Штамм о n 2311/забайкальский/2016 вируса ящура aphtae epizooticae типа о для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа о



Штамм о n 2311/забайкальский/2016 вируса ящура aphtae epizooticae типа о для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа о
Штамм о n 2311/забайкальский/2016 вируса ящура aphtae epizooticae типа о для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа о
Штамм о n 2311/забайкальский/2016 вируса ящура aphtae epizooticae типа о для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа о
Штамм о n 2311/забайкальский/2016 вируса ящура aphtae epizooticae типа о для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа о
Штамм о n 2311/забайкальский/2016 вируса ящура aphtae epizooticae типа о для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа о
Штамм о n 2311/забайкальский/2016 вируса ящура aphtae epizooticae типа о для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа о
Штамм о n 2311/забайкальский/2016 вируса ящура aphtae epizooticae типа о для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа о
Штамм о n 2311/забайкальский/2016 вируса ящура aphtae epizooticae типа о для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа о
Штамм о n 2311/забайкальский/2016 вируса ящура aphtae epizooticae типа о для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа о
Штамм о n 2311/забайкальский/2016 вируса ящура aphtae epizooticae типа о для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа о
G01N2333/09 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2658608:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") (RU)

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается нового штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа О сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, депонированного в коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером штамм ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 (производственный), (контрольный КРС - К-КРС), (контрольный свиной - К-СВ). Представленный штамм репродуцируется в монослойной культуре клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), почки свиньи (IBRS-2) и почки сирийского хомячка (ВНК - 21). При высокой множественности заражения (1-10 ТЦД/клетка) вызывает ЦПД через 5 часов, сохраняя исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 3 пассажей. Представленный штамм может быть использован для контроля антигенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О. 4 з.п. ф-лы, 7 табл., 1 ил., 5 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин, а также при разработке и изготовлении средств диагностики и специфической профилактики ящура типа О.

Ящур - это острое, контагиозное, вирусное заболевание парнокопытных животных, проявляющееся лихорадкой, везикулярными (афтозными) поражениями слизистой оболочки ротовой полости, бесшерстных участков кожи головы, вымени, венчика, межкопытной щели и сопровождающееся нарушением движения [1].

Ящур относится к особо опасным трансграничным заболеваниям животных и подлежит обязательной нотификации. Для этого возбудителя характерна тенденция к широкому распространению и эпизоотическому течению. Болезнь сопровождается большими потерями животноводческой продукции, затрудняет коммерческие операции и хозяйственную деятельность [2].

Вирус ящура относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus. Он имеет 7 антигенных типов, большое количество подтипов и множество штаммов [1, 3, 4].

Возбудитель ящура обладает значительной антигенной изменчивостью штаммов в пределах одного серотипа, которая выявляется в различные временные промежутки и на разных территориях и зависит от видового состава восприимчивого поголовья, его иммунного статуса и множества других различных факторов. Антигенная изменчивость вируса ящура обусловлена заменами аминокислот в полипептидных фрагментах (антигенных эпитопах), экспонированных на поверхности капсидных белков. Изменения, которые сохраняются в последующем поколении, становятся постоянными и отражаются в модификации нуклеотидной последовательности генома вируса.

Сдвиги антигенного спектра, соответствующие обновлению структуры нового полевого изолята, могут варьировать от незначительных, улавливаемых моноклональными антителами, до существенных, регистрируемых с помощью традиционных поликлональных иммуноглобулинов. Изменение антигенных свойств природного изолята с большой вероятностью вызывают ослабление специфического иммунитета, индуцированного негомологичным антигеном. При этом затрудняется штаммоспецифическая диагностика полученных изолятов вируса ящура. Проблема отбора и подготовка новых производственных штаммов вируса ящура является одной из главных в системе мер профилактики ящура.

В результате возникает необходимость создания новых средств диагностики и специфической иммунопрофилактики.

