Способ профилактики ретинальной ишемии-реперфузии миноксидилом в эксперименте

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии и офтальмологии, и может быть использовано для профилактики ишемических состояний сетчатки в эксперименте. Способ включает предварительное прекондиционирование лекарственным средством путем однократного внутрижелудочного введения его раствора лабораторному животному. Последующее моделирование ишемии сетчатки проводят путем механического давления 110 мм рт.ст. на переднюю камеру глаза в течение 30 минут. В качестве лекарственного средства за 60 минут до моделирования используют миноксидил в дозе 0,5 мг/кг массы тела животного. Ретинопротективный эффект миноксидила оценивают по результатам электроретинографии после 72 часов реперфузии. Способ приводит к выраженной коррекции ретинальной ишемии-реперфузии в эксперименте, что подтверждается достижением показателей уровня ретинальной микроциркуляции и восстановлением электрофизиологической активности сетчатки. 1 пр., 2 табл.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и офтальмологии.

По известным литературным источникам – в последние годы отмечается рост ишемических заболеваний глазного дна, связанных с распространением атеросклероза, гипертонической болезни, ишемической болезни сердца, сахарного диабета, которые приводят к патологии сетчатки. Ретинальная ишемия приводит к развитию слепоты и инвалидности по зрению у людей различных возрастных групп (Камилов Х. М. Состояние общей и регионарной гемодинамики при глазном ишемическом синдроме [Текст] / Х. М. Камилов, М. С. Касимова, Д. К. Махкамова // Вестник Тамбовского университета. Сер. Естественные и технические науки. – 2015. – Т. 20, № 3. – С. 596–599). В связи с этим, профилактика и коррекция ишемических повреждений сетчатки, возникающих при различных системных заболеваниях и состояниях, является актуальной проблемой современной медицины.

Известен способ профилактики ишемии сетчатки эритропоэтином в эксперименте (RU № 2539629, публ. 20.01.2015), включающий воспроизведение модели патологии и введение лабораторному животному рекомбинантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг, отличающийся тем, что рекомбинантный эритропоэтин вводят однократно в 1-й день эксперимента внутрибрюшинно в качестве прекондиционирующего агента, а через 30 минут проводят моделирование ишемии сетчатки путем оказания механического давления (110 мм рт.ст.) на переднюю камеру глаза в течение 30 минут в 1-й день эксперимента.

Основным недостатком способа является то, что профилактика ишемии сетчатки рекомбинантным эритропоэтином в эксперименте не приводит к достижению целевых значений уровня ретинальной микроциркуляции после 72 часов реперфузии в отличие от предлагаемой профилактики, где уровень микроциркуляции в сетчатке в группе крыс с коррекцией патологии миноксидилом стремится к значению в группе интактных животных, достоверно не отличаясь от него, и превосходит показатели коррекции рекомбинантным эритропоэтином.

Наиболее близким к заявленному решению является способ профилактики ишемии сетчатки в эксперименте (RU № 2539630, публ. 20.01.2015), включающий фармакологическое прекондиционирование никорандилом путем его введения лабораторному животному в виде раствора внутрижелудочно через зонд, а затем моделирование патологии, а никорандил вводят в дозе 0,86 мг/кг массы тела животного однократно, а через 30 минут проводят моделирование ишемии сетчатки путем оказания механического давления 110 мм рт.ст. на переднюю камеру глаза в течение 30 минут в 1-й день эксперимента.

Основным недостатком способа является то, что оценку профилактического действия никорандила проводят только по изменению показателей уровня микроциркуляции в сетчатке, не учитывая показатели функциональной активности сетчатки, что не позволяет полностью оценить фармакологическое действие препарата при проведении доклинических исследований.

Задачей предлагаемого изобретения является создание эффективного способа профилактики ретинальной ишемии-реперфузии миноксидилом в эксперименте, включающего прекондиционирующий агент миноксидил.

