Способ оценки гемостимулирующей активности пантов марала

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

G01N33/00 - Исследование или анализ материалов особыми способами, не отнесенными к предыдущим группам

Владельцы патента RU 2642308:

федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет" (RU)

Изобретение относится к фармакологии, фармакогнозии. Способ оценки гемостимулирующей активности пантов марала, включающий изучение его влияния на колониеобразующую активность стволовых клеток-предшественников костного мозга мыши in vitro, отличается тем, что готовят водное извлечение из пантов марала путем выдерживания одной части пантов в трех частях воды деионизированной на водяной бане с обратным холодильником при 80°С в течение одного часа, при этом активность сырья считается достаточной, если извлечение, полученное из этого сырья, стимулирует рост колоний не менее чем в 1,5 раза по сравнению с группой контроля. 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к фармакологии, фармакогнозии.

В настоящее время оценка качества пантов марала (далее - ПМ) как сырья достаточно затруднена. Существуют ГОСТы для оценки качества консервированных ПМ [1, 2]. При консервации теряется значительная часть биологически активных веществ [3]. Однако не разработана соответствующая документация для оценки качества неконсервированных (сырых, замороженных) ПМ.

Известен способ стандартизации сырых ПМ [5], он заключается в визуальной оценке качества пантов по количеству отростков, толщине охвата ствола, признакам окостенения, цвету и натянутости кожи самого панта. Недостатки: оценка внешнего вида не может дать полное и объективное представление о качестве ПМ, а также их биологической активности, поскольку не оцениваются действующие вещества и величина их биологического эффекта.

В «Руководстве по проведению доклинических исследований лекарственных средств» Миронов А.Н. М., 2012. Ч. I. Глава 49. С. 759 [4] (прототип) описаны культуральные методы оценки гемостимулирующей активности фармакологических веществ, недостатком которых являются необходимость использования цитостатика, а также исследование содержания различных видов стволовых кроветворных клеток, что является достаточно сложной задачей, необходимой лишь в доклинических исследованиях лекарственных средств.

Задачей, решаемой настоящим изобретением, является расширение арсенала способов оценки биологической активности пантов марала, в частности их гемостимулирующей активности.

Известно, что ПМ обладают способностью стимулировать кроветворение [7]. Известно, что ПМ содержат группы веществ, способных стимулировать процессы пролиферации и дифференцировки стволовых клеток [7].

При добавлении водного извлечения из ПМ к культуре клеток костного мозга мыши активные вещества, входящие в состав этого извлечения, стимулируют процесс колониеобразования клеток. Активность сырья (ПМ) считается достаточной, если извлечение, полученное из этого сырья, стимулирует рост колоний не менее чем в 1,5 раза по сравнению с группой контроля.

Способ основан на способности биологически активных веществ, содержащихся в ПМ, стимулировать процесс колониеобразования кроветворных стволовых клеток костного мозга мыши in vitro. Предлагаемым способом оценивается активность суммы биологически активных веществ из пантов марала, продуктов и препаратов, получаемых из этого сырья, в отношении изменения количества колоний гемопоэтических клеток. В качестве экстрагента используется вода деионизированная, поскольку для экспериментов на культуре клеток необходимы именно водные растворы веществ. Сырьем служат свежезамороженные панты марала.

Изобретение поясняется фигурами.

Фиг. 1 - схема забора образца панта марала, где 1 - средняя часть панта.

Фиг. 2 - схема засевания планшета, где ряды с 1 по 11- опытные, ряд 12 - контрольный.

Для забора пробы используется средняя часть панта марала (фиг. 1), от которой отпиливают пластинку массой 2 г. Измельчают ПМ до размера 0,5×0,5 см, выдерживают в течение 1 часа на водяной бане с обратным холодильником при 80°С в соотношении сырье / экстрагент - 1/3. После извлечение процеживают через тройной слой марли, охлаждают до комнатной температуры, центрифугируют при 3000 оборотов в течение 10 мин, фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм и используют для исследования.