Известны штаммы вируса ящура типа О, использовавшиеся в качестве производственных на территории России в течение последних 50 лет. К ним относятся следующие штаммы: O1 №1618 Чечено-Ингушский, выделенный в 1966 году; O1 №194, выделенный в 1957 году в Волгоградской области. Указанные штаммы использовались для получения диагностикумов и противоящурных вакцин, применявшихся в различных регионах страны, в настоящее время поддерживаются в коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ».

Известен штамм типа О №1734/Приморский/2000, выделенный 13.04.2000 г. от свиней в ОПХ «Степное» с. Элитное Уссурийского района Приморского края [5, 6].

Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм О №1734/Приморский/2000 принадлежит к Паназиатской генетической линии вируса ящура типа О. Паназиатский вирус вызвал пандемию ящура в 1999-2000 годах в большинстве стран Азии, в том числе во Вьетнаме, Японии, Корее, Монголии, а также Армении и Грузии [4]. Опустошительная эпизоотия ящура в Великобритании в 2001 г. также была вызвана паназиатским вирусом. Исследуемый вирус имеет наиболее высокий уровень гомологии (98,74%) с изолятами О Вьетнам/99 и О Тайвань/99. Производственный штамм №1734 О/Приморский-2000- ДЕП используется в Российской Федерации в качестве производственного при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики, применяемых на всей территории России и в странах-членах СНГ.

Известны штаммы О/Тайвань 3/97, О №2222/Тайвань/2012 генетической линии Cathay. В настоящее время вирус ящура данной генетической линии регистрируется на территории Юго-Восточной Азии.

В 2010 г. в Японии, Южной Корее, Гонконге и континентальном Китае вспышки ящура типа О были вызваны вирусом топотипа Юго-Восточная Азия, относящимся к генетической линии Муа-98 [2].

Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма О №2147/Приморский/2012, был выделен в марте 2012 года от больного крупного рогатого скота в селе Усачевка Хорольского района Приморского края. Данный производственный штамм принадлежит к топотипу Средний Восток-Южная Азия генетической линии О PanAsia.

В мае 2014 г. была зарегистрирована вспышка ящура генетической линии Муа-98 на территории ООО «Мерси Трейд», деревня Прохоры Спасского района Приморского края в буферной зоне РФ. Изолят вируса ящура, выделенный от больных животных, послужил источником производственного штамма О №2212/Приморский/2014.

В 2015-2016 гг. широкое распространение в мире получил вирус ящура типа O/ME-SA/Ind-2001d. Вирус ящура данной генетической линии был зарегистрирован в Саудовской Аравии, Объединенных Арабских Эмиратах, Иране, Непале, Таиланде, Турции, Армении.

В ноябре-декабре 2016 г. вспышки ящура были зарегистрированы в противоящурной буферной зоне Российской Федерации на территории СП «Молодежнинское» Приаргунского района Забайкальского края, где из имевшихся 322 голов КРС разного возраста заболело 172 головы.

По результатам сравнительного анализа нуклеотидных последовательностей выделенный изолят вируса ящура принадлежит к генетической линии Ind-2001 вируса ящура типа О, который значительно отличается от производственного штамма вируса ящура типа О, применяемого для вакцинации в противоящурной буферной зоне РФ.

Следует отметить, что вирус ящура генетической линии О Ind-2001 был выделен на территории Российской Федерации впервые.

В связи с этим возникла необходимость получить новый производственный штамм из эпизоотического изолята вируса ящура серотипа О для обеспечения безопасности территории Российской Федерации и сопредельных государств от этого возбудителя.

Проблема, на решение которой направлено настоящее изобретение, заключается в расширении арсенала производственных штаммов вируса ящура серотипа О, обладающих высокой инфекционной, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и сохраняющих антигенную и иммуногенную активность после инактивации, пригодных для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин, изготовления чувствительных и высокоспецифичных диагностикумов и высокоиммуногенных вакцинных препаратов, гомологичных эпизоотическому вирусу, появившемуся на территории России в 2016 г.

Указанная проблема решена путем получения штамма ВЯ О №2311/Забайкальский/ 2016 для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О.