Поставленная задача достигается тем, что предложен способ профилактики ретинальной ишемии-реперфузии миноксидилом в эксперименте, включающий фармакологическое прекондиционирование лекарственным средством путем его введения лабораторному животному в виде раствора внутрижелудочно через зонд, а затем моделирование патологии путем оказания механического давления 110 мм рт.ст. на переднюю камеру глаза в течение 30 минут в 1-й день эксперимента, причем в качестве лекарственного средства применяют миноксидил, который вводят в дозе 0,5 мг/кг массы тела животного однократно, а через 60 минут проводят моделирование ретинальной ишемии-реперфузии. Результат подтверждается электроретинографически через 72 часа реперфузии.

Основным преимуществом предлагаемого способа является то, что внутрижелудочное введение миноксидила в дозе 0,5 мг/кг массы тела животного однократно приводит к более выраженной коррекции ретинальной ишемии-реперфузии в эксперименте, чем в прототипе и аналоге, так как миноксидил открывает митохондриальные АТФ-зависимые К+-каналы, за счет чего реализуется эффект прекондиционирования, что подтверждается достижением лучших показателей уровня ретинальной микроциркуляции и восстановлением электрофизиологической активности сетчатки при коррекции миноксидилом.

Регистрацию уровня микроциркуляции в сетчатке и электроретинографию (ЭРГ) проводили через 72 часа реперфузии после моделирования ретинальной ишемии.

Кроме того, в предлагаемом способе выявлена более эффективная профилактика ретинальной ишемии-реперфузии в эксперименте, подтверждаемая достижением лучших показателей уровня микроциркуляции в сетчатке при коррекции миноксидилом, чем в прототипе, и улучшением электрофизиологической активности сетчатки при проведении ЭРГ.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проведены на 40 белых лабораторных крысах обоих полов массой 180-220 г. Каждая группа включала 10 крыс. Первая группа – группа интактных животных, вторая группа – с ретинальной ишемией (контроль), третья группа – с коррекцией миноксидилом; четвертая группа - с коррекцией никорандилом (препарат сравнения).

Моделирование ретинальной ишемии-реперфузии проводили путем оказания механического давления 110 мм рт.ст. на переднюю камеру глаза в течение 30 минут в 1-й день эксперимента. Подтверждением формирования ишемии служило отсутствие глазного кровотока (побеление глаза лабораторного животного).

В третьей группе животных за 60 мин до моделирования патологии вводили миноксидил в дозе 0,5 мг/кг массы тела крысы (терапевтическая доза получена в результате переноса доз с человека на крысу с использованием формулы межвидового переноса и коэффициента пересчета доз для разных видов животных в зависимости от массы тела по Улановой И.П.) однократно внутрижелудочно через зонд в виде крахмального раствора. За 15 мин до моделирования ишемии осуществляли наркотизацию внутрибрюшинным введением раствора хлоралгидрата в дозе 300 мг/кг массы тела крысы.

В четвертой группе животных за 30 мин до моделирования ретинальной ишемии-реперфузии вводили никорандил в дозе 0,86 мг/кг массы тела животного (терапевтическая доза получена в результате переноса доз с человека на крысу с использованием формулы межвидового переноса и коэффициента пересчета доз для разных видов животных в зависимости от массы тела по Улановой И.П.) однократно внутрижелудочно через зонд в виде крахмального раствора. За 15 мин до моделирования ишемии осуществляли наркотизацию внутрибрюшинным введением раствора хлоралгидрата в дозе 300 мг/кг массы тела животного.

О выраженности ретинопротективного эффекта судили по электрофизиологическим изменениям в сетчатке крыс через 72 часа реперфузии. Для этого под наркозом (хлоралгидрат, 300 мг/кг массы тела животного, внутрибрюшинно) животное фиксировали. Функциональное состояние сетчатки оценивали по амплитуде а- и b-волн электроретинограммы. Угнетение волны b является наиболее чувствительным показателем ишемического повреждения ткани и отражает функциональное состояние сетчатки даже при отсутствии заметных структурных повреждений (Константинова Т. С. Протекторная и нейротоксическая роль оксида азота в моделях зрительных патологий [Текст] : автореф. дис. … канд. биол. наук : 03.00.02 / Т. С. Константинова. – Москва, 2009. – 26 с.). Вызванные биопотенциалы пропускались на частоте 1-1000 Гц, усиливались, усреднялись и представлялись графически на экране при помощи Biopac-systems MP-150 с компьютерной программой AcqKnowledge 4.2 (США).

