4(5) карбэтоксиимидазолил-5(4)-амид @ -[п-ди-(2-хлорэтил) аминофенил]масляной кислоты, обладающий противоопухолевой активностью

 

4

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУ &ЛИК,,SU„„ 522ß A

» (51) 4 С 07 D 233 /58, А Ь1 К 3)/415

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСИОЬИ/ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ностью»

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

flQ ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯ)4

ПРИ ГКНТ CCCP (21) 2101439/23-04 .(22) 28.01.75 (46) 30.07.89. Бюл. ¹ 28 (71) Новокузнецкий научно-исследо-. вательский химико-фармацевтический институт (72) Р.Н. Гирева, Г.А. Алешина, Л.Ф. Мальцева и Г.П. Муратова (53) 547.781.785(088.8) Изобретение относится к новым химическим соединениям, конкретно к производному имидазола и 1- — 1п-.ди-(2-хлорэтил)-аминофенил) -масляной кислоты формулы

- ГМНСОСИ2СН2СН i Mi

СН2СН2С1, К Соос Н, И

4(5)-Карбэтоксиимидазолил-5 j4 )-амид †-ди-(2-хлорэтил)-аминофенил1-масляной кислоты является биологически активным соединением. Он может, быть использован как лекарственный препарат противоопухолевого действия.

Предлагаемое в качестве изобретения новое химическое соединение является структурной модификацией применяемого в клинике противоопухолевого препарата хлорбутина (54) 4 (5) -КАРБЭТОКСИИМИДАЗОЛИЛ-5 (4) .

-АМИД J" - 1П-ДИ- (2-ХЛОР ЭТИЛ) -АМИНОФЕНИЛ)-МАСЛЯНОЙ КИСЛОТЫ, ОБЛАДАЮЩИЙ

ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ (57) 4 (5) -Кафбэтоксиимидаэолил-5 (4)- амид J" — 1 п-ди- (2-хлорэтил) -аминофенил) -масляной кислоты формулы

NHCO CH2CH2CH2 i М"

СН2СН2С1СН2СН2С1

ЛООС 2н, Н обладающий противоо@ухолевЩ акт (вЯ

-(л-Ли-(2-хлорэтил)-аминофанил 1-мас.ляной кислоты формулы

СН 20Н 01.

НООС вЂ” СЫ2СН2СН2 М, 0Н CH2С1

В качестве аналогов можно рассматривать также следующие химические соединения, обладающие противоопухолевой активностью:

4(5)-карбэтоксиимидазолил-5(4)—

"амид п-ди-(2-хлорэтил)-аминофенилуксусной кислоты формулы

СН2СК2С1

- жсосн / ж

СН2СНЯС1

1 СООС2 5

4 (5) -карбопропокси,имидаэолил-5 (4)-амид п-дн-(2-хлорэтил)-аминофенилуксусной кислоты формулы

СН2СН С1

МНСОСН2 i Ы

СП2СНгс1

20

4 (5)-Карбэтоксиимидазолил-S (4 )-амид 1 -1п-ди-(2-хлорэтил )- амико" фенил) -масляной кислоты получают т ацилированием этилового эфира 4(5)-амино-, имидазол-5(4)-карбоновой кислоты хлор- гидратом хлорангидрида k -fè-ди-(2-хлорэтил)"аминофенил)-масляной кислоты в с е е р д бензола в присутствии триэтиламина.

0 0

II p H M e p. К суспензии 3 1 г (,02 моль) этилового эфира 4(5)-аминоимидазол-5(4)-карбоновой кислоты и 7,2 r (0,0206 моль) хлорангидри. да P --(п-ди-(2-хлорэтил)-аминофенил)-масляной кислоты в 300 мл без- 35 водного бензола при температуре не

) выше 5 С прибавляют по каплям 10,8 мл (0,08 моль) триэтиламина, нагревают до кипения и кипятят 1 ч. Горячую реакционную массу фильтруют от осад- "40 ка хлоргидрата триэтиламина и бензольный фильтрат упаривают досуха на роторном испарителе . Остаток . по" следовательно обрабатывают разбавленной соляной кислотой (1:1), раз- 45 бавленным раствором соды, промывают водой и сушат на воздухе. Выход неочищенного продукта с т.пл. 129-131 С

5,8 г (65,8X) ° Чистый продукт получают двукратной кристаллизацией из спирта. Бесцветные пластинки с т.пл. р

133-134 С, выход 3,0 r (34,0Ж),Растворим в спирте, ацетоне, бензоле, нерастворим в воде, эфире. При хранении на воздухе медленно гидролизуется.;5

Найдено, 7.: С 54,44, Н 5,92, CI !5,99, N 12,74.

