилеверу проводят сканирование зернистых форм лейкоцитов, затем переводят область сканирования образца на край с расположенной каплей суспензии эритроцитов и проводят их сканирование. Приготовление биомеханического сенсора и измерение сил адгезии в системе «клетка-клетка» проводят в режиме силовой спектроскопии в процессе однократного сканирования. Использование способа позволяет изготавливать биомеханические сенсоры, позволяющие с высокой точностью получать объективные данные о силах взаимодействия в системе «клетка-клетка». 3 з.п. ф-лы, 1 ил.

 

Способ изготовления биомеханического сенсора для измерения сил адгезии в системе «клетка-клетка» относится к области молекулярно-клеточной физиологии и может быть использован в клинической диагностике для изучения адгезивных свойств поверхности нативных клеток.

В области молекулярно-клеточной физиологии известны различные экспериментальные подходы в исследовании адгезионных свойств клеток. Особое внимание среди них уделено исследованию механических свойств клеток адгезиометрическими методами (Маленков А.Г., Чуич Г.А. Межклеточные контакты и реакции клеток. – М.: Медицина, 1976. – 136 с.). В частности, распространенным является метод жидкостной дезинтеграции, включающий взятие материала (клеток крови), приготовление препаратов, инкубацию клеток в микрокамере и определение процента проадгезировавших клеток после их смыва буферным раствором, подсчет проадгезировавших клеток. Существенным недостатком такого подхода является приблизительное определение числа проадгезировавших клеток и невозможность измерить силу сцепления клетки со стеклянной подложкой, более того, полученная информация не дает объективной картины, присутствующей в системе «клетка-клетка», т.к. силы сцепления в биологических системах в значительной степени определяются экспрессией молекул клеточной адгезии между двумя контактирующими клетками, в то время как прилипание клетки к стеклу зависит не только от ее рецепторного аппарата, но и от инкубационной среды, содержащей белковые комплексы.

В области сканирующей зондовой микроскопии известны способы измерения адгезии биологических объектов к острию нанозонда методом силовой спектроскопии. В основе этого метода лежит измерение межмолекулярных сил, возникающих между модифицированным металлическим зондом и клеткой (Sagvolden G., Glaever I., Pettersen E.O., Feder J., Cell adhesion force microscopy //Proc. Natl. acad. Sci. USA. – 1999. – V. 96. – P. 471-476). Однако данный способ имеет ряд ограничений. Одной из непреодолимых характеристик является сила взаимодействия между клеткой и зондом, которая увеличивается при удлинении времени сканирования из-за возникновения связей. Причем консоли, используемые для измерения адгезии клеток очень жесткие по сравнению с клетками и тканями. Кроме того, для «мягких образцов» (образцов с пониженной механической жесткостью) трудно разделить относительный вклад поверхностных сил в адгезию и деформацию образца.

Наиболее близким по своей сущности к заявляемому является способ изучения адгезивных сил на молекулярном уровне методом атомно-силовой микроскопии с использованием сенсоров, в качестве которых выступают одиночные клетки, клеточные монослои и полимерные микросферы, иммобилизованные на tipless кантилеверaх (Benoit M., Gaub H.E. Measuring cell adhesion force with the atomic force microscope at the molecular level //Cell tissues organs. – 2002. – V. 172. – P. 174-189), включающий измерение сил адгезии в системе «эритроцит-эритроцит». Для осуществления способа изготавливают сенсор адгезии следующим образом:

1) эритроциты группы А или О, полученные от соответствующих пациентов, разбавляют фосфатно-солевым буфером (PBS; pH=7,4) и подвергают центрифугированию на микроцентрифуге при 10 000 об/мин в течение 2 мин;

2) отделяют эритроциты от плазмы и наносят их в виде монослоя на аминосиликонизированные стекла, которые готовят путем обработки Si-O слоя поверхности стекла N1-[3-(триметоксисимил)пропил] диэтиленамином (Aldrich, USA) при 80°С в течение 10 мин, затем промывают в этаноле и воде при 80°С в течение 80 мин;