Уровень микроциркуляции в сетчатке крыс определяли сразу после проведения ЭРГ при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-150 и датчика игольчатого типа TSD-144 (США). Регистрацию уровня микроциркуляции в сетчатке оценивали в десяти точках, из полученных значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в сетчатке у данного животного.

Достоверность изменений абсолютных параметров определяли разностным методом вариационной статистики с нахождением средних значений сдвигов, средней арифметической и вероятности возможной ошибки (р) по таблицам Стьюдента. Различия оценивали как достоверные при p<0,05. Для расчётов использовали программу статистического анализа Microsoft Excel 2003.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Оценку электрофизиологической активности сетчатки проводят по её основным компонентам – по амплитуде а- и b-волн. Для проведения ЭРГ животных выдерживают в темноте 30 мин (Effects of the duration of dark adaptation on the retinal function of normal SD rats [Text] / L. Zahng, Y.-h. Gu, J. An [et al.] // Chinese journal of optometry ophthalmology and visual science. – 2013. – Vol. 15, № 6. – P. 323-326), далее наркотизируют и фиксируют на столике, изолированном от электромагнитного излучения. Роговичный серебряный электрод помещают на роговицу, предварительно смоченную физ. раствором для более полного контакта, референтный игольчатый электрод помещают подкожно в области черепа, заземляющий игольчатый электрод помещают подкожно в области основания хвоста. Стробоскоп со вспышкой белого света, подключенный к стимулятору, размещают за спиной животного, регистрацию ЭРГ проводят в ответ на одиночную стимуляцию. Вызванные биопотенциалы пропускают на частоте 1-1000 Гц, усиливают, усредняют и представляют графически. Запись ЭРГ проводят в течение 0,5 с у каждой крысы. Для оценки степени развития ишемии сетчатки используют соотношение амплитуд b- и а-волн ЭРГ – коэффициент b/a (Константинова Т. С. Протекторная и нейротоксическая роль оксида азота в моделях зрительных патологий [Текст] : автореф. дис. … канд. биол. наук : 03.00.02 / Т. С. Константинова. – Москва, 2009. – 26 с.; Нероев В. В. Ишемия сетчатки и оксид азота [Текст] / В. В. Нероев, М. М. Архипова // Вестник РАМН. – 2003. – № 5. – С. 37-40).

Результаты оценки электрофизиологической активности сетчатки крыс на 72 час реперфузии после моделирования ретинальной ишемии в экспериментальных группах представлены в таблице 1.

Таблица 1

Результаты оценки электрофизиологической активности сетчатки крыс на 72 час реперфузии (М±m), усл.ед.

№ п/п Экспериментальные группы Коэффициент b/a после 72 ч реперфузии
1 Интактные (n=10) 2,5±0,10 у
2 Ретинальная ишемия (n=10) 1,2±0,04*
3 Коррекция миноксидилом, 0,5 мг/кг (n=10) 2,4±0,09 у
4 Коррекция никорандилом,
0,86 мг/кг (n=10)
2,2±0,06 *у

Примечание: * - р<0,05 в сравнении с группой интактных животных; у - р<0,05 в сравнении с группой с ретинальной ишемией

В нашем исследовании при развитии ретинальной ишемии через 72 ч после моделирования патологии коэффициент b/a снижался до 1,2±0,04 при его нормальных значениях у белых лабораторных крыс 2,5±0,1 (р<0,05). На фоне коррекции патологии миноксидилом коэффициент b/a достоверно возрастал до 2,4±0,09 (р<0,05) по сравнению с группой контроля (табл. 1). При коррекции ишемии никорандилом коэффициент b/a составил 2,2±0,06, что достоверно отличается как от значений в группе контроля (р<0,05), так и от значений в группе интактных крыс (р<0,05).