Изолят вируса ящура, послуживший источником для получения штамма ВЯ О №2311/Забайкальский/2016, был выделен в декабре 2016 года от больных ящуром КРС, находящихся на территории падь «Широкая», сельского поселения «Молодежнинское» Приаргунского района Забайкальского края (экспертиза №2311). Производственный штамм ВЯ О №2311/3абайкальский/2016 получен путем последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток.

Штамм ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 депонирован 08 августа 2017 года в Коллекцию штаммов микроорганизмов Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), под регистрационным номером: штамм ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 (производственный), (контрольный КРС - К-КРС), (контрольный свиной - К-СВ).

Экспериментально подтверждена возможность использования штамма ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 для изготовления средств диагностики и профилактики ящура типа О.

Сущность изобретения пояснена на графическом изображении. Представлена дендрограмма, отражающая филогенетические взаимоотношения штамма ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса ящура серологического типа О. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP1.

Сущность изобретения пояснена следующими перечнями последовательностей:

SEQ ID NO:1 представляет последовательность нуклеотидов гена белка VP1 штамма ВЯ О №2311/Забайкальский/2016;

SEQ ID NO: 2 представляет последовательность аминокислот гена белка VP1 штамма ВЯ О №2311/Забайкальский/2016.

Штамм О №2311/Забайкальский/2016 характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки:

Штамм ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus, серотипу О и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.

Антигенные свойства

По своим антигенным свойствам штамм ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 относится к серотипу О. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотке крови образуются специфические антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН).

Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура гена VP1 штамма ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 и выведена первичная структура белка VP1. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 принадлежит к генетической линии Ind-2001 топотипа Ближний Восток-Южная Азия.

Антигенное родство штамма ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 с производственными штаммами вируса ящура O1 Manisa, О №1734/Приморский/2000, О PanAsia2, О/Тайвань 3/97, О №2222/Тайвань/2012, О №2102/Забайкальский/2010, О №2147/Приморский/2012 и О №2212/Приморский/2014 изучено в РМН.

Результаты исследований в РМН представлены в таблице 1. Антигенное соответствие (r1) составило для O1 Manisa - 0,41; О PanAsia2 - 0,85; О №2102/Забайкальский/2010 - 0,44; О №2147/Приморский/2012 - 0,47; О/Тайвань 3/97 - 0,07; О №2222/Тайвань/2012 - 0,12 и О №2212/Приморский/2014 - 0,33.

При значении r1>0,3 полевой изолят и производственный штамм являются родственными, при значении r1<0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма.

Биотехнологические характеристики

Штамм ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 репродуцируется в первичной монослойной культуре клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток: почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), почки свиньи (IB-RS-2), почки сирийского хомячка (ВНК-21). В течение 18-24 часов инкубирования урожай вируса в указанных культурах клеток достигает значений от 5,78 до 6,45 lg ТЦД50/см3. При высокой множественности заражения (1-5 ТЦД/клетка) вызывает ЦПД через 5 часов. Сохраняет исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 3 пассажей (срок наблюдения).

Гено- и хемотаксономическая характеристики

Штамм ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 вируса ящура типа О является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 7×106 Д.

Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×106 Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Липопротеидная оболочка отсутствует.

Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (VР66а) является РНК-, зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.

Физические свойства

Масса вириона составляет 8,4×10-18 г. Коэффициент седиментации 146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,45 г/см3.

Устойчивость к внешним факторам

Штамм ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и другим органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при рН 7,4-7,6. Сдвиги рН как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, высоким температурам.

Дополнительные признаки и свойства

Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.

Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок.

Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.

Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 3 пассажей на перевиваемой культуре клеток IBRS-2 (срок наблюдения).

При испытании было проведено 3 последовательных пассажа штамма ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 в перевиваемой культуре клеток IBRS-2. Для определения биологической активности проводили титрование вируса каждого пассажа в перевиваемой культуре клеток IBRS-2.

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.

Пример 1

Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма О ВЯ О №2311/Забайкальский/2016, был выделен в ФГБУ «ВНИИЗЖ» из проб афтозного патологического материала, полученных в ноябре 2016 года от подозреваемых в заболевании ящуром КРС (падь «Широкая» сельского поселения «Молодежнинское» Приаргунского района Забайкальского края (экспертиза №2311). Пробы афтозного материала от КРС поступили в ФГБУ «ВНИИЗЖ» 30 ноября 2016 года.

