Карола Йованович, Дьердь Фекете, Эстер Дежери, Лайош Данчн, Чаба Леринч, Бела Сарвади, Дьердь Добо, Чаба Сантаи и Лайош Сабо (BHP) (72) Авторы изобретения

Иностранное предприятие

"Рихтер Гедеон Ведьесети Дьяр РТ" (ВНР) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛКАЛОИДОВ-ЛЕИРОЗИНА, ВИНКРИСТИНА,BHHBJIACTHHA,ÄÅÇAÖÅTOÊÑÈÂÈHÂËÀÑTÈÍA, N-ДЕЗМЕТИЛВИНБЛАСТИНА,ДЕЗАЦЕТИЛВИНБЛАСТИНА )

ВИНДОЛИНА, КАТАРАНТИНА, 3,4 -АНГИДРОВИНБЛАСТИНА

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения алкалондов вЂ” лейрозина, винкристина, винбластина, дезацетоксивинбластина, Н-дезметилвинбластина, дезацетилвин- 5

Г бластина, виндолина, катарантина и 3, 4 -ангидровинбластина, обладающих фармакологической активностью.

Известен способ получения алкалоидов вЂ” винбластина, винкристина и вин- 10 лейрозина, заключающийся в том, что растение Vlnca rosea 1 .экстрагируют водным метанолом, к экстракту после отгонки метанола добавляют разбавленный водный раствор неорганической 15 кислоты до рН 4-5, образующиеся при этом соли алкалоидов подвергают хроматографическому разделению на окиси алюминия с использованием в качестве зтцоента смеси бензола с хлорофор- 0 мом. Выход алкалоидов составляет 0,10,2 г .в расчете на 1 кг высушенных лйстьев (1) .

Недостатком этого способа является относительно невысокий выход целе-25 вого продукта.

Цель изобретения вЂ” повышение выхода целевого продукта.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения 30 алкалоидов-лейрозина, винкристина, винбластина, дезацетоксинбластина, N-дезметилвинбластина, дезацетилвинбластина, виндолина, катарантина и

3, 4 - ангидровинбластина, заключающемуся в том, что высушенные части растения VInca rosea 1.. экстраги-. руют смесью метанола с разбавленным водным раствором кис. оты и бензолом или его гомологом, устанавливают рН водной фазы 8,5-9, экстрагируют бензолом или его гомологом, остаток после упаривания органического растворителя обрабатывают спиртовым раствором серной кислоты, осадок сульфатов лейрозина, винкристина, винбластина, дезацетоксивинбластина, N-дезметилвинбластина, дезацетилвинбластина разделяют известным способом, а маточный раствор, полученный после отделения сернокислых солей экстрагируют при рН 5,5-10 бензолом или его гомологом, с последующим хроматографическим выделением из экстракта виндолина, катарантина, 3,4

-ангидровинбластина и лейрознна или из этого маточного раствора экстрагируют бензолом или его гомологом при рН 2,5-3,5 внндолин, при рН 56 вЂ” катарантин, 3, 4 вЂ” айгидровин867313 бластин и лейрозин, которые подвер= гают хроматографическому разделению или иэ этой смеси путем кристаллизации отделяют смесь лейрозина и 3, 4 -ангидровинбластина и подвергают ее или после выделения 3, 4 вЂ” ангидровинбластин эпоксидированию, а затем из полученного после отделения кристаллического продукта маточного раствора выделяют катарантин.