Оценку микроциркуляции проводили при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-150 и датчика TSD-144 (США). Для этого производили регистрацию уровня микроциркуляции в сетчатке в десяти точках по окружности склеры с шагом 1 мм. Запись кривой уровня микроциркуляции проводили в течение 20 секунд в каждой точке. Из полученных десяти значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в сетчатке у данного животного. Из 10 полученных значений выводили среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в сетчатке в данной группе животных.

Результаты оценки уровня микроциркуляции в сетчатке крыс на 72 час реперфузии после моделирования ретинальной ишемии в экспериментальных группах представлены в таблице 2.

Таблица 2

Результаты оценки уровня микроциркуляции в сетчатке крыс на 72 час реперфузии (М±m), п.е. (перфузионные единицы)

№ п/п Экспериментальные группы Уровень микроциркуляции после
72 ч реперфузии
1 Интактные (n=10) 743,9±5,0 у
2 Ретинальная ишемия (n=10) 353,3±11,7*
3 Коррекция миноксидилом, 0,5 мг/кг (n=10) 739,5±14,1 у
4 Коррекция никорандилом,
0,86 мг/кг (n=10)
705,2±15,5 у

Примечание: * - р<0,05 в сравнении с группой интактных животных; у - р<0,05 в сравнении с группой с ретинальной ишемией

Уровень микроциркуляции в сетчатке интактных крыс составил 743,9±5,0 п.е. Уровень микроциркуляции после моделирования ретинальной ишемии в группе контроля составил на 72 час реперфузии 353,3±11,7 п.е., что достоверно ниже значения в группе интактных животных (р<0,05). На фоне коррекции патологии миноксидилом уровень микроциркуляции в сетчатке достоверно возрастает до 739,5±14,1 п.е. (р<0,05) по сравнению с группой контроля. При коррекции ишемии никорандилом уровень микроциркуляции в группе возрастает до 705,2±15,5 п.е. и достоверно отличается от значений в группе контроля (р<0,05).

В связи с вышеизложенным следует, что коррекция ретинальной ишемии-реперфузии миноксидилом в дозе 0,5 мг/кг массы тела животного приводит к достижению более высоких показателей уровня микроциркуляции в сетчатке лабораторных крыс после 72 ч реперфузии по сравнению с коррекцией никорандилом в дозе 0,86 мг/кг массы тела животного и стремится к значениям в группе интактных крыс.

Таким образом, в предлагаемом способе введение миноксидила в дозе 0,5 мг/кг массы тела животного производится внутрижелудочно через зонд однократно, что приводит к более выраженной коррекции ретинальной ишемии-реперфузии в эксперименте, чем в прототипе и аналоге, так как миноксидил открывает митохондриальные АТФ-зависимые К+-каналы, за счет чего реализуется эффект прекондиционирования, что подтверждается достижением лучших показателей уровня ретинальной микроциркуляции и восстановлением электрофизиологической активности сетчатки.

Способ профилактики ретинальной ишемии-реперфузии в эксперименте, включающий фармакологическое прекондиционирование лекарственным средством путем однократного внутрижелудочного введения его раствора лабораторному животному с последующим моделированием ишемии путем механического давления 110 мм рт.ст. на переднюю камеру глаза в течение 30 минут, отличающийся тем, что в качестве лекарственного средства за 60 минут до моделирования используют миноксидил в дозе 0,5 мг/кг массы тела животного, а ретинопротективный эффект миноксидила оценивают по результатам электроретинографии после 72 часов реперфузии.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и офтальмологии, и может быть использовано для профилактики ишемической нейропатии зрительного нерва.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано в комплексной оценке активности фармакологических средств на изолированном сердце крысы.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и неврологии, и может быть использовано для профилактики ишемических состояний головного мозга.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть применимо для моделирования реконструкции передней крестообразной связки коленного сустава. Измеряют диаметр полученного трансплантата, сложенного вдвое.
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к патофизиологии, и может быть использовано для прогноза развития патогенетического процесса по культивируемому и некультивируемому типу при инфекционных заболеваниях.
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к нейрохирургии, и может быть использовано для моделирования тяжелой черепно-мозговой травмы с грубыми стойкими нарушениями неврологических и когнитивных функций.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной токсикологии, и может быть использовано при исследовании механизмов токсического действия растворимых форм бериллия.

