Способ диагностики системной красной волчанки

 

Союз Советскмк

Соцналнстнческнх

Республнк

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

<и>775694

К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к &BT. свид-ву— (22) Заявлено 021078 (21) 2664851/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 301080. Бюллетень ¹ 40

Дата опубликования описания 301080 (51)М Kh 3

G 01 и 33/48

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 616.9 (088.8) (72) Авторы изобретения

Л.А.Исаева, С.Г.Левина и Н.А.Геппе

Первый Московский ордена Ленина и ордена Трудового

Красного Знамени медицинский институт им.И.N.Cå÷åíoâà (71) Заявитель (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СИСТЕМНОЙ KPACHOA

ВОЛЧАНК И

Изобретение относится к области медицины, а именно педиатрии.

Известен способ диагностики системной красной волчанки путем подсчета в крови розеткообраэующих Т и В лимфоцитов j1).

Однако известный способ не позволяет определить степень активности заболевания. 10

Целью изобретения является определение степени активности заболевания.

Эта цель достигается тем, что подсчитывают количество высокоаффинных лимфоцитов, прикрепивших 16 и более эритроцитов,и при величине 2,5 — 5,0% диагностируют минимальную, 5 — 8% умеренную, а 8 — 15% — высокую степень активности системной красной волчанки. 20

Способ осуществляют следующим образом.

Лимфоциты из периферической крови выделяют по известной методике в градиенте фиколл-уротраста. для получе- 25 ния Т-клеток к лимфоцитам добавляют взвесь эритроцитов барана, для получения В-клеток — эритроциты быка, сенсибилизированные антителами и комплементом.Готовят мазки,в которьпе 30 среди розеткообраэующих Т- и В-клеток определяют процент высокоаффинных лимфоцитов, т.е. прикрепивших 16 и более эритроцитов. При наличии последних в количестве менее 5% к общему числу розеткообраэующих клеток диагностируют минимальную степень активности, 5-8% — умеренную и более

8Ъ вЂ” высокую степень активности, что служит основанием для назначения патогенетического лечения. Данный способ дает возможность на основании анализа адгеэивной способности клеток выявлять число функционально активных лимфоцитов в популяции Ти В-клеток.

Пример. Больная Г. поступила в клинику по поводу системной красной волчанки для решения вопроса об активности заболевания и продолжения или отмены лечения. При поступлении отсутствовали выраженные клинические признаки активности заболевания„ отмечены лишь артралгии и умеренные явления миокардита. Данные, полученные при предварительном обследовании противоречивы: умеренно ускоренная РОЭ, наличие ЛЕ-клеток, высокий антинуклеарный фактор свидетель775694

Среди 100 розеткообразовавших

Т- и В-клеток определяют число высокоаффинных лимфоцитов с 16 и более прикрепившимися эритроцитами.

Количественное определение Т- и

В-клеток у больной показало незначительное снижение Т-клеток до 50% (при норме 56,7 2,4%) и повышение

В-клеток до ЗЗЪ (при норме 16,1+

0,8Ъ). Число высокоаффинных лимфоцитов в мазках среди Т-клеток составило 10%, среди В-клеток — 16%.

Эти данные свидетельствуют о том, что у больной, несмотря на отсутствие выраженных клинических признаков заболевания, в крови имеется большое число активированных форм Т- и В-клеток, что указывает на высокую степень активности процесса. Полученные данные послужили основанием для повышения дозы преднизолона. Улучшение состояния больной сопровождалось исчезновением высокоаффинных лимфоцитов среди Т-клеток и снижением их среди В-клеток до 6%.

Аналогичные исследования проведены в динамике у 37 больных системной красной волчанкой. 60 больных обследованы известными способами.

При исследовании больных предлагаемым способом частота правильного определения активности заболевания у больных составляет 78+3,2

82,2+4,6Ъ, что значительно выше, чем при использовании известного способа (от 30,2 до 69%) р < 0,05.

