Способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов



Способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов
Способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов
G01N1/30 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2665171:

Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия" (ФГБОУ ВО НГСХА) (RU)

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к лабораторным методам исследования. Изобретение представляет собой способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов, включающий фиксацию эритроцитов глутаровым альдегидом, отличающийся тем, что для оценки присутствия фосфатидилсерина эритроциты фиксируют глутаровым альдегидом в течение 30 минут, затем один раз отмывают забуференным физиологическим раствором с pH 7.4, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 минут, добавляют хлористый лантан до финальной концентрации 20 мкМ, перемешивают и по появлению агрегатов судят о присутствии фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов. Изобретение обеспечивает сокращение временных затрат на проведение анализа при сохранении его информативности. 2 ил., 2 пр.

 

Предлагаемое изобретение относится к биологии и медицине, а именно к лабораторным методам исследования, и может использоваться для оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.

Известно, что в эритроцитах фосфолипиды расположены асимметрично. Фосфатидилхолин и сфингомиелин локализованы на внешней половине липидного бислоя, фосфатидилэтаноламин на внешней и внутренней половине мембраны. Отрицательно заряженный фосфолипид фосфатидилсерин локализован исключительно на внутренней стороне липидного бислоя (Zwaal R.F.A., Schroit A.J. Blood. 1997. Vol. 89. P. 1121-1132). Выход фосфатидилсерина на поверхность мембран клеток крови при многих патологических состояниях ускоряет свертывание крови, приводит к тромботическим состояниям (Zwaal R.F.A, Comfurius P., Bevers E.V. Cell. Mol. Life Sci. 2005. Vol. 62. P. 971-988.).

Известен способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов, который включает добавление к эритроцитам флюоресцентного белка аннексина V и последующее измерение флюоресценции с помощью проточного цитофлюориметра (Kuypers F.A., Lewis R.A., Hua М. et al. Blood. 1996. Vol. 87. P. 1179-1183).

Однако для этого требуется дорогостоящее дефицитное оборудование (проточный цитофлюориметр) и дорогие дефицитные реактивы.

В качестве прототипа выбран способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов (Шереметьев Ю.А., Успенский А.Н., Шевченко Е.А., Еремин С.П. Способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов. Патент RU 2547573. 2015), который включает фиксацию эритроцитов глутаровым альдегидом, помещение их на предметное стекло, обработанное хлористым лантаном. После перемешивания по появлению агрегатов судят о присутствии фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.

Однако этот способ требует длительного времени. Это заключается в предварительном приготовлении стекол, обработанных хлористым лантаном и трехкратном отмывании эритроцитов дистиллированной водой. Кроме того, фиксация эритроцитов происходит в растворе глутарового альдегида в течение 60 минут.

Задача предлагаемого изобретения - совершенствование способа.

Технический результат - сокращение времени оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.

Технический результат достигается за счет того, что в способе, включающем фиксацию эритроцитов с помощью раствора глутарового альдегида в течение 30 минут, их однократное отмывание забуференным физиологическим раствором, к клеткам добавляют хлористый лантан в финальной концентрации 20 мкМ и наблюдают за появлением агрегатов. По появлению агрегатов эритроцитов судят о присутствии фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.

Способ осуществляется следующим образом. Эритроциты фиксируют в 0.25% растворе глутарового альдегида, приготовленного на фосфатном буфере, в течение 30 минут при комнатной температуре. После фиксации эритроциты один раз отмывают забуференным физиологическим раствором (10 мМ трис-HCI, 150 мМ NaCI, рН 74) с последующим центрифугированием при 3000 об/мин в течение 5 минут. К 0.9 мл 0.5% суспензии фиксированных эритроцитов в забуференном физиологическом растворе добавляют 0.1 мл хлористого лантана в финальной концентрации 20 мкМ, перемешивают и наблюдают с помощью светового микроскопа за образованием агрегатов клеток. Появление агрегатов свидетельствует о присутствии фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.