Для оценки гемостимулирующей активности in vitro используются белые лабораторные мыши либо мыши линии СВА. Бедренную кость мыши извлекают в стерильных условиях, после чего костный мозг асептически эксплантируют и суспендируют в среде RPMI-1640. Количество клеток доводят до 2×10⁵ на 1 мл питательной среды следующего состава: 80% RPMI-1640, 20% эмбриональной телячьей сыворотки, 280 мг/мл L-глютамина, 50 мг/л гентамицина. Засевают (фиг. 2) 96-луночные планшеты, по 200 мкл среды в каждую лунку, после чего добавляют по 10 мкл извлечения из ПМ. Каждый ряд планшета соответствует определенному извлечению. Также засевается контрольный ряд, где вместо изучаемых извлечений в лунки добавляется по 10 мкл воды в качестве контроля растворителя. Таким образом в 1 планшете можно проанализировать 11 проб пантов марала.

Планшеты культивируются в инкубаторе в течение 7 суток при 5% СO₂, 100% влажности. После производят подсчет числа колоний и кластеров (колония - скопление клеток количеством 40 и более; кластер - скопление от 20-40 клеток), статистическую обработку проводят с использованием критерия Манна - Уитни. Разница сравниваемых средних считается достоверной, если показатель достоверности р<0,05.

Согласно «Руководству по проведению доклинических исследований» [4] критерием достаточности гемостимулирующей активности является превышение количества колоний в исследуемых образцах не менее чем в 1,5 раза по сравнению с контролем. В связи с этим был взят этот критерий качества сырья и достаточности биологической активности: сырье считается качественным, если полученное извлечение будет стимулировать рост гемопоэтических колоний в исследуемом планшете не менее чем в 1,5 раза по сравнению с контролем. При этом превышение роста колоний на каждые 10% по сравнению с контролем принято за 1 колоние-стимулирующую единицу действия (КЕД).

Результаты эксперимента представлены в таблице 1.

Количество колоний и кластеров в исследуемой группе составило 300% по сравнению с контролем. В результате извлечение имеет активность, равную 20 КЕД. Поскольку для приготовления извлечения использовали 2 г ПМ, содержание единиц действия в 1 г сырья будет следующим: извлечение, полученное в результате настаивания в течение 1 часа, имеет активность, равную 10 КЕД.

Источники информации

1. ГОСТ 4227-76 «Панты марала и изюбра консервированные. Технические условия». М.: Госстандарт, 1976.

2. ГОСТ 3573-76 «Панты пятнистого оленя консервированные. Технические условия». М.: Госстандарт, 1976.

3. Луницын В.Г. Продукция пантового оленеводства: (способы консервирования, переработка, использование): монография / В.Г. Луницын, Н.А. Фролов. Рос. акад. с/х. наук, Сиб. отд-ние Всерос. науч.-исслед. ин-т пантового оленеводства. - Барнаул: Азбука, 2006. - 270 с.

4. Миронов А.Н. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. М., 2012. Ч. I. Глава 49. С. 759.

5. Павлова А.В. Научное и практическое обоснование рационального использования продукции мараловодства в условиях Тувы: дис. - Барнаул: Алт. гос. аграр. ун-т, 2000.

6. Патент РФ №2009125095/15, 30.06.2009. Дыгай A.M., Скурихин Е.Г., Першина О.В., Андреева Т.В., Хмелевская Е.С. Способ определения эффективности гемостимуляторов при цитостатической миелосупрессии // Патент России №2421720. 2011.

7. Deer antler base as a traditional Chinese medicine: A review of its traditional uses, chemistry and pharmacology / Feifei Wu, Huaqiang Li, Liji Jin // Journal of Ethnopharmacology. - 2013. - №145. - P. 403-415.

