Ингибитор ret

Авторы патента:

САКАМОТО Хироси (JP)

ЦУКАГУТИ Тосиюки (JP)

КОДАМА Тацуси (JP)

G01N2500/10 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

C12Q1/68 - использующие нуклеиновые кислоты

C12N15/09 - метод рекомбинантных ДНК

A61P43/00 - Лекарственные средства для специфических целей, не указанные в группах A61P 1/00-A61P 41/00

A61P35/04 - специально против метастаза

A61P35/02 - специально против лейкоза

A61P35/00 - Противоопухолевые средства

A61K31/5377 - не конденсированные и содержащие дополнительно гетероциклические кольца, например тимолол

A61K2121/00 - Лекарства и медикаменты для терапевтических, стоматологических или гигиенических целей (изготовление специальных лекарственных форм A61J; химические аспекты или использование материалов для дезодорации воздуха, для дезинфекции или стерилизации или для бандажей, перевязочных средств, впитывающих прокладок или хирургических приспособлений A61L; соединения как таковые C01, C07,C08,C12N; мыла C11D; микроорганизмы как таковые C12N)

Владельцы патента RU 2648818:

ЧУГАИ СЕЙЯКУ КАБУСИКИ КАЙСЯ (JP)

Группа изобретений касается онкологии и фармакологии. Предложено терапевтическое и/или профилактическое средство против опухоли с мутацией в RET и против метастазов опухоли, которое содержат соединение формулы (I), где R - C₁-₆-алкил, его соль или его сольват в качестве активного ингредиента; терапевтическое и/или профилактическое средство того же состава, используемое для пациента с мутацией в RET и против метастазов опухоли; способ идентификации рака или пациента, реагирующего на лечение соединением формулы (I). Технический результат: соединение формулы (I) продемонстрировало ингибирование каждого мутанта RET тирозиновой киназы, ингибирование клеточного роста линии немелкоклеточного рака лёгкого, содержащего ССDС6-RET-гибридный ген, и противоопухолевую активность в отношении тех же клеток рака у мышей без потери массы тела мыши. 3 н. и 23 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл., 6 пр.

Область изобретения

[0001]

Настоящее изобретение относится к ингибитору RET, ингибитору RET тирозиновой киназы, профилактическому или терапевтическому средству от заболеваний, включающих раковые заболевания с мутацией в RET и их метастазы, способу идентификации целевого пациента и т.п., каждый из этих объектов включает тетрациклическое соединение или его соль или его сольват.

Предпосылки изобретения

[0002]

Реаранжированный в процессе трансфекции (RET) является членом рецепторных тирозиновых киназ, относящихся к кадгериновому суперсемейству (Surgery, 2007, vol. 141, p. 96-99). RET тирозиновая киназа содержит трансмембранную область в середине и содержит тирозинкиназную область на карбоксил-концевой стороне и внеклеточную область на амино-концевой стороне. Известно, что существует три типа белков как результат различий в карбоксил-концевом сплайсинге (TRENDS in Genetics, 2006, vol. 22, p. 627-636: Reference a). RET образует димер через лиганд/GFR комплекс для фосфорилирования и активирования таким образом своего собственного тирозина (Ссылочный документ a).

Существуют сообщения, показывающие, что RET будет вовлечен в онкогенез при изменениях (точечная мутация, хромосомная транслокация, хромосомная инверсия, генная амплификация) в RET гене. Например, сообщалось о том, что в медуллярном раке щитовидной железы точечная мутация в RET гене приводит к экспрессии RET тирозиновой киназы с онкогенной способностью (Ссылочный документ a). Кроме того, сообщалось о том, что в папиллярном раке щитовидной железы RET ген слит с другим геном (например, содержащий биспиральный домен 6 (CCDC6) ген или ген коактиватора 4 ядерного рецептора (NCOA4)) путем хромосомной инверсии или хромосомной транслокации, вызывая экспрессию гибридной тирозиновой киназы RET/PTC с онкогенной способностью (European Journal of Endocrinology, 2006, vol. 155, p. 645-653). Кроме того, сообщалось о том, что в немелкоклеточном раке легкого RET слит с геном белка 5B кинезинового семейства (KIF5B), который представляет собой одну из молекул, образующих моторные белковые комплексы, вовлеченные во внутриклеточный транспорт микротрубочек, или с CCDC6 геном, вызывая немелкоклеточный рак легкого путем конститутивной тирозинокиназной активности гибридной тирозиновой киназы KIF5B-RET или CCDC6-RET с онкогенной способностью (Nature Medicine. 2012, 18, p. 378-381, WO 2012/014795). Кроме того, сообщалось о том, что гибридная тирозиновая киназа NCOA4-RET или TRIM33-RET, где RET ген слит с NCOA4 геном или TRIM33 (трехкомпонентный мотив-содержащим 33) геном, присутствует у пациентов с немелкоклеточным раком легкого (J Clin Oncol, 30 (35), Dec 10, 2012, p. 4352-9; и Cancer Discov 2013 Jun, 3 (6), Jun 2013, p. 630-5).

В свете указанного выше, соединения, обладающие ингибиторным эффектом против RET тирозиновой киназы, являются чрезвычайно полезными для профилактики и лечения рака.

Сообщалось о том, что, в качестве веществ-ингибиторов RET тирозиновой киназы, ингибиторы, действующие против многих киназ, такие как сорафениб, сунитиниб, XL184, вандетаниб и понатиниб, обладают эффектом ингибирования клеточного роста против клеточных линий, экспрессирующих KIF5B-RET (Не-патентный документ 1: J Clin Oncol 30, 2012, suppl; Abstract no: 7510). Кроме того, сообщалось о том, что два пациента с RET гибридным ген-положительным немелкоклеточным раком легкого показали частичный ответ на ингибитор, действующий против многих киназ, кабозантиниб (Не-патентный документ 2: Cancer Discov, 3 (6), Jun 2013, p. 630-5).

С другой стороны, тетрациклическое соединение, имеющее следующую общую формулу, описано в качестве ингибитора киназы анапластической лимфомы (ALK), рецепторной тирозиновой киназы, относящейся к семейству инсулиновых рецепторов (Патентный документ 1: WO 2010/143664, Патентный документ 2: WO 2012/023597, Патентный документ 3: Японская выложенная патентная заявка № 2012-126711). Это соединение является полезным в качестве терапевтического и/или профилактического средства против опухолей с мутацией в ALK гене.

(см. указанную выше патентную публикацию, содержащую подробную информацию, касающуюся заместителей и т.п.).

Кроме того, сообщалось о том, что следующее соединение при высокой концентрации (1000 нМ) ингибирует многие киназы, включая RET, в скрининговом испытании, охватывающем большой диапазон киназ (Не-патентный документ 3: Cancer Cell, 19 (5), p. 679-690, 2011, Дополнительная информация):

Однако, нет никаких сообщений, показывающих, что тетрациклическое соединение, описанное в Патентном документе 1 и Не-патентном документе 3, является полезным в качестве терапевтического или профилактического средства против раковых заболеваний с мутацией в RET.

Кроме того, сообщалось о том, что ингибитор ALK кризотиниб не обладает никакой активностью ингибирования клеточного роста против KIF5B-RET-экспрессирующих клеток (Не-патентный документ 4: Nature Medicine. 2012, 18, p. 378-381).

[Перечень документов]

[Патентные документы]

[0003]

[Патентный документ 1] WO 2010/143664

[Патентный документ 2] WO 2012/023597

[Патентный документ 3] JP 2012-126711 A

[Не-патентные документы]

[0004]

[Не-патентный документ 1] J Clin Oncol 30, 2012, suppl; Abstract no: 7510

[Не-патентный документ 2] Cancer Discov, 3 (6), Jun 2013, p. 630-5

[Не-патентный документ 3] Cancer Cell, 19 (5), p. 679-690, 2011, Дополнительная информация

[Не-патентный документ 4] Nature Medicine. 2012, 18, p. 378-381

Краткое описание изобретения

Задача, решаемая настоящим изобретением

[0005]

Раковые заболевания, вызываемые мутацией в ALK гене, и раковые заболевания, вызываемые мутацией в RET гене, отличаются по их механизму развития рака, трехмерной белковой структуре их соответствующих киназ и т.п., и, следовательно, необходим специфический способ лечения и/или профилактики для каждого типа рака. Что касается рака легкого, сообщалось о том, что группа пациентов с мутацией в ALK гене не перекрывалась с группой пациентов с мутацией в RET (Nat Med, 2012 Feb 12, 18 (3), 375-7). Эти группы пациентов четко отличались друг от друга, что касается лечения, и пациенты в каждой группе нуждались в специфическом способе лечения и/или профилактики.

С другой стороны, в то же время известно, что соединение, которое ингибирует множество киназ, в некоторых случаях показывает низкий терапевтический эффект, поскольку его эффективный терапевтический диапазон является узким. Таким образом, лекарственное средство, которое селективно ингибирует небольшое количество киназ, можно рассматривать как обладающее желаемыми свойствами, что касается его терапевтического эффекта, и, следовательно, существует потребность в таком лекарственном средстве.

Средства решения задачи

[0006]

В результате экстенсивных и интенсивных усилий, предпринятых для решения указанной выше задачи, авторы настоящего изобретения обнаружили, раньше других, что тетрациклическое соединение, представленное следующей формулой (I), или его соль или его сольват обладает не только ингибиторной активностью против ALK, но также сильной ингибиторной активностью против RET, селективно ингибирует RET, является полезным для лечения и профилактики заболеваний, включая раковые заболевания с мутацией в RET и их метастазы, и также обладает высокой терапевтической эффективностью в отношении этих заболеваний. Это открытие привело к созданию настоящего изобретения.

где R₁ представляет собой C_1-6 алкильную группу.

А именно, в соответствии с одним аспектом настоящего изобретения, настоящее изобретение направлено на терапевтическое или профилактическое средство против раковых заболеваний с мутацией в RET и их метастазов, которое включает тетрациклическое соединение, представленное ниже, или его соль и т.п. В соответствии с другим аспектом, настоящее изобретение обеспечивает способ идентификации рака или целевого пациента, реагирующего на лечение указанным выше соединением или т.п.

[0007]

Более конкретно, настоящее изобретение представляет собой следующее.

[1] Терапевтическое и/или профилактическое средство против опухоли с мутацией в RET или против метастазов опухоли, которое содержит соединение, представленное формулой (I), его соль или его сольват в качестве активного ингредиента:

где R₁ представляет собой C_1-6 алкильную группу.

[2] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [1], представленным выше, где опухоль выбрана из группы, состоящей из острого миелогенного лейкоза, хронического миелогенного лейкоза, острого лимфоцитарного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза, лимфомы Ходжкина, не-ходжкинской лимфомы, опухоли головного мозга, нейробластомы, глиомы, рака щитовидной железы, миелодиспластического синдрома, рака головы и шеи, эзофагеального рака, рака желудка, колоректального рака, рака молочной железы, рака яичника, рака легкого, рак поджелудочной железы, рака печени, рака желчного пузыря, рака кожи, злокачественной меланомы, рака почки, рака почечных лоханок и уретры, рака мочевого пузыря, рака матки, рака яичка, рака предстательной железы и опухолей, метастазирующих из этих опухолей.

[3] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [1] или [2], представленным выше, где опухоль представляет собой рак щитовидной железы или рак легкого.

[4] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[3], представленным выше, где опухоль представляет собой медуллярный рак щитовидной железы или немелкоклеточный рак легкого.

[4-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [1]-[4], представленным выше, где опухоль представляет собой опухоль, показывающую, как было подтверждено, активированную RET тирозиновую киназу в опухолевой ткани.

[4-2] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [1]-[4], представленным выше, где опухоль представляет собой опухоль с мутацией, которая индуцирует активацию RET тирозиновой киназы.

[4-2-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[4-2], представленным выше, где опухоль представляет собой опухоль с (a) мутацией в цистеин-обогащенном домене RET тирозиновой киназы, (b) мутацией в тирозинкиназном домене RET тирозиновой киназы, или (c) гибридным геном RET и/или гибридным белком RET.

[4-2-2] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[4-2], представленным выше, где опухоль представляет собой опухоль с гибридным геном RET и/или гибридным белком RET.

[4-2-3] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[4-2] и [4-2-2], представленным выше, где опухоль представляет собой опухоль с KIF5B-RET, CCDC6-RET, NCOA4-RET или TRIM33-RET.

[4-3] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [1]-[4-2], представленным выше, где опухоль представляет собой опухоль с (a) мутацией в цистеин-обогащенном домене RET тирозиновой киназы, (b) мутацией в тирозинкиназном домене RET тирозиновой киназы или (c) гибридным геном, образованным между RET геном и другим геном, и/или гибридным белком, образованным между RET белком и другим белком.

[0008]

[5] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[4-2], представленным выше, где опухоль представляет собой опухоль с гибридным геном, образованным между RET геном и другим геном, и/или гибридным белком, образованным между RET белком и другим белком.

[5-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [5], представленным выше, где другой ген и белок представляют собой ген и белок KIF5B, CCDC6 или NCOA4 или TRIM33.

[5-2] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [5] или [5-1], представленным выше, где гибридный ген и белок включает тирозинкиназный домен RET гена или белка и биспиральный домен другого гена или белка.

[5-2-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [5]-[5-2], представленным выше, где полипептид, образующий RET белок, и полинуклеотид, образующий RET ген, представляют собой любой из следующих полипептидов и любой из полинуклеотидов, кодирующих полипептиды:

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3 или 4;

(b) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности с заменой, делецией или вставкой одной или нескольких аминокислот в полипептиде, представленном в SEQ ID NO: 3 или 4; и

(c) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности с идентичностью 80% или больше с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 3 или 4.

[5-2-2] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [5-1] или [5-2-1], представленным выше, где полипептид, образующий каждый из KIF5B, CCDC6, NCOA4 и TRIM33 белков, и полинуклеотид, образующий каждый из KIF5B, CCDC6, NCOA4 и TRIM33 генов, представляют собой любой из следующих полипептидов и любой из полинуклеотидов, кодирующих полипептиды:

(1) полипептид, образующий KIF5B белок, представляет собой

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 30,

(b) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности с заменой, делецией или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 30, или

(c) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности с идентичностью 80% или больше с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 30;

(2) полипептид, образующий CCDC6 белок, представляет собой

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 31,

(c) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности с идентичностью 80% или больше с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 31;

(3) полипептид, образующий NCOA4 белок, представляет собой

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 38-42,

(b) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности с заменой, делецией или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 38-42, или

(c) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности с идентичностью 80% или больше с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 38-42; и

(4) полипептид, образующий TRIM33 белок, представляет собой

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 45 или 46,

(c) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности с идентичностью 80% или больше с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 45 или 46.

[5-2-3] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [4-2-2], [5] или [5-2], представленным выше, где полипептид, образующий гибридный белок, и полинуклеотид, образующий гибридный ген, представляют собой любой из следующих полипептидов (a)-(f) и любой из полинуклеотидов, кодирующих полипептиды:

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24;

(b) полипептид, включающий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24, или полипептид, включающий аминокислотную последовательность с заменой, делецией или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24;

(c) полипептид, включающий аминокислотную последовательность с идентичностью 80% или больше с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24;

(d) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 27 или 28;

(e) полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 27 или 28, или полипептид, включающий аминокислотную последовательность с заменой, делецией или вставкой одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 27 или 28; и

(f) полипептид, включающий аминокислотную последовательность с идентичностью 80% или больше с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 27 или 28.