3) для приготовления силового сенсора стандартный tipless кантилевер Si3N4 обрабатывают N1-[3-(триметоксисимил)пропил] диэтиленамином (Aldrich, USA) при 80°С в течение 10 мин, затем промывают в этаноле и воде при 80°С в течение 80 мин с целью получения аминофункционализированной поверхности, которую обрабатывают лектином WGA (Sigma, USA) в концентрации 100 мг/мл;

4) одиночные эритроциты прикрепляют к функционализированному tipless кантилеверу в режиме силовой спектроскопии;

5) измеряют силы адгезии между эритроцитами на атомно-силовом микроскопе в режиме силовой спектроскопии.

Недостатком изложенного способа является использование в качестве датчика силового взаимодействия между клетками отмытых эритроцитов группы А или О, которые теряют в процессе отмывки поверхностные молекулы, транспортируемые клеточной поверхностью, и, как следствие, проявляют малую адгезивную активность, более того, в норме эритроциты не адгезируют к другим клеткам и не несут на своей поверхности рецепторов адгезии, хотя способны образовывать агрегаты за счет «мостиков» (Узикова Е.В., Милорадов М.Ю., Булаева С. В., Муравьев А.В., Замышляева А.В., Зайцев Л.Г. Молекулярные механизмы агрегации и адгезии эритроцитов //Ярославский педагогический вестник. – 2011. - №4. Т. III. – С. 105-107). Использование различных химических агентов с целью получения аминофункционализированной поверхности стекла либо tipless кантилевера существенно изменяет природный баланс сил, который существует между клетками в кровяном русле, и искажает полученные результаты. Использование лектина WGA (агглютинин из проростков пшеницы), которым покрывают tipless кантилевер перед прикреплением эритроцита, создает дополнительные артефакты при проведении измерений, так как будет вносить дополнительные помехи при измерении сил адгезии между клетками, потому как клетки лейкоцитарного ряда имеют рецепторы, обладающие повышенным сродством к лектинам, что существенно сказывается на полученных результатах.
Задачей предлагаемого изобретения является создание способа изготовления биомеханического сенсора для измерения сил адгезии в системе «клетка-клетка», который обладает свойствами нативной клетки, способен измерять силы адгезии между одиночными клетками и сводит к минимуму получение возможных артефактов при проведении измерений.
Для решения поставленной задачи в способе, включающем:

- выделение эритроцитов группы А или О путем центрифугирования;

- нанесение эритроцитов в виде монослоя на аминсиликонизированные стекла;

- приготовление силового сенсора из стандартного tipless кантилевера путем его аминосиликонизирования и последующей обработки лектином WGA (Sigma, USA);

- прикрепление одиночного эритроцита к функционализированному tipless кантилеверу в режиме силовой спектроскопии;

- измерение силы адгезии между эритроцитами на атомно-силовом микроскопе в режиме силовой спектроскопии;

предлагается внести следующие изменения:

- использовать для приготовления биосенсора стандартный tipless кантилевер серии CSG 11/tipless, который обрабатывают 2% раствором желатина, приготовленным на дистиллированной воде, и суспензию лимфоцитов, причем приготовление сенсора проводят в режиме силовой спектроскопии в процессе однократного сканирования;

- готовить суспензию лейкоцитов путем центрифугирования цельной гепаринизированной крови при 1500 об/мин в течение 5 мин без отмывки в фосфатном буфере;

- проверять жизнеспособность лейкоцитов в тестах in vitro путем окраски клеточной суспензии 0,4% раствором трипанового синего в фосфатно-солевом буфере (рН 7,2-7,3) и последующего подсчета погибших форм на световом микроскопе (мертвые клетки окрашиваются в синий цвет, живые клетки не окрашиваются), в эксперимент отбирать лейкосуспензии с жизнеспособностью клеток не менее 95%;

- наносить в центр стеклянной поверхности каплю 2% раствора желатина, на противоположные края стеклянной поверхности помещать каплю лейкосуспензии и каплю эритроцитарной суспензии;

- помещать образец во влажную камеру, насыщенную парами воды и закрытую мембраной;

- проводить процедуру силовой спектроскопии участка размером 50x50 мкм, погружая tipless кантилевер в каплю желатина, затем переводить область сканирования на край стеклянной поверхности, где находится капля лейкосуспензии, под контролем оптической системы микроскопа, выбрать участок с расположенными на нем отдельно лежащими лимфоцитами, осуществить подвод tipless кантилевера к отдельному лимфоциту. После прилипания лимфоцита к tipless кантилеверу проводить сканирование суспензии зернистых форм лейкоцитов;

- регистрировать с помощью приготовленного биосенсора силовые кривые 30 зернистых форм лейкоцитарных клеток в режиме силовой спектроскопии. Затем перевести область сканирования образца на край, где располагается капля суспензии эритроцитов. Регистрировать снятие силовых кривых 30 эритроцитов;

- по полученным кривым вести расчет сил адгезии с помощью программного обеспечения Nova.

Предлагаемый способ позволит получить объективные данные о силах адгезии между клетками крови за счет использования биомеханического сенсора, который состоит из tipless кантилевера и живой клетки – лимфоцита. Модификация tipless кантилевера с использованием лимфоцита позволит смоделировать условия, максимально приближенные к условиям ex vivo, и получить объективные данные о силах адгезии в биологических системах, поскольку эти клетки несут на своей поверхности различные семейства рецепторов адгезии, вступающих во взаимодействие с биологическими молекулами в организме. Кроме того, применение 2% раствора желатина, в качестве модифицирующего агента, к которому прикрепляется клетка, позволит сохранить ее жизнеспособность, использование влажной камеры, создающей оптимальные условия для сохранения нативной формы клеток. Совмещение способа приготовления биосенсора и процедуры измерения сил адгезии за одну процедуру сканирования позволяет сократить время исследования и увеличивает скорость манипулирования объектами за счет быстрой смены областей сканирования.

Техническим результатом заявленного способа является получение объективных данных о силах адгезии между клетками крови в норме и при развитии лейкоза, которые позволяют осуществлять диагностику раннего обнаружения остаточной популяции лейкозных клеток после лечения и решить важную научно-практическую задачу, связанную с подбором адекватной программы лечения заболевания, а также прогнозировать и выявлять ранние цитологические признаки начинающейся декомпенсации ремиссионного состояния.

Отличительными признаками заявленного способа являются:

- использование нативных лимфоцитов для приготовления биосенсорных АСМ-зондов, которые являются живыми модельными системами, несущими на своей поверхности рецепторы адгезии, что позволяет получить объективные данные о силах взаимодействия в системе «клетка-клетка»;

- проведение тестов по определению жизнеспособности клеток крови in vitro позволяет отбирать нативные жизнеспособные лимфоциты крови для изготовления биосенсора, который позволяет моделировать силы адгезии в живых системах;

- использование 2% раствора желатина для обработки tipless кантилевера позволяет сохранить жизнеспособность лимфоцита, прикрепленного к нему, и поддерживает оптимальный баланс сил при выдвижении пьезосканера и надавливании на клетку с определенной силой, что позволяет избежать воздействия на поверхность чрезмерных нагрузок при силовом надавливании;

- изготовление биосенсоров в процессе проведения одной процедуры сканирования позволяет экономить время исследования и увеличивает скорость манипулирования объектами за счет быстрой смены областей сканирования на одном стекле;

