Способ получения @ -глицерофосфата,меченого фосфором-32

 

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ'о^-ГЛИ-,ЦЕРОФОСФАТА, МЕЧЕНОГО ФОСФОРОЦ-32, с использованием'с!'^ -изопропилиден-глицерина, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и повьпиения удельной активности целевого продукта, смесь четыреххлористого углерода, о', Р-из о пропил ид енглицерина и пиридина, взятых в мольном соотношении (100-100,13):(О,161- 0,03):0,02, облучают быстрыми нейтронами в течение 7-28 суток.2. Способ по к.1, отличаю- •ц и и с я тем, что облучение проводят на Ро-Ве-источнике быстрых нейтронов интенсивностью 4,0-10 нейтр/с.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„Я0„„671277 (1)4 С 07 F 9/09

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМГУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 2474826/23-04 (22) 11.04.77 (46) 30.09.85. Бюл. 36 (72) Н.И. Габов, А.Я.Миранович, А.Н.Богушевский, В.П.Коробов и В.М.Калюжная (71) Пермский ордена Трудового

Красного Знамени государственный университет им. А.M.Горького (53) 547.26>118.07 (088 ° 8) (54)(57) 1. СПОСОВ ПОЛУЧЕНИЯ Ы-ГЛИ-, ЦЕРОФОСФАТА, 2ЖЧЕНОГО ФОСФОРОЦ-32, с использованиемД.,Р. -изопропилиденглицерина, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и повышения удельной активности целевого продукта, смесь четыреххлористого углерода, a,P-изопрочилиденглицерина и пиридина, взятых в мольном соотношении (100-100,13):(0,1610,03):0,02, облучают быстрыми нейтронами в течение 7-28 суток.

2. Способ по ;.1, о т л и ч а ю— и и с я тем, что облучение проводят на Po-Be-источнике быстрых нейтронов интенсивностью 4,0 .10 нейтр/с.

671277

Изобретение относится к области химии фосфорорганических соединений, а именно к способу получения о -глицерофосфата, меченого фосфором-32, являющегося биологически активным 5 веществом, играющим центральную роль в биосинтезе соединений, ведущих к образованию глицерофосфатидов в клетках эу-и прокариотов.

Известен способ получения а -гли° церофосфата, меченого Аосфором-32 фосфорилированием d 1-изопропилиденглицерина, меченой хлорокисью фосфора в присутствии тщательно измельченной гидроокиси бария и сухого 15 хинолина с последующим нагреванием бариевой соли 2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-метнлфосАорной 2Р кислоты с разбавленной серной кислотой (1g °

Недостатками известного способа 20 получения о -глицерофосфата, меченого фосфором-32, являются: многостадийность синтеза промежуточных меченых продуктов, необходимость использования специальной аппаратуры, позволяю-25 щей проводить все операции процесса беэ.,нарушения герметичности системы, необходимость очистки промежуточных . продуктов.

Известный способ не позволяет 30 получать целевой продукт с высокой удельной активностью, так как она не может быть вьппе удельной активности меченой Н РО кислоты, из которой получен исходныи реагент— хлорокись фосАора, меченая фосфором-32 23.

Целью изобретения является упрощение процесса и повьппение удельной активности целевого продукта.

Поставленная цель достигается описываемым способом получения д -глицерофосфата, меченого фосфором-32, заключающимся в том, что смесь четыреххлористого углерода, d t-йзопропилиденглицерина и пиридина, взятых в мольном соотношении (100100, 13):(О, 161-0,03):0,02, облучают быстрыми нейтронами в течение 7- 50

28 суток.

Отличительным признаком способа является то, что смесь четыреххлорио+ того фосАора,, 1, 1-изопропилиденглицерина и пиридина, взятых в мольном 55 соотношении (100-100, 13):(О, 161-0,03):0,02, облучают быстрыми нейтронами в течение 7-28 суток. г а

Облучение проводят на Po-Be-источнике быстрых нейтронов интенсивностью 4,0 10 " нейтр./с в стеклянных колбах или ампулах при температуре

20+5 С.

Идентификацию, выделение и очистку целевого продукта осуществляют с помощью метода бумажной хроматографии

Средняя энергия быстрых нейтронов на применяемом Po-Be-источнике составляет 4 Мэв.

Предлагаемый способ основан на совмещении реакции получения атомов отдачи Aochopa-32 по ядерному процессу С1(п,d)3 P и химических реакций атомов отдачи P с молекулами системы СС1 -CH>-СН-СН ОН с образова1 I.

0 0

3) нием целевого продукта. Поскольку указанная ядерная реакция протекает с изменением порядкового номера элемента, радиоактивный фосфор получается в состоянии без носителя. Это дает возможность получать конечные препараты Аосфора-32 с удельной активностью, близкой к предельно возможной.

Общая активность целевого продукта, выделенная посредством тонкослойной хроматографии из смеси полученных при облучении мишени меченых фосАором-32 соединений, составляет

5-10 — 2,5.10 расп./мин или 10

5 .10 г по весу.

Выход целевого меченого продукта в абсолютном .измерении в данном случае определяется только его радиоакI тивностью, т. е. количеством распада, в единицу времени.

Чистота и индивидуальность меченого фосАором-32 e(-глицероАосфата подтверждена данными тщательного хроматографического анализа на бумаге.

Пример 1. Смесь 400 r (2,8 ь моль) CCg, 0,33 г (0,0025 г моль) и, I!-иеопропилидеиглицерина и 0,05 r (0,0006 r моль) пиридина в стеклянной колбе облучают на. Po-Be-источнике нейтронов; интенсивностью 4 10 нейтронов/с в течение 7 суток. После облучения основную массу мишени отгоняют под слоем воды досуха при температуре

100-110 С в вакууме 2 мм рт.ст., затем в колбу добавляют каплю соляной кислоты (1: 1) и нагревают с

671277 обратным холодильником в течение

15 мин при температуре 100 С. После гидролиза эфира d,3-изопропилиденглицерина в o(-глицерофосфат актив— ность вносят на хроматограмму из 5 бумаги FN-13 размером 20 350 мм

o(-глицерофосфат, меченый фосфором-32 выделяют из остатка путем хроматографирования либо в системе растворителей: 1-пропанол-аммиак-вода (7:1:2), либо в системе 1-пропанол-трихлоруксусная кислота-вода-ам миак (240 мл : 15 г 60 мл : 1 мл).

Затем хроматограмму протягивают на установке непрерывного радиометри- 15 рования хроматограмм и после проявления путем сравнения хроматограммы с записью потенциометра выявляют место расположения активного о -глицерофосфата, который затем элюируют 20 с соответствующего участка хроматограммы дистиллированной водой.

Получают меченый фосфором-32 о -глицерофосфат в состоянии без носителя. с общей активностью около 25

5 10 имп/мин.

Для проверки надежности идентификации в колбу добавляют каплю

HIO и нагревают с обратным холо- З0 дильником в течение 1 ч. o(-глицерофосфат окисляется иодной кислотой.

После окисления cL-глицерофосфата активность наносят на хроматограмму и хроматографируют в растворителе -С Н„ОН-NH OÍ-Н О (7: 1:2). При по-следующем радиометрировании хроматограммы исчезает пик активности с величиной Rg = 0,55, тем самым подтверждается чистота и индивидуаль- > ность полученного g-глицерофосфата, меченого Аосфором-32.

Радиохимический выход, 7 о(-глицерофо лЛъam

Ъ Ckk

4,5 9,9 11,4

36,0

1. 2,6 (99,95) 0,0006 (0,02) 0,0008 (0,03) 22,9 3,4

4., 2

О, 00 4 2 (О, 16) 0,0006 (0,02) 56,5

2 2,6 (99,82) 1f- ff- Состав мишени r-моль, мол .Ж

СС1 d, ф-изопропи- пиридин лиденглицерин

Пример 2. Для идентиАикации строения целевого продукта биологическими методами осуществляют препаративное получение о -глицерофосфата, меченого АосАором-32. Для этого смесь 3260 r (21. r.ìîëü)

СС1, 0,85 г (0,0065 г- оль) of,Å-и.опропилиденглицерина и 0,4 r (0,005 r моль) пиридина облучают

Po-Be источником нейтронов интенсивностью 4 10 нейтронов/с в течение 28 сут. После отгонки основной массы мишени остаток количественно переносят в микроколбу и отгоняют содержимое при температуре 100-110 С в вакууме досуха. Затем добавляют в колбу 1 мл разбавленной соляной кислоты (1:1) и нагревают в течение

15 мин с обратным холодильником при о температуре 100 С, после чего содержимое колбы выпаривают досуха. Активность смывают со стенок колбы водноацетоновой смесью и наносят на хроматограмму. Хроматографирование производят в растворителе i-С Н OH3 7

-NH OH-H О (7:1:2) и после высуши1 2-вания хроматограммы снимают радиоавтограф. С хроматограммы вырезают участок, соответствующий местонахождению о -глнцерофосфата и элюируют о -глицерофосфат дистиллированной водой. Получают водный раствор а -гли церофосфата, меченого фосфором-32, в состоянии без носителя с общей активностью 3 мккюри.

Аналогично проводят получение

Ы-глицерофосфата, меченого Аосфором-32, при различных соотношениях исходных реагентов. В таблице приведены соотношения реагентов и радиометрический выход меченых фосфо- ром-32 соединений.

HqP207 Нз РО Н 9Р02

671277

Корректор В. Гирняк

Редактор П.Горькова

Техред ц.неце

Заказ 6644/4 Тираж 353 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб, д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Оптимальным соотношением реагентов для получения меченого фосфором-32 .g-глицерофосфата является след "ющее (в г моль): четыреххлористый углерод 2,6, ct, f-изопропилиденглицерин .—

0,0025, пиридин — 0,0006. При этом соотношении выход е(;глнцерофосфата меченого фосфором-32, составляет 59, 57,