[5-2-4] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [4-2-2], [5] или [5-2], представленным выше, где полипептид, образующий гибридный белок, и полинуклеотид, образующий гибридный ген, представляют собой любой из следующих полипептидов (a)-(f) и любой из полинуклеотидов, кодирующих полипептиды:

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24;

(b) полипептид, который включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24, и который содержит активированную тирозиновую киназу, или полипептид, который включает аминокислотную последовательность с заменой, делецией или вставкой от 1 до 10 аминокислот в аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24, и который обладает тирозинкиназной активностью;

(c) полипептид, который включает аминокислотную последовательность с идентичностью 90% или больше с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24 и который обладает тирозинкиназной активностью;

(d) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 27 или 28;

(e) полипептид, который включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 27 или 28 и который содержит активированную RET тирозиновую киназу, или полипептид, который включает аминокислотную последовательность с заменой, делецией или вставкой от 1 до 10 аминокислот в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 27 или 28, и который обладает тирозинкиназной активностью; и

(f) полипептид, который включает аминокислотную последовательность с идентичностью 90% или больше с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 27 или 28, и который обладает тирозинкиназной активностью.

[5-3] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [5-2], представленным выше, где гибридный ген представляет собой любой из (a)-(d), описанных ниже:

(a) гибридный ген, который включает полинуклеотид, имеющий нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 5-14;

(b) гибридный ген, состоящий из полинуклеотида, который гибридизуется в жестких условиях с ДНК, состоящей из нуклеотидной последовательности, комплементарной нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 5-14, и который кодирует полипептид, обладающий тирозинкиназной активностью;

(c) гибридный ген, который включает полинуклеотид, кодирующий полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24; или

(d) гибридный ген, включающий полинуклеотид, кодирующий полипептид, который включает замену, делецию или вставку одной или нескольких (например, несколько десятков, от 1 до 10, от 1 до 5, от 1 до 3) аминокислот в полипептиде, имеющем аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24, и который обладает тирозинкиназной активностью.

[0009]

[6] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[4-2], представленным выше, где опухоль представляет собой опухоль с точечной мутацией в RET гене и/или белке.

[6-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [6], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в нуклеотиде 2091G, 2261G, 2494G, 2562A, 2600G, 2861T или 2943T полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[6-1-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [6] или [6-1], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в нуклеотиде 2091G, 2261G, 2494G, 2562A или 2861T полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[6-2] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [6] или [6-1], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в нуклеотиде 2091G, 2494G, 2600G или 2943T полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[6-3] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [6] или [6-1], представленным выше, где точечная мутация представляет собой 2091G>T, 2261G>A, 2494G>C, 2562A>T, 2600G>A, 2600G>C, 2861T>G или 2943T>C в полинуклеотиде, имеющем нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[6-3-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [6], [6-1] или [6-3], представленным выше, где точечная мутация представляет собой 2091G>T, 2261G>A, 2494G>C, 2562A>T или 2861T>G в полинуклеотиде, имеющем нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[6-4] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [6], [6-1], [6-2] или [6-3], представленным выше, где точечная мутация представляет собой 2091G>T, 2494G>C, 2600G>A или 2943T>C в полинуклеотиде, имеющем нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[6-5] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [6], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в аминокислоте C609, C611, C618, C620, C630, C634, G691, E768, Y791, V804, S891, A883 или M918 полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[6-5-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [6] или [6-5], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в аминокислоте C609, C611, C618, C620, C630, C634, G691, E768, Y791, S891 или A883 полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[6-6] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [6] или [6-5], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в аминокислоте C609, C611, C618, C620, C630, C634, E768, V804, S891, A883 или M918 полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[6-7] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [6] или [6-5], представленным выше, где точечная мутация представляет собой C634W, C634Y, G691S, E768D, Y791F, V804M, V804L, S891A или M918T в полипептиде, имеющем аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[6-7-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [6], [6-5] или [6-7], представленным выше, где точечная мутация представляет собой C634W, C634Y, G691S, E768D, Y791F или S891A в полипептиде, имеющем аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[6-8] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [6] или [6-6], представленным выше, где точечная мутация представляет собой C634W, C634Y, E768D, V804M или M918T в полипептиде, имеющем аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[0010]

[7] Терапевтическое и/или профилактическое средство против опухоли, используемое для пациента с мутацией в RET или против метастазов опухоли, которое содержит соединение, представленное формулой (I), его соль или его сольват в качестве активного ингредиента.

[8] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [7], представленным выше, где опухоль представляет собой рак щитовидной железы или рак легкого.

[8-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [7] или [8], представленным выше, где пациент представляет собой пациента, у которого подтверждена активированная RET тирозиновая киназа в опухолевой ткани.

[8-2] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [7] или [8], представленным выше, где пациент представляет собой пациента с мутацией, которая индуцирует активацию RET тирозиновой киназы.

[8-2-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [7]-[8-2], представленным выше, где пациент представляет собой пациента с (a) мутацией в цистеин-обогащенном домене RET тирозиновой киназы, (b) мутацией в тирозинкиназном домене RET тирозиновой киназы, или (c) гибридным геном RET и/или гибридным белком RET.

[8-2-2] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [7]-[8-2-1], представленным выше, где пациент представляет собой пациента с гибридным геном RET и/или гибридным белком RET.

[8-2-3] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [7]-[8-2] и [8-2-2], представленным выше, где пациент представляет собой пациента с KIF5B-RET, CCDC6-RET, NCOA4-RET или TRIM33-RET.

[8-3] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [7]-[8-2], представленным выше, где пациент представляет собой пациента с (a) мутацией в цистеин-обогащенном домене RET тирозиновой киназы, (b) мутацией в тирозинкиназном домене RET тирозиновой киназы, или (c) гибридным геном, образованным между RET геном и другим геном, и/или гибридным белком, образованным между RET белком и другим белком.

[9] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [7] или [8], представленным выше, где пациент представляет собой пациента с гибридным геном, образованным между RET геном и другим геном, и/или гибридным белком, образованным между RET белком и другим белком.

[9-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [8-3] или [9], представленным выше, где другой ген и белок представляют собой KIF5B, CCDC6, NCOA4 или TRIM33.

[9-2] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [9] или [9-1], представленным выше, где гибридный ген и гибридный белок включает тирозинкиназный домен RET гена или белка и биспиральный домен другого гена или белка.

[9-2-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [9]-[9-2], представленным выше, где полипептид, образующий RET белок, и полинуклеотид, образующий RET ген, представляют собой любой из следующих полипептидов и любой из полинуклеотидов, кодирующих полипептиды:

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3 или 4;

[9-2-2] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [9-1], представленным выше, где полипептид, образующий каждый из KIF5B, CCDC6, NCOA4 и TRIM33 белков, и полинуклеотид, образующий каждый из KIF5B, CCDC6, NCOA4 и TRIM33 генов, представляют собой любой из следующих полипептидов и любой из полинуклеотидов, кодирующих полипептиды:

(1) полипептид, образующий KIF5B белок, представляет собой

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 30,

(2) полипептид, образующий CCDC6 белок, представляет собой

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 31,

(3) полипептид, образующий NCOA4 белок, представляет собой

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 38-42,

(4) полипептид, образующий TRIM33 белок, представляет собой

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 45 или 46,

[9-2-3] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [8-2-2] или [9], представленным выше, где полипептид, образующий гибридный белок, и полинуклеотид, образующий гибридный ген, представляют собой любой из следующих полипептидов (a)-(f) и любой из полинуклеотидов, кодирующих полипептиды:

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24;

(d) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 27 или 28;

[9-2-4] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [8-2-2] или [9], представленным выше, где полипептид, образующий гибридный белок, и полинуклеотид, образующий гибридный ген, представляют собой любой из следующих полипептидов (a)-(f) и любой из полинуклеотидов, кодирующих полипептиды:

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24;

(c) полипептид, который включает аминокислотную последовательность с идентичностью 90% или больше с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24, и который обладает тирозинкиназной активностью;

(d) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 27 или 28;

(e) полипептид, который включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 27 или 28, и который содержит активированную RET тирозиновую киназу, или полипептид, который включает аминокислотную последовательность с заменой, делецией или вставкой от 1 до 10 аминокислот в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 27 или 28, и который обладает тирозинкиназной активностью; и

[9-3] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [9] или [9-2], представленным выше, где гибридный ген представляет собой любой из (a)-(d), описанных ниже:

(b) гибридный ген, состоящий из полинуклеотида, который гибридизуется в жестких условиях с ДНК, состоящей из нуклеотидной последовательности, комплементарной нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 5-14 и который кодирует полипептид, обладающий тирозинкиназной активностью;

[0011]

[10] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [7] или [8], представленным выше, где пациент представляет собой пациента с точечной мутацией в RET гене и/или белке.

[10-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [10], представленным выше, где точечная мутация в RET представляет собой точечную мутацию в цистеин-обогащенном домене или в тирозинкиназном домене RET тирозиновой киназы.

[10-2] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [10] или [10-1], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в нуклеотиде 2091G, 2261G, 2494G, 2562A, 2600G, 2861T или 2943T полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[10-2-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [10]-[10-2], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в нуклеотиде 2091G, 2261G, 2494G, 2562A или 2861T полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[10-3] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [10]-[10-2], где точечная мутация в RET представляет собой мутацию в нуклеотиде 2091G, 2494G, 2600G или 2943T полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[10-4] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [10]-[10-2], представленным выше, где точечная мутация представляет собой 2091G>T, 2261G>A, 2494G>C, 2562A>T, 2600G>A, 2600G>C, 2861T>G или 2943T>C в полинуклеотиде, имеющем нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[10-4-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [10]-[10-2] и [10-4], представленным выше, где точечная мутация представляет собой 2091G>T, 2261G>A, 2494G>C, 2562A>T или 2861T>G в полинуклеотиде, имеющем нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[10-5] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [10]-[10-2], [10-4], представленным выше, где точечная мутация в RET представляет собой 2091G>T, 2494G>C, 2600G>A или 2943T>C в полинуклеотиде, имеющем нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[10-6] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [10] или [10-1], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в аминокислоте C609, C611, C618, C620, C630, C634, G691, E768, Y791, V804, S891, A883 или M918 полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[10-6-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [10], [10-1] или [10-6], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в аминокислоте C609, C611, C618, C620, C630, C634, G691, E768, Y791, S891 или A883 полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[10-7] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [10], [10-1] или [10-6], представленным выше, где точечная мутация в RET представляет собой мутацию в аминокислоте C609, C611, C618, C620, C630, C634, E768, V804, S891, A883 или M918 полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[10-8] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [10], [10-1] или [10-6], представленным выше, где точечная мутация представляет собой C634W, C634Y, G691S, E768D, Y791F, V804M, V804L, S891A или M918T в полипептиде, имеющем аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[10-8-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с пунктом [10], [10-1], [10-6] или [10-8], представленным выше, где точечная мутация представляет собой C634W, C634Y, G691S, E768D, Y791F или S891A в полипептиде, имеющем аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[10-9] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [10], [10-1] или [10-6]-[10-8], представленным выше, где точечная мутация в RET представляет собой C634Y, E768D, V804M или M918T в полипептиде, имеющем аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[10-10] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [10]-[10-9], представленным выше, где пациент представляет собой пациента, у которого определено присутствие мутации в RET путем секвенирования методом Sanger или FISH методом.

[0012]

[11] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[10-10], представленным выше, где R¹ представляет собой этил.

[11-1] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[11], представленным выше, где соединение представляет собой гидрохлорид.

[11-2] Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[11-1], представленным выше, где терапевтическое и/или профилактическое средство селективно ингибирует RET.

[12] Ингибитор RET, который включает соединение формулы (I), его соль или его сольват в качестве активного ингредиента.

[12-1] Применение соединения формулы (I), его соли или его сольвата для ингибирования RET.

[12-2] Способ профилактики и/или лечения опухоли с мутацией в RET и метастазов опухоли, который включает введение пациенту эффективного терапевтического количества соединения, представленного формулой (I), его соли или его сольвата.

[12-3] Применение соединения, представленного формулой (I), его соли или его сольвата для профилактики и/или лечения опухоли с мутацией в RET и метастазов опухоли.

[12-3-1] Применение в соответствии с пунктом [12-3], представленным выше, где мутация в RET представляет собой (a) мутацию в цистеин-обогащенном домене RET тирозиновой киназы, (b) мутацию в тирозинкиназном домене RET тирозиновой киназы, или (c) образование гибридного гена RET и/или гибридного белка RET.

[12-3-2] Применение в соответствии с пунктом [12-3] или [12-3-1], представленным выше, где мутация в RET приводит к образованию гибридного гена RET и/или гибридного белка RET.

[12-3-3] Применение в соответствии с любым из пунктов [12]-[12-2-2], представленным выше, где мутация в RET приводит к образованию KIF5B-RET, CCDC6-RET, NCOA4-RET или TRIM33-RET.

[12-3-4] Применение в соответствии с любым из пунктов [12-3]-[12-3-3], представленным выше, где соединение формулы (I), его соль или его сольват селективно ингибирует RET.

[12-3-5] Применение в соответствии с любым из пунктов [12-3]-[12-3-4], представленным выше, где R¹ представляет собой этил.

[12-3-6] Применение в соответствии с любым из пунктов [12-3]-[12-3-5], представленным выше, где соединение представляет собой гидрохлорид.

[12-3-7] Применение в соответствии с любым из пунктов [12-3]-[12-3-6], представленным выше, где опухоль представляет собой рак щитовидной железы или рак легкого.

[0013]

[13] Способ идентификации субъекта, которому требуется введение соединения, представленного формулой (I), его соли или его сольвата, который включает стадию определения мутации в RET в ткани субъекта.

[13-1] Способ в соответствии с пунктом [13], представленным выше, где ткань представляет собой ткань, в которой было подтверждено присутствие активированной RET тирозиновой киназы.

[13-2] Способ в соответствии с пунктом [13], представленным выше, где ткань содержит мутацию, которая индуцирует активацию RET тирозиновой киназы.

[13-2-1] Способ в соответствии с любым из пунктов [13]-[13-2], представленным выше, где мутация в RET представляет собой (a) мутацию в цистеин-обогащенном домене RET тирозиновой киназы, (b) мутацию в тирозинкиназном домене RET тирозиновой киназы, или (c) образование гибридного гена RET и/или гибридного белка RET.

[13-2-2] Способ в соответствии с любым из пунктов [13]-[13-2-1], представленным выше, где мутация в RET приводит к образованию гибридного гена RET и/или гибридного белка RET.

[13-2-3] Способ в соответствии с любым из пунктов [13]-[13-2-2], представленным выше, где мутация в RET приводит к образованию KIF5B-RET, CCDC6-RET, NCOA4-RET или TRIM33-RET.

[13-3] Способ в соответствии с любым из пунктов [13]-[13-2], представленным выше, где ткань содержит (a) мутацию в цистеин-обогащенном домене RET тирозиновой киназы, (b) мутацию в тирозинкиназном домене RET тирозиновой киназы или (c) гибридный ген между RET геном и другим геном и/или гибридный белок между RET белком и другим белком.

[13-4] Способ в соответствии с любым из пунктов [13]-[13-3], представленным выше, где мутация в RET приводит к образованию гибридного гена между RET геном и другим геном и/или гибридного белка между RET белком и другим белком.

[13-5] Способ в соответствии с пунктом [13-4], представленным выше, где другой ген и белок представляют собой KIF5B, CCDC6, NCOA4 или TRIM33.

[13-6] Способ в соответствии с пунктом [13-5], представленным выше, где гибридный ген и гибридный белок включают тирозинкиназный домен RET гена или белка и биспиральный домен другого гена или белка.