Отличительными признаками способа являются использование для экстракции 1О смеси метанола с разбавленным водным раствором кислоты и бензолом или его гомологом, экстракция водной фазы при рН 8,5-9 бензолом или его гомологом, обработка остатка после упаривания растворителя спиртовым раствором серной кислоты экстракция маточного раствора после отделения сернокислых солей лейрозина, винкристина, винбластина, дезацетоксивинбластина, N-дезметилвинбластина, дезацетилвинбластина при рй 5,5-10 бензолом или его гомологом с последующим хроматографическим выделением из экстракта виндолина, катарентина, 3, 4 вЂ” ангидровинбластина и лейрозина или

25 экстракция маточного раствора бензолом или его гомологом при рН 2,53,5 виндолина, при рН 5-б-катарантина, 3,4 -ангидровинбластина и лейрозина, которые подвергают хроматог- ЗО рафическому разделению или из этой смеси путем кристаллизации отделяют смесь лейрозина и 3, 4 - ангидровинбластина и подвергают эпоксидированию ее или 3, 4 - ангидровинбластин пос- ЗЗ ле выделения,а из полученного после отделения кристаллического продукта маточного раствора выделяют катарантин .

Этим способом можно из 1 кг высушенных листьев получить примерно 0,4-0,5 г 4g лейрозина, 0,4 r катараитина и 0,8 r виндолина. Предпочтительно используют 2-ЗЪ-ный водный раствор серной или винной кислот с бензолом или толуолом. Если для экстракции приме- 45 няют двухфазную, содержащую наряду с водно-спиртовой фазой также бензол, или его гомологи,смесь,то после окончания экстракции оргайическую фазу отделяют, встряхивают с разбавленным водным раствором кислоты (чтобы перевести все алкалоиды в водную кислую фазу) и объединяют водную кислую фазу с полученной ранее водно-спиртовой фазой. Если же при экстракции из измельченных, высушенных листьев

55 бензольная фаза не используется, то целесообразно подвергнуть водно-спиртовой экстракт экстракции органическими растворителями, предпочтительно бензолом, с тем, чтобы очистить его QQ от хлорофилла и других органических окрашивающих веществ. Эпоксидирование целесообразно осуществлять с помощью органических гидроперекисей, например, гидроперекиси кумила или g5 третбутила, гипогалогенитов щелочных металлов или кислорода, предпочтительно кислорода воздуха. Если в качестве зпоксидирующего агента используют кислород воздуха, то реакция в любом органическом растворителе протекает всегда селективно с образованием лейрозина. Наиболее предпочтительными растворителями являются тетрагидрофуран и диметилформамид.

Пример 1. 1 кг измельченных высушенных листьев Vinca rosea пропитывают смесью 1 л метанола и

0,25 л 2Ъ-ного водного раствора серной кислотЫ, после чего добавляют

5 л толуола и перемешивают в течение

1,5 ч. После отделения жидкой фазы экстракцию повторяют еще три раза порциями толуола по 5 л. Толуольные фазы объединяют и из объединенной фазы трижды проводят экстракцию 2Вным водным раствором серной кислоты порциями по 5 л (или до тех пор, пока последний водный кислый экстракт уже не будет содержать алкалоидов) .

Водные кислые фазы объединяют и для удаления из них хлорофилла и других окрашенных примесей встряхивают дважды с бензолом порциями по 1 л.рН отделенной водной фазы устанавливают затем с помощью концентрированного водного раствора гидроокиси аммония равным 8,5-9 и подвергают водную фазу при этом значении рН экстракции бензолом (четыре раза порциями по 1 л) . Бензольные фазы объединяют

I высушивают безводным сульфатом натрия, фильтруют и упаривают досуха.

Иэ полученной смеси примерно 10 r оснований алкалоидов сульфатные соли дииндоловых флкалоидов (винкристина, лейрозина, вйнбластина, дезацетоксивинбластина, N-дезметилвинбластииа и деэацетилвинбластина) осаждают известным способом с помощью этанольного раствора серной кислоты, получают 0,73 г смеси сульфатных солей, из которой известными способами мож.но выделить отдельные дииндоловые алкалоиды и среди них 0,18 r лейрозина.

Полученный после фильтрования упомянутой смеси солей первый маточный раствор (около 100 мл) разбавляют

1,5 л воды и устанавливают его pH равным 2,7-3,0. Кислый раствор подвергают экстракции бензолом (пять раз порциями по 1 л) . Отделенную водную фазу оставляют для дальнейшей переработки (маточный раствор

11) . Бензольные. фазы объединяют, высушивают безводным сульфