Способ получения пуринсодержащих соединений

 

А.ll. Башкович, Л..П. Ширай, Е.Д. Этингов, М.А. Малков, К.Л. Глаэомицкий, И,M. Терешин, Е.А. Федонина, Л.И. Фридман и В.A. Перлин (723 Авторы изобретения (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПУРИНСОДЕРЖАЩИХ

СОЕДИНЕНИЙ

Изобретение относится к медицинской промышленности, а именно производству медицинских препаратов.

Известен способ получения пуринсо держащих соединений путем ферментации штаммоа-продуцентов, отделения био- s массы, извлечения сорбцией с последующей промывкой и десорбцией, упариванием, пропусканием раствора через ионообменный адсорбент, с последующей очисткой (1

1О

Однако известный способ обеспечивает недостаточно высокую степень чис" тоты - 903.

Целью изобретения является повыше- 1 ние чистоты целевого продукта.

Эта цель достигается тем, что пе" ред сорбцией культуральную жидкость обрабатывают сульфатом алюминия, до" водят ее до рН 5,2-5 5, отделяют над- ,ю осадочную жидкость, раствор пропуска" ют через ионообменник, содержащий сульфогруппы, и кристаллизуют. 2

Пример 1. К 50 л культураль-. ной жидкости, содержащей следующие компоненты, г/л: рибоксин 8, гипоксантин 0,2, гуанозин 2,2, с рН 6,0 добавляют 43 по весу от обьема культуральной жидкости алюминия сернокислого для установления значения рН, равного 4,0. Затем значение рН культуральной жидкости доводят до 5,2 с помощью

253-ного раствора натра едкого, культуральную жидкость нагревают до 50 С и отфильтровывают. на фильтр"-прессе.

Биомассу промывают 10 л смягченной воды, которую присоединяют к нативному раствору. Нативный раствор.пропускают через батарею колонн с волокнистым углеродным материалом, скорость пропускания 400 мл/ч .см . Фильтрат нативного раствора, не содержащий пу;ринов, сливают в.трап. Колонны промыварт 5 л смягченной воды для вытеснения нативного раствора. Десорбцию пуринов проводят спиртовоаммиачной смесью (253- ный водный раствор аммиака, 3 67;6i; I

Р ° врут э г сырца сiiII«ченная вода, этиловый спирт . П р » и е 2. Ь.. 00 .96 :-ный, взятые в объемном cooTHolile рибоксина, полученного по способу, ни» 2:3:5, со скоростью 75 мл/ч см описанному в примере 1, содержащего при 40ОС)-. Элюат со средней концент- 804 рибоксина, 5 гипоксантина и 7 рацией пуринов 15 г/л упарйвают под " 5" ryàéîçèíà Сырец растворяют в 5. -вакуумом при температуре греющей во- смягченной воды при 100 С, получают ды не выше 80t до"концентра»ций 120 г/rl;< концентрацию пуринов 96 г/л. Раствор

Полученный концентрат постепенно ох- профильтровывают через угольную полаждают до температуры 5 С и выдержи- душку, разбавляют 60 л воды до конвают при этой температуре 4-6 ч, что 1р центрации 7,4 г/л и пропускают через приводит к кристаллизации пуринов. колонну с сульфокатионитом КУ-23 в

Выпавший осадок отфильтровывают, про» Водородной форме (0,5 Kl сульфокатиомывают от маточника ацетоном. Получен- нита). Профильтрованный через смолу ный сырец содержит рибоксин и гуано- раствор,- подвергшийся двйигментации зин. Вес сырца в пересчете на сухой 15 и содержащий только рибоксин, собирасоставляет 400 г. Осадок сырца- Раст- — ют и после нейтрализации концентрироворяют при нагревании в смягченной ванным раствором аммиака упаривают воде с концентрацией 80 г/л, отфйльт- до концентрации 120 г/л. Проводят ровывают через угольную подушку, раз- .крйсталлизацию, как описано выше, и бавляют водой до концентрации 10 г/л gp получают 362 г чистого рибоксина и полученный раствор npîïóñêàéò через" 993-ной »степени чистоты, что составколонну диаметром 40 мм и "высотой ляет 907 от содержания .его в сырце.

800 мм с волокнистым адсорбейтоЖ, не"= ... сущий сульфогруппы. Предварительйо " р и м е р 3. Берут 10 л культу-. адсорбент переводят в H-форму и отмы- 25 ральной жидкости, содержащей 6 г/л вают водой до значения РН 5,0."Раст- гипоксайтина и 8 г/л рибоксина (иновор после колонны контролируют хрома- зина), добавляют 24 сульфата алюминия тографически на содержание"гуанозина и доводят РН 25л,-ным раствором едкого и рибоксина. По насыщении сорбента .-. " натра до значения 5,5. Культуральную колоннУ отмывают" водой, проводят де- Зв жидкость нагревают до 50 С и биомассу сорбцию сорбированного на адсорбенте отфильтровйвают на фильтр-прессе. В рибоксина. Растворы рибоксийа," не со- полученйый нативный раствор вносят держащие гуанозин, после нейтрализа- 600 г активированного угля, и при пе-" . ции концентрированным раствором амми- " ремешиванйи в течение 30 мин проводят

-ака упаривают до концентрации 120 г/л. адсорбцию. 35

Полученный концентрат нагревают до

95ОС пропускают через угольную подуш- Уголь отфильтРовйваот, пРомывают 1 ку и проводят кристаллизацию, как опи- л смягченнои водои для вытеснения сано выше. Выпавший рибоксин отфильт- нативного раствора, после чего при

poBbleaioT промывают этиловым спиртом пеРемешивании пРоводЯт десоРбцию спиР40 о и высушивают Получают 240 г рибокси= Тоао-аммиачнои смесью ПРи 40 С. злю=.=«:.-::= -;:;на, что составляет 601 содержания его ат Упаривают в тРи Раза до полУчениЯ в. культуральйой жидкости. Степень чи- концентрацйи 80 г/л и nPOBQART крис" стоты препарата 98о :-- -- - — таллизацию, аналогично описанной в предыдущих примерах. Осадок, содержаВолокнистый адсорбент отмывают . 45 щий гипоксантин и рибоксин, отделяют, спиртово-аммиачной элюирующей смесью прбмывают ацетоном и растворяют при и водой и испбльзуют в йоследующих . . нагревании до температуры 40 С в смягоперациях выделения рибоксина., Адсор- ченной воде с концентрацией 6 г/л.. бент, несущий сульфогруппы, после тща- Раствор пропускают через колонку со тельной отмывки рибоксина водой обра- 5О смолой КУ-2-8 в водородной форме батывают раствором 0,1 н соляной кис- (120 г), колонку промывают водой для лоты, проводят таким образом десорб- десорбции рибоксина (инозина), после цию -гуанозина. Полученный элват нейт- чего гипоксантин десорбируют 0,1 н. реализуют концентрйрованным раствором раствором соляной кислоты. Элюат нейаммиака -до значения рн 7,0. Выпавший 55 трализуют концентрированным раствором гуанозин отфильтровывают и перекрис- аммиака и проводят кристаллизацию гиталлизовывают из воды. Получают 40 г поксантина. Осадок отделяют, промыва" гуанозина 964-ной степени чистоты. ют этиловым"спиртом и высушивают, ПоСоставитель

Редактор П. Горькова Техред Q. Неце.

Корректор А, Дэятко

Тираж 714 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 10473/3 филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, ч!

5 6756 1 d лучают 40 г гипоксантина 964-ной сте" 70 г гуаноэина. Степень чистоты рибопени чистоты. ксина 981, гуаноэина 95?.

Растворы, содержащие только рибо- Предлагаемый способ обеспечивает ксин (инозин), упаривают, пропускают выход и качество готового продукта. горячий раствор через угольную подуш- s Чистота целевого продукта повышается ку и проводят кристаллизацию рибокси- на 8- 15 . на. Осадой рибоксина отделяют, промывают этиловым спиртом и высушивают.

Получают 30 r рибоксина (инозина) формула изобретения

97ь-ной степени чистоты. о

Активированный уголь после десорб- Способ получения пуринсодержащих ции промывают водой до нейтрального соединений путем ферментации штаммовзначения,рН и используют в последую- продуцентов, отделения биомассы, из" щих операциях. влечения сорбцией с последующей hpo"

1 мывкой и десорбцией, упариванием, hpoПример 4. В l00 л культураль- пусканием раствора через ионообменный ной жидкости, содержащей 10 г/л рибо- адсорбент с последующей очисткой, о тксина (инозина) и 2,7 г/л гуанозина, л. и ч а ю шийся тем, что, с целью добавляют 63 сульфата алюминия. Пос- повышения чистоты целевого продукта, ле доведения рН 253-ным раствором ед- В перед сорбцией культуральную жидкость кого натра до значения 5,3 культура- обрабатывают сульфатом алюминия, дольную жидкость нагревают до 50 С и - водят ее.до рН 5,2-5,5, отделяют надбиомассу отфильтровывают. Биомассу осадочную жидкость, раствор пропускапромывают 10 л смягченной воды для выл ют через ионообменник, содержащий теснения нативного раствора, и промыв: сульфогруппы и кристаллиэуют. ную воду присоединяют к нативному Источники информации, раствору. Далее проводят выделение принятые во внимание при экспертизе способом, описанным в примере 1. В ре- 1. Авторское свидетельство СССР зультате получают 420 г рибоксина и N 382676, кл. А 61 К 31/33, 1973.