[13-6-1] Способ в соответствии с любым из пунктов [13-4]-[13-6], представленным выше, где полипептид, образующий RET белок, и полинуклеотид, образующий RET ген, представляют собой любой из следующих полипептидов и любой из полинуклеотидов, кодирующих полипептиды:

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3 или 4;

[13-6-2] Способ в соответствии с пунктом [13-5], представленным выше, где полипептид, образующий каждый из KIF5B, CCDC6, NCOA4 и TRIM33 белков, и полинуклеотид, образующий каждый из KIF5B, CCDC6, NCOA4 и TRIM33 генов, представляют собой любой из следующих полипептидов и любой из полинуклеотидов, кодирующих полипептиды:

(1) полипептид, образующий KIF5B белок, представляет собой

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 30,

(2) полипептид, образующий CCDC6 белок, представляет собой

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 31,

(3) полипептид, образующий NCOA4 белок, представляет собой

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 38-42,

(4) полипептид, образующий TRIM33 белок, представляет собой

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 45 или 46,

[13-6-3] Способ в соответствии с пунктом [13-2-1], [13-2-2], [13-3] или [13-4], представленным выше, где полипептид, образующий гибридный белок, и полинуклеотид, образующий гибридный ген, представляют собой любой из следующих полипептидов (a)-(f) и любой из полинуклеотидов, кодирующих полипептиды:

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24;

(d) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 27 или 28;

[13-6-4] Способ в соответствии с пунктом [13-2-1], [13-2-2], [13-3], [13-4] или [13-6-3], представленным выше, где полипептид, образующий гибридный белок, и полинуклеотид, образующий гибридный ген, представляют собой любой из следующих полипептидов (a)-(f) и любой из полинуклеотидов, кодирующих полипептиды:

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24;

(c) полипептид, который включает аминокислотную последовательность с идентичностью 90% или больше с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24, и который обладает тирозинкиназной активностью;

(d) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 27 или 28;

[13-7] Способ в соответствии с пунктом [13-6], представленным выше, где гибридный ген представляет собой любой из (a)-(d), описанных ниже:

[13-8] Способ в соответствии с пунктом [13]-[13-2], представленным выше, где ткань содержит точечную мутацию в RET.

[13-9] Способ в соответствии с пунктом [13-8], представленным выше, где ткань содержит точечную мутацию в цистеин-обогащенном домене или в тирозинкиназном домене RET тирозиновой киназы.

[0014]

[13-10] Способ в соответствии с пунктом [13-8] или [13-9], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в нуклеотиде 2091G, 2261G, 2494G, 2562A, 2600G, 2861T или 2943T полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[13-10-1] Способ в соответствии с любым из пунктов [13-8]-[13-10], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в нуклеотиде 2091G, 2261G, 2494G, 2562A или 2861T полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[13-11] Способ в соответствии с любым из пунктов [13-8]-[13-10], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в нуклеотиде 2091G, 2494G, 2600G или 2943T полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[13-12] Способ в соответствии с любым из пунктов [13-8]-[13-10], представленным выше, где точечная мутация представляет собой 2091G>T, 2261G>A, 2494G>C, 2562A>T, 2600G>A, 2600G>C, 2861T>G или 2943T>C в полинуклеотиде, имеющем нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[13-12-1] Способ в соответствии с любым из пунктов [13-8]-[13-10] и [13-12], представленным выше, где точечная мутация представляет собой 2091G>T, 2261G>A, 2494G>C, 2562A>T или 2861T>G в полинуклеотиде, имеющем нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[13-13] Способ в соответствии с любым из пунктов [13-8]-[13-12], представленным выше, где точечная мутация представляет собой 2091G>T, 2494G>C, 2600G>A или 2943T>C в полинуклеотиде, имеющем нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[13-14] Способ в соответствии с пунктом [13-8] или [13-9], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в аминокислоте C609, C611, C618, C620, C630, C634, G691, E768, Y791, V804, S891, A883 или M918 полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[13-14-1] Способ в соответствии с пунктом [13-8], [13-9] или [13-14], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в аминокислоте C609, C611, C618, C620, C630, C634, G691, E768, Y791, S891 или A883 полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[13-15] Способ в соответствии с пунктом [13-8], [13-9] или [13-14], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в аминокислоте C609, C611, C618, C620, C630, C634, E768, V804, S891, A883 или M918 полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[13-16] Способ в соответствии с пунктом [13-8], [13-9] или [13-14], представленным выше, где точечная мутация представляет собой C634W, C634Y, G691S, E768D, Y791F, V804M, V804L, S891A или M918T в полипептиде, имеющем аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[13-16-1] Способ в соответствии с пунктом [13-8], [13-9] или [13-14], представленным выше, где точечная мутация представляет собой C634W, C634Y, G691S, E768D, Y791F или S891A в полипептиде, имеющем аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[13-17] Способ в соответствии с любым из пунктов [13-8]-[13-16], представленным выше, где точечная мутация в RET представляет собой C634Y, E768D, V804M или M918T в полипептиде, имеющем аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[13-18] Способ в соответствии с любым из пунктов [13]-[13-17], представленным выше, где способ идентифицирует субъекта, которому требуется введение соединения, представленного формулой (I), его соли или его сольвата для лечения и/или профилактики опухоли с мутацией в RET или метастазов опухоли.

[13-19] Способ в соответствии с любым из пунктов [13]-[13-18], представленным выше, где опухоль представляет собой рак щитовидной железы или рак легкого.

[13-20] Способ в соответствии с любым из пунктов [13]-[13-19], представленным выше, где соединение, представленное формулой (I), его соль или его сольват селективно ингибирует RET.

[13-21] Способ в соответствии с любым из пунктов [13]-[13-20], представленным выше, где R¹ представляет собой этил.

[13-22] Способ в соответствии с любым из пунктов [13]-[13-21], представленным выше, где соединение формулы (I), его соль или его сольват представляет собой гидрохлорид соединения формулы (I).

[0015]

[14] Способ профилактики и/или терапевтического лечения опухоли с мутацией в RET и метастазов опухоли, который включает идентификацию пациента с мутацией в RET и введение пациенту эффективного терапевтического количества соединения, представленного формулой (I), его соли или его сольвата.

[15] Способ идентификации или предварительной идентификации пациента, чувствительного к соединению, представленному формулой (I), его соли или его сольвату, который включает следующие стадии:

определение присутствия мутации в RET в образце, полученном от пациента; и

определение или предварительное определение, что пациент обладает чувствительностью к соединению, его соли или его сольвату, на основании присутствия мутации в RET в образце.

[15-1] Способ в соответствии с пунктом [15], представленным выше, дополнительно включающий стадию определения активации RET тирозиновой киназы.

[15-2] Способ в соответствии с пунктом [15], представленным выше, где мутация в RET представляет собой мутацию, которая индуцирует активацию RET тирозиновой киназы.

[15-2-1] Способ в соответствии с любым из пунктов [15]-[15-2], представленным выше, где мутация в RET представляет собой (a) мутацию в цистеин-обогащенном домене RET тирозиновой киназы, (b) мутацию в тирозинкиназном домене RET тирозиновой киназы, или (c) образование гибридного гена RET и/или гибридного белка RET.

[15-2-2] Способ в соответствии с любым из пунктов [15]-[15-2-1], представленным выше, где мутация в RET приводит к образованию гибридного гена RET и/или гибридного белка RET.

[15-2-3] Способ в соответствии с любым из пунктов [15]-[15-2-2], представленным выше, где мутация в RET приводит к образованию KIF5B-RET, CCDC6-RET, NCOA4-RET или TRIM33-RET.

[15-3] Способ в соответствии с любым из пунктов [15]-[15-2], представленным выше, где мутация в RET представляет собой (a) мутацию в цистеин-обогащенном домене RET тирозиновой киназы, (b) мутацию в тирозинкиназном домене RET тирозиновой киназы, или (c) образование гибридного гена между RET геном и другим геном, и/или гибридного белка между RET белком и другим белком.

[15-4] Способ в соответствии с любым из пунктов [15]-[15-3], представленным выше, где мутация в RET приводит к образованию гибридного гена между RET геном и другим геном, и/или гибридным белком, образованным между RET белком и другим белком.

[15-5] Способ в соответствии с пунктом [15-4], представленным выше, где другой ген и белок представляют собой KIF5B, CCDC6, NCOA4 или TRIM33.

[15-6] Способ в соответствии с пунктом [15-4] или [15-5], представленным выше, где гибридный ген между RET геном и другим геном и гибридный белок между RET белком и другим белком включают тирозинкиназный домен RET гена или белка и биспиральный домен другого гена или белка.

[15-6-1] Способ в соответствии с любым из пунктов [15-4]-[15-6], представленным выше, где полипептид, образующий RET белок, и полинуклеотид, образующий RET ген, представляют собой любой из следующих полипептидов и любой из полинуклеотидов, кодирующих полипептиды:

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3 или 4;

[15-6-2] Способ в соответствии с пунктом [15-5], представленным выше, где полипептид, образующий каждый из KIF5B, CCDC6, NCOA4 и TRIM33 белков, и полинуклеотид, образующий каждый из KIF5B, CCDC6, NCOA4 и TRIM33 генов, представляют собой любой из следующих полипептидов и любой из полинуклеотидов, кодирующих полипептиды:

(1) полипептид, образующий KIF5B белок, представляет собой

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 30,

(2) полипептид, образующий CCDC6 белок, представляет собой

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 31,

(3) полипептид, образующий NCOA4 белок, представляет собой

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 38-42,

(4) полипептид, образующий TRIM33 белок, представляет собой

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 45 или 46,

[15-6-3] Способ в соответствии с пунктом [15-2-1], [15-2-2], [15-3] или [15-4], представленным выше, где полипептид, образующий гибридный белок, и полинуклеотид, образующий гибридный ген, представляют собой любой из следующих полипептидов (a)-(f) и любой из полинуклеотидов, кодирующих полипептиды:

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24;

(d) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 27 или 28;

[15-6-4] Способ в соответствии с пунктом [15-2-1], [15-2-2], [15-3] или [15-4], представленным выше, где полипептид, образующий гибридный белок, и полинуклеотид, образующий гибридный ген, представляют собой любой из следующих полипептидов (a)-(f) и любой из полинуклеотидов, кодирующих полипептиды:

(a) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24;

(c) полипептид, который включает аминокислотную последовательность с идентичностью 90% или больше с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24, и который обладает тирозинкиназной активностью;

(d) полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 27 или 28;

[15-6-5] Способ в соответствии с пунктом [15-3] или [15-4], представленным выше, где гибридный ген представляет собой любой из (a)-(d), описанных ниже:

[15-7] Способ в соответствии с любым из пунктов [15]-[15-2], представленным выше, где мутация в RET представляет собой точечную мутацию.

[15-8] Способ в соответствии с пунктом [15-7], представленным выше, где точечная мутация представляет собой точечную мутацию в цистеин-обогащенном домене или в тирозинкиназном домене RET тирозиновой киназы.

[15-9] Способ в соответствии с пунктом [15-7] или [15-8], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в нуклеотиде 2091G, 2261G, 2494G, 2562A, 2600G, 2861T или 2943T полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[15-9-1] Способ в соответствии с любым из пунктов [15-7]-[15-9], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в нуклеотиде 2091G, 2261G, 2494G, 2562A или 2861T полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[15-10] Способ в соответствии с любым из пунктов [15-7] или [15-9], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в нуклеотиде 2091G, 2494G, 2600G или 2943T полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[15-11] Способ в соответствии с любым из пунктов [15-7]-[15-9], представленным выше, где точечная мутация представляет собой 2091G>T, 2261G>A, 2494G>C, 2562A>T, 2600G>A, 2600G>C, 2861T>G или 2943T>C в полинуклеотиде, имеющем нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[15-11-1] Способ в соответствии с любым из пунктов [15-7]-[15-9-1] и [15-11], представленным выше, где точечная мутация представляет собой 2091G>T, 2261G>A, 2494G>C, 2562A>T или 2861T>G в полинуклеотиде, имеющем нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[15-12] Способ в соответствии с любым из пунктов [15-7]-[15-11], представленным выше, где точечная мутация представляет собой 2091G>T, 2494G>C, 2600G>A или 2493T>C в полинуклеотиде, имеющем нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

[15-13] Способ в соответствии с пунктом [15-7] или [15-8], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в аминокислоте C609, C611, C618, C620, C630, C634, G691, E768, Y791, V804, S891, A883 или M918 полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[15-13-1] Способ в соответствии с пунктом [15-7], [15-8] или [15-13], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в аминокислоте C609, C611, C618, C620, C630, C634, G691, E768, Y791, S891 или A883 полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[15-14] Способ в соответствии с пунктом [15-7], [15-8] или [15-13], представленным выше, где точечная мутация представляет собой мутацию в аминокислоте C609, C611, C618, C620, C630, C634, E768, V804, S891, A883 или M918 полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[15-15] Способ в соответствии с пунктом [15-7], [15-8] или [15-13], представленным выше, где точечная мутация представляет собой C634W, C634Y, G691S, E768D, Y791F, V804M, V804L, S891A или M918T в полипептиде, имеющем аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[15-15-1] Способ в соответствии с пунктом [15-7], [15-8], [15-13] или [15-15], представленным выше, где точечная мутация представляет собой C634W, C634Y, G691S, E768D, Y791F или S891A в полипептиде, имеющем аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[15-16] Способ в соответствии с любым из пунктов [15-7]-[15-15], где точечная мутация представляет собой C634W, C634Y, E768D, V804M или M918T в полипептиде, имеющем аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.

[15-17] Способ в соответствии с любым из пунктов [15]-[15-16], представленным выше, где пациент представляет собой пациента с раком щитовидной железы или раком легкого.

[15-18] Способ в соответствии с любым из пунктов [15]-[15-17], представленным выше, где пациент представляет собой пациента с медуллярным раком щитовидной железы или немелкоклеточным раком легкого.

[15-19] Способ в соответствии с любым из пунктов [15]-[15-18], представленным выше, где соединение формулы (I), его соль или его сольват селективно ингибирует RET.

[15-20] Способ в соответствии с любым из пунктов [15]-[15-18], представленным выше, где R¹ представляет собой этил.

[15-21] Способ в соответствии с любым из пунктов [15]-[15-19], представленным выше, где соединение представляет собой гидрохлорид.

[16] Способ прогнозирования чувствительности пациента к соединению формулы (I), его соли или его сольвату, который включает следующие стадии;

(1) подтверждение присутствия или отсутствия мутации в RET в образце, полученном от пациента; и

(2) определение или предварительное определение, что пациент обладает чувствительностью к соединению формулы (I), его соли или его сольвату, при условии присутствия мутации в RET.

Эффекты изобретения

[0016]

Терапевтическое и/или профилактическое средство по настоящему изобретению обладает сильным ингибиторным эффектом против RET, в частности, против RET тирозиновой киназы, и является полезным в качестве профилактического или терапевтического средства (в частности, терапевтического средства) против пролиферативных заболеваний. Кроме того, активный ингредиент в настоящем изобретении является полезным в качестве профилактического или терапевтического средства (в частности, терапевтического средства) от заболеваний, включающих различные типы рака, такие как лейкоз (например, острый миелогенный лейкоз, хронический миелогенный лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз), злокачественная лимфома (например, лимфома Ходжкина, не-ходжкинская лимфома), опухоль головного мозга, нейробластома, глиома, рак щитовидной железы, миелодиспластический синдром, рак головы и шеи, эзофагеальный рак, рак желудка, колоректальный рак, рак молочной железы, рак яичника, рак легкого, рак поджелудочной железы, рак печени, рак желчного пузыря, рак кожи, злокачественная меланома, рак почки, рак почечных лоханок и уретры, рак мочевого пузыря, рак матки, рак яичка и рак предстательной железы. Активный ингредиент в настоящем изобретении, кроме того, является полезным в качестве профилактического или терапевтического средства (в частности, терапевтического средства) против инфильтрации и метастазов солидных раковых опухолей.

Настоящим изобретением достигается идентификация рака или пациента с мутацией в RET и достигается эффективное лечение и т.п. такого пациента с использованием соединения, представленного формулой (I), или т.п.

Краткое описание чертежа

[0017]

Чертеж демонстрирует противоопухолевую активность соединения 1 с использованием мышиных моделей ксенотрансплантата с CCDC6-RET гибридным геном (Пример 6).

Способ осуществления изобретения

[0018]

Ниже представлена разъясняющая информация, касающаяся терапевтического или профилактического средства по настоящему изобретению и процедур его получения.

Определения

В контексте настоящего изобретения, термин "C_1-6 алкильная группа" относится к одновалентной группе, образованной из линейного или разветвленного алифатического углеводорода, содержащего от 1 до 6 атомов углерода, путем удаления любого из водородных атомов. Более конкретно, примеры включают метильную группу, этильную групп, изопропильную группу, бутильную группу, н-бутильную группу, изобутильную группу, втор-бутильную группу, трет-бутильную группу, пентильную группу, изопентильную группу, 2,3-диметилпропильную группу, гексильную группу, 2,3-диметилгексильную группу, 1,1-диметилпентильную группу, гептильную группу и октильную группу. Предпочтительной является C_1-6 алкильная группа, более предпочтительной является C_1-5 алкильная группа, еще более предпочтительной является C_1-4 алкильная группа, и еще более предпочтительной является C_1-3 алкильная группа.

[0019]

В контексте настоящего изобретения, выражение "с мутацией в RET", "мутация в RET" или “мутация RET” означает, что мутация присутствует в RET гене и/или RET белке. В контексте настоящего изобретения, выражение "с мутацией в RET", "мутация в RET" включает точечную мутацию, делеционную мутацию или инсерционную мутацию в RET гене и/или RET белке, транслокация- или инверсия-опосредованное слияние между RET геном и другим геном, а также образование гибридного белка между RET белком и другим белком. Выражение "с мутацией в RET", "мутация в RET" или “мутация RET”, кроме того, включает амплификацию RET гена и/или амплификацию RET белка, вызванную увеличением количества ДНК областей в геноме, по сравнению с нормальным состоянием, при расщеплении и повторном соединении RET гена, нарушением репарационных функций для RET гена и т.п.

В контексте настоящего изобретения, термин "RET ген" означает ген, кодирующий RET (реаранжированную в процессе трансфекции) тирозиновую киназу. RET ген по настоящему изобретению означает RET ген любого происхождения. В частности, примеры включают, но не ограничиваются этим, ген, содержащий полинуклеотид, состоящий из нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1 или 2, и полинуклеотид, кодирующий полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3 или 4.

[0020]

В контексте настоящего изобретения, термин "RET белок" означает белок, состоящий из аминокислотной последовательности, образующей RET тирозиновую киназу. RET белок по настоящему изобретению означает RET белок любого происхождения. В частности, примеры включают, но не ограничиваются этим, белок, содержащий полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3 или 4. Известно, что существует три типа белков RET9, RET43 и RET51 для RET тирозиновой киназы из-за разницы в карбоксил-концевом сплайсинге (TRENDS в Genetics, 2006, vol. 22, p. 627-636), и полипептиды, состоящие из аминокислот, образующих эти три типа белков, также охватываются термином "RET белок".

[0021]

В настоящем изобретении, полипептид, образующий RET белок, и полинуклеотид, образующий RET ген, включают следующие полипептиды и гены, кодирующие полипептиды:

полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности с заменой, делецией или вставкой одной или нескольких (предпочтительно от 1 до 10, особенно предпочтительно от 1 до 5) аминокислот в полипептиде, представленном в SEQ ID NO: 3 или 4; и

полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности с идентичностью 80% или больше (предпочтительно 85% или больше, более предпочтительно 90% или больше, еще более предпочтительно 95% или больше) с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 3 или 4.

В контексте настоящего изобретения, выражение "полинуклеотид, кодирующий полипептид" охватывает любой полинуклеотид, способный кодировать специфический полипептид, и охватывает любую из геномных ДНК и кДНК. Полинуклеотид включает даже вырожденный полинуклеотид, состоящий из любого кодона, кодирующего ту же самую аминокислоту.

[0022]

В настоящем изобретении, идентичность аминокислотной последовательности можно рассчитать следующим способом: выравнивание соответствующим образом по меньшей мере двух последовательностей для сравнения друг с другом; определение идентичных аминокислотных остатков между этими последовательностями; определение количества совпадающих сайтов; и затем деление количества совпадающих сайтов на общее количество остатков в области последовательности, подлежащей сравнению, и умножение полученного численного значения на 100. Например, идентичность специфической аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 3, можно рассчитать следующим способом: определение количества совпадающих сайтов между двумя последовательностями, т.е. аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 3, и специфической аминокислотной последовательностью, описанным выше способом; и затем деление количества совпадающих сайтов на общее количество остатков в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3, и умножение полученного численного значения на 100.

[0023]

Альтернативно, идентичность аминокислотной последовательности можно определить с использованием BLAST алгоритма Карлина-Альтшуля (Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1993) 90: 5873-7). На основании этого алгоритма была разработана программа, названная BLASTN или BLASTX (Altschul et al., J. Mol. Biol. (1990) 215: 403-10). Каждую нуклеотидную последовательность можно анализировать при помощи BLASTN на основании BLAST с использованием параметров, установленных как, например, количество баллов = 100 и длина слова = 12. Также, каждую аминокислотную последовательность можно анализировать при помощи BLASTX на основании BLAST с использованием параметров, установленных как, например, количество баллов = 50 и длина слова = 3. В случае использования BLAST и Gapped BLAST программ, используют значения параметров по умолчанию каждой программы. Специфические подходы этих методов анализа известны из уровня техники (см. информацию, представленную на веб-сайте BLAST (Basic Local Alignment Search Tool), NCBI (National Center for Biotechnology Information)).

[0024]

В контексте настоящего изобретения, термин "гибридизующийся" означает гибридизующийся с мишенью ДНК или полинуклеотидом в жестких условиях. Жесткие условия можно определить на основании температуры плавления (Т.пл.) нуклеиновой кислоты с образованием комплекса, в соответствии с рутинным способом. В частности, жесткие условия включают "5 × SSPE, 5 × раствор Денхардта, 0,5% SDS, 50% формамида, 200 мкг/мл ДНК из молок лососевых, 42°C в течение ночи" в качестве условий для гибридизации, и "0,5 × SSC, 0,1% SDS, 42°C" в качестве условий для промывки. Более жесткие условия включают "5 × SSPE, 5 × раствор Денхардта, 0,5% SDS, 50% формамида, 200 мкг/мл ДНК из молок лососевых, 42°C в течение ночи" в качестве условий для гибридизации, и "0,2 × SSC, 0,1% SDS, 65°C" в качестве условий для промывки.

[0025]

Выражение "с мутацией в RET", "мутация в RET" или “мутация RET”, кроме того, включает состояние, когда произошла мутация, которая индуцирует активацию RET тирозиновой киназы, или мутация, которая активирует RET тирозиновую киназу и индуцирует онкогенез (например, рак щитовидной железы, рак легкого), в RET гене и/или RET белке. Активацию RET тирозиновой киназы можно подтвердить путем определения фосфорилированного RET в опухолевой ткани методом иммуноокрашивания или т.п. с использованием антитела против фосфорилированного RET.

В контексте настоящего изобретения, выражение "активация RET тирозиновой киназы" или "состояние, где произошла активация RET тирозиновой киназы" означает, что аминокислотный остаток (например, тирозиновый остаток), содержащийся в RET тирозиновой киназе, был фосфорилирован, и включает повышенное количество фосфорилированного RET тирозинкиназного белка у субъекта (например, в образце, взятом у субъекта) (например, по сравнению с нормальным субъектом). Кроме того, выражение "активация RET тирозиновой киназы" или "состояние, где произошла активация RET тирозиновой киназы" включает состояние, где фосфорилированная RET тирозиновая киназа индуцирует фосфорилирование белка, служащего в качестве мишени RET тирозиновой киназы (далее указан как белок-мишень). Выражение "активация RET тирозиновой киназы" или “состояние, где произошла активация RET тирозиновой киназы” включает не только количество фосфорилированного RET тирозинкиназного белка, но также и увеличение количества указанного выше белка-мишени в фосфорилированной форме.

В контексте настоящего изобретения, выражение "обладающий тирозинкиназной активностью" означает обладание активностью в качестве фермента, который фосфорилирует аминокислотный остаток, например, тирозиновый остаток, содержащийся в тирозиновой киназе. Тирозинкиназную активность полипептида, образующего RET белок, можно подтвердить, например, описанным выше способом. Кроме того, выражение "обладающий тирозинкиназной активностью" включает, обладание активностью в качестве фермента, который фосфорилирует аминокислотный остаток белка-мишени.

[0026]

Мутации, описанные как индуцирующие активацию RET тирозиновой киназы, включают (1) мутацию в цистеин-обогащенном домене RET, (2) мутацию в тирозинкиназном домене RET и (3) образование гибридного гена между RET геном и другим геном, или гибридного белка между RET белком и другим белком (TRENDS in Genetics, 2006, vol. 22, p. 627-636). Человеческий RET ген расположен на хромосоме 10 (10q11,2) и состоит из 21 экзона. "Цистеин-обогащенный домен RET" относится к области с большим количеством цистеина, обнаруженной в RET тирозиновой киназе, и полинуклеотид, кодирующий этот домен, расположен в экзонах 10 и 11. "Тирозинкиназный домен RET" относится к области, обладающей тирозинкиназной активностью, обнаруженной в RET тирозиновой киназе, и полинуклеотид, кодирующий этот домен, расположен в экзонах 12-18 (TRENDS in Genetics, 2006, vol. 22, p. 627-636).

[0027]

Конкретные примеры указанных выше мутаций (1)-(3) включают мутации, перечисленные ниже. В контексте настоящего изобретения, выражение "с мутацией в RET" или "мутация в RET" включает состояние, где произошла любая из этих мутаций (1)-(3) в RET гене и/или RET белке.

(1) Мутация в цистеин-обогащенном домене

Мутация в C609, C611, C618, C620, C630, C634 или в другом месте в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3 (например, C634W, C634Y)

(2) Мутация в тирозинкиназном домене

Мутация в E768, V804, S891, A883, M918 или в другом месте в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3 (например, E768D, V804M, V804L, M918T)

(3) Образование гибридного гена между RET геном и другим геном или гибридного белка между RET белком и другим белком

Образование KIF5B-RET гибридного гена и/или гибридного белка, включающего биспиральный домен KIF5B и тирозинкиназный домен RET

Образование CCDC6-RET гибридного гена и/или гибридного белка, включающего биспиральный домен CCDC6 и тирозинкиназный домен RET

Образование NCOA4-RET гибридного гена и/или гибридного белка, включающего биспиральный домен NCOA4 и тирозинкиназный домен RET

Образование TRIM33-RET гибридного гена и/или гибридного белка, включающего биспиральный домен TRIM33 и тирозинкиназный домен RET

[0028]

В контексте настоящего изобретения, выражение "ген KIF5B" или "KIF5B ген" означает ген, кодирующий KIF5B (относящийся к Кинезиновому семейству белок 5B), и выражение "белок KIF5B" или "KIF5B белок" означает белок, состоящий из аминокислотной последовательности, образующей KIF5B. Эти термины предназначены для обозначения гена или белка KIF5B любого происхождения. Примеры полинуклеотида, образующего KIF5B ген, и полипептида, образующего KIF5B белок, в частности, включают, но не ограничиваются этим, полинуклеотид, состоящий из нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 29, и полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 30. Полипептид, образующий KIF5B белок, и полинуклеотид, образующий KIF5B ген, кроме того, включают следующие полипептиды и полинуклеотиды, кодирующие полипептиды:

полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности с заменой, делецией или вставкой одной или нескольких (предпочтительно от 1 до 10, особенно предпочтительно от 1 до 5) аминокислот в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 30; и

[0029]

Человеческий KIF5B ген расположен в хромосоме 10 и состоит из 26 экзонов. Кандидаты для нуклеотидной последовательности KIF5B-RET гибридного гена включают, но не ограничиваются этим, последовательности, представленные в SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 и SEQ ID NO: 14. Кандидаты для аминокислотной последовательности KIF5B-RET гибридного белка включают, но не ограничиваются этим, последовательности, представленные в SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 и SEQ ID NO: 24. Сообщалось о том, что такой KIF5B-RET гибридный ген и гибридный белок включают биспиральный домен KIF5B и киназный домен RET (Nature Medicine. 2012, 18, p. 378-381, Nature Medicine. 2012, 18, p. 382-384). В настоящем изобретении, полипептид, образующий KIF5B-RET гибридный белок, и полинуклеотид, образующий KIF5B-RET гибридный ген, кроме того, включают следующие полипептиды и полинуклеотиды, кодирующие полипептиды:

(i) полипептид, включающий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24, или полипептид, включающий аминокислотную последовательность с заменой, делецией или вставкой одной или нескольких (предпочтительно от 1 до 10, особенно предпочтительно от 1 до 5) аминокислот в аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24;

(ii) полипептид, включающий аминокислотную последовательность с идентичностью 80% или больше (предпочтительно 85% или больше, более предпочтительно 90% или больше, еще более предпочтительно 95% или больше) с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 15-24; и

(iii) полипептид, который представляет собой полипептид (i) или (ii), и который обладает тирозинкиназной активностью.

[0030]

В контексте настоящего изобретения, выражение "ген CCDC6" или "CCDC6 ген" означает ген, кодирующий CCDC6 (содержащий биспиральный домен 6), и выражение "белок CCDC6" или "CCDC6 белок" означает белок, состоящий из аминокислотной последовательности, образующей CCDC6. Предполагается, что эти термины обозначают ген или белок CCDC6 любого происхождения. Примеры полинуклеотида, образующего CCDC6 ген, и полипептида, образующего CCDC6 белок, в частности, включают, но не ограничиваются этим, полинуклеотид, состоящий из нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 31, и полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 32. Полипептид, образующий CCDC6 белок, и полинуклеотид, образующий CCDC6 ген, кроме того, включают следующие полипептиды и полинуклеотиды, кодирующие полипептиды:

полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности с заменой, делецией или вставкой одной или нескольких (предпочтительно от 1 до 10, особенно предпочтительно от 1 до 5) аминокислот в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 31; и

Человеческий CCDC6 расположен в хромосоме 10 и состоит из 9 экзонов.

Примеры нуклеотидной последовательности CCDC6-RET гибридного гена включают, но не ограничиваются этим, последовательности, представленные в SEQ ID NO: 25 и 26. Примеры аминокислотной последовательности CCDC6-RET гибридного белка включают, но не ограничиваются этим, последовательности, представленные в SEQ ID NO: 27 и 28. Сообщалось о том, что такой CCDC6-RET гибридный ген и гибридный белок включают биспиральный домен CCDC6 и тирозинкиназный домен RET (Nat Med. 2012 Feb 12; 18 (3): 378-81).

