Вакцина против туберкулеза



Вакцина против туберкулеза
Вакцина против туберкулеза
Вакцина против туберкулеза

Владельцы патента RU 2647831:

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов" Федерального медико-биологического агентства (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения вакцины против туберкулеза. Вакцина содержит активное начало на основе микобактерий туберкулеза и вспомогательных веществ, при этом в качестве активного начала она содержит белок Tb10.4 M. tuberculosis и Ag85B M. tuberculosis в соотношении от 1:2 до 2:1 при следующем соотношении ингредиентов, мас.%: белок Tb10.4 M. tuberculosis 0,001-0,003; Ag85B M. tuberculosis 0,001-0,003; гибридный белок на основе FliC Salmonella typhimurium в концентрации 0,001-0,0030; вспомогательные вещества 4,5-5,5; вода - остальное. Использование в составе вакцины гибридного белка на основе FliC Salmonella typhimurium позволяет нивелировать побочные эффекты от использования живой вакцины, при этом полученная вакцина проявляет протективную активность как при внутримышечном, так и при интраназальном введении. 3 з.п. ф-лы, 1 пр., 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к препаратам для профилактики туберкулеза.

В настоящее время одной из основных причин смерти от инфекционных и паразитарных заболеваний является туберкулез [Татьков С.И., Дейнеко Е.В., Фурман Д.П. Перспективы создания противотуберкулезных вакцин нового поколения // Вавиловский Журнал Генетики и Селекции. 2011. Vol. 15, №11]. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) туберкулезом ежегодно заболевает в мире около 8 млн. человек, и около 3 млн. заболевших погибает. При этом по данным ФГБУ «ЦНИИОИЗ» Минздрава России в 2013 году в Российской Федерации по официальной статистике заболеваемость туберкулезом составила 63 случая на 100 тыс. населения, а смертность - 11,3 случаев на 100 тыс. населения [Hoang Т. et al. ESAT-6 (EsxA) and ТВ10.4 (EsxH) Based Vaccines for Pre- and Post-Exposure Tuberculosis Vaccination // PLoSONE / ed. Izzo A.A. 2013. Vol. 8, №12. P. e80579].

Возбудителем туберкулеза является патоген Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis), реже - родственные ему виды М. bovis и М. africanum. Основным резервуаром и источником аэрогенной туберкулезной инфекции является бациллярный больной, выделяющий большое количество микобактерий с мокротой или слюной. Кроме того, заражение может происходить алиментарным путем - через употребление молока и молочнокислых продуктов от коров, пораженных М. bovis, или яиц от кур, инфицированных М. avium. В результате аэрогенного заражения туберкулезный процесс чаще возникает в органах дыхания, при алиментарном инфицировании могут поражаться почки, легкие, кости и суставы, периферические лимфоузлы, мочеполовые органы, глаза, центральная нервная система.

В зависимости от основных клинических проявлений различают легочную и нелегочные формы туберкулеза. Тем не менее, туберкулез легких остается наиболее распространенной и опасной формой. Без лечения более половины случаев в течение 5 лет заканчиваются смертью [Iem V. et al. Resistance of Mycobacterium tuberculosis to antibiotics in Lao PDR: first multicentric study conducted in 3 hospitals // BMC Infect. Dis. 2013. Vol. 13, №1. P. 275].

Если заболевание вызвано чувствительными к противотуберкулезным средствам штаммами микобактерий, правильно назначенное лечение практически всегда дает эффект. Однако в последние годы широкое распространение получили устойчивые к противотуберкулезным средствам штаммы микобактерий, лечение вызванного ими туберкулеза проходит крайне сложно. В связи с этим важным аспектом в борьбе с данным заболеванием является предупреждение развития заболевания, вакцинация.

В настоящее время для предупреждения туберкулеза широко используется вакцинирование новорожденных детей живой вакциной БЦЖ.

Вакцинация БЦЖ в детском возрасте эффективна в отношении заболевания милиарной формой туберкулеза легких и туберкулезным менингитом. Однако в последние годы усиливаются сомнения относительно ее универсальности и эффективности. Необходимо отметить, что развитие туберкулеза на сегодняшний день отмечается не только у некачественно вакцинированных или невакцинированных детей, но и у лиц, которым вакцина БЦЖ была введена правильно и своевременно [Стукова М.А. et al. Профилактика туберкулеза: современные подходы к разработке противотуберкулезных вакцин // Актуальные Вопросы Фтизиатрии Вестник РАМН. 2012. №11].

БЦЖ, подобно другим живым вакцинам, способна вызывать отрицательные побочные эффекты. Осложнения при вакцинации БЦЖ наблюдаются, в частности, у детей, инфицированных ВИЧ, еще до рождения. Принципиальным недостатком вакцины БЦЖ является постепенное (в течение 3-7 лет) снижение поствакцинального иммунитета. Согласно результатам контролируемых исследований, это приводит к практически полному отсутствию защитного эффекта уже через 10 лет после вакцинации [Russell D.G., Barry С.Е., Flynn J.L. Tuberculosis: what we don't know can, and does, hurt us // Science. 2010. Vol. 328, №5980. P. 852-856]. В то же время использование БЦЖ для ревакцинации, направленной на поддержание противотуберкулезного иммунитета, по данным экспертов ВОЗ, признается неэффективным [World Health Organization. BCG vaccine. WHO position paper // Sect. Nations Wkly. Epidemiol. Rec. Health Sect. Secr. Leag. Nations. 2004. Vol. 79, №4. P. 27-38].

Таким образом, к настоящему времени назрела необходимость разработки вакцин нового поколения как наиболее эффективных иммунопрофилактических средств борьбы с туберкулезом, в первую очередь с его легочной формой.

Одним из направлений разработки новых противотуберкулезных вакцин является создание субъединичных вакцин на основе рекомбинантных белков [Татьков С.И., Дейнеко Е.В., Фурман Д.П. Перспективы создания противотуберкулезных вакцин нового поколения // Вавиловский Журнал Генетики И Селекции. 2011. Vol. 15, №1].

Субъединичными называют вакцины, которые содержат только отдельные компоненты патогенного микроорганизма, содержащие эпитопы антигенов, активно распознаваемые иммунной системой хозяина. Достоинства субъединичных вакцин заключаются в том, что препарат, содержащий очищенный иммуногенный белок, стабилен и безопасен, его физико-химические свойства известны, в нем отсутствуют дополнительные белки и нуклеиновые кислоты, которые могли бы вызвать нежелательные эффекты в вакцинируемом организме [Калюкина А.С. Изучение возможности применения рекомбинантного белка HSP70 туберкулезной микобактерий в профилактике туберкулеза. Москва: Московская Медицинская Академия им. И.М. Сеченова, 2007]. Изучение генома М. tuberculosis штамма H37Rv показало, что он содержит 3995 открытых рамок считывания, но лишь для 52% из них удалось предсказать функциональную активность. Анализ протеома позволил выявить не менее 1800 клеточных и 800 секретируемых белков [Sharma А.K., Khuller G.K. Recombinant mycobacterial proteins future directions to improve protective efficacy // Indian J. Exp. Biol. 2001. Vol. 39, №12. P. 1214-1219].

К началу 2000 г. было получено несколько вариантов субъединичных вакцин, однако их протективный эффект при испытаниях оказался в ряде случаев непредсказуемым и сильно варьировался по эффективности [Sharma А.К., Khuller G.K. Recombinant mycobacterial proteins future directions to improve protective efficacy // Indian J. Exp. Biol. 2001. Vol. 39, №12. P. 1214-1219].

Наиболее широко используемой и близкой по достигаемому эффекту к заявляемому изобретению является вакцина туберкулезная для щадящей первичной иммунизации (БЦЖ-М) (Vaccinum tuberculosis (BCG-M) cryode-siccatum), содержащая в 1 дозе 0,025 мг микробных клеток БЦЖ живые микобактерий вакцинного штамма БЦЖ-1 и вспомогательные вещества, в частности, стабилизатор-натрия глутамата моногидрат в дозе 0,15 мг [http://www.rlsnet.ru/tn_index_id_8621.htm]. Препарат выпускается в комплекте с растворителем - 0,9% раствором натрия хлорида для инъекций, которым 1 доза вакцины разводится до объема 0,1 мл.

Недостатком вакцины наличие негативных побочных эффектов (к числу осложнений относятся "холодные" абсцессы, лимфадениты, остеомиелиты, хориоретиниты, сахарный диабет, а также возможность возникновения генерализованной БЦЖ-инфекции, приводящей к смерти [http://homeoint.ru/glossary/b001.htm].

Целью, решаемой в результате использования настоящего изобретения, являлось создание расширение спектра противотуберкулезных вакцин с целью получения более безопасной вакцины с эффективностью, не уступающей эффективности БЦЖ.

Технический результат достигался за счет введения в противотуберкулезную вакцину, содержащую активное начало и вспомогательные вещества, в качестве активного начала белков Tb10.4 М. tuberculosis (далее белок Tb10.4) и Ag85B М. tuberculosis (далее белок Ag85B) в соотношении от 2:1 до 1:2. при следующем соотношении ингредиентов, % масс:

белок Tb10.4 M. tuberculosis - 0,001-0,003
белок Ag85B M. tuberculosis - 0,001-0,003
вспомогательные вещества 4,5-5,5
вода остальное

Оптимальные результаты достигаются в том случае, когда белок Tb10.4 М. Tuberculosis и белок Ag85B M. tuberculosis содержатся в соотношении 1:1. В качестве вспомогательных веществ вакцина содержит белок на основе FHC Salmonella typhimurium (ФСТ) в концентрации 0,001-0,003% масс. и стабилизаторы, такие как маннитол, сукцинат натрия и твин-20. Последние могут вводится в вакцину как индивидуально, так и в виде смеси.

Композиция вакцины достигается смешением порошков ингредиентов в выбранных пропорциях с последующим их растворением водой в заданных объемах.

Использования белка на основе FliC Salmonella typhimurium в качестве компонента вакцины, нивелирует негативные эффекты и риски от использования живой, либо инактивированной вакцины, обеспечивая расширение спектра противотуберкулезных вакцин, а стабилизатор обеспечивает хранение вакцины в течение по крайней мере 6 месяцев при температуре +4C.

Заявляемая вакцина обладает эффективностью, превышающей эффективность аналогов при минимизации негативных побочных эффектов. Особенно эффективно использование заявляемой вакцины при противопоказаниях к применению аналогов, либо нежелании использовать аналоги ввиду их вышеописанных недостатков.

Указанные свойства предложенной вакцины подтверждены примерами.

Пример 1. Смещением ингредиентов были получены композиции 5 вакцин состав которых приведен в таблице 1 (вода - остальное).

Иммунизация субстанцией рекомбинантных белков

Осуществляли двукратную иммунизацию субстанцией рекомбинантных белков ТВ10.4 и Ag85B (интраназально, для композиции 1 также внутримышечно, по 6 мышей) с интервалом в 2 недели. Использовали дозу 50 мкг суммарного белка на мышь, вводили в объеме 100 мкл внутримышечно или 10 мкл - интраназально, по 5 мкл в каждую ноздрю. Для доведения требуемого объема использовали физиологический раствор.

Заражение осуществляли через 10 дней после последней вакцинации. Для моделирования туберкулеза использован стандартный тест-штамм М. tuberculosis Erdman. Микобактериальная суспензия для заражения мышей приготовлена ex tempore из трехнедельного штамма, культивируемого на среде Левенштейна-Йенсена. Заражающая доза - 106 колониеобразующих единиц (КОЕ)/мышь в 0,2 мл физраствора, путь введения - в латеральную хвостовую вену.