См Нее С1аХ Оз.

3 52531

Предлагаемое соединение обладает менее выраженным токсическим влиянием на об е щ е число лейкоцитов кро» ви и имеет несколько инои спектр про тивоопухолевой активности, а также оказывает б олее эффективное действие на отдельные штаммы экспериментальных опухолей, например саркому 45 и ССК, по сравнению с хлорбутином, °

Целью изобретения является сйн-, тез нового химического соединения4(5)-карбэтоксиимидазолил-5(4)-амида р — fn-ди-.(2-хлорэтил)-аминофенил — масляной кислоты, которое может найти применен ие в медицинскои практике для лечения злокачественных новообразований.

1 4

Вычислено, X: С 54,42, Н 5 «89

С1 16,10, N 12,70.

4(5)-Карбэтоксйимидазолил-5(4)—

-амид " -tï"äè(2-хлорэтил)-аминофенил.1-масляной кислоты в дозе . 8 мг/

r/êã при: введении внутрь обладает значительным противоопухолевым действием. Индекс торможения при максимальном эффекте составляет, Ж:

Саркома 45 90,4

Карцинома Герена 94

Саркома М-1 67, Саркома ССК 100

Лимфосаркома Плисса 58

Саркома Иенсена 96

Саркома 536 80

Альвеолярный рак печени 55

Асцитная опухоль Эрлиха 63

Саркома 180 69

Саркома НК 68

Саркома АК 40

Судя по химиотерапевтическому индексу., предлагаемое соединение обладает наибольшой избирательностью противоопухолевого действия в отношении саркомы 45 по сравнению с хлорбутином и сарколизином. Предлагаемое соединение может найти применение в медицинской практике для лечения определенных форм злокачественных новообразований и расширить ассортимент противоопухолевых препаратов .

4(5)-Карбэтоксиимидазолил- 5(4)— с- амид — п-ди(2-хлорэтил) -аминофенил -масляной ккслоты для я краткости назван имбутином.

Злияние имбутина на рост экспериментальных опухолей.

Противоопухолевая активность имб утина изучена на 8 перевиваемых опухолях крыс и 4 перевиваемых опухолях мышей. Препарат вводят внутрь в виде взвеси в 1 -ном крахмальном клеистере. Лечение солидных опухолей начинают на 5-8 день после трансплантации (альвеолярного рака печени — на

l4

4 день), за исключением отмеченных ниже опытов. Противоопухолевую активность оценивают по индексу торможения роста опухолей, вычисленному как отношение разности веса опухолей вконтроле и опыте к среднему весу опухолей в контроле (7). Лечение асцитной опухоли Эрлиха начинают на следующий день после перевивки. Прое

5

5253 тивоопухолевую активность оценивают по влиянию на накопление асцитической жидкости и асцитных клеток.

О.токсичности имбутина судят по. изменению веса животных (за вычетом веса опухоли) и веса селезенки в конце опыта. В некоторых опытах подсчитывают общее количество лейкоцитов в крови. 10

Число животных в каждой опытной и контрольной группе составляет б10, в большинстве случаев:8-9.

Все экспериментальные данные стати.стически обработаны путем вычисления 15 средней арифметической и ее стандартной ошибки. Различие между сравниваемыми средними считают статистически значимыми при уровне вероятности р (0,05.

А. Первичное испытание противоопухолевой активности имбутина.

В предварительных опытах на здоровых крысах была изучена токсичность имбутина при однократном введении. 25

Установлено, что ЛД ф для крыс равна 105 мг/кг.

Первичное испытание противоопухолевого действия имбутина проведено на трех штаммах опухолей: асцитная 30 опухоль Эрлиха, саркома 45 и саркома 180.

Результаты показывают (табл.l), что препарат в дозах 5, IO и 20 мг/кг уменьшает накопление асцитической жидкости опухоли Эрлиха на 33-56Х. В этих же опытах имбутин снижает накопление асцитных клеток на 35-48Х. . В дозе 20 мг/кг препарат тормозит рост саркомы 180 на 76Х. 40

Значительное противоопухолевое действие имбутин проявляет в опытах на крысах с саркомой 45. При длительном введении (в течение 15 дней) в дозе 8 мг/кг препарат угнетает рост 45 опухоли на 90,4Х. Во второй серии опытов лечение крыс начинают через

72 ч после перевивки и продолжают в течение 5 дней. Результат оценивают через 10 дней после окончания 50 лечения. В дозах 6, 10 и 12, 8 мкг/кг имбутин вызывает полное рассасывание опухоли. В дозе 12, .8 мг/кг препарат оказывает токсическое действие на организм, снижая вес тела животных, 55 уменьшая вес селезенки и вызывая ги- бель 10Х животных.