Примеры полипептида, образующего CCDC6-RET гибридный белок, и полинуклеотида, образующего CCDC6-RET гибридный ген, кроме того, включают следующие полипептиды и полинуклеотиды, кодирующие полипептиды:

(i) полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 27 или 28, или полипептид, включающий аминокислотную последовательность с заменой, делецией или вставкой одной или нескольких (предпочтительно от 1 до 10, особенно предпочтительно от 1 до 5) аминокислот в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 27 или 28;

(ii) полипептид, включающий аминокислотную последовательность с идентичностью 80% или больше (предпочтительно 85% или больше, более предпочтительно 90% или больше, еще более предпочтительно 95% или больше) с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 27 или 28; и

(iii) полипептид, который представляет собой полипептид (i) или (ii) и который обладает тирозинкиназной активностью.

[0031]

В контексте настоящего изобретения, выражение "ген NCOA4" или "NCOA4 ген" означает ген, кодирующий NCOA4 (коактиватор 4 ядерного рецептора), и выражение "белок NCOA4" или "NCOA4 белок" означает белок, состоящий из аминокислотной последовательности, образующей NCOA4. Предполагается, что эти термины обозначают ген или белок NCOA4 любого происхождения. Примеры полинуклеотида, образующего NCOA4 ген, и полипептида, образующего NCOA4 белок, в частности, включают, но не ограничиваются этим, полинуклеотид, состоящий из нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 33-37, и полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 38-42. Полипептид, образующий NCOA4 белок, и полинуклеотид, образующий NCOA4 ген, кроме того, включают следующие полипептиды и полинуклеотиды, кодирующие полипептиды:

полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности с заменой, делецией или вставкой одной или нескольких (предпочтительно от 1 до 10, особенно предпочтительно от 1 до 5) аминокислот в аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 38-42; и

полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности с идентичностью 80% или больше (предпочтительно 85% или больше, более предпочтительно 90% или больше, еще более предпочтительно 95% или больше) с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 38-42.

Человеческий NCOA4 расположен в хромосоме 10. Ген, в котором экзон 6 NCOA4 гибридизован с экзоном 12 RET описан как NCOA4-RET гибридный ген. Сообщалось о том, что этот гибридный ген и его гибридный белок включают биспиральный домен NCOA4 и тирозинкиназный домен RET (J Clin Oncol, 30 (35), Dec 10, 2012, p. 4352-9).

[0032]

В контексте настоящего изобретения, выражение "ген TRIM33" или "TRIM33 ген" означает ген, кодирующий TRIM33 (трехкомпонентный мотив-содержащий 33), и выражение "белок TRIM33" или "TRIM33 белок" означает белок, состоящий из аминокислотной последовательности, образующей TRIM33. Предполагается, что эти термины обозначают ген или белок TRIM33 любого происхождения. Примеры полинуклеотида, образующего TRIM33 ген, и полипептида, образующего TRIM33 белок, в частности, включают, но не ограничиваются этим, полинуклеотид, состоящий из нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 43 или 44, и полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 45 или 46. Полипептид, образующий TRIM33 белок, и полинуклеотид, образующий TRIM33 ген, кроме того, включают следующие полипептиды и полинуклеотиды, кодирующие полипептиды:

полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности с заменой, делецией или вставкой одной или нескольких (предпочтительно от 1 до 10, особенно предпочтительно от 1 до 5) аминокислот в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 45 или 46; и

[0033]

Человеческий TRIM33 расположен в хромосоме 1. Ген, в котором экзон 14 TRIM33 гибридизован с экзоном 12 RET описан как TRIM33-RET гибридный ген. Сообщалось о том, что этот гибридный ген и его гибридный белок включают биспиральный домен TRIM33 и тирозинкиназный домен RET (Cancer Discov, 3 (6), Jun 2013, p. 630-5).

Биспиральный домен представляет собой домен, вовлеченный в димеризацию белка. Поэтому считают, что KIF5B-RET, CCDC6-RET, NCOA4-RET и TRIM33-RET образуют димеры через их биспиральные домены. Считается, что эти белки вызывают аномальную активацию RET тирозиновой киназы через димеризацию между их биспиральными доменами, индуцируя онкогенез (Nature Medicine. 2012, 18, p. 378-381; Nature Medicine. 2012, 18, p. 382-384; J Clin Oncol, 30 (35), Dec 10, 2012, p. 4352-9; и Cancer Discov 2013 Jun, 3 (6), Jun 2013, p. 630-5).

[0034]

Примеры мутации в RET белке в раке щитовидной железы (например, медуллярный рак щитовидной железы) включают C634W, C634Y, E768D, V804M, V804L и M918T мутации в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3 (аминокислотная последовательность RET). Каждое из обозначений "C634W", "C634Y", "E768D", "V804M", "V804L" и "M918T" представляет собой аминокислотную мутацию, выраженную в виде числа, представляющего специфическое положение, которое находится между однобуквенными символами, обозначающими аминокислоты до и после мутации. Например, "C634W" означает замену Cys на Trp в 634-й аминокислоте от N-конца специфической аминокислотной последовательности. А именно, число представляет собой положение аминокислоты, считаемое от N-конца специфической аминокислотной последовательности, в то время как однобуквенные символы аминокислот перед этим числом и после него представляют аминокислоты до и после замены, соответственно.

[0035]

Мутации в RET гене, соответствующие указанным выше мутациям, включают 2091G>T, 2494G>C, 2600G>A, 2600G>C и 2943T>C мутации в нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1 (нуклеотидная последовательность RET). Каждое из обозначений "2091G>T", "2494G>C", "2600G>A", "2600G>C" и "2943T>C" представляет собой мутацию нуклеотида, выраженную в виде числа, представляющего специфическое положение, после которого указаны основания до и после мутации. Например, "2091G>T" означает замену G на T в 2091-ом нуклеотиде от 5' конца специфической последовательности оснований. А именно, число представляет собой положение основания, считаемое от 5' конца специфической последовательности оснований, в то время как основание, указанное после этого числа и перед символом ">", представляет собой основание до замены, и основание, указанное после символа ">", представляет собой основание после замены.

Примеры мутации в RET в раке легкого (например, немелкоклеточный рак легкого) включают образование KIF5B-RET гибридного гена и/или белка, CCDC6-RET гибридного гена и/или белка, NCOA4-RET гибридного гена и/или белка, TRIM33-RET гибридного гена и/или белка и т.п. Более конкретно, примеры включают, но не ограничиваются этим, мутации, перечисленные ниже.

[0036]

В контексте настоящего изобретения, выражение "гибридный ген RET", "гибридный ген, образованный между RET геном и другим геном" относится к гену, в котором весь RET ген или его часть гибридизован с другим целым геном или его частью (например, KIF5B геном, CCDC6 геном, NCOA4 геном).

В контексте настоящего изобретения, термин "KIF5B-RET гибридный ген" относится к гену, в котором весь RET ген или его часть гибридизован с целым KIF5B геном или его частью. Термин "CCDC6-RET гибридный ген" относится к гену, в котором весь RET ген или его часть гибридизован с целым CCDC6 геном или его частью. Термин "NCOA4-RET гибридный ген" относится к гену, в котором весь RET ген или его часть гибридизован с целым NCOA4 геном или его частью. Термин "TRIM33-RET гибридный ген" относится к гену, в котором весь RET ген или его часть гибридизован с целым TRIM33 геном или его частью.

В контексте настоящего изобретения, выражение "гибридный белок RET," "гибридный белок, образованный между RET белком и другим белком" относится к белку, в котором весь RET белок или его часть гибридизован с другим целым белком или его частью (например, KIF5B белком, CCDC6 белком, NCOA4 белком, TRIM33 белком).

[0037]

В контексте настоящего изобретения, термин "KIF5B-RET гибридный белок" относится к белку, в котором весь RET белок или его часть гибридизован с целым KIF5B белком или его частью. Термин "CCDC6-RET гибридный белок" относится к белку, в котором весь RET белок или его часть гибридизован с целым CCDC6 белком или его частью. Термин "NCOA4-RET гибридный белок" относится к белку, в котором весь RET белок или его часть гибридизован с целым NCOA4 белком или его частью. Термин "TRIM33-RET гибридный белок" относится к белку, в котором весь RET белок или его часть гибридизован с целым TRIM33 белком или его частью.

В контексте настоящего изобретения, термин "KIF5B-RET" означает KIF5B-RET гибридный ген и/или KIF5B-RET гибридный белок. Термин "CCDC6-RET" означает CCDC6-RET гибридный ген и/или CCDC6-RET гибридный белок. Термин "NCOA4-RET" означает NCOA4-RET гибридный ген и/или NCOA4-RET гибридный белок. Термин "TRIM33-RET" означает TRIM33-RET гибридный ген и/или TRIM33-RET гибридный белок.

Выражение "опухоль с мутацией в RET" означает опухоль с мутацией в RET гене и/или белке в опухолевых клетках.

[0038]

Термин "терапевтическое средство" означает фармацевтическое средство для непосредственного или опосредованного облегчения целевого заболевания или профилактики обострений целевого заболевания. Более конкретно, он означает фармацевтическое средство для использования для ингибирования роста или уменьшения размера опухолевых тканей, ингибирования метастазов, уменьшения опухолевых маркеров, облегчения системных симптомов или продления периода выживания пациента и т.п.

Термин "профилактическое средство" означает фармацевтическое средство для использования в предварительном лечении пациента, имеющего риск целевого заболевания, так, чтобы целевое заболевание не развивалось.

Выражение "метастазы опухоли" означает метастазы первичной опухоли в другие ткани. Терапевтическое средство против "метастазов опухоли" означает фармацевтическое средство для ингибирования или подавления метастазов опухоли, или фармацевтическое средство для ингибирования роста или уменьшения размера опухоли, рецидивирующей как результат метастазов. Профилактическое средство против "метастазов опухоли" означает фармацевтическое средство для использования в предварительном лечении так, чтобы опухоль не метастазировала или не рецидивировала как результат метастазов.

[0039]

Выражение "опухоли, метастазирующие из опухолей" означает, что опухоли, перечисленные в качестве первичных опухолей, метастазируют в другие ткани и развиваются в них.

Выражение "субъект, которому требуется введение" означает субъекта, для которого, как можно ожидать, фармацевтическое средство будет обеспечивать терапевтический эффект, основанный на его механизме действия. Более конкретно, означает пациента с пролиферативным заболеванием, для которого можно ожидать ингибирование роста или уменьшение размера опухолевых тканей, ингибирование метастазов, уменьшение опухолевых маркеров и облегчение системных симптомов у пациента.

Выражение "ткань от субъекта" означает ткань, содержащуюся в крови, альвеолах, образце биопсии, образце слюны или т.п., взятую у субъекта, такого как пациент.

Выражение "пациент с мутацией в RET" означает, что пациент имеет мутацию в RET гене и/или белке либо в опухолевой, либо в неопухолевой ткани, взятой у пациента.

[0040]

Термин "ингибитор RET" означает фармацевтическое средство, которое ингибирует активность RET киназы, предпочтительно фармацевтическое средство, которое связывается с RET киназой и обладает ингибиторным эффектом против активности RET киназы.

Выражение "селективно ингибирующий RET" означает, что ингибиторная активность против RET тирозиновой киназы является высокой, выраженная как значение ИК₅₀, по сравнению с ингибиторной активностью против многих других киназ (например, ABL, EGFR, FGFR2, HER2, IGF1R, JAK1, KIT, MET, AKT1, MEK1), за исключением ALK.

Выражение "предварительное определение" или "предварительная идентификация" означает предоставление информации о присутствии мутации в RET для определения или идентификации чувствительного пациента.

[0041]

В настоящем изобретении, соль соединения, представленного формулой (I), включает, например: гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, фосфат, фосфонат и сульфат; сульфонаты, такие как метансульфонат и п-толуолсульфонат; карбоксилат, такой как ацетат, цитрат, малат, тартрат, сукцинат и салицилат; соли щелочных металлов, такие как натриевая соль и калиевая соль; соли щелочно-земельных металлов, такие как магниевая соль и кальциевая соль; и соли аммония, такие как соль аммония, соль алкиламмония, соль диалкиламмония, соль триалкиламмония и соль тетраалкиламмония. Предпочтительные примеры включают гидрохлорид и метансульфонат. Гидрохлорид является более предпочтительным.

Такую соль получают путем контактирования соединения с кислотой или основанием, доступными в фармацевтическом производстве.

В настоящем изобретении, соединение, представленное формулой (I), или его соль может быть безводным или может образовывать сольват, такой как гидрат. Термин "сольватация", используемый в настоящей заявке, относится к явлению, когда молекулы или ионы растворенного вещества в растворе сильно притягивают молекулы растворителя, расположенные в непосредственной близости от них, с образованием одной молекулярной популяции, и относится, например, к гидратации, если растворитель представляет собой воду. Сольват может представлять собой гидрат или не-гидрат. Спирт (например, метанол, этанол, н-пропанол), диметилформамид или т.п. можно использовать в качестве не-гидрата.

[0042]

Также, соединение или его соль, используемые в настоящем изобретении, могут существовать в некоторых таутомерных формах, например, енольных и иминовых формах, кето и енаминовых формах и в виде смеси таких форм. Таутомеры существуют в виде смеси таутомерных видов в растворе. Один таутомер обычно является доминирующим в твердой форме. Выражение "один таутомер" в настоящем изобретении включает все таутомеры соединения, используемого в настоящем изобретении.

Настоящее изобретение включает все стереоизомеры (например, энантиомеры, диастереомеры (включая цис и транс геометрические изомеры)) соединения, представленного формулой (I), рацематы изомеров и другие смеси. Соединение, используемое в настоящем изобретении, может содержать, например, одну или несколько асимметричных точек в формуле (I). Настоящее изобретение включает рацемические смеси, диастереомерные смеси и энантиомеры таких соединений.

Соединение в соответствии с настоящим изобретением можно получить в свободной форме. В этом случае, свободную форму можно преобразовать в соль, которая может быть образована соединением, или в его гидрат или сольват в соответствии с рутинным способом. Альтернативно, соединение в соответствии с настоящим изобретением можно получить в виде соли, гидрата или сольвата соединения. В этом случае, эти формы можно преобразовать в свободную форму соединения в соответствии с рутинным способом.

[0043]

Также, вещество, используемое в настоящем изобретении, включает пролекарство соединения формулы (I). В данном контексте, термин "пролекарство" означает производное соединения формулы (I), которое преобразуется в соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль через ферментативное или неферментативное разложение в физиологических условиях после введения. Пролекарство может быть неактивным при введении пациенту, но существует in vivo в виде активного соединения формулы (I), преобразованного из такого пролекарства.

Пролекарство, например, преобразуется в форму желаемого лекарственного средства при достижении определенного pH или через действие фермента.

[0044]

Типичный способ получения

Соединение, представленное формулой (I), которое служит в качестве активного ингредиента терапевтического или профилактического средства по настоящему изобретению, можно получить в соответствии со способом, описанным в Международной публикации № WO 2010/143664, хотя способ получения соединения, представленного формулой (I), не ограничивается этим.

[0045]

Терапевтическое и/или профилактическое средство по настоящему изобретению

Термин "терапевтическое и/или профилактическое средство", используемый в настоящем изобретении, относится к фармацевтическому средству, которое используют для лечения или профилактики, и, в частности, относится к фармацевтическому средству, которое используют, например, для лечения или профилактики целевого заболевания или для подавления прогрессирования (профилактики обострений или поддержания статус-кво) состояния заболевания.

Терапевтическое и/или профилактическое средство по настоящему изобретению можно использовать в виде фармацевтической композиции, включающей выбранное соединение, полезное для настоящего изобретения, и, кроме того, фармацевтически приемлемый носитель.