При выделении вируса с целью получения его однородной популяции, обладающей оптимальными биотехнологическими свойствами, использовали комплекс биологических, вирусологических и биохимических методов, предусмотренных методическими указаниями по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура [7].

Биологические и вирусологические методы включали в себя выделение и адаптацию вируса ящура.

Выделение вируса проводили на культуре первично трипсинизированных клеток СП, перевиваемых линиях клеток ПСГК-30, IB-RS-2, ВНК - 21 с последующей адаптацией (3 пассажа). Для постановки биопроб на первичных и перевиваемых культурах клеток их выращивали на соответствующих питательных средах, в стационарных условиях во флаконах с площадью поверхности 25 см2, отмывали от ростовой среды и заражали 10% суспензией афтозного материала (множественность заражения составляла 1-10 ТЦД50 на клетку), приготовленной в растворе Хенкса с 0,5% гидролизата лактальбумина (ГЛА) и антибиотиками по стандартной рецептуре. Для удаления микрофлоры и балластных клеточных компонентов суспензию предварительно обрабатывали 10% раствором хлороформа. После 30-минутного контакта при 37°С во флаконы вносили по 5 см3 поддерживающей среды и инкубировали при 37°С до появления ЦПД культур клеток. При наличии ЦПД (округление клеток, повышение их оптической плотности, дегенерация и отделение клеток от стекла) флаконы подвергали замораживанию-оттаиванию, очистке клеточной взвеси хлороформом и центрифугированию при 3000 g в течение 15 мин. Полученный вируссодержащий материал использовали для последующих пассажей и исследования в РСК и ИФА на наличие вирусного антигена, при этом использовали коммерческие типоспецифические сыворотки, хранящиеся в музее штаммов ФГБУ «ВНИИЗЖ» и «Набор для выявления антигена вируса ящура в ИФА», изготовленный ФГБУ «ВНИИЗЖ». Вирус считался адаптированным к культурам клеток, если в течение 18-24 часов проявлялось 90-100% ЦПД в монослое клеточных культур.

Адаптация эпизоотического изолята О №2311/Забайкальский/2016 к различным клеточным линиям наступала на уровне 3 пассажей. Результаты адаптации вируса к различным клеточным культурам представлены в таблице 2.

Данные, приведенные в таблице 2, свидетельствуют о высокой адаптационной способности штамма ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 к использованным клеточным культурам.

Вирусный препарат был исследован в реакции РСК с целью идентификации его типовой принадлежности (таблица 3).

Проведена проверка штамма на стерильность, отсутствие контаминации бактериальной, грибной микрофлорой и микоплазмами, а также посторонними вирусами в ГГЦР и ОТ-ПЦР.

Приведенные в таблице 3 результаты свидетельствуют о том, что в афтозном материале экспертизы №2311 выявлен антиген вируса ящура типа О в разведении 1:4 в РСК.

Контаминация бактериальной и грибной микрофлорой, микоплазмами и посторонними вирусами отсутствует.

Пример 2.

Проведена оценка биологических свойств штамма ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 при репродукции в перевиваемой суспензионной клеточной линии ВНК-21/2-17.

Штамм ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 репродуцировали в суспензионной перевиваемой культуре клеток из почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/2-17. В качестве поддерживающей среды использовали раствор Эрла без внесения сыворотки, с добавлением ферментативного гидролизата мышц сухого (ФГМС), гидролизата белков крови сухого (ГБКС) и антибиотиков при рН среды 7,4-7,6. Клеточную линию заражали вирусом из расчета 0,002-0,06 ТЦД50/клетка.