Мыши выведены из опыта через шесть недель после заражения путем эвтаназии в CO2-камере с последующим гильотинированием в соответствии с Методическими рекомендациями (см. п. 3).

Коэффициенты массы легких (КМЛ) и селезенки (KMC) рассчитывали по формуле, в условных единицах:

Индекс поражения легких (ИПЛ) устанавливали по совокупности экссудативных и продуктивных изменений в условных единицах - баллах.

Экссудативные изменения:

- легкие воздушны - 0

- единичные безвоздушные очаги - 0,25

- легкие безвоздушны на 1/2 - 0,5

- легкие безвоздушны на 2/3 - 0,75

- легкие безвоздушны на всем протяжении - 1,0

Продуктивные очаги:

- единичные субмилиарные очаги - 0,5

- многочисленные (не более 20) - 1,0

- многочисленные субмилиарные (более 20) - 1,5

- единичные милиарные - 1,75

- многочисленные сливающиеся субмилиарные и единичные милиарные - 2,0

- многочисленные милиарные (не более 10) - 2,25

- многочисленные милиарные, сливающиеся - 2,75

- появление мелких казеозных некротических фокусов - 3,0

- обширный казеоз - 4,0

- сплошное поражение легких - 5,0

Определяли показатели тяжести течения туберкулезной инфекции:

Результаты, приведенные на диаграммах, показывают, что кандидатная вакцина против туберкулеза на основе рекомбинантных белков ТВ10.4 и Ag85B M. tuberculosis проявляет протективную активность, причем как при внутримышечном, так и при интраназальном введении. Различия между группами достоверные.

Таким образом, продемонстрирована высокая эффективность противотуберкулезных вакцин на основе белка Tb10.4 M. tuberculosis, которая оказалась больше, чем таковая БЦЖ, в профилактической модели на лабораторных животных, по всем изученным показателям.

Также продемонстрирована безопасность предлагаемой вакцины: животные соответствующих групп выжили и были выведены из эксперимента принудительно, в процессе испытаний побочные эффекты не наблюдали.

1. Вакцина против туберкулеза, содержащая активное начало на основе микобактерий туберкулеза и вспомогательных веществ, содержащих воду для инъекций, отличающаяся тем, что в качестве активного начала она содержит белок Tb10.4 M. tuberculosis и Ag85B M. tuberculosis в соотношении от 1:2 до 2:1 при следующем соотношении ингредиентов, мас.%: белок Tb10.4 M.tuberculosis 0,001-0,003; Ag85B M.tuberculosis 0,001-0,003; гибридный белок на основе FliC Salmonella typhimurium в концентрации 0,001-0,0030; вспомогательные вещества 4,5-5,5; вода - остальное.

2. Вакцина против туберкулеза по п. 1, отличающаяся тем, что белок Tb10.4 М. tuberculosis и белок Ag85B M. tuberculosis содержатся в соотношении 1:1.

3. Вакцина против туберкулеза по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве вспомогательного вещества она содержит стабилизаторы.

4. Вакцина против туберкулеза по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве стабилизатора она содержит по крайне мере одно вещество, выбранное из группы, в которую входит маннитол, сукцинат натрия и твин-20.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к производному фторхинолонкарбоновой кислоты, а именно 1-этил-6-фтор-4-оксо-7-(8-этокси-2-оксо-2Н-хромен-3-ил)-1,4-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоте формулы (4), обладающей высокой противотуберкулезной активностью, в том числе по отношению к штаммам микобактерий с множественной лекарственной устойчивостью.