Термин "фармацевтически приемлемый носитель", используемый в настоящей заявке, означает один или несколько совместимых твердых или жидких эксципиентов или инкапсулирующих веществ, который являются подходящими для введения млекопитающим. Термин "приемлемый", используемый в настоящей заявке, означает, что соединение, представляющее интерес, и другие ингредиенты смешиваются в композиции таким образом, чтобы в обычных условиях применения между ними не происходила реакция, существенно снижающая фармацевтическую эффективность композиции. Разумеется, фармацевтически приемлемый носитель должен иметь достаточно высокую чистоту и достаточно низкую токсичность, подходящие для введения, предпочтительно, животному, более предпочтительно млекопитающему, подлежащему лечению.

[0046]

Примеры вещества, которое можно использовать в качестве фармацевтически приемлемого носителя, включают: сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; целлюлозу и ее производные, такие как натрий карбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза и метилцеллюлоза; порошкообразный трагакант; солод; желатин; тальк; твердые смазывающие вещества, такие как стеариновая кислота и стеарат магния; сульфат кальция; растительные масла, такие как арахисовое масло, масло семян хлопчатника, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и масло какао; многоатомные спирты, такие как пропиленгликоль, глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль; альгиновую кислоту; эмульгаторы, такие как TWEEN; смачивающие вещества, такие как лецитин; красители; отдушки; вещества для таблетирования; стабилизаторы; антиоксиданты; антисептики; апирогенную воду; изотонический солевой раствор; и фосфатно-буферные растворы.

Примеры способа введения терапевтического и/или профилактического средства по настоящему изобретению включают пероральный, ректальный, парентеральный (внутривенный, внутримышечный, подкожный), интрацистернальный, интравагинальный, интраперитонеальный, внутрипузырный и местный (капли, порошок, мазь, гель или крем) пути введения и ингаляцию (в полость рта или с использованием назальных спреев). Примеры лекарственной формы включают: твердые препараты, такие как таблетки, капсулы, гранулы, порошки и пилюли; жидкие препараты, такие как водные и неводные пероральные растворы и суспензии, и парентеральные растворы, загружаемые в контейнеры, приспособленные для деления на отдельные дозы; и лиофилизированные препараты, которые можно растворять при применении. Альтернативно, лекарственная форма может быть адаптирована для различных способов введения, охватывающих композиции контролируемого высвобождения, как в подкожной имплантации.

[0047]

Эти препараты получают хорошо известным способом с использованием добавок, таких как эксципиенты, смазывающие вещества (вещества покрытий), связующие, разрыхлители, стабилизаторы, отдушки и разбавители.

Примеры эксципиентов могут включать крахмалы, такие как крахмал, картофельный крахмал и кукурузный крахмал, лактозу, кристаллическую целлюлозу и гидрофосфат кальция.

Примеры веществ покрытий могут включать этилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, шеллак, тальк, карнаубский воск и парафин.

Примеры связующих могут включать поливинилпирролидон, Macrogol и соединения подобные эксципиентам.

Примеры разрыхлителей могут соединения, подобные эксципиентам, и химически модифицированные крахмалы и целлюлозы, такие как натрий кроскармелоза, натрий карбоксиметилкрахмал и сшитый поливинилпирролидон.

Примеры стабилизаторов могут включать: п-гидроксибензоатный сложные эфиры, такие как метилпарабен и пропилпарабен; спирты, такие как хлорбутанол, бензиловый спирт и фенилэтиловый спирт; бензальконий хлорид; фенолы, такие как фенол и крезол; тимеросал; дегидроуксусную кислоту; и сорбиновую кислоту.

Примеры отдушек включают подсластители, подкислители и обычно используемые отдушки.

Жидкие препараты можно получить с использованием растворителя, такого как этанол, фенол, хлоркрезол, очищенная вода или дистиллированная вода.

Примеры поверхностно-активных веществ или эмульгаторов могут включать полисорбат 80, полиоксил 40 стеарат, лаурилсульфат натрия и Lauromacrogol.

[0048]

Количество используемого профилактического и/или терапевтического средства по настоящему изобретению варьируется в зависимости от симптома, возраста, массы тела, относительного состояния здоровья, использования других препаратов, способов введения и т.п. В случае пероральных средств, обычное эффективное количество, например, для пациента (теплокровного животного, в частности, человека) предпочтительно составляет от 0,001 до 3000 мг/кг массы тела, более предпочтительно от 0,01 до 300 мг/кг массы тела в день, в расчете на количество активного ингредиента (соединение, представленное формулой (I)), и суточная доза для взрослого пациента, имеющего нормальную массу тела, предпочтительно находится в пределах от 1 до 800 мг. В случае парентеральных средств, обычное эффективное количество предпочтительно составляет от 0,001 до 1000 мг/кг массы тела, более предпочтительно от 0,01 до 300 мг/кг массы тела в день. Желательно, когда это количество вводят в виде разовой дозы или в виде нескольких дробных доз в день, в соответствии с симптомом.

Профилактическое и/или терапевтическое средство по настоящему изобретению можно формулировать способом, описанным в Международной публикации № WO 2012/023597.

[0049]

Терапевтическое и/или профилактическое средство по настоящему изобретению можно использовать в комбинации с одним или несколькими фармацевтическими средствами, выбранными из, например, других химиотерапевтических средств, гормональных терапевтических средств, иммунотерапевтических средств и молекулярно-таргетирующих лекарственных средств (далее обобщенно указаны как совместно используемые средства). Такой активный ингредиент может представлять собой низкомолекулярное соединение. Альтернативно, такой активный ингредиент может представлять собой низкомолекулярное соединение, может представлять собой высокомолекулярный белок, полипептид или антитело, или может представлять собой вакцину или т.п. Кроме того, два или более этих активных ингредиентов можно смешивать для использования в подходящем соотношении.

Примеры "химиотерапевтических средств" включают алкилирующие средства, препараты платины, метаболические антагонисты, ингибиторы топоизомеразы, противораковые антибиотики и противораковые средства растительного происхождения. Примеры "алкилирующих средств" включают азотный иприт, азотный иприт-N-оксид гидрохлорид, хлорамбуцил, циклофосфамид, ифосфамид, тиотепа, карбоквон, импросульфан тозилат, бусульфан, нимустин гидрохлорид, митобронитол, мелфалан, дакарбазин, ранимустин, эстрамустин натрий фосфат, триэтиленмеламин, кармустин, ломустин, стрептозоцин, пипоброман, этоглуцид, алтретамин, амбамустин, диброспидиум гидрохлорид, фотемустин, преднимустин, пумитепа, рибомустин, темозоломид, треосульфан, трофосфамид, зиностатин стималамер, адоцелезин, цистемустин и бицелезин. Примеры "препаратов платины" включают карбоплатин, цисплатин, мибоплатин, недаплатин и оксалиплатин. Примеры "метаболических антагонистов" включают меркаптопурин, 6-меркаптопурин рибозид, тиоинозин, метотрексат, эноцитабин, цитарабин, цитарабин окфосфат, анцитабин гидрохлорид, 5-FU лекарственные средства (например, фторурацил, тегафур, UFT, доксифлуридин, кармофур, галоцитабин, эмитефур), аминоптерин, лейковорин кальций, таблоид, бутоцин, кальций фолинат, кальций левофолинат, кладрибин, флударабин, гемцитабин, гидроксикарбамид, пентостатин, пиритрексим, идоксуридин, митоглуазон, тиазофурин и амбамустин. Примеры ингибиторов топоизомеразы I (например, иринотекан, топотекан), ингибиторов топоизомеразы II (например, собузоксан) и "противораковых антибиотиков" включают антрациклиновые противораковые средства (доксорубицин гидрохлорид, даунорубицин гидрохлорид, акларубицин гидрохлорид, пирарубицин гидрохлорид, эпирубицин гидрохлорид и т.п.), актиномицин D, актиномицин C, митомицин C, хромомицин A3, блеомицин гидрохлорид, блеомицин сульфат, пепломицин сульфат, неокарциностатин, митрамицин, саркомицин, карцинофилин, митотан, зорубицин гидрохлорид, митоксантрон гидрохлорид и идарубицин гидрохлорид. Примеры "противораковых средств растительного происхождения" включают противораковые средства на основе алкалоидов барвинка (винбластин сульфат, винкристин сульфат, виндезин сульфат и т.п.), таксановые противораковые средства (паклитаксел, доцетаксел и т.п.) етопозид, етопозид фосфат, тенипозид и винорелбин.

[0050]

Примеры "гормональных терапевтических средств" включают адренокортикальные гормональные лекарственные средства (например, дексаметазон, преднизолон, бетаметазон, триамцинолон). Из них, преднизолон является предпочтительным.

Примеры "иммунотерапевтических средств (модификаторы биологического ответа: BRM)" включают Пицибанил, Крестин, сизофиран, лентинан, убенимекс, интерфероны, интерлейкин, макрофагальные колониестимулирующие факторы, гранулоцитарные колониестимулирующие факторы, лимфотоксины, BCG вакцины, Corynebacterium parvum, левамизол, полисахарид K и прокодазол.

"Молекулярно-таргетирующие лекарственные средства" включают, например, "фармацевтические средства, которые ингибируют действие факторов клеточного роста и их рецепторов". "Факторы клеточного роста" могут представлять собой любое вещество, которое промотирует клеточный рост, и примеры типично включают пептиды с молекулярной массой 20000 или ниже, которые представляют собой факторы, проявляющие действие при более низких концентрациях через связывание с их рецепторами, и, в частности, включают (1) EGF (эпидермальный фактор роста) и вещества, обладающие по существу такой же активностью [например, EGF, герегулин (HER2 лиганд)], (2) инсулин и вещества, обладающие по существу такой же активностью [например, инсулин, IGF (инсулиноподобный фактор роста)-1, IGF-2], (3) FGF (фактор роста фибробластов) и вещества, обладающие по существу такой же активностью [например, кислотный FGF, щелочной FGF, KGF (фактор роста кератиноцитов), FGF-10], (4) VEGF (сосудистый эндотелиальный фактор роста) и (5) другие факторы клеточного роста [например, CSF (колониестимулирующий фактор), EPO (эритропоэтин), IL-2 (интерлейкин-2), NGF (фактор роста нервов), PDGF (тромбоцитарный фактор роста), TGFβ (трансформирующий фактор роста β), HGF (фактор роста гепатоцитов)].

"Рецепторы факторов клеточного роста " могут представлять собой любой рецептор, обладающий способностью к связыванию с указанными выше факторами клеточного роста, и конкретные примеры включают EGF рецепторы, рецепторы герегулина (HER2), инсулиновые рецепторы, IGF рецепторы, FGF рецептор-1 или FGF рецептор-2, HGF рецепторы (c-met), VEGF рецепторы и SCF рецепторы (c-kit). Примеры "фармацевтических средств, которые ингибируют действие факторов клеточного роста" включают Герцептин (HER2 антитело), GLEEVEC (ингибитор c-kit, abl) и Тарцева (ингибитор EGF рецептора).

Молекулярно-таргетирующие лекарственные средства также включают фармацевтическое средства, каждое из которых ингибирует действия многих факторов клеточного роста, и фармацевтические средства, которые блокируют внутриклеточные сигналы, генерируемые факторами клеточного роста.

[0051]

В дополнение к описанным выше фармацевтическим средствам, также можно использовать L-аспарагиназу, ацеглатон, прокарбазин гидрохлорид, протопорфирин-кобальт комплексные соли, ртуть-гематопорфирин натрий, индукторы дифференциации (например, ретиноид, витамин Ds), ингибиторы ангиогенез, α-блокаторы (например, тамсулозин гидрохлорид) и т.п.

Из средств, описанных выше, платиновый комплекс (например, карбоплатин, цисплатин, оксалиплатин), метаболический антагонист (например, гемцитабин, пеметрексед), ингибитор топоизомеразы I (например, иринотекан, топотекан), противораковое средство растительного происхождения (таксановые лекарственные средства (например, паклитаксел, доцетаксел), винорелбин), противораковый антибиотик (например, митомицин C), гормональное терапевтическое средство (например, преднизолон), иммунотерапевтическое средство (например, Пицибанил, Крестин), молекулярно-таргетирующее лекарственное средство (например, анти-VEGF антитела, такие как бевацизумаб, ингибиторы EGFR, такие как эрлотиниб, ингибиторы VEGFR, такие как сунитиниб) или т.п. является предпочтительным в качестве совместно используемого средства. Цисплатин, гемцитабин, паклитаксел, бевацизумаб или т.п. является более предпочтительным. Альтернативно, терапевтическое и/или профилактическое средство по настоящему изобретению можно использовать в комбинации с комбинированной терапией с использованием этих фармацевтических средств. Примеры включают использование в комбинации с комбинированной терапией, включающей цисплатин, винбластин и митомицин C, цисплатин и винорелбин, цисплатин и паклитаксел, цисплатин и гемцитабин, карбоплатин и паклитаксел, преметрексед и цисплатин, или бевацизумаб, цисплатин и преметрексед.

[0052]

В настоящем изобретении выбор времени введения активного ингредиента по настоящему изобретению и совместно используемого средства не ограничивается, и их можно вводить одновременно или через определенный промежуток времени субъекту, которому требуется введение. Альтернативно, активный ингредиент по настоящему изобретению и совместно используемое средство можно вводить в виде одного препарата, включающего их, субъекту, которому требуется введение. Например, их можно вводить в виде мультилекарственной терапии, которая включает введение путем инъекции или капельной инфузии нескольких лекарственных средств в комбинации в течение 3-6 месяцев, или с использованием способа, который включает прием пероральных средств в течение примерно 2 лет.

Также, предоперационные дополнительные лечебные мероприятия, такие как "химиотерапия" можно осуществлять до хирургической операции для ингибирования уже распространившихся опухолевых (раковых) клеток для предотвращения рецидив как результата метастазов или в целях уменьшения объема хирургической операции.

Кроме того, можно осуществлять послеоперационные дополнительные лечебные мероприятия, такие как "химиотерапия", для ингибирования роста опухолевых (раковых) клеток, которые не были удалены путем локального лечения, таким как хирургическая операция или облучение, для предотвращения рецидива как результата метастазов.

Противораковые средств, которые можно использовать в комбинации с активным ингредиентом по настоящему изобретению, могут действовать не только на раковые клетки, но также на нормальные клетки, приводя к побочным реакциям. Типичные побочные реакции включают тошноту, вызываемую повреждением слизистой желудочно-кишечного тракта, рвоту, анорексию, стоматит, диарею или запор, нарушение ощущения вкуса, снижение уровня лейкоцитов, эритроцитов или тромбоцитов или алопецию, вызванную поражением костного мозга, снижение иммунитета и т.п. Активный ингредиент по настоящему изобретению и совместно используемое средство можно использовать в комбинации со средством, уменьшающим побочную реакцию, для предотвращения этих побочных реакций. Примеры включают противорвотные средства, эффективно подавляющие тошноту (например, гранисетрон гидрохлорид), и лекарственные средства, способствующие восстановлению повреждения костного мозга (например, эритропоэтин, G-CSF, GM-CSF).

Дозу совместно используемого средства можно соответственно выбрать в соответствии с клинически используемой дозой. Соотношение в смеси между активным ингредиентом по настоящему изобретению и совместно используемым средством можно соответственно выбрать в соответствии с субъектом, которому требуется введение, путем введения, заболеванием, на которые направлено лечение, симптомом, комбинацией фармацевтических средств и т.п. Например, когда субъектом, которому требуется введение, является человек, можно использовать от 0,01 до 100 частей массовых совместно используемого средства в расчете на 100 частей массовых препарата, включающего активный ингредиент по настоящему изобретению.