Таким образом, при первичном испы-. тании имбутин проявляет выраженную

ll

6 способность тормозить рост опухолей, в связи с чем было проведено расширенное изучение его противоопухолевой активности в сравнении с хлор" бутином . — препаратом группы хлорэтиламинов, применяемым в клинической практике.

Б. Сравнительное изучение противоопухолевой активности имбутина и хлорбутина.

В терапевтических опытах животных делят на три группы. В первой группе вводят имбутин внутрибрюшинно в дозах

8-10 мг/кг, во второй группе — хлорбутин внутрибрюшинно в дозе 3 мг/кг.

Выбранная первоначально доза 5 мг/кг оказалась токсичной и была снижена

Третья группа животных служит контролем для двух первых.

Результаты показывают (табл.2), что имбутин так же, как хлорбутин, имеет широкий спектр противоопухолевого действия. Оба препарата вызывают сильное торможение карциномы

Герена и саркомы Иенсена. При этом отдельные опухоли подвергаются полной регрессии.

Самый высокий эффект достигнут на саркоме ССК. К концу лечения опухоли отсутствовали у всех животных в обеих экспериментальных группах.

Для определения полноты излечения за животными наблюдают в течение двух недель после окончания введения препаратов, через две недели у крысы,получивших имбутин, опухоли не появляются. У крыс, леченных хлорбутином, средний вес опухолей составляет 26,0.

Таким образом, на этом штамме имбутин оказывается более эффективным, чем хлорбутин.

Менее чувствительными к обоим препаратам оказались саркома 45, саркома М-l, саркома 536, лимфосаркома

Плисса и альвеолярный рак печени PC-I .

При сравнении противоопухолевой активности препаратов в отношении перевиваемых опухолей мышей установ/ лено, что имбутин оказывает более сильное влияние .на рост саркомы 180.

Индекс торможения при максимальном эффекте для имбутина 69, для хлорбутина 44Х.

По влиянию на асцитную опухоль

Эрлиха имбутин уступает хлорбутину: индекс торможения соответственно 68 и 84Х.

525311

Саркома НК и саркома AK оказались в одинаковой степени чувствительны к обоим препаратам.

При сравнении токсического дейст- 5 вия препаратов на организм установлено, что имбутин и хлорбутин в оди1 иаковом числе опытов вызывают уменьшение веса селезенки и падение веса тела животных. Однако имбутин оказы- ll0 вает более мягкое воздействие на лейкопоэз. Так, после применения имбутина в дозе 10 мг/кг в крови сохраняется 54 от исходного содержания лейкоцитов. После применения хлорбутина в адекватной по эффективности дозе

3,3 мг/кг в крови определяется лишь

18/.лейкоцитов.

В. Исследование избирательности противоопухолевого действия имбути- 20 на.

Изучение избирательности противоопухолевого действия имбутина проводят в сравнении с двумя препаратами группы хлорэтиламинов — сарколизином и хлорбутином. Противоопухолевую активность и токсичность испытывают в одном комбинированном токсико-терапевтическом опыте на саркоме 45 по методике М.Х . Караивановой (1 971).

Соединение вводят в пяти-шести различных дозах в течение 5 дней, имбутин — внутрь, сарколизин и хлор,бутин — внутрибрюшинно. Лечение начинают через 72.ч после перевивки опухоли. Животных забивают через 1О дней после окончания введения препаратов.

Вычисляют процент гибели животных.

Противоопухолевую активность выражают в процентах торможения роста опухоли.

Применяют пробит — метод для нахождения значения искомых величин: дозы, вызывающей гибель 10 животных (ДЛ», ) и дозы. дающей 90 торможения опухоли (ДТро ). Определяют терапевтиче— ский индекс-ДЛ . ДТ .

Установлено (табл. 3), терапевтический индекс равен у сарколизина

1,76, у хлорбутина 2,22, у имбутина

2,70. Таким образом, имбутин обладает наибольшей избирательностью действия в отношении саркомы 45.