Известно, что инкубация отмытых эритроцитов при 37°C в течение 48 ч в присутствии кальция приводит к развитию эриптоза, на поверхности мембран появляется большое количество фосфатидилсерина (Klarl В.A. et al. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2006. Vol. 290. C. 244-253).

Пример 1. К 0.9 мл 0.5% суспензии фиксированных нормальных эритроцитов добавляли 0.1 мл хлористого лантана до финальной концентрации 20 мкМ, перемешивали и наблюдали с помощью светового микроскопа. Наблюдается отсутствие агрегатов эритроцитов (рис. 1). На поверхности мембран эритроцитов фосфатидилсерин отсутствует (рис. 1).

Пример 2. К 0.9 мл 0.5% суспензии фиксированных эритроцитов, которые предварительно инкубировали в присутствии 1 мМ кальция при 37°C в течение 48 ч, добавляли 0.1 мл хлористого лантана до финальной концентрации 20 мкМ, перемешивают и наблюдают с помощью светового микроскопа. Наблюдаются агрегаты эритроцитов (рис. 2). На поверхности мембран эритроцитов присутствует фосфатидилсерин.

Проведенные эксперименты показывают возможности применения способа оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов и его преимущества перед прототипом (сокращается время определения с 120 до 40 мин).

Способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов, включающий фиксацию эритроцитов глутаровым альдегидом, отличающийся тем, что для оценки присутствия фосфатидилсерина эритроциты фиксируют глутаровым альдегидом в течение 30 минут, затем один раз отмывают забуференным физиологическим раствором с pH 7.4, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 минут, добавляют хлористый лантан до финальной концентрации 20 мкМ, перемешивают и по появлению агрегатов судят о присутствии фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к анализу биологических материалов и измерению характеристик крови в живом организме, в частности к определению группы крови и резус-фактора.

Изобретение относится к медицине и, в частности, к акушерству и позволяет определить прогноз родоразрешения беременных с рубцом на матке. Осуществляют прогноз родоразрешения беременных с рубцом на матке по формуле p=1/(1+2,718-582,96+1,216×1000×ИР-44,07×TCMP), где р - искомая величина; ИР - индекс резистентности; ТСМР - толщина стенки матки в области рубца.

Изобретение относится к области иммунодиагностики и может быть использовано для иммунодиагностического тестирования биологического образца. Карта иммунодиагностического тестирования включает плоскую подложку и множество содержащихся на ней прозрачных колонок с инертным тестовым материалом, выполненным с возможностью формирования реакции агглютинации при добавлении биологического образца и реагента.

Группа изобретений относится к лабораторной диагностике и может быть использована для проведения анализов, основанных на реакции агглютинации частиц. Аналитический наконечник (100), предназначенный для выполнения визуально детектируемой реакции агглютинации после всасывания в него реактивов и образца, включает: первое отверстие (110) для приложения отрицательного или положительного давления к внутреннему объему аналитического наконечника; камеру для образца (120); по меньшей мере, одну боковую камеру (130), которая расположена по периметру камеры для образца; камеру детектирования (150), находящуюся в жидкостной связи с камерой для образца; переходную зону (140) между камерой детектирования и камерой для образца для вращательного перемешивания образца; второе отверстие (160) для всасывания реактивов и образца во внутренний объем аналитического наконечника или для удаления их оттуда.
Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использован для прогнозирования иммунного ответа доноров на вакцину клещевого энцефалита. .

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано для диагностики злокачественных опухолевых заболеваний. .
Изобретение относится к медицине, в частности к судебной медицине, дерматологии и генетике. .

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано в диагностике нарушений сперматогенеза различной этиологии, включая идиопатическое бесплодие.