[0053]

Способ определения мутации в RET

Терапевтическое и/или профилактическое средство в соответствии с изобретением, раскрытым в настоящей заявке, как ожидают, будет терапевтически и/или профилактически эффективным при введении субъекту, у которого подтверждена мутация в RET. Это предполагает, что пациент, у которого подтверждена мутация в RET, является чувствительным к терапевтическому и/или профилактическому средству в соответствии с изобретением, раскрытым в настоящей заявке. В настоящем изобретении, способ определения мутации в RET включает способ определения мутации в RET гене и способ определения мутации в RET белке.

Способ определения мутации в RET гене включает стадию определения присутствия RET ген-зависимого специфического полинуклеотида, показанного ниже, в образце, полученном от субъекта, и амплификации специфического полинуклеотида.

В частности, способ включает следующие стадии (1)-(3):

(1) У субъекта берут образец (кровь, легочно-альвеолярный, образец биопсии, образец мокроты и т.п.);

(2) Геномную ДНК или ее транскрипт (например, мРНК, кДНК, белок) экстрагируют из образца. Геномную ДНК можно экстрагировать способом, известным из уровня техники. Эту экстракцию можно удобным образом осуществлять с использованием коммерчески доступного набора для экстракции ДНК.

(3) Определяют присутствие специфического полинуклеотида в экстрагированной геномной ДНК или ее транскрипте (например, мРНК, кДНК, белок) и присутствие или отсутствие амплификации специфического полинуклеотида.

Присутствие специфического полинуклеотида можно определить с использованием методов генного анализа, известных из уровня техники (например, методов, таких как ПЦР, обратно-транскрипционная ПЦР, секвенирование по методу Сэнгера, in situ гибридизация и использование микроматрицы), отдельно или в комбинации.

В случае детекции присутствия последовательности специфического полинуклеотида с использованием мРНК, детекцию можно осуществить с использованием реакции амплификации гена, такой как обратно-транскрипционная ПЦР, с использованием праймеров, разработанных для специфической амплификации последовательности полинуклеотида, детекцию которой осуществляют. Праймер может быть сконструирован с использованием программы конструирования праймеров (например, Primer Express; PE Biosystems) или т.п.

Кроме того, ПЦР продукты, которые получают при помощи ПЦР и обратно-транскрипционной ПЦР, анализируют методом электрофореза на агарозном геле, и успешное получение амплифицированного фрагмента с размером, представляющим интерес, можно подтвердить методом окрашивания этидийбромидом или т.п. Успешное получение амплифицированного фрагмента с размером, представляющим интерес, показывает, что специфическиий полинуклеотид присутствует в образце, полученном от субъекта.

Детекцию точечной мутации, делеционной мутации или инсерционной мутации в RET гене можно осуществить путем определения присутствия специфического полинуклеотида с использованием, например, объединенного способа, включающего указанные выше обратно-транскрипционную ПЦР и секвенирование по методу Сэнгера, или с использованием реакции однонуклеотидного удлинения, известной из уровня техники.

[0054]

Гибридный ген, образованный между RET геном и другим геном, можно определить способом определения присутствия специфического полинуклеотида с использованием объединенного способа, включающего указанные выше обратно-транскрипционную ПЦР и секвенирование по методу Сэнгера, или с использованием метода in situ гибридизации. Детекцию с использованием метода in situ гибридизации можно осуществить, например, методов флуоресцентной in situ гибридизации (FISH), хромогенной in situ гибридизации (CISH) или in situ гибридизации с использованием серебра (SISH), известных из уровня техники.

Зонд, который можно использовать в гибридизации, представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты из по меньшей мере 32 последовательных нуклеотидов (16 нуклеотидов выше и 16 нуклеотидов ниже, фланкирующие точку гибридизации), которая гибридизуется в жестких условиях (предпочтительно в более жестких условиях) с специфическим полинуклеотидом или его комплементарной цепью, но не ограничивается этим. Зонд, включающий последовательность специфической части в полинуклеотиде, имеющем нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 5-14, 25 и 26, или ее комплементарную нить, также можно использовать.

Жесткие условия можно определить на основании температуры плавления (Т.пл.) нуклеиновой кислоты с образованием комплекса, в соответствии с рутинным способом. В частности, жесткие условия включают "5 × SSPE, 5 × раствор Денхардта, 0,5% SDS, 50% формамида, 200 мкг/мл ДНК из молок лососевых, 42°C в течение ночи" в качестве условий для гибридизации, и "0,5 × SSC, 0,1% SDS, 42°C" в качестве условий для промывки. Более жесткие условия включают "5 × SSPE, 5 × раствор Денхардта, 0,5% SDS, 50% формамида, 200 мкг/мл ДНК из молок лососевых, 42°C в течение ночи" в качестве условий для гибридизации, и "0,2 × SSC, 0,1% SDS, 65°C" в качестве условий для промывки.

[0055]

Детекцию амплификации RET гена можно осуществить путем определения амплификации специфического полинуклеотида описанным выше методом in situ гибридизации или методом сравнительной геномной гибридизации (CGH) с использованием геномной ДНК.

Специфический полинуклеотид, присутствие которого определяют, относится к полинуклеотиду, содержащему основание, варьирующееся в результате точечной мутации, делеционной мутации или инсерционной мутации в полинуклеотиде, образующем RET ген, полинуклеотиду, образующему гибридный ген между RET геном и другим геном (например, KIF5B ген, CCDC6 ген, NCOA4 ген, TRIM33 ген), или амплифицированному полинуклеотиду, образующему RET ген. Примеры такого полинуклеотида включают, но не ограничиваются этим, полинуклеотиды, описанные ниже, и полинуклеотиды, гибридизующиеся в жестких условиях с полинуклеотидами, состоящими из последовательностей, комплементарных этим полинуклеотидам (в частности, полинуклеотиды, кодирующие полипептиды, обладающие тирозинкиназной активностью).

(1) Полинуклеотид, образующий гибридный ген между RET геном и KIF5B геном:

Полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5

Полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6

Полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7

Полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8

Полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9

Полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10

Полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11

Полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12

Полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 13

Полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14

(2) Полинуклеотид, образующий гибридный ген между RET геном и CCDC6 геном:

Полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 25

Полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 26

(3) Полинуклеотид, образующий RET ген:

Полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1

Полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2

(4) Полинуклеотид, содержащий основание, варьирующееся в результате точечной мутации, делеционной мутации или инсерционной мутации в полинуклеотиде, образующем RET ген:

Полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность с мутацией в нуклеотиде 2091G, 2261G, 2494G, 2562A, 2600G, 2861T или 2943T (например, 2091G>T, 2261G>A, 2494G>C, 2562A>T, 2600G>A, 2600G>C, 2861T>G или 2943T>C мутацией) полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1

Полинуклеотид, включающий полинуклеотид, кодирующий полипептид с мутацией в аминокислоте C609, C611, C618, C620, C630, C634, E768, V804, S891, A883 или M918 (например, C634W, C634Y, E768D, V804M, V804L или M918T мутацией) полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3

[0056]

Способ определения мутации в RET, кроме того, включает способ определения мутации в RET белке в дополнение к описанному выше способу.

Способ определения мутации в RET включает стадию детекции присутствия специфического полипептида (далее указан как полипептид, подлежащий обнаружению) в образце, полученном от субъекта. Стадия детекции полипептида, подлежащего обнаружению, включает получение лизата из образца, полученного от субъекта (например, раковые ткани или клетки, полученные от субъекта).

В случае, когда полипептид, подлежащий обнаружению, представляет собой гибридный белок между RET белком и другим белком, присутствие полипептида, подлежащего обнаружению, можно определить например, методом иммуноанализа или анализа ферментативной активности с использованием антитела против KIF5B, CCDC6, NCOA4 или TRIM33 и анти-RET антитела в комбинации. Предпочтительно, можно использовать подход, такой иммуноферментный анализ, использующий два антитела сандвич-анализ ELISA, флуоресцентный иммуноанализ, радиоиммуноанализ или вестерн-блоттинг с использованием моноклонального или поликлонального антитела, специфического для полипептида, подлежащего обнаружению. В дополнение к указанному выше способу, детекцию мутации (включая точечную мутацию, делеционную мутацию и инсерционную мутацию) в RET белке можно осуществить путем определения присутствия полипептида, подлежащего обнаружению, с использованием вестерн-блоттинга, масс-спектрометрии или т.п.

[0057]

Примеры полипептида, подлежащего обнаружению, включают, но не ограничиваются этим, полипептиды, описанные ниже, и полипептиды с делецией, заменой и/или вставкой одной или нескольких аминокислот (например, от 1 до 10, от 1 до 5 или от 1 до 3 аминокислот) в этих полипептидах (в частности, полипептиды, имеющие тирозинкиназную активность).

(1) Полипептид, образующий гибридный белок между RET белком и KIF5B белком:

Полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15

Полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 16

Полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 17

Полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18

Полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19

Полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 20

Полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 21

Полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 22

Полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23

Полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 24

(2) Полипептид, образующий гибридный белок между RET белком и CCDC6 белком:

Полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 27

Полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 28

(3) Полипептид, образующий RET белок

Полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3

Полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4

(4) Полипептид, содержащий точечную мутацию в полипептиде, образующем RET белок

Полипептид, кодируемый полинуклеотидом, включающий нуклеотидную последовательность с мутацией в нуклеотиде 2091G, 2261G, 2494G, 2562A, 2600G, 2861T или 2943T (например, 2091G>T, 2261G>A, 2494G>C, 2562A>T, 2600G>A, 2600G>C, 2861T>G или 2943T>C мутацией) полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1

Полипептид с мутацией в аминокислоте C609, C611, C618, C620, C630, C634, G691, E768, Y791, V804, S891, A883 или M918 (например, C634W, C634Y, G691S, E768D, Y791F, V804M, V804L, S891A или M918T мутацией) полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3

[0058]

Кроме того, присутствие гибридного гена, образованного между RET геном и KIF5B геном, или других гибридных генов можно определить способами, описанными в Международной публикации № WO2012/014795, Nature Medicine, 2012, 18, p. 378-381, J Clin Oncol, 30 (35), Dec 10, 2012, p. 4352-9, Cancer Discov 2013 Jun, 3 (6), Jun 2013, p. 630-5, и т.п.

В дополнение к указанному выше способу, можно определить активацию RET тирозиновой киназы. Активацию RET тирозиновой киназы можно подтвердить путем определения фосфорилированного RET в опухолевой ткани методом иммуноокрашивания или т.п. с использованием антитела против фосфорилированного RET.

Примеры

[0059]

Далее настоящее изобретение будет описано более конкретно со ссылкой на Примеры. Однако настоящее изобретение не ограничивается этими Примерами.

Соединение 1 (9-этил-6,6-диметил-8-(4-морфолин-4-ил-пиперидин-1-ил)-11-оксо-6,11-дигидро-5H-бензо[b]карбазол-3-карбонитрил или 9-этил-6,6-диметил-8-[4-(морфолин-4-ил)пиперидин-1-ил]-11-оксо-6,11-дигидро-5H-бензо[b]карбазол-3-карбонитрил), представленное формулой II (соединение, описанное в Примере 366 WO2010/143664), подвергали фармакологическим испытаниям, описанным в Примерах 1-6.

[0060]

Пример 1

Оценка активности ингибирования RET киназы и сродства связывания

Активность соединения 1, направленную на ингибирование RET киназы, оценивали с использованием ингибиторной активности против реакции фосфорилирования биотинилированного пептида (EGPWLEEEEEAYGWMDF) в качестве показателя, используя RET киназу, содержащую N-концевой GST-меченный RET киназный домен (Carna Biosciences). Фосфорилированный биотинилированный пептид определяли методом TR-FRET (перенос резонансной энергии флуоресценции с разрешением по времени) с использованием европий-меченного антитела против фосфорилирования. Концентрацию ингибирования 50% (ИК₅₀ значение) рассчитывали методом логистической регрессии. Как результат, соединение 1 продемонстрировало ингибиторную активность в отношении RET киназы со значением ИК₅₀ 4,8 нМ.

Константу диссоциации (Kd значение) соединения 1 для RET киназы также измеряли при помощи KINOME_SCAN(TM) (DiscoveRx). Как результат, соединение 1 продемонстрировал сродство связывания с RET с Kd значением 7,6 нМ.

[0061]

Пример 2

Получение KIF5B-RET-экспрессирующих клеток и оценка активности ингибирования клеточного роста против этих клеток

Экспрессирующую плазмиду CS-GS104J-M67 (GeneCopoeia), содержащую KIF5B-RET вариант 1 (ген, в котором область от N-конца KIF5B CDS до экзона 15 была гидридизована с областью от экзона 12 RET CDS до C-конца) (SEQ ID NO: 5), трансфицировали в мышиные лимфоциты Ba/F3 (RIKEN Cell Bank) путем электропорации. После трансфекции клетки культивировали в течение ночи в RPMI-1640 среде (Sigma-Aldrich), содержащей 10% FBS (Bovogen Biologicals) и 1 нг/мл рекомбинантного мышиного IL-3 (R&D systems). Затем культуральный супернатант заменяли RPMI-1640 средой, содержащей 10% FBS. Клетки высевали в 96-луночный планшет методом серийных разведений. Приблизительно через 2 недели определяли экспрессию фосфорилированного RET в клетках, выращенных в отсутствие IL-3, методом весстерн-блоттинга. Это использовали в качестве показателя для установления клеточной линии Ba/F3 KIF5B-RET, стабильно экспрессирующей KIF5B-RET.

Ba/F3 KIF5B-RET клетки высевали в 96-луночный планшет при концентрации 2500 клеток/лунка в RPMI-1640 среду, содержащую 10% FBS. Гидрохлоридную соль соединения 1 разбавляли до 1 нМ - 10 мкМ (конечные концентрации) диметилсульфоксидом и добавляли в 96-луночный планшет. Диметилсульфоксид добавляли в качестве отрицательного контроля. После культивирования при 37°C в течение 2 дней в присутствии 5% CO₂ добавляли реагент для подсчета клеток CellTiter-Glo(R) Luminescent Cell Viability Assay (Promega Corporation) и перемешивали, с последующим измерением интенсивности люминесценции с использованием устройства для измерения люминесценции Envision (PerkinElmer). Измеренное значение в лунке, в которую добавляли только среду, определяли как клеточную жизнеспособность 0%, тогда как измеренное значение в лунке, в которую добавляли диметилсульфоксид, определяли как клеточную жизнеспособность 100%. Клеточную жизнеспособность Ba/F3 KIF5B-RET клеток рассчитывали при каждой концентрации соединения 1. ИК₅₀ значение определяли из полученных значений методом логистической регрессии. Как результат, соединение 1 ингибировало клеточный рост Ba/F3 KIF5B-RET клеток при ИК₅₀ значении 86 нМ.

Эти результаты показали, что соединение 1 может ингибировать киназную активность RET и может ингибировать рост клеточной линии, экспрессирующей KIF5B-RET.

[0062]

Пример 3

Оценка активности ингибирования клеточного роста против клеточной линии медуллярного рака щитовидной железы TT

Активность ингибирования клеточного роста оценивали с использованием клеточной линии медуллярного рака щитовидной железы TT (American Type Culture Collection) с активной мутацией RET киназы (C634W).