Культивирование вируса осуществляли при температуре 35-37°С. Цитопатическое действие вируса, соответствующее 90-95%, достигалось через 15,95±0,86 ч. После этого репродукцию вируса ящура прекращали, полученную суспензию контролировали на стерильность и содержание 146S и 75S компонентов. Концентрация 146S+75S компонентов вируса ящура в суспензии должна составлять не менее 0,5 мкг/см3. Значения титра инфекционной активности вируса, а также концентрации общего вируспецифичного белка и иммуногенных компонентов штамма ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 отражены в таблице 4, из данных которой видно, что при средней концентрации клеток ВНК-21/2-17, равной 3,22±0,26 млн клеток/см3, дозе заражения 0,002-0,06 ТЦД50/клетка и продолжительности репродукции вируса 15,95±0,86 ч титр инфекционной активности возбудителя ящура находился в диапазоне 6,50-8,00 lg ТЦД50/см3 (среднее значение - 7,25±0,61 lg ТЦД50/см3), концентрация общего вирусного белка составляла 2,54±0,19 мкг/см3, содержание 146S+75S компонентов - 1,67±0,54 мкг/см3 (75,97±1,50%).

Пример 3.

Для получения сывороток ящурных типо- и штаммоспецифических для серологических реакций используют антиген из штамма ВЯ О №2311/Забайкальский/2016, репродуцированный в монослойной культуре клеток ПСГК-30. Вируссодержащую суспензию концентрируют в 100 раз добавлением 8-10% полиэтиленгликоля (ПЭГ) м.м. 6000, очищают от балластных примесей добавлением 10% хлороформа. Очищенный вирус инактивируют аминоэтилэтиленимином (АЭЭИ) в концентрации 0,025-0,05% при значении рН 8,0-8,3.

Инактивированный концентрат антигена в смеси с равным объемом масляного адъюванта типа неполного адъюванта Фрейнда вводят морским свинкам в объеме 1,0 см3 внутримышечно. Через 21 и 7 дней иммунизацию повторяют и через 10 дней после последнего введения антигена животных обескровливают. Индивидуальные пробы сыворотки крови проверяют на типовую специфичность и активность в РСК в соответствии с методическими рекомендациями по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура [7].

После этого готовят серию штаммоспецифической сыворотки путем смешивания типоспецифических индивидуальных проб сыворотки одинаковой активности. Штаммовую специфичность серийного препарата определяют в одно- и двусторонних реакциях с гомо- и гетерологичными антигенами.

После консервирования азидом натрия (1:5000) и выдерживания при температуре 4°С в течение 30 дней полученную сыворотку фасуют во флаконы по 0,5-1,0 см3 и высушивают методом сублимации под вакуумом.

Способом, описанным в примере 3, была приготовлена 1 серия сыворотки ящурной типо- и штаммоспецифической для серологических реакций, характеристика которой представлена в таблице 5.

Данные, приведенные в таблице 5, свидетельствуют о том, что получена диагностическая сыворотка, по специфической активности отвечающая требованиям ГОСТ 25384.

Пример 4

Для получения антигена ящурного штаммоспецифического для серологических реакций используют штамм ВЯ О №2311/Забайкальский/2016, адаптированный к культуре клеток перевиваемых линий IB-RS-2. Для адаптации используют вируссодержащий материал в виде 10% афтозной суспензии. Пассирование проводят в течение 3-5 последовательных пассажей. Полученный вирус используют для наработки вирусного сырья. Заражение клеточной культуры и сбор вирусного материала проводят по общепринятой методике.

Полученную вируссодержащую суспензию концентрируют в 100 раз добавлением (%) 8-10 ПЭГ. Полученный концентрат инактивируют АЭЭИ, фасуют во флаконы и высушивают методом сублимации под вакуумом.

Указанным способом была приготовлена 1 серия антигена ящурного штаммоспецифического для серологических реакций, характеристики которой приведены в таблице 6.

Результаты исследований, приведенные в таблице 6, свидетельствуют, что получены диагностические антигены, специфическая активность которых соответствует требованиям ГОСТ 25384.

Пример 5.

Проведена оценка иммуногенной и протективной активности инактивированной эмульсионной вакцины из штамма ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 вируса ящура.