- использование в процессе сканирования влажной камеры для создания условий, обеспечивающих сохранение нативного функционально активного и морфологически неизменного состояния клеток в течение времени, достаточного для сканирования образцов.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Готовят 2% раствор желатина на дистиллированной воде. Проводят разделение цельной крови путем центрифугирования (при 1500 об/мин в течение 5 мин, без отмывки в фосфатном буфере) на суспензии лейкоцитов и эритроцитов. Проверяют жизнеспособность лейкоцитов в тестах in vitro путем окраски клеточной суспензии 0,4% раствором трипанового синего в фосфатно-солевом буфере (рН 7,2-7,3) и последующего подсчета погибших форм на световом микроскопе (мертвые клетки окрашиваются в синий цвет, живые клетки не окрашиваются). В эксперимент отбирают лейкосуспензии с жизнеспособностью клеток не менее 95%. На середину обезжиренной стеклянной поверхности наносят каплю приготовленного 2% раствора желатина, по бокам от нее на противоположные края наносят суспензию лейкоцитов суспензию эритроцитов. Помещают препарат во влажную камеру, насыщенную парами воды. Проводят процедуру силовой микроскопии на участке препарата, где расположена капля желатина, осуществляя подвод стандартного tipless кантилевера серии CSG 11/tipless в каплю. Изменяют область сканирования, перемещаясь на противоположный край препарата, где расположена лейкосуспензия. Под контролем оптической системы микроскопа выбирают участок с расположенными на нем отдельно лежащими лимфоцитами и осуществляют подвод tipless кантилевера к отдельному лимфоциту. После прилипания клетки к tipless кантилеверу переводят область сканирования на суспензию лейкоцитов. Регистрируют с помощью приготовленного биомеханического сенсора силовые кривые 30 лейкоцитарных клеток в режиме силовой спектроскопии. Затем изменяют область сканирования и передвигают к краю стеклянной поверхности, где располагается суспензия эритроцитов. Регистрируют снятие силовых кривых 30 эритроцитов. Рассчитывают силы адгезии с помощью программного обеспечения Nova.

Пример 1. Способ изготовления биомеханического сенсора для измерения сил адгезии в системе «лимфоцит-эритроцит», «лимфоцит-лейкоцит» крови больных лейкозом и здоровых людей во влажной камере в режиме атомно-силовой спектроскопии.

Производят забор крови больных острым лимфобластным лейкозом и здоровых пациентов в гепаринизированные вакуумные пробирки. Выделяют лейкосуспензию и эритроцитарную суспензию путем центрифугирования при 1500 об/мин в течение 5 мин, без отмывки в фосфатном буфере. Отбирают плазму и лейкоцитарное кольцо. Проверяют жизнеспособность лейкоцитов в тестах in vitro путем окраски клеточной суспензии 0,4% раствором трипанового синего в фосфатно-солевом буфере (рН 7,2-7,3) и последующего подсчета погибших форм на световом микроскопе (мертвые клетки окрашиваются в синий цвет, живые клетки не окрашиваются). Если в исследуемой лейкосуспензии жизнеспособность клеток составляет 95% и более, ее используют далее в эксперимента. Готовят 2% раствор желатина на дистиллированной воде, для этого взвешивают 4 г желатина и растворяют его при нагревании в 50 мл дистиллированной воды, не доводя до кипения. Приготовленный раствор остужают. На середину подготовленной стеклянной поверхности наносят каплю приготовленного 2% раствора желатина, по бокам от нее на один край наносят каплю суспензии лейкоцитов, на другой край – каплю суспензии эритроцитов. Помещают препарат во влажную камеру, насыщенную парами воды. Проводят процедуру силовой микроскопии на участке препарата, где расположена капля желатина, осуществляя подвод стандартного tipless кантилевера серии CSG 11/tipless в каплю. Изменяют область сканирования, перемещаясь на противоположный край препарата, где расположена лейкосуспензия. Под контролем оптической системы микроскопа выбирают участок с расположенными на нем отдельно лежащими лимфоцитами и осуществляют подвод tipless кантилевера к отдельному лимфоциту. После прилипания клетки к tipless кантилеверу переводят область сканирования на суспензию лейкоцитов. Регистрируют с помощью приготовленного биомеханического сенсора силовые кривые 30 лейкоцитарных клеток в режиме силовой спектроскопии. Затем изменяют область сканирования и передвигают стеклянную поверхность к краю, где располагается суспензия эритроцитов. Регистрируют снятие силовых кривых 30 эритроцитов. Рассчитывают силы адгезии с помощью программного обеспечения Nova. Результаты измерений представлены на фиг. 1 в таблице.