Способ оценки гемостимулирующей активности пантов марала, включающий изучение его влияния на колониеобразующую активность стволовых клеток-предшественников костного мозга мыши in vitro, отличающийся тем, что готовят водное извлечение из пантов марала путем выдерживания одной части пантов в трех частях воды деионизированной на водяной бане с обратным холодильником при 80°C в течение одного часа, при этом активность сырья считается достаточной, если извлечение, полученное из этого сырья, стимулирует рост колоний не менее чем в 1,5 раза по сравнению с группой контроля.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается выбора дозировки периндоприла у пациентов с ишемической болезнью сердца (ИБС) на фоне артериальной гипертензии (АГ).

Способ диагностики эндогенной интоксикации криопротекторного генеза // 2642270

Изобретение относится к лабораторной диагностике и представляет собой способ диагностики эндогенной интоксикации у лабораторных мышей для разработки нетоксичного криопротектора, включающий внутрибрюшинное введение испытуемого антифриза, забор крови, высушивание капель сыворотки крови объемом 4 мкл при +37°C, анализ структурности фации дегидратированных капель под микроскопом по показателям: индекс структурности, кристаллизуемость, степень деструкции фации и выраженность краевой зоны фации, отличающийся тем, что фации испытуемых веществ сравнивают с паттерном эндогенной интоксикации низкой выраженности, и вещества, у которых структурность фации аналогична паттерну с высокой выраженностью, относят к высокотоксичным и неперспективным, а вещества, у которых структурность фации аналогична паттерну с низкой выраженностью, относят к малотоксичным и перспективным для разработки криопротектора.

Способ прогнозирования концентрации церулоплазмина у стажированных работников, экспонированных ртутью // 2642266

Изобретение относится к области диагностики, а именно к способу прогнозирования концентрации церулоплазмина у стажированных работников, экспонированных ртутью. Способ прогнозирования концентрации церулоплазмина у стажированных работников, экспонированных ртутью, заключается в том, что определяют уровень церулоплазмина и активность гамма-глутамилтрансферазы в сыворотке крови, рассчитывают стаж работы в условиях экспозиции ртутью через 4-5 лет от текущего момента и полученные результаты обследования пациента подставляют в уравнение:У=-3,77665+0,31061×ГГТ1+0,00518×СТАЖ22+2,01893×ЦП1-0,02850×ЦП12, гдеУ - прогнозируемая концентрация церулоплазмина через 4-5 лет, -3,77665 - константа; 0,31061, 0,00518, 2,01893, 0,02850 - коэффициенты предикторов; ГГТ1 - концентрация гамма-глутамилтрансферазы в сыворотке крови на момент обследования (Е/л), не превышающая 200 Е/л; ЦП1 - концентрация церулоплазмина в сыворотке крови на момент обследования (мг/дл); СТАЖ2 - стаж работы в условиях экспозиции ртутью на прогнозируемый момент (стаж на момент обследования +4-5 лет).

Способ диагностики метастазов колоректального рака в печень // 2642247

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии и биохимии, и касается способа диагностики метастазов колоректального рака в печень с помощью анализа крови, Сущность способа: у больных со злокачественными новообразованиями толстой кишки до лечения определяют содержание меди в плазме периферической крови и при его значении, превышающем 37 мкмоль/л определяют наличие метастазов колоректального рака в печени.

Способ прогнозирования риска развития осложнений в раннем госпитальном периоде у пациентов после коронарного шунтирования в условиях искусственного кровообращения // 2642238

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается прогнозирования риска развития осложнений в раннем госпитальном периоде после коронарного шунтирования в условиях искусственного кровообращения.

Способ диагностики хронической болезни почек у больных сахарным диабетом 2 типа // 2641964

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики хронической болезни почек (ХБП) у больных сахарным диабетом 2 типа, включающий общеклиническое обследование, определение уровня микро- и макроальбуминурии, содержания цистатина С в сыворотке крови и расчет скорости клубочковой фильтрации по креатинину и цистатину С (CysC), отличающийся тем, что в плазме крови определяют васкулоэндотелиальный фактор роста (VEGF-A), эндотелин-1 (ЭТ-1), в моче определяют содержание нефрина и при значениях васкулоэндотелиального фактора роста (VEGF-A) 1000-1549 пг/мл, эндотелина-1 (ЭТ-1) 1,48-2,0 фмоль/мл, нефрина 20-50 нг/мл и цистатина С (CysC) 1,02-1,05 мг/мл диагностируют доклиническую стадию ХБП у больных сахарным диабетом 2 типа.