Изобретение относится к соединениям общей формулы (I) или (II): n=0-2;A выбирается независимо и представляет собой 5-7-членный ароматический гетероцикл, содержащий 1-2 атома N и 0-1 атом S; А содержит 0-2 заместителя R; R выбирается независимо и представляет собой метил или этил; B выбирается независимо и представляет собой фенил, 5-6-членный гетероарильный цикл, содержащий 0-2 атома N и 0-1 атом S, или 5-6-членный циклоалкил, содержащий 0-2 атома N и 0-1 атом S; B содержит 0-3 заместителя R1; C выбирается независимо и представляет собой фенил, -NH2, -NH-C1-3-алкил, -NH(С1-3-алкил)С1-3-алкил, 5-6-членный гетероарильный цикл, содержащий 0-2 атома N и 0-1 атом S, или 5-6-членный циклоалкил, содержащий 0-2 атома N и 0-1 атом S; C содержит 0-3 заместителя R1; R1 выбирается независимо и представляет собой -C1-6-алкил, галоген, фенил, -C5-7-гетероарил, содержащий 1-2 атома N и 0-1 атом S, -COOH, -CONH2, -NH2 или -NHR2; R2 выбирается независимо и представляет собой -C1-6-алкил, -C(O)-C1-8-алкил; линкер X выбирается независимо и представляет собой -CH2-, -С(=O)-СН2- или -CH2-O-группу; линкер Q выбирается независимо и представляет собой -NH- или -NH-C(O)-группу; линкер Y выбирается независимо и представляет собой -O-(СН2)m или -С(O)-NH-(СН2)m, где m=1-3; Z выбирается независимо и представляет собой -СН2- группу или атом кислорода.

Изобретение относится к новым четвертичным аммонийным солям производных 2-аминотиофен-3-карбоновых кислот, обладающих противотуберкулезной активностью, общей формулы I и формулы II: где X отсутствует или представляет собой -СН2-, -(СН2)2-, СН3СН-, -N(R4)-; R1 представляет собой CN, C(O)OR5, C(O)NHR6; R4 представляет собой алифатические насыщенные, неразветвленные или разветвленные С1-С5 углеводороды, бензил; R5 представляет собой алифатические насыщенные, неразветвленные или разветвленные C1-С5 углеводороды; R6 представляет собой Н, алифатические насыщенные, неразветвленные или разветвленные C1-С5 углеводороды, циклические углеводороды С3-С7.

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано для подавления роста полирезистентных штаммов Mycobacterium tuberculosis в эксперименте. Для этого осуществляют фотодинамическое воздействие.

Изобретение относится к медицине, в частности к фармацевтической композиции для лечения туберкулеза, которая включает в качестве активного вещества тиоацетазон, а также лактозу, крахмал, тальк и стеариновую кислоту и/или ее соль, при определенном количественном соотношении.

Изобретение относится к медицине и заключается в способе получения полимерных комплексов рифампицина с пониженной токсичностью и высокой противотуберкулезной активностью путем комплексообразования рифампицина с анионным полиэлектролитом в его водном растворе.

Изобретение относится к области медицины, а именно к фармации, и касается разработки средства в форме медицинских капсул с липосомами, обладающего противотуберкулезной активностью.

Изобретение относится к области медицины, а именно к фармации. Предлагаемое драже в качестве действующих веществ содержит изониазид и офлоксацин, в качестве вспомогательных веществ для покрытия ядра содержит смесь молочного сахара, крахмала картофельного 1500 и кросповидона Polyplasdone в соотношении 2:1:1; 7% водный раствор картофельного крахмала в качестве увлажнителя 1; 3% водный раствор повидона (Plasdone С) в качестве увлажнителя 2; спиртовой раствор, содержащий 5 мас.

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии, и может быть использовано для лечения больных туберкулезом лёгких. Для этого проводят антибактериальную терапию согласно стандартным режимам.