Контроль иммуногенной и протективной активности вакцины инактивированной эмульсионной из штамма ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 осуществляли следующим образом. Для проверки иммуногенной активности препарата использовали 17 голов КРС массой 200÷250 кг, доставленных из благополучных по ящуру зон. Первой группе животных из 5 голов КРС ввели вакцину внутримышечно в цельном виде. Второй группе животных из 5 голов КРС ввели внутримышечно разведение вакцины на фосфатно-буферном растворе в соотношении 1:4 и третьей группе из 5 голов в разведении 1:16. Четвертая группа из 2 голов осталась без вакцинации.

Объем прививной дозы составил 2,0 см3. На 21 день после вакцинации у 15 вакцинированных и 2 контрольных голов КРС взяли пробы крови и провели контрольное заражение животных введением под слизистую языка суспензии вируса ящура типа О №2311/Забайкальский/2016 в дозе 104,0 ИД50/0,2 см3.

Результаты испытания вакцины инактивированной эмульсионной, против ящура типа О из штамма ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 на КРС представлены в таблице 7.

Антигенную активность вакцины контролировали по уровню вируснейтрализующих антител в сыворотке крови в РН на монослое первично трипсинизированной культуры клеток СП. На 21 день после вакцинации уровень вируснейтрализующих антител в РН у КРС, привитых цельной вакциной, составил 6,80±0,33 log2.

Через 7 дней после заражения провели патологоанатомическое исследование КРС. Заболели 2 контрольных животных, 1 животное, привитое разведением вакцины 1:16.

ИмД50 вакцины составила 0,09 см3. Прививная доза вакцины содержала 22,0 ПД50 в прививном объеме 2,0 см3, что свидетельствует об эффективности препарата. Такая вакцина считается иммуногенной и пригодной для практического применения.

Источники информации

1. Бурдов А.Н., Дудников А.И., Малярец П.В. и др. Ящур. / Под ред. А.Н. Бурдова. - М., Агропромиздат, 1990, 320 с.

2. Southeast Asian Foot-and-Mouth Disease Viruses in Eastern Asia / N.J. Knowles, J.J. He, Y. Shang [et al.] // Emerg Infect Dis. - 2012. - V. 18(3): P. 499-501.

3. Рёрер X. Ящур. Пер. с нем. Г.А. Сурковой. / Под ред. и с предисл. канд. вет. наук. П.В. Малярца. - М.: Колос, 1971, 432 с.

4. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В. и др. Вирусные болезни животных. - М., ВНИИТИБП, 1998, С. 532-548.

5. Иммунобиологические свойства эпизоотического штамма вируса ящура типа О №1734 «Приморский-2000» / В.К. Спирин, А.И. Егорова, С.Р. Кременчугская [и др.] // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2007. - Т. 5. - С. 52-57.

6. Пат. РФ №2204599, C12N 7/00, А61К 39/135, 20.05.2003 г.

7. Методические указания по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура / Гусев А.А., Захаров В.М., Шажко Ж.А. [и др.]. Владимир, 2002, 31 с.

1. Штамм вируса ящура Aphtae epizooticae типа О, сем. Picornaviridae, род Aphtovirus, депонированный в коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером штамм ВЯ О №2311/Забайкальский/2016 (производственный), (контрольный КРС - К-КРС), (контрольный свиной - К-СВ) для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О, характеризующийся тем, что он получен в течение последовательного пассирования в культурах клеток гомологичного и гетерологичного происхождения, обладает высокой биологической активностью в нативном виде и сохраняет высокую антигенную и иммуногенную активность после инактивации.

2. Штамм по п. 1, характеризующийся тем, что он получен в течение 3 последовательных пассажей в первично трипсинизированной культуре клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30) с титром инфекционной активности не менее 6,45±0,25 lg ТЦД50/см3 и антигенной активностью в реакции связывания комплемента (РСК) 1:4.

3. Штамм по п. 1, характеризующийся тем, что он получен в течение 3 последовательных пассажей в перевиваемой культуре клеток свиной почки (СП) с титром инфекционной активности не менее 5,78±0,25 lg ТЦД50/см3 и антигенной активностью в реакции связывания комплемента (РСК) 1:2.