Метод диагностики паразитозов птиц и животных // 2641961

Изобретение относится к области ветеринарии и связано с разработкой копрологического метода диагностики кишечных паразитов птиц и яиц клещей. Метод заключается в том, что берут пробу фекалий весом 1-2 г, помещают в копрологический стакан, заливают 10 мл дистиллированной воды, размешивают, доливают 20-30 мл воды, процеживают через металлическое сито в чистый стакан, дают взвеси отстояться в течение 5 мин, верхнюю часть сливают, оставшуюся часть переливают в центрифужную пробирку объемом 13 мл, центрифугируют в течение 3 мин при 1500 g, после сливают жидкость до осадка на дне пробирки, к осадку добавляют флотационную жидкость, состоящую из насыщенного раствора хлористого цинка - 1750 г на 1 л, и насыщенного раствора сахара - 1333 г на 1 л, взятых в соотношении 1,5:1 соответственно, размешивают и центрифугируют 3 мин при 1500 g, после чего микроскопируют поверхностную пленку.

Метод диагностики паразитозов птиц и животных // 2641961

Способ обнаружения микробной и вирусной контаминации растворов и биологических жидкостей // 2641960

Изобретение относится к области микробиологии, а именно к способу определения контаминации растворов и биологических жидкостей. Сущность способа состоит в том, что детектируют биологические объекты, включающие микроорганизмы или вирусы, с помощью наночастиц металлов, формирующихся in situ из внесенных в исследуемый объект солей соответствующих металлов, при последующем анализе динамики спектральных характеристик формирующихся наночастиц.

Способ проведения мульти-анализов редких клеток, экстрагированных или выделенных из биологических образцов фильтрацией // 2641595

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической онкологии для ранней диагностики инвазивного рака. Для этого выделяют или экстрагируют циркулирующие раковые клетки из биологического образца вертикальной фильтрацией через фильтр с размером пор между 3 и 100 мкм, который позволяет удерживать свободно циркулирующие опухолевые редкие клетки, но не препятствует прохождению через фильтр более мелких клеток.

Анализы определения антител, специфичных к терапевтическим антителам против ige, и их применение при анафилаксии // 2642295

Изобретение относится к биохимии. Предложены способы обнаружения человеческого антитела изотипа IgE против омализумаба.

Способ определения простых сахаров в тонком слое сорбента // 2642264

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам стандартизации лекарственных препаратов, лекарственного растительного сырья, фитопрепаратов и биологически активных добавок по содержанию моносахаридов (глюкозы, ксилозы и рамнозы), и может быть использовано в фармацевтическом анализе, в химико-фармацевтической промышленности.

Лизиметр // 2642261

Изобретение относится к приборам, применяемым в сельском хозяйстве при балансовых исследованиях на мелиорируемых землях, в частности для определения инфильтрации поливных, талых и дождевальных вод.

Способ оценки стойкости материалов космической техники к воздействию факторов космического пространства // 2642009

Изобретение относится к области испытаний полимерных материалов, входящих в состав конструкций космических аппаратов (КА). В предлагаемом способе образцы материалов экспонируют в течение заданного срока на поверхности КА, затем помещают в контейнер, который, в свою очередь, укладывают в транспортный контейнер (герметизируемый в условиях космоса) и возвращают их на Землю.

Композиции и способы анализа рака предстательной железы // 2641968

Предложенная группа изобретений относится к области медицины, в частности к онкологии. Предложены способ диагностики рака предстательной железы и способ мониторинга реакции на терапию рака предстательной железы, включающие контактирование раковых клеток эпителиального происхождения с анти-STEAP-l антителом, которое специфически связывается с простата-специфическим маркером STEAP-1 с KD≤1000 нМ, где анти-STEAP-1 антитело представляет собой антитело 15А5, продуцированное клеткой гибридомы, имеющей номер депонирования микроорганизмов РТА-12259.