Как видно из представленных данных, сила адгезии между лимфоцитами и лейкоцитами во время лечения больных острым лимфобластным лейкозом возросла на 23% (р<0,05), а на стадии рецидива – на 117% (р<0,05) по сравнению с группой здоровых пациентов. При этом сила адгезии между эритроцитами и лимфоцитами не отличается от нормы во время лечения больных, но существенно возрастает при развитии рецидива болезни почти в 2 раза. Увеличение адгезивных свойств опухолевых клеток обусловлено большим количеством на их поверхности терминальных остатков сиаловых кислот в углеводных цепях О- и N-типов (Луцик М.М., Ященко А.М., Ковалишин В.И., Придатко О.Е., Стойка Р.С., Луцик М.Д. Гетерогенность популяции клеток лимфомы Nk/Ly и лейкоза L-1210 по углеводной структуре клеточной поверхности: иммуноцитохимический анализ связывания лектинов // Цитология и генетика. – 2011. - №2. – С. 3-9). Следовательно, предлагаемый способ позволяет получить объективные данные по адгезии клеток крови больных лейкозом, которые отражают подходы раннего обнаружения остаточной популяции лейкозных клеток после лечения, что позволит решить важную научно-практическую задачу, связанную с подбором адекватной программы лечения заболевания, а также прогнозировать и выявлять ранние цитологические признаки начинающейся декомпенсации ремиссионного состояния.

Предлагаемый способ изготовления биомеханического сенсора для измерения сил адгезии в системе «клетка-клетка» в режиме атомно-силовой спектроскопии технически прост, позволяет осуществлять манипуляции с нативными клетками в процессе проведения силовой спектроскопии, не изменяет свойств поверхности исследуемых образцов, позволяет получить объективные данные об адгезивных свойствах клеток в условиях ex vivo, приближенных к нативным. Предлагаемый способ может быть использован в общей физиологии и клинической диагностике для изучения адгезивных свойств поверхности нативных клеток, а также прогнозирования течения болезни и дальнейшей коррекции терапии.

1. Способ изготовления биомеханического сенсора для измерения сил адгезии в системе «клетка-клетка», включающий выделение клеток крови, нанесение их в виде монослоя на подготовленную стеклянную поверхность, приготовление биомеханического сенсора путем прикрепления одиночной клетки крови к tipless кантилеверу, измерение силы адгезии между клетками на атомно-силовом микроскопе, отличающийся тем, что для приготовления биомеханического сенсора используют влажную камеру, стандартный tipless кантилевер, суспензию лимфоцитов, которую готовят путем центрифугирования цельной гепаринизированной крови без отмывки в фосфатном буфере, проверяют жизнеспособность лейкоцитов в тестах in vitro, затем в центр стеклянной поверхности наносят каплю 2% раствора желатина, а на противоположные края помещают каплю лейкосуспензии и каплю эритроцитарной суспензии, после чего погружают tipless кантилевер в каплю 2% раствора желатина, затем переводят область сканирования на край стеклянной поверхности, где находится капля лейкосуспензии, под контролем оптической системы микроскопа выбирают участок с расположенными на нем отдельно лежащими лимфоцитами, осуществляют подвод tipless кантилевера к отдельному лимфоциту, после прилипания лимфоцита к tipless кантилеверу проводят сканирование зернистых форм лейкоцитов, затем переводят область сканирования образца на край с расположенной каплей суспензии эритроцитов и проводят их сканирование, причем приготовление биомеханического сенсора измерение сил адгезии в системе «клетка-клетка» проводят в режиме силовой спектроскопии в процессе однократного сканирования.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для приготовления биомеханического сенсора и измерения сил адгезии в системе «клетка-клетка» используют влажную камеру, насыщенную парами воды и закрытую мембраной.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для приготовления биомеханического сенсора и измерения сил адгезии в системе «клетка-клетка» используют стандартный tipless кантилевер серии CSG 11.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что предлагается регистрировать снятие силовых кривых не менее 30 клеток крови и по полученным кривым вести расчет сил адгезии с помощью программного обеспечения Nova.