Изобретение относится к аналитической химии и касается способов определения ионов хрома (III) и железа (III) в растворе при совместном присутствии. Способ определения концентрации ионов хрома (III) и железа (III) при совместном присутствии в растворе включает добавление к анализируемому раствору, содержащему ионы хрома (III) и железа (III), 4 мл раствора трилона Б (концентрацией 80 г/л), нагревание полученной смеси на кипящей водяной бане в течение 10 мин, охлаждение смеси до комнатной температуры, добавление к охлажденной смеси 0,5 мл водного раствора аммиака, доведение дистиллированной водой до 25 мл, определение оптической плотности раствора и вычисление концентрации ионов по калибровочным зависимостям, при этом измерение оптической плотности производят при 660 нм для ионов хрома (III) и при 315 нм для ионов железа (III).

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и предназначено для прогнозирования скорости прогрессии глаукомной оптической нейропатии. В слезной жидкости определяют концентрации ММР-9 и TIMP-1 методом иммуноферментного анализа и затем рассчитывают величину их отношения.

Изобретение относится к области автоматизации отбора проб высокоабразивных жидкотекучих промпродуктов в трубах, желобах, сосудах и других потоках горно-обогатительных, химико-металлургических и других производств.

Группа изобретений относится к устройству и системе для контроля потока вещества. Устройство содержит первый и второй источники света, предназначенные для излучения первого и второго луча света; первый и второй детекторы; первый сканирующий элемент, приспособленный для перенаправления зоны детектирования второго детектора от одной стороны до другой поперек указанного потока, и светоделительный элемент, предназначенный для приема указанных первого и второго лучей света после их отражения от указанного вещества, причем указанный светоделительный элемент приспособлен для направления указанного отраженного первого луча света в сторону указанного первого детектора и для направления указанного отраженного второго луча света в сторону указанного второго детектора.

Устройство подвижки относится к точной механике и может быть использовано для перемещения образцов по двум или трем координатам, например, в зондовой микроскопии. Сущность изобретения заключается в том, что в устройстве подвижки каретка 10 упруго сопряжена с переходным элементом 9 по координате Z, перпендикулярной плоскости координат X, Y.

Изобретение относится к газоотборному зонду и способу его эксплуатации. Предложен способ эксплуатации газоотборного зонда (1), в котором анализируемый газ в зоне переднего конца (1а) газоотборной трубки (2) отбирается из технологической камеры (17) и направляется по газоотборной трубке к заднему концу (lb).

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к фотометрическому методу анализа, и может быть использовано для определения содержания железа (III) в растворах чистых солей, содержащих железо (III) в очень малой концентрации.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ и устройство для экстракции биомолекул.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики мутантного аллеля, вызывающего короткий позвоночник или брахиспину у крупного рогатого скота.

Изобретение относится к металлургии, в частности к области анализа и определения водорода в алюминиевых сплавах. Предложен способ определения содержания водорода в алюминиевых сплавах, включающий отбор расплава, его последующую кристаллизацию сразу в двух подогреваемых тиглях: один под атмосферным давлением, а другой под низким давлением, и измерение разности плотностей полученных слитков. Во время кристаллизации расплава на образец в тигле под низким давлением воздействуют ультразвуком, а образец в тигле под атмосферным давлением подвергают прессованию в пруток с вытяжкой не менее 5 и по полученной разности плотностей образцов определяют содержание водорода. Технический результат – повышение точности при определении содержания водорода в алюминиевом расплаве.

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к лабораторным методам исследования. Изобретение представляет собой способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов, включающий фиксацию эритроцитов глутаровым альдегидом, отличающийся тем, что для оценки присутствия фосфатидилсерина эритроциты фиксируют глутаровым альдегидом в течение 30 минут, затем один раз отмывают забуференным физиологическим раствором с pH 7.4, центрифугируют при 3000 обмин в течение 5 минут, добавляют хлористый лантан до финальной концентрации 20 мкМ, перемешивают и по появлению агрегатов судят о присутствии фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов. Изобретение обеспечивает сокращение временных затрат на проведение анализа при сохранении его информативности. 2 ил., 2 пр.

Наверх