Способ определения показаний к проведению противогерпетической терапии при инфекции вгч-6 у детей с острыми респираторными заболеваниями // 2641609

Изобретение относится к области медицины, в частности к педиатрии. Предложен способ определения показаний к проведению противогерпетической терапии при инфекции ВГЧ-6 у детей с острыми респираторными заболеваниями.

Способ обнаружения проникновения текучей среды в пациента // 2641603

Изобретение относится к обнаружению текучей среды в теле человека, в частности к обнаружению гидравлической текучей среды и жидкого топлива внутри тела человека. Способ обнаружения проникновения текучей среды в пациента включает этапы обеспечения емкости для хранения текучей среды, обеспечения текучей среды для использования в машинном оборудовании и ее добавления в указанную емкость; и обеспечения флуоресцентного красителя и его добавления в текучую среду с обеспечением флуоресценции текучей среды в присутствии голубого или ультрафиолетового света.

Аппаратный комплекс для оценки теплотехнических параметров текстильных материалов // 2641317

Изобретение относится к области измерительной техники, предназначено для определения параметров стационарного и нестационарного теплообмена в системе «человек-одежда-окружающая среда».

Способ, система и устройство контроля качества с использованием датчиков для применения с устройствами для проведения биологических/экологических диагностических экспресс-тестов // 2641234

В заявке описаны способы, системы и устройства контроля качества (КК) с использованием датчиков, предназначенные для применения с устройствами для проведения биологических/экологических диагностических экспресс-тестов (ДЭТ).

Способ ранней диагностики серозной карциномы яичника высокой степени злокачественности на основании изменения клеточного состава эпителия маточной трубы // 2641094

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии и патологической анатомии, предназначено для ранней диагностики серозных карцином яичника высокой степени злокачественности.

Способы избирательной количественной оценки агрегатов а-бета // 2642314

Изобретение относится к биохимии. Описан способ количественной оценки и характеризации агрегатов А-бета, включающий следующие стадии, на которых: а) осуществляют иммобилизацию захватывающих молекул на субстрате, б) наносят предназначенный для тестирования образец и внутренний стандарт на субстрат, в) добавляют меченые с целью детекции зонды, которые метят агрегаты А-бета посредством специфического связывания с ними, и г) определяют количество и размер маркированных агрегатов А-бета с пространственным разрешением в каждом случае по сравнению с соответствующим фоном, при этом стадию б) можно осуществлять до осуществления стадии в). Также представлен набор для осуществления описанного способа, содержащий стандарт и один или несколько из следующих компонентов: стеклянный субстрат с нанесенным покрытием из гидрофобной субстанции; захватывающую молекулу; зонд; субстрат с захватывающей молекулой; растворы; и буфер. Также представлен способ определения эффективности действующих веществ и/или терапий, предназначенных для лечения болезни Альцгеймера, отличающийся тем, что а) осуществляют иммобилизацию захватывающих молекул на субстрате, б) наносят предназначенный для тестирования образец и внутренний стандарт на субстрат, в) добавляют меченые с целью детекции зонды, которые метят агрегаты А-бета посредством специфического связывания с ними, и г) определяют количество и размер маркированных агрегатов А-бета с пространственным разрешением в каждом случае по сравнению с соответствующим фоном, при этом стадию б) можно осуществлять до осуществления стадии в), д) сравнивают результаты, полученные на образцах, которые представляют собой образцы биологической жидкости организма, взятые до или в различные моменты времени после введения действующих веществ и/или применения терапии, с результатами, полученными для контроля, который не обрабатывали действующим веществом и/или не подвергали терапии, и на основе полученных результатов отбирают действующие вещества и/или терапии, после применения которых наблюдалось снижение количества агрегатов А-бета. Изобретение расширяет арсенал средств, предназначенный для определения эффективности лечения болезни Альцгеймера. 3 н. и 40 з.п. ф-лы, 7 ил., 3 пр.