4. Штамм по п. 1, характеризующийся тем, что он получен в течение 3 последовательных пассажей в перевиваемой культуре клеток почки свиньи (IB-RS-2) с титром инфекционной активности не менее 6,3±0,25 lg ТЦД50/см3 и антигенной активностью в реакции связывания комплемента (РСК) 1:4.

5. Штамм по п. 2, характеризующийся тем, что он получен в течение 3 последовательных пассажей в перевиваемой культуре клеток почки сирийского хомячка (ВНК-21) с титром инфекционной активности не менее 6,0±0,25 lg ТЦД50/см3 и антигенной активностью в реакции связывания комплемента (РСК) 1:4.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к биотехнологии и медицине. Предложены способы прогнозирования ответа субъекта-человека, страдающего, предположительно страдающего раком эндометрия, или с риском развития рака эндометрия, на терапию, включающую ленватиниб или его фармацевтически приемлемую соль (варианты).

Изобретение относится к нагревательному устройству для прибора для измерения методом спектрометрии. Данное нагревательное устройство отличается тем, что оно выполнено в виде мягкого оптического элемента (1), который включает в себя мягкую гибкую опору (10) с верхней стороной (10a) и нижней стороной (10b).
Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики миелодиспластического синдрома. В мононуклеарных фракциях клеток пациентов определяют экспрессию VEGF-A, VEGFR1 и VEGFR2.

Изобретение относится к области медицины и биологии. Способ выявления у детей ранних нарушений физиологической функции сердца в условиях контаминации фенолом включает отбор пробы крови у ребенка и определение в пробе содержания фенола, отбор пробы буккального эпителия и осуществление выделения из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), генотипирование полиморфизма генов MTHFR и SULTIAI, исследование генотипов гена MTHFR С677Т (rs1801133) и гена SULTIAI G2663A (rs9282861), при одновременном выполнении следующих условий: наличие вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена MTHFR С677Т (rs1801133) и гена SULTIAI G2663A (rs9282861), и при превышении концентрации фенола в крови выше фонового уровня более чем в 1,5 раза, диагностируют у ребенка наличие ранних нарушений физиологической функции сердца в виде функциональной кардиопатии, связанной с контаминацией фенолом.
Изобретение относится к иммунологии, вирусологии, биотехнологии и лабораторной диагностике в медицине и может быть использовано для диагностики параметров врожденного иммунитета и при различных заболеваниях инфекционной (вирусной, бактериальной, грибковой) и неинфекционной (аллергической, аутоиммунной, онкологической) этиологии.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования наличия хромосомных аномалий в эмбрионах удовлетворительного и плохого качества в программе экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу детекции комплекса Mycobacterium tuberculosis. Способ детекции комплекса Mycobacterium tuberculosis, включает иммунологический анализ специфического для комплекса Mycobacterium tuberculosis белка, где внеклеточную секрецию указанного белка осуществляют посредством термической обработки биологического образца, содержащего комплекс Mycobacterium tuberculosis, при 45-50°C в течение от 15 до 60 минут.

Изобретение относится к химии, в частности к контролю качества воды, содержащей органические примеси. Способ заключается в использовании трех емкостей, в первую и вторую помещают исследуемый водный раствор, а в третью емкость помещают контрольный водный раствор, не содержащий органических примесей, во вторую и третью емкости добавляют сульфат меди или сульфат железа и раствор иодида калия, определяют количество выделившегося йода на основании предварительно построенной градуировочной зависимости между содержанием йода в системе и оптической плотностью, измеренной при длине волны 285 нм в кюветах с длиной оптического пути 50 мм.

Изобретение относится к областям судебной экспертизы и наноструктур, а именно, к выявлению невидимых либо слабовидимых следов пальцев рук, оставленных на различных следовоспринимающих поверхностях на основе ультрадисперсного наноматериала, при проведении идентификации личности человека.

Изобретение относится к области измерительной техники и может быть использовано для измерения содержания жиров в жидкости. В настоящем изобретении предлагается способ определения присутствия жиров в телесной жидкости путем фотографирования капли телесной жидкости и расчета изменения площади контакта капли телесной жидкости и коэффициента диффузии площади контакта.