 

Похожие патенты:

Изобретение относиться к медицине, а именно к эндокринологии, и может быть использовано для коррекции избыточного веса и лечения алиментарного ожирения. Больным алиментарно-конституциональным ожирением проводят курсы рефлексотерапии в виде иглоукалывания тормозным методом и гипокалорийную диетотерапию.
Изобретение относится к области хирургии и биохимии и представляет собой способ прогнозирования несостоятельности колоректального анастомоза с помощью анализа крови, отличающийся тем, что в первые и четвертые сутки послеоперационного периода выполняют хемилюминесцентный анализ эритроцитов крови и при возрастании интенсивности вспышки (Imax) свыше 160 мВ и светосуммы (S) свыше 700 мВ*сек прогнозируют высокий риск несостоятельности анастомоза.

Изобретение относится к медицине и предназначено для выбора тактики ведения пациента с острым деструктивным панкреатитом. Ежедневно в сыворотке крови определяют концентрацию серотонина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, оценивают тяжесть состояния пациента по шкале APACHE II и дополнительно измеряют внутрибрюшное давление, если на 2-е сутки от поступления в отделение реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ) внутрибрюшное давление повышается в пределах 1-2 степени, а к 4-5 суткам затем снижается без дальнейшего повышения; на 2-е сутки серотонин крови снижается до 23 нг/мл, а затем к 4-5-м суткам повышается с последующей тенденцией к нормализации; на 2-е сутки показатель шкалы APACHE II повышается до 17 баллов и выше, затем снижается к 4-5 суткам без последующего увеличения - прогнозируют относительно благоприятное течение; в случае, если на 2 сутки от поступления в отделение ОРИТ внутрибрюшное давление повышается в пределах 1-2 степени, затем снижается к 4-5 суткам и вновь повышается до 2-3 ст.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для определения наличия в организме беременных женщин хронического процесса, который сопровождается увеличенной гибелью клеток.

Изобретение относится к области оптических измерений и касается способа и устройства для динамического контроля газовых сред. Устройство включает в себя монохроматические пары, представляющих собой твердотельный монохроматический излучатель на базе диодного лазера и твердотельный монохроматический приемник.
Изобретение относится к области медицины и касается способа диагностики микробного фактора при хроническом неспецифическом эндометрите. Сущность способа заключается в том, что у больной на 7-9-й день менструального цикла берут бактериологический посев из полости матки и цервикального канала с помощью внутриматочной цитощетки.

Изобретение относится к диагностике, а именно к способу диагностики крови на наличие паразитарных заболеваний по изменению лейкограммы после ультразвукового воздействия, включающему: воздействие на образцы крови, помещенные в термостатируемую кювету, бегущей модулированной ультразвуковой волной; обработку образцов крови в абсолютно одинаковых условиях; поддержание постоянной температуры образцов в кюветах с проточным охлаждением и анализ морфологического состояния клеток методами световой микроскопии; при начале гемолиза эритроцитов через 18-30 с, уменьшении количества лимфоцитов в 1,7-3,5 раза, а сегментоядерных нейтрофилов в 1,5-4,0 раза, деформации и разрушении ядер и изменении структуры цитоплазмы, ее вакуолизации, а также при ядерном сдвиге влево диагностируют наличие паразитарного заболевания.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической кардиологии. Проводят эхокардиографическое обследование.
Изобретение относится к области медицины и касается способа определения профилактических мероприятий опухолевых заболеваний. Сущность способа заключается в том, что у пациента отбирается вторая утренняя проба мочи, 5 мл мочи помещается в чашку Петри, добавляется раствор нингидрина и несколько капель спиртового настоя растения, содержащего алкалоиды.

Изобретение относится к области медицины и касается способа морфофунционального анализа тромбоцитов, содержащихся в богатой тромбоцитами плазме (БоТП) или тромбоцитном концентрате (ТК).