Имбутин обладает высокой противоопухолевой активностью и широким спектром действия. По силе противоопухолевого эффекта сопоставим с таким алкилирующим препаратом, как хлорбутин, но отличается от него по спектру действия. В опытах на саркоме 45 имбутин проявляет большую, избирательность противоопухолевого действия по сравнению с сарколизином и хлорбутином.! о

Таблица 1

525311

Влияние нибуткна на рост перевнвае>е>х опухолей

Дневная доза, иг/кг

Вес опухоли, г (обьем асцктичесхой жидкости) Вес

Индекс

Число селезенки, г зменение веса животных, г введе" иий торможения, Х контроль опыт контроль опыт контроль

Асцитнвя опухоль Эрлиха

5 8

10 8

lS 8

20 8

Саркома 180

20 8

0,45 + 0,04

2,0 1 0,20

0,$ t 0,05

-6,9 t t 00 -4,9 + I 00

0,10 t.0,05

Саркома 45

Таблица 2

Влияние нмбутинв н клорбутина на рост перевиваемых опухолей крыс к мьпаей

Число живот- i

Вариант

Дневная доза, мг/кг

Число

Вес селезенки

Вес опухоли, г Индекс торможе ния, I рирост веса ж»отных введений

2 3 4 $ 6

Саркоиа 45

1,30+ 0,14

0,47 Т 0,007

0,57 t 0,09

i>10 t 0>13

0>61.2 0,22

0,87 т 0>06

4,21 3,8

17,0 t 4,6

6,1 1 5,2

l7,0 т 1,6

2,4 t0,6

1,5»0,6

Контроль

Имбутин

Хлорбутин!

3/12

5/3

20,2 + 3,3

14,5 t 4;7

9,4t4 0

I8,4 t 1,5

2,6 t 0,5

6,9 t 1,0

lO

86

Контроль

Имбутнн

Хлорбутнн

14

Карциноиа Герека

0,98 Ф 0,09

8,54 t 0>05

0,64 Т 0,06

5,01 4,2

-0,5 + 2,3

3/6

13, l t 1, 1

0,78t 0,3

1,14 t 0,5

Контроль l0

Имбутин 10

Хлорбутин lO

94

8

5/3

Саркома И-!

l>61 t 0,22

0,87 t 0,06»

0,86 + 0,07

9,8+ 8,1

4>0 t 5>4

1,8 и 2,6

19,1е 5 ° 6

6,2 t2,2

10,0 х0>7

Контроль

Имбутин

Хлорбутин

67

3/12

5/3

0,96 t 0,13

0,68 4 0,09

0 ° 72 т0,16

-0,7 х 4,7

10,3 + 6,0

5,7 т 4,2

26,5 t 1,2

11,5 1 1,4

I1,7 t l,2 8

57

Контроль

Имбутин

Хлорбутин

Саркома ССК

5/3

1,50t 0,19

0,71 t 0,06

0,85 t 0,07

-13,0 t4,7

6>6т 3,7

18,3 з 2,7

64>0 t 12,2

8

100

Контроль

Имбутин

Хлорбутин

I 1,0 t 5,7

100 47,3 f 4,5

100 35,1 t 7,8

2,50 2 0,27

0,58 + 0,07

l,OI t 0il5»

42,0 1 4,2

8

Контроль

Иибуткн

Хлорбутин

8.

Лимфосаркоиа Плисов

0,67 t О, l I

0,88з 0,12

0,67 t 0,06

l0,4 1,8

-8,6 t 5>3

-8,4 t 4,2

5I,8 t 3,5

21,7 т 2,9

26,8 + 2,9

Контроль l0

Имбутин 10

Хлорбуткн " 10

58

14

0,78 t 0,12

0,48 > 0,04

0,88 Е 0,08

7,8т6,4

17,2t Э ° 3

l l, l t 4 ° 4

28,2 t 4,4

14,2+ 1,6 !

0,7 Е2,1

Контроль 8

Имбутин 9

Хлорбутин 10

49

Э/1 2

5/3

6

l2,8

l5

5

2,6 6 0,40

2,4 т 0,020

1,8 < 0,30

l,7 » 0,20

1,6+ 0,36

0

3,9 tO 50 . 3,9 10,50

3,9 4 0,50

3,9 t 0,50

17,0 1 1,60.