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и касается синергической фармацевтической композиции, обладающей противотуберкулезной активностью, которая содержит в качестве активного начала циклосерин и цинкосодержащее соединение.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения туберкулеза мочеполовой системы. Для этого вводят противотуберкулезные препараты.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа детектирования рака, включающего измерение уровня экспрессии CAPRIN-1, экспрессированного на клеточной поверхности, в биологическом образце посредством реакции «антиген-антитело» с использованием антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, обладающего иммунологической реактивностью с полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 63.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа детектирования рака, включающего измерение уровня экспрессии CAPRIN-1, экспрессированного на клеточной поверхности, в биологическом образце посредством реакции «антиген-антитело» с использованием антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, обладающего иммунологической реактивностью с полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 66.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которые специфически связываются с белком GITR человека.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для лечения лучевых повреждений мочевого пузыря. Способ заключается в том, что во все вершины ромба Михаэлиса вводят по 0,3 мл аутологичной дендритно-клеточной вакцины, полученной с использованием антигенов культуры HeLa.

Изобретение относится к области биохимии, а именно к уникальным терапевтическим и диагностическим антителам, а также к их фрагментам, частям, производным и вариантам, которые связывают области белка тау, которые участвуют в инициации и развитии патологических взаимодействий тау-тау, а также к способам их получения.

Изобретение относится к области биохимии, а именно к уникальным терапевтическим и диагностическим антителам, а также к их фрагментам, частям, производным и вариантам, которые связывают области белка тау, которые участвуют в инициации и развитии патологических взаимодействий тау-тау, а также к способам их получения.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для регенерации поврежденной ткани или органа у пациента. Способ включает введение указанному пациенту, имеющему активные зародышевые центры в лимфоидной ткани, стволовых клеток для доставки или хоуминга в поврежденную ткань или орган, нуждающиеся в регенерации; и иммунодепрессанта, ингибирующего связывание стволовых клеток с указанными активными зародышевыми центрами, до или в сочетании с введением стволовых клеток.

Настоящее изобретение относится к биохимии, в частности к фармацевтической композиции, способу лечения или профилактики, а также способу торможения развития опухоли или ракового заболевания, характеризующихся экспрессией опухолеассоциированного антигена, с использованием такой композиции.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммуноцитокинам, и может быть использовано в медицине для лечения рака. Получают иммуноцитокин, содержащий: конъюгат интерлейкина 15 и домена sushi IL-15Rα, ковалентно связанный с антителом или его фрагмент, направленным против антигена, имеющего отношение к неоваскуляризации опухоли или к внеклеточному матриксу опухоли, или опухолевого антигена.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к средству для профилактики лейкоза крупного рогатого скота. Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота, которое содержит водорастворимую белковую фракцию с молекулярной массой 18-20 кДа, выделенную из продуктов разрушения микобактерий туберкулеза, и характеризующуюся наличием пиков при длине волны 214 нм в ультрафиолетовой области спектра, фосфатно-солевой буферный раствор, водный раствор муравьиного альдегида и изотонический раствор натрия хлорида, взятые в определенном соотношении компонентов.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения вакцины против туберкулеза. Вакцина содержит активное начало на основе микобактерий туберкулеза и вспомогательных веществ, при этом в качестве активного начала она содержит белок Tb10.4 M. tuberculosis и Ag85B M. tuberculosis в соотношении от 1:2 до 2:1 при следующем соотношении ингредиентов, мас.: белок Tb10.4 M. tuberculosis 0,001-0,003; Ag85B M. tuberculosis 0,001-0,003; гибридный белок на основе FliC Salmonella typhimurium в концентрации 0,001-0,0030; вспомогательные вещества 4,5-5,5; вода - остальное. Использование в составе вакцины гибридного белка на основе FliC Salmonella typhimurium позволяет нивелировать побочные эффекты от использования живой вакцины, при этом полученная вакцина проявляет протективную активность как при внутримышечном, так и при интраназальном введении. 3 з.п. ф-лы, 1 пр., 1 табл.

Наверх