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования развития артериальной гипертензии (АГ) среди шорцев, имеющих почечную дисфункцию (ПД).
Изобретение относится к области медицины, а именно к ортопедии и травматологии, и предназначено для диагностики при подозрении на инфекцию в области сустава. Для осуществления способа выполняют взятие биологического материала и транспортировку для исследования.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу определения биологической активности дефибротида. Приводят в контакт дефибротид, эуглобулин млекопитающего и субстрат, специфичный для плазмина, который в результате реакции с плазмином дает измеряемый продукт.

Изобретение относится к медицине в области онкологии и представляет собой способ прогнозирования резистентности опухоли к таргетной терапии цетуксимабом у больных плоскоклеточным раком языка и слизистой дна полости рта, включающий исследование крови, отличающийся тем, что за два дня до начала полихимиотерапевтического лечения с включением таргетной терапии цетуксимабом, у больного плоскоклеточным раком языка и слизистой дна определяют EGF, sEGFR, затем рассчитывают соотношение EGF/sEGFR и при значении этого соотношения в пределах 55,3-66,9 прогнозируют отсутствие резистентности опухоли к терапии цетуксимабом, а при значении этого показателя в пределах 92,6-117,8 прогнозируют наличие резистентности опухоли к терапии цетуксимабом.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования риска развития быстрорастущей миомы матки, заключающийся в том, что исследуют ультразвуковые параметры матки с подсчетом количества миоматозных узлов, методом краевой дегидратации менструальных выделений (МВ) определяют наличие параллельных и волокнистых структур и рассчитывают коэффициент Р: где z рассчитывают по формуле:z=b1×x1+b2×x2+b3×х3+а,где b1 - коэффициент, равный 2,172; x1 - волокнистые структуры в MB: наличие «2»; отсутствие «1»; b2 - коэффициент, равный 2,238; x2 - параллельные структуры в MB: наличие «2»; отсутствие «1»; b3 - коэффициент, равный 1,568; x3 - количество узлов; а - константа, равная –10,915; и при значении Р>0,5 дополнительно методом иммуноферментного анализа исследуют уровни лигандов APRIL и TRAIL, и при значении APRIL более 11,1 нг/мл, TRAIL менее 22,5 пг/мл прогнозируют риск развития быстрорастущей миомы матки.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования летального исхода у реанимационных пациентов кардиохирургического профиля, отличающийся тем, что вычисляют интегральный индекс (ИИ) по формуле: где K1 - отношение количества тромбоцитов у пациента к значению нижней границы референтного интервала;К2 - отношение активности антитромбина III у пациента к значению нижней границы референтного интервала;К3 - отношение содержания фибриногена у пациента к значению нижней границы референтного интервала;К4 - отношение содержания фибрин-мономера у пациента к референтному значению;К5 - отношение содержания Д-димера у пациента к референтному значению,и при значении интегрального индекса ниже 10,0 прогнозируют летальный исход у реанимационных пациентов кардиохирургического профиля.

Группа изобретений относится к медицине и предназначена для неинвазивного мониторинга свойств биологической ткани. Последовательно проводят следующие этапы: сбора данных импеданса и вспомогательных данных от участка тела пользователя; предварительной обработки полученных данных, причем предварительная обработка заключается в фильтрации полученных данных и удалении артефактов из полученных данных импеданса путем обнаружения не относящихся к пище физиологических факторов на основе вспомогательных данных; восстановления динамики кривой глюкозы путем применения обученного алгоритма машинного обучения, оценивания гликемического индекса из динамики кривой глюкозы, предоставления пользователю результатов оценки и автоматического мониторинга привычек питания на основе упомянутых результатов оценки для определенного периода времени.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и касается прогнозирования преждевременных родов. Для этого выделяют геномную ДНК, определяют полиморфизм генов интерлейкинов IL1b Т>СЗ1 и TNFa - G>A308 и рассчитывают прогностический коэффициент Y по формуле Y=exp(2,54+0,19*X1+12,28*X2+0,07*X3+0,63*X4+2,43*X5+1,97*X6)/(1+ехр(-2,54+0,19*Х1+12,28*Х2+0,07*Х3+0,63*Х4+2,43*Х5+1,97*Х6), где Y - вероятность развития преждевременных родов; X1 - полиморфизм гена интерлейкина IL1b Т>СЗ1 (0 - нормальная гомозигота или гетерозигота, 1 - мутантная гомозигота); Х2 - полиморфизм гена интерлейкина TNFa - G>A308 (0 - нормальная гомозигота или гетерозигота, 1 - мутантная гомозигота); Х3 - возраст пациентки (в годах); Х4 - вредные привычки (курение) (0 - нет; 1 - есть); Х5 - наличие выкидышей и преждевременных родов (0 - нет; 1 - есть); Х6 - наличие абортов (0 - нет; 1 - есть).