10,4+ 0,9

10,4t 0,9

20,8 t 0,08

33

36

53

90,4

100

-2,7

-3,2

-0,3

-2>2

-6,0

21,4

l9,4

20,4

t 0,73

t. 1,10

+ O>65 т 1,00 т1>40

t l1,3

4 9,35

+ 5,97

-3, 2 е 0,73

-3,! t 0,73

-Э,l i 0,73

-3,1 + 0,73

4,2 т 3,8

25,5 t 2,9

25,5 1 2,9

40,8 1 6,6

0,16 80,02

0,20 4 0,03

О, IS+ 0,02

0,17+ 0,02

0,55t 0,08

I,II + 0>07 I,00 4 0,06

0,06 t 0 004

0,22 t 0,02

0,22 t 0,02

0,22 е 0,02

0,22 t 0,02

1,30 4 0,14

1,29 t 0,07

1,29 0,07

1,!5 t 0,07!

5253ll

Ородолкение табл. 2! Т

5 6

Контроль

Имбутин

Хлорбутнн

40,8 Т &, I

l,48 t 0,5

2>16+ 0,9

-0,7+ l >2

-5,1 t 6,9

IO>l Т Э,I 96

8

5/3

23,4 Т I 0

18,2 Т 2,0

18,6 t 5,1

20,8 t 4,7

ll,6 t 2,6

Контроль

Инбутин

Хлорбутнн

67

Саркома 536

16,2 t 1,4

3>2 Т 0,5

l,2 t O>3

IO

IO

10.Контроль

Имбутин

Хлорбутин

2,0i 4,3

-19,3 i 5,2

-28>9+ 5,7

l,l6t О,16

0,66 +- 0>09

0,52 + 0,09

II

Э/12

8

5/3

Контроль

Имбутин

Хлорбутин

l5

23,2+ 8,7

15,0t 7,0

3,0 Т0,8

I 7,8 + 6,7

1,90 t 0,12

0,81+ 0,05

I >10 t 0,19

Альвеолярный рак нечени PC-I

46,2+ 4,1

20,6+ 8,1

23,8 + 8,9

Контроль lO

Имбутин 10

Хлорбутин 10

3i8i 7,8

-3,9 t 6,1

I,S7 t О.Оа

0>88 Т 0,01

0>94 t 0,13

t5

Асцитнан олухоль Эрлиха

Контроль 9

Имбутнн 9

Хлорбутнн 9

2,38 t 0,16

0,83 t 0,28

0,52 Т 0,22

3,5Т 0,5

Э,l iO>3

22,2 Т 0,63

0,24 Т 0,09

0,15t 0,01

0,1Э т 0,05.8

$/Э

2/8

63

Саркома 180

Контроль

Инбутин

Хлорбутин

IO

5,13 Т 0,84

1,57 Т 0,20

3,91 t 0,45

4,2+ 1,8

7,2+ 0,5

0,45 Т 0,08

0,1ОТ 0,02

0,32 t 0,03

69

Хонтроль

Инбутин

Хлорбутин

l0

10 10

4,1 Т 0,61

I,8 t 0,25

2,3 + 0,30

3>3t l>1

3,7 Т0,5

4,1 Т 0,46

0,20 т О,ОЭ

0,21 Т О ° 02

0,20 +0,02

56

8

lO

Саркома НК

Контроль 9

Инбутин 9

Хлорбутнн 9

2,37 + 0,39

0,75 t 0>21

0,67 t 0,17

O,1Т 1,0

2,4 - 0 9

2>3 Т 2,2

0,47 t0,07

Oil2 ТО,OI

0,17 т Oi02

68

13

3/10

5/Э

Саркома АК

2,50 Т 0,58

1,50 + 0>27

l,40 -0,22

Контроль

Имбутин .

Хлорбутин

l,2 т0,7

2,8 т 0,27

2,5 + 1,!

0>40 ь 0>04

0,20 Т O,OI

0,20 + 0,02

IO

l0 а}

Раэличие с контролем статистически достоверно .

Таблица 3

Количественное соотношение между токсичностыо и противоопухолевым действием сарколизина, хлорбутина и имбутина

Химиотерапевтиче ский индекс

ДЛ„, ДТ9oi мг/к r мг/кг

Препарат

9

lO

Сарколизин

Хлорбутин

Имбутин

Э/12

1$

3,3

9,0

l3,5

l,9

4>0

5,0

1., 76

2,22

2,70

1,631 0,14

0,84 < 00,13

0,83 t 0,11

0,96 t 0,07

0,81 t 0,07

0,72 t0,07