TT клетки высевали в 96-луночный планшет при концентрации 5000 клеток/лунка в F-12K Питательную Смесь (Life Technologies Corporation), содержащую 10% FBS, и культивировали в течение ночи при 37°C в присутствия 5% CO₂. Затем гидрохлоридную соль соединения 1 разбавляли до 1 нМ - 10 мкМ (конечные концентрации) диметилсульфоксидом и добавляли в 96-луночный планшет. Диметилсульфоксид добавляли в качестве отрицательного контроля. После культивирования при 37°C в течение 5 дней в присутствия 5% CO₂ добавляли реагент для подсчета клеток Luminescent Cell Viability Assay (Promega Corporation) и перемешивали, с последующим измерением интенсивности люминесценции с использованием устройства для измерения люминесценции Envision. Измеренное значение в лунке, в которую добавляли только среду, определяли как клеточную жизнеспособность 0%, тогда как измеренное значение в лунке, в которую добавляли диметилсульфоксид, определяли как клеточную жизнеспособность 100%. Клеточную жизнеспособность TT клеток рассчитывали при каждой концентрации соединения 1. ИК₅₀ значение определяли из полученных значений методом логистической регрессии. Как результат, соединение 1 ингибировало клеточный рост TT клеток при ИК₅₀ значении 190 нМ.

[0063]

Пример 4

Активность ингибирования мутантной RET киназы

Активность соединения 1, направленную на ингибирование мутантной RET киназы, оценивали с использованием в качестве показателя ингибиторной активности против реакции фосфорилирования биотинилированного пептида (EGPWLEEEEEAYGWMDF) с использованием мутантной RET киназы, содержащей N-концевой GST-меченный RET киназный домен (Carna Biosciences, Millipore). Фосфорилированный биотинилированный пептид определяли TR-FRET методом с использованием европий-меченного антитела против фосфорилирования. ИК₅₀ значение рассчитывали методом логистической регрессии. Результаты испытания представлены в Таблице 1. Соединение 1 продемонстрировало ингибиторную активность против каждого мутанта RET киназы с мутацией (V804L, V804M) в “сторожевом” остатке.

Таблица 1
RET мутант	ИК₅₀ (нМ)
RET G691S	9,5
RET Y791F	14
RET V804L	32
RET V804M	53
RET S891A	8,3
RET M918T	5,7

[0064]

Пример 5

Оценка активности ингибирования клеточного роста против клеточной линии немелкоклеточного рака легкого LC-2/ad

Активность, направленную на ингибирование клеточного роста, оценивали с использованием клеточной линии немелкоклеточного рака легкого LC-2/ad (RIKEN, J Thorac Oncol. 2012 Dec, 7 (12), 1872-6), содержащей CCDC6-RET гибридный ген.

LC-2/ad клетки высевали в 96-луночный планшет при концентрации 2000 клеток/лунка в среду, представляющую собой 1:1 смесь среды RPMI-1640 и среды Ham, содержащую 15% FBS и 25 мМ HEPES, и культивировали в течение ночи при 37°C в присутствия 5% CO₂. Затем гидрохлоридную соль соединения 1 разбавляли до 1 нМ - 1 мкМ (конечные концентрации) диметилсульфоксидом и добавляли в 96-луночный планшет. Диметилсульфоксид добавляли в качестве отрицательного контроля. После культивирования при 37°C в течение 5 дней в присутствия 5% CO₂ добавляли реагент для подсчета клеток CellTiter-Glo(R) Luminescent Cell Viability Assay и перемешивали, с последующим измерением интенсивности люминесценции с использованием a устройства для измерения люминесценции Envision. Измеренное значение в лунке, в которую добавляли только среду, определяли как клеточную жизнеспособность 0%, тогда как измеренное значение в лунке, в которую добавляли диметилсульфоксид, определяли как клеточную жизнеспособность 100%. Клеточную жизнеспособность LC-2/ad клеток рассчитывали при каждой концентрации соединения 1. ИК₅₀ значение определяли из полученных значений методом логистической регрессии. Как результат, соединение 1 ингибировало клеточный рост LC-2/ad клеток при ИК₅₀ значении 190 нМ.

[0065]

Пример 6

Оценка противоопухолевой активности в мышиной модели ксенотрансплантата, содержащего CCDC6-RET гибридный ген

In vivo противоопухолевую активность соединения 1 оценивали в мышиных моделях с имплантированной клеточной линией немелкоклеточного рака легкого LC-2/ad. LC-2/ad подкожно имплантировали SCID мышам и рандомизировали после достижения размера опухоли 200-350 мм³. Введение соединения начинали в день рандомизации. Носители, используемые для растворения соединения, представляли собой 0,02н HCl, 10% диметилсульфоксид, 10% Cremophor EL, 15% PEG400 и 15% HPCD (2-гидроксипропил-β-циклодекстрин) (показана конечная концентрация). Соединение 1 перорально вводили раз в день каждой мыши при дозе 20 мг/кг или 60 мг/кг в течение 14 дней. Как результат, доза-зависимый эффект ингибирования роста опухоли и регрессии опухоли подтверждали для всех опухолей. В процессе этого испытания существенную потерю массы тела мыши не наблюдали ни при какой дозе. Результаты, касающиеся противоопухолевой активности, представлены на Фиг. 1.

1. Терапевтическое и/или профилактическое средство против опухоли с мутацией в RET и против метастазов опухоли, которое содержат соединение, представленное формулой (I), его соль или его сольват в качестве активного ингредиента:

где R₁ представляет собой C_1-6 алкильную группу.

2. Терапевтическое и/или профилактическое средство по п. 1, где опухоль выбрана из группы, состоящей из острого миелогенного лейкоза, хронического миелогенного лейкоза, острого лимфоцитарного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза, лимфомы Ходжкина, не-ходжкинской лимфомы, опухоли головного мозга, нейробластомы, глиомы, рака щитовидной железы, миелодиспластического синдрома, рака головы и шеи, эзофагеального рака, рака желудка, колоректального рака, рака молочной железы, рака яичника, рака легкого, рака поджелудочной железы, рака печени, рака желчного пузыря, рака кожи, злокачественной меланомы, рака почки, рака почечных лоханок и уретры, рака мочевого пузыря, рака матки, рака яичка, рака предстательной железы и опухолей, метастазирующих из этих опухолей.

3. Терапевтическое и/или профилактическое средство по п. 1, где опухоль представляет собой рак щитовидной железы или рак легкого.

4. Терапевтическое и/или профилактическое средство по п. 1, где опухоль представляет собой медуллярный рак щитовидной железы или немелкоклеточный рак легкого.

5. Терапевтическое и/или профилактическое средство по любому из пп. 1-4, где опухоль представляет собой опухоль с гибридным геном, образованным между RET геном и другим геном, и/или гибридным белком, образованным между RET белком и другим белком.

6. Терапевтическое и/или профилактическое средство по любому из пп. 1-4, где опухоль представляет собой опухоль с точечной мутацией в RET гене и/или белке.

7. Терапевтическое и/или профилактическое средство против опухоли, используемое для пациента с мутацией в RET, и против метастазов опухоли, которое содержит соединение, представленное формулой (I), его соль или его сольват в качестве активного ингредиента:

где R₁ представляет собой C_1-6 алкильную группу.

8. Терапевтическое и/или профилактическое средство по п. 7, где опухоль представляет собой рак щитовидной железы или рак легкого.

9. Терапевтическое и/или профилактическое средство по п. 7 или 8, где пациент представляет собой пациента с гибридным геном, образованным между RET геном и другим геном, и/или гибридным белком, образованным между RET белком и другим белком.

10. Терапевтическое и/или профилактическое средство по п. 7 или 8, где пациент представляет собой пациента с точечной мутацией в RET гене и/или белке.

11. Терапевтическое и/или профилактическое средство по любому из пп. 1-4, где R¹ представляет собой этил.

12. Терапевтическое и/или профилактическое средство по пп. 7 или 8, где R¹ представляет собой этил.

13. Терапевтическое и/или профилактическое средство по любому из пп. 1-4, где соединение представляет собой гидрохлорид.

14. Терапевтическое и/или профилактическое средство по пп. 7 или 8, где соединение представляет собой гидрохлорид.

15. Способ идентификации рака или пациента, реагирующего на лечение соединением формулы (I), его солью или его сольватом

где R₁ представляет собой C_1-6 алкильную группу,

который включает следующие стадии:

определение присутствия мутации в RET в образце, полученном от пациента;

предоставление информации о присутствии мутации в RET в образце и

определение, что рак или пациент реагирует на лечение соединением формулы (I), его солью или его сольватом при условии присутствия мутации в RET в образце.

16. Способ по п. 15, где мутация в RET представляет собой мутацию, которая индуцирует активацию RET тирозиновой киназы.

17. Способ по п. 15 или 16, где мутация в RET представляет собой (a) мутацию в цистеин-обогащенном домене RET тирозиновой киназы, (b) мутацию в тирозинкиназном домене RET тирозиновой киназы или (c) образование гибридного гена RET и/или гибридного белка RET.

18. Способ по п. 15 или 16, где опухоль представляет собой опухоль с гибридным геном RET и/или гибридным белком RET.

19. Способ по п. 15 или 16, где мутация в RET представляет собой (a) мутацию в цистеин-обогащенном домене RET тирозиновой киназы, (b) мутацию в тирозинкиназном домене RET тирозиновой киназы или (c) образование гибридного гена между RET геном и другим геном и/или гибридного белка между RET белком и другим белком.

20. Способ по п. 15 или 16, где мутация в RET приводит к образованию гибридного гена между RET геном и другим геном и/или гибридного белка между RET белком и другим белком.

21. Способ по п. 20, где другой ген и белок представляет собой KIF5B, CCDC6, NCOA4 или TRIM33.

22. Способ по п. 20, где гибридный ген, образованный между RET геном и другим геном, и гибридный белок, образованный между RET белком и другим белком, включают тирозинкиназный домен RET гена или белка и биспиральный домен другого гена или белка.

23. Способ по п. 15 или 16, где мутация в RET представляет собой точечную мутацию.

24. Способ по п. 23, где точечная мутация представляет собой точечную мутацию в цистеин-обогащенном домене или в тирозинкиназном домене RET тирозиновой киназы.

25. Способ по п. 15 или 16, где пациент представляет собой пациента с раком щитовидной железы или раком легкого.

26. Способ по п. 15 или 16, где пациент представляет собой пациента с медуллярным раком щитовидной железы или немелкоклеточным раком легкого.

Группа изобретений относится к способу определения результата реакции агглютинации, а также к микропланшету и устройству, используемым при осуществлении указанного способа.

Способ днк-диагностики врожденной формы катаракты (ctrct18) // 2648464

Изобретение относится к области медицины, в частности к медицинской генетике и офтальмологии, и предназначено для ДНК-диагностики врожденной формы катаракты. Из периферической крови выделяют ДНК.

Гистологический блокер // 2648427

Изобретение относится к лабораторному оборудованию, гистологической технике и может использоваться в медицинских клинических лабораториях, биологической, паразитологической лаборатории, прозекторских и в научных целях в научно-исследовательских лабораториях.

Способы идентификации антител с пониженной иммуногенностью // 2648141

Представленные изобретения касаются варианта исходного антитела против TNF-α или исходного связывающего фрагмента антитела против TNF-α, молекулы нуклеиновой кислоты, клетки-хозяина, фармацевтической композиции и способа лечения.

Способ диагностики степени тяжести атаки у пациентов с язвенным колитом // 2647838

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики степени тяжести атаки у пациентов с язвенным колитом (ЯК), отличающийся тем, что рассчитывают степень тяжести атаки по формуле:СТА=-0,815-0,034*ФНО-α+0,018*СРБ+0,016*СОЭ+0,155*α2-ГЛ-0,01*АЛ,где СТА - степень тяжести атаки язвенного колита; ФНО-α - фактор некроза опухоли альфа сыворотки крови, пг/мл; СРБ - С-реактивный белок в сыворотке крови, мг/л; СОЭ - скорость оседания эритроцитов, мм/час; α2-ГЛ - α2-глобулины сыворотки крови, %; АЛ - альбумин сыворотки крови, г/л; и при значении СТА в интервале от 0 до 0,5 определяют отсутствие атаки или ремиссию заболевания, значение СТА в интервале от 0,5 до 1,2 соответствует легкой степени тяжести атаки ЯК, значение СТА в интервале от 1,2 до 2,2 соответствует умеренной тяжести атаки ЯК, при СТА более 2,2 следует говорить о тяжелой атаке ЯК.

Способ неинвазивной диагностики состояния и организации внутриклеточного хроматина в gv-ооците млекопитающих // 2647832

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ неинвазивной диагностики состояния и организации внутриклеточного хроматина в GV-ооците млекопитающих.

Способ окраски и дифференцировки микроорганизмов // 2647474

Изобретение относится к области микробиологии, а именно к способам окраски и дифференцировки микроорганизмов. Предложен способ окраски и дифференцировки микроорганизмов, при котором в качестве основного красителя используют 4-дневную настойку плодов черноплодной рябины на 90% этиловом спирте с добавлением 2-2.5 г медного купороса на 40 мл раствора, для докрашивания применяют 1% раствор эозина, при этом бактериологические мазки, фиксированные над пламенем спиртовки, окрашивают новым красителем на основе экстракта плодов черноплодной рябины в течение 4,5-5 мин, смывают 2 раза 96% спиртом, наносят 96% спирт на 20 с, промывают водой и окрашивают 1% эозином в течение 1 мин, затем промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой.

Способ диагностики метастазов рака толстой кишки // 2647470

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для диагностики метастазов рака толстой кишки. Из тканевых проб толстой кишки выделяют тотальную ДНК.

Способ определения содержания витамина к1 в продуктах растительного происхождения // 2647451

Изобретение относится к способам количественного определения биологически активных веществ в растительном сырье и получаемых на его основе продуктах питания, а именно к способу определения содержания витамина К1 в продуктах растительного происхождения, и может быть использовано в химической, фармацевтической и пищевой отраслях, медицине, в том числе гигиене питания.

Комбинированный способ гистохимического выявления дезоксирибонуклеопротеинов, полисахаридов и углеводных компонентов биополимеров в полутонких срезах тканей и органов // 2647420

Изобретение относится к области экспериментальной медицины и биологии, в частности к гистологическим исследованиям, и предназначено для микроскопических исследований полутонких срезов органов и тканей, залитых в смесь эпона и аралдита.

Способ днк-диагностики врожденной формы катаракты (ctrct18) // 2648464

Объект кукурузы mon 87411 // 2648155

Изобретение относится к области биохимии, в частности к молекуле рекомбинантной ДНК, указывающей на присутствие трансгенного события, где показательный образец семени, содержащего указанное трансгенное событие, депонирован в ATCC как РТА-12669.

Объект кукурузы mon 87411 // 2648155

Способ диагностики метастазов рака толстой кишки // 2647470

Способ прогнозирования результативности программы экстракорпорального оплодотворения // 2646822

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, гинекологии, репродуктологии и иммунологии, и предназначено для прогнозирования результативности программы экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).

Способ выявления наследственной предрасположенности к развитию задержки роста плода у курящих женщин // 2646505

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству и гинекологии. Предложен способ выявления наследственной предрасположенности к развитию задержки роста плода у курящих женщин.

Способ определения наследственной предрасположенности человека к спортивной деятельности и оценки рисков для здоровья // 2646479

Изобретение относится к области спортивной медицины и предназначено для определения наследственной предрасположенности человека к спортивной деятельности. Осуществляют забор биологического материала, выделение ДНК, генотипирование по локусам ACE, PPPARGC1A, PPARGC1B, PPARG2, PPARA, PPARD, VDR, CALCR, VEGFA, GNB3, NOS3, AGT 704, AGT 521, IL6.

Способ получения 2,4-дигидроксибутирата // 2645260

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен способ получения 2,4-дигидроксибутирата (2,4-ДГБ) из гомосерина, включающий два этапа: 1) замещение первичной аминогруппы гомосерина карбонильной группой для получения 2-оксо-4-гидроксибутирата (ОГБ), и 2) восстановление полученного ОГБ до 2,4-ДГБ.