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения длительности химиотерапии после хирургического лечения туберкулеза органов дыхания у детей и подростков.

Изобретение относится к области медицины и касается способа прогнозирования значений индекса атерогенности через 4-5 лет у стажированных работающих, экспонированных ртутью, без признаков патологии нервно-психической сферы. Сущность способа заключается в том, что у пациента натощак производят забор крови для получения сыворотки. Определяют уровень общего холестерина и холестерина липопротеидов высокой плотности в сыворотке крови, рассчитывают индекс атерогенности, экспозиционную нагрузку ртутью за период работы во вредных условиях труда, а также возраст через 4-5 лет от текущего момента. Полученные результаты обследования пациента подставляют в уравнение, полученное методом множественной нелинейной регрессии с прямой пошаговой процедурой включения признаков:У = 9,656572 + 0,085618 × ИА12 + 0,022347 × НАГРУЗКА12 - 0,268078 × ВОЗР2 + 0,002611 × ВОЗР22,где У - прогнозируемое значение индекса атерогенности через 4-5 лет; 9,656572 - константа; 0,085618; 0,02234; 0,268078; 0,002611 - коэффициенты предикторов; ИА1 - значение индекса атерогенности на момент обследования; НАГРУЗКА1 - уровень индивидуальной экспозиционной нагрузки за период работы во вредных условиях на момент обследования (мг); ВОЗР2 - рассчитанный возраст на прогнозируемый момент (возраст на момент обследования + 4-5 лет) (лет). Использование способа позволяет с высокой точностью прогнозировать ИА, что может обеспечить своевременное выявление и коррекцию факторов риска раннего развития атеросклероза у стажированных работающих. 3 пр., 1 табл.

Изобретение касается способа изготовления биомеханического сенсора для измерения сил адгезии в системе «клетка-клетка». Сущность способа заключается в том, что используют влажную камеру, стандартный tipless кантилевер, суспензию лимфоцитов. Суспензию лимфоцитов готовят путем центрифугирования цельной гепаринизированной крови без отмывки в фосфатном буфере, проверяют жизнеспособность лейкоцитов в тестах in vitro. В центр стеклянной поверхности наносят каплю 2 раствора желатина, а на противоположные края помещают каплю лейкосуспензии и каплю эритроцитарной суспензии, после чего погружают tipless кантилевер в каплю 2 раствора желатина, затем переводят область сканирования на край стеклянной поверхности, где находится капля лейкосуспензии, под контролем оптической системы микроскопа выбирают участок с расположенными на нем отдельно лежащими лимфоцитами, осуществляют подвод tipless кантилевера к отдельному лимфоциту, после прилипания лимфоцита к tipless кантилеверу проводят сканирование зернистых форм лейкоцитов, затем переводят область сканирования образца на край с расположенной каплей суспензии эритроцитов и проводят их сканирование. Приготовление биомеханического сенсора и измерение сил адгезии в системе «клетка-клетка» проводят в режиме силовой спектроскопии в процессе однократного сканирования. Использование способа позволяет изготавливать биомеханические сенсоры, позволяющие с высокой точностью получать объективные данные о силах взаимодействия в системе «клетка-клетка». 3 з.п. ф-лы, 1 ил.

Наверх