Группа изобретений относится к биотехнологии и медицине. Предложены способы прогнозирования ответа субъекта-человека, страдающего, предположительно страдающего раком эндометрия, или с риском развития рака эндометрия, на терапию, включающую ленватиниб или его фармацевтически приемлемую соль (варианты).

Изобретение относится к устройствам сканирования возбуждаемого лазерным источником излучения спектра флуоресценции поверхности объекта исследований и представления результата в виде изображений в видимом и ИК-диапазонах.

Группа изобретений относится к области биотехнологии, в частности к области биосенсоров с металлическими наночастицами в качестве системы передачи сигнала. Биосенсор для визуального детектирования аналита включает распознающую молекулу, способную распознавать целевой аналит, иммобилизованную на теплочувствительной поверхности, и металлическую наночастицу, характеризующуюся полосой поверхностного плазмонного резонанса, функционализированную второй распознающей молекулой, способной распознавать целевой аналит или другие распознающие молекулы.

Изобретение относится к специальному оборудованию, предназначенному для обучения студентов вузов и колледжей техническим дисциплинам. Лабораторная установка обратного осмоса и химического обессоливания включает стол с горизонтальной и вертикальной установочными поверхностями, на которых размещены питательный насос 1 с водонапорной магистралью, накопительный бак 5, механический фильтр 2, соединительные патрубки, задвижки отбора пробы и запорную арматуру.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики миелодиспластического синдрома. В мононуклеарных фракциях клеток пациентов определяют экспрессию VEGF-A, VEGFR1 и VEGFR2.

Группа изобретений относится к области медицины, а также к аналитической и органической химии. Тест-система для экспрессного определения аутоиммунных антител к тиреоглобулину человека содержит фосфатный буфер и суспензионную композицию полимерных микросфер со средним размером от 1,0 до 5,0 мкм из поли(2-метил-5-винилпиридина), у которых к карбоксиметильным группам, связанным с поверхностью микросфер через атом азота пиридина, ковалентно присоединены молекулы тиреоглобулина.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования частоты обострений при хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ). Используют результаты теста с оценкой расстояния, пройденного пациентом за 6 минут, проводят оценку по шкалам влияния, симптомов и активности, рассчитывают количество выкуриваемых пачек сигарет в год, устанавливают факт курения на момент обследования, осуществляют орофарингеальный мазок с задней стенки глотки с выделением ДНК и секвенированием по V3-V4 участкам бактериального гена 16S рРНК определяют количество операционных таксономических единиц семейства Propionibacteriaceae, семейства Acidaminobacteraceae, рода Bradyrhizobium, рода Treponema, рода Ruminococcus, вида Rothia mucilaginosa, вида Brevundimonas diminuta, вида Pseudomonas viridiflava, вида Acinetobacter schindleri, рода Sphingopyxis alaskensis.

Изобретение относится к нейробиологии и медицине и может быть использовано при изучении парасимпатической и симпатической иннервации разных органов и тканей в норме и при патологии.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования наличия хромосомных аномалий в эмбрионах удовлетворительного и плохого качества в программе экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).

Лабораторная автоматизированная система содержит пару конвейерных лент (4), вмещающих устройства (5) для транспортировки биологических образцов и приводимых в действие моторизованным тяговым устройством (100), которое включает в себя первый и второй двигатели (111а, 111b).

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен штамм бактерий Streptococcus pyogenes, обладающий способностью продуцировать вещества, в том числе комплекс ферментов и других белков, обладающих высокими иммуностимулирующими свойствами.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается нового штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа О сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, депонированного в коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером штамм ВЯ О №2311Забайкальский2016,,. Представленный штамм репродуцируется в монослойной культуре клеток почки свиньи, перевиваемых культурах клеток почки сибирского горного козерога, почки свиньи и почки сирийского хомячка. При высокой множественности заражения вызывает ЦПД через 5 часов, сохраняя исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 3 пассажей. Представленный штамм может быть использован для контроля антигенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О. 4 з.п. ф-лы, 7 табл., 1 ил., 5 пр.

Наверх