Изобретение относится к области медицины, а именно к методам экспериментального моделирования патологических процессов, протекающих в мочевой системе. Предлагаемый способ моделирования процесса образования оксалатного мочевого камня основан на выращивании камня в искусственно созданной модельной среде мочи человека, при этом для приготовления раствора используют: CaCl2⋅2H2O - 7 ммоль/л, MgSO4⋅7H2O - 4 ммоль/л, NH4Cl - 8 ммоль/л, K2SO4 - 6 ммоль/л, (NH4)2C2O4⋅H2O - 2÷4 ммоль/л, (NH4)3PO4 - 10 ммоль/л, K2CO3 - 7 ммоль/л, KCl - 24 ммоль/л, NaCl - 140 ммоль/л, и дистиллированную воду.

Изобретение относится к медицинской технике, к устройству, обеспечивающему обратные тактильные ощущения при манипулировании имитатором медицинского инструмента, и может быть использовано в медицинских тренажерах эндоскопической хирургии, при моделировании виртуального медицинского вмешательства, где хирург, проводит тренировочную хирургическую операцию в моделируемой среде, оперируя имитаторами медицинских инструментов, подобными реальным инструментам.

Группа изобретений относится к медицине, биологии и включает систему и способ ее использования для адресного контроля нейронов мозга живых, свободноподвижных животных на основе размыкаемого волоконно-оптического зонда с многоканальными волокнами.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и офтальмологии, и может быть использовано для профилактики ишемической нейропатии зрительного нерва.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой фармацевтическую композицию, обладающую противовоспалительной и антибактериальной активностью, заживлением ран, активностью восстановления суставов и усилением активности противоопухолевых лекарственных средств, содержащую эффективное количество несульфатированного хондроитина в качестве активного ингредиента.

Группа изобретений относится к области фармацевтики и медицины и касается пептида, содержащего последовательность глицин-аргинин-глицин-цистеиновая кислота-треонин-пролин, который ингибирует клеточную адгезию к RGD-сайтам связывания.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначена для лечения синдрома сухости глаз. Композиция для лечения синдрома сухости глаз, связанного с нуклеиновыми кислотами, который развивается в результате выработки/образования нуклеиновых кислот вместе с образованием глазных мукоидных пленок и/или биопленок, содержит дезоксирибонуклеазу I (ДНКазу I) и офтальмологическое вспомогательное вещество, и не содержит антибиотик.

Группа изобретений относится к области медицины и представляет собой: глазную взвесь, содержащую циклоспорин А формы 2 и какую-либо среду, где циклоспорин А формы 2 характеризуется следующими пиками при сканировании рентгеновским дифрактометром с излучением Cu Kα, 2θ: 7,5, 8,8, 10,2, 11,3, 12,7, 13,8, 14,5, 15,6 и 17,5; способ приготовления состава циклоспорина, который включает этапы смешивания циклоспорина А формы 2 со средой для образования взвеси; размельчение взвеси; глазную взвесь, содержащую частицы циклоспорина А Формы 2; и среду, в которой средний размер (d90) частиц меньше чем около 10 мкм; способ лечения состояния выбранного из: сидром сухого глаза, блефарит, заболевание мейбомиевой железы, нарушение чувствительности роговицы, аллергический конъюнктивит, атопический кератоконъюнктивит, весенний кератоконъюнктивит и птеригий, включающий этап применения к пациенту, имеющему такое состояние, вышеуказанной глазной взвеси.

Группа изобретений относится к медицине. Описаны биоразлагаемые устройства, такие как имплантаты для контролируемой доставки терапевтических агентов, в частности больших молекул, таких как белки и антитела.