Предлагаемый способ определения активности системной красной волчанки позволяет выявить степень активности, не определяемую известным способом, полученные с помощью метода объективные данные повышают надежность диагностики степени активности и правильность назначения соответствующего лечения.

Формула изобретения

Способ диагностики системной красной волчанки путем подсчета в крови розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов, отличающийся тем, что, с целью определения степени активности заболевания, подсчитывают количество высокоаффинных лимфоцитов, прикрепивших 16 и более эритроцитов, и при величине 2,5 — 5,0Ъ диагностируют минимальную, 5 — 8% — умеренную, а 8 — 15% — высокую степень активности системной красной волчанки.

Источники информации, принятые во. внимание при экспертизе

1. Чередеев A.Н. Методы клеточной и гуморальной иммунологии у человека, МР)Х, 1975, Р 10(обзор Р 1315 (прототип).

Тираж 1019 Подписное ствуют об активности процесса, однако, отсутствуют антитела к ДНК, характерные для высокой степени активности,и комплект, который снижает. ся при активности процесса, имеет у больной нормальное значение.

Для установления истинной активности процесса в крови определяют количество Т- и В-клеток и процент высокоаффинных лимфоцитов в Т- и В-популяции. Лимфоциты из 3 мл периферической крови выделяют в градиенте фиколл-уротраста. Окончательную концентрацию клеток доводят до 2х10 кл/мл. ь

Для определения T-клеток к 0,1 мл взвеси лимфоцитов добавляют 0,5Ъ-ную взвесь эритроцитов барана, трижды 15 отмытых в физрастворе. Смесь инкуби руют 5 мин при 37С и центрифугируют

5 мин при 750 об/мин.Клетки фиксируют добавлением 0,05 мл О,ЗЪ-ного раствора глютаральдегида, отмывают дистил-20 лированной водой и центрифугируют

5 мин при 750 об/мин. Удаляют основную массу надосадочной жидкости,осадок разбивают пипеткой и наслаивают на предметное стекло. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют 5 мин в метаноле и окрашивают по Бранше.

Для определения В-клеток готовят эритроциты быка, предварительно сенсибилизированные кроличьими антителами и комплементом мыаи. К 2,5%-ной звеси эритроцитов быка добавляют равный объем кроличьей антисыворотки к эритроцитам быка в субагглютинирующем разведении. Сыворотку берут у кролика на 7-й день после иммунизации его;

10 мл 10%-ной взвеси эритроцитов быка. Смесь инкубируют 30 — 45 мин при

37 С. Затем эритроциты, сенсибилизированные антителами, дважды отмывают и и центрифугируют по 5 мин при 750 — 4О

1200 об/мин. К осадку добавляют 2 мл среды Р 199 и 2 мл комплемента в разведении 1:10.. Смесь инкубируют 30

45 мин при 37 С. Источником комплемента служит сыворотка мыши. Кровь из аорты 3 мышей сворачивалась в термостате 20 мин, затем ее выдерживают в холодильнике 15 мин и 2 раза центрифугируют. После инкубации обработанные антителами и комплементом эритро- gO циты быка трехкратно отмывают средой

Р 199 па 7 — 10 мин при 1000 об/мин.

Из полученных эритроцитов готовят

0,5Ъ-ную взвесь. K 0,1 мл лимфоцитов добавляют 0,1 мл 0,5%-ную взвесь эрМ роцитов быка и центрифугируют 5 мин при 750 об/мин. После фиксации клеток

О,ЗЪ-ным раствором глютаральдегида готовят маЙки, также как и для Т-клеток.

Число Т- и В-клеток определяют подподсчетом розеткообразовавших кле- Щ ток на 200-300 лимфоцитов в препарате. За розетку принимают лимфоцит с

3 и более прикре:.ившкмися эритроцитами. . :;11!""..ПИ Заказ 7736 60

Б.л.! a л i IIIII Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4