Изобретение относится к области офтальмологии и представляет собой офтальмологическую композицию, предназначенную для введения в силиконовую гидрогелевую контактную линзу, для лечения, предотвращения или смягчения синдрома сухого глаза, где композиция содержит сложный эфир противовоспалительного липоидного медиатора в количестве от приблизительно 0,01% до 5,0% по весу в расчете на общую массу композиции, где противовоспалительный липоидный медиатор представляет собой этиловый эфир альфа-линолевой кислоты и пропиленгликоль, где противовоспалительный липоидный медиатор присутствует в форме сложного эфира.

Изобретение относится к соединению общей формулы (I), обладающему высокой антагонистической активностью по отношению к S1P2 человека, и может применяться для приготовления лекарственного средства для лечения заболевания, опосредованного S1P2, такого как заболевание, обусловленное сужением сосудов, фиброз и респираторное заболевание.

Изобретение относится к области медицины и фармацевтической промышленности, а именно к офтальмической композиции в виде глазных капель, содержащей полиафроновую дисперсию и имеющей вязкость от 1 до 50 Па⋅с при скорости сдвига 1 с-1, где указанная композиция включает неионное, негалогенированное поверхностно-активное вещество, фармацевтически приемлемое масло, выбранное из группы, состоящей из касторового масла, длинноцепочечных триглицеридов, среднецепочечных триглицеридов, минерального масла, силиконов, фосфолипидов, моно- и диглицеридов и смесей двух или более из них, и фармацевтически активный агент – циклоспорин, при этом композиция не содержит фторированное поверхностно-активное вещество.

Группа изобретений относится к области медицины и представляет собой офтальмологический состав, содержащий циклоспорин А формы 2 и какой-либо гидрогель, где циклоспорин А формы 2 характеризуется следующими пиками при сканировании рентгеновским дифрактометром с излучением Cu Кα, 2θ: 7,5, 8,8, 10,2, 11,3, 12,7, 13,8, 14,5, 15,6 и 17,5; а также способ лечения состояния, выбранного из: сидром сухого глаза, блефарит, заболевание мейбомиевой железы, нарушение чувствительности роговицы, аллегрический конъюнктивит, атопический кератоконънюктивит и птеригия, включающий этап применения к пациенту, имеющему такое состояние, указанного состава.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой капсульный состав для перорального введения, обладающий противогрибковым действием, содержащий инкапсулированный материал, содержащий L-лизин-{[(1R,2R)-2-[4-(4-цианофенил)-1,3-тиазол-2-ил]-1-(2,4-дифторфенил)-1-(1H-1,2,4-триазол-1 илметил)пропил]окси}метилдигидрофосфат-этанол; и оболочку капсулы, образованную основой оболочки капсулы, содержащей пуллулан или гипромеллозу, где массовое соотношение L-лизин-{[(1R,2R)-2-[4-(4-цианофенил)-1,3-тиазол-2-ил]-1-(2,4-дифторфенил)-1-(1H-1,2,4-триазол-1-илметил)пропил]окси} метилдигидрофосфат-этанола к оболочке капсулы составляет от 0,27 или более.

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии и офтальмологии, и может быть использовано для профилактики ишемических состояний сетчатки в эксперименте. Способ включает предварительное прекондиционирование лекарственным средством путем однократного внутрижелудочного введения его раствора лабораторному животному. Последующее моделирование ишемии сетчатки проводят путем механического давления 110 мм рт.ст. на переднюю камеру глаза в течение 30 минут. В качестве лекарственного средства за 60 минут до моделирования используют миноксидил в дозе 0,5 мгкг массы тела животного. Ретинопротективный эффект миноксидила оценивают по результатам электроретинографии после 72 часов реперфузии. Способ приводит к выраженной коррекции ретинальной ишемии-реперфузии в эксперименте, что подтверждается достижением показателей уровня ретинальной микроциркуляции и восстановлением электрофизиологической активности сетчатки. 1 пр., 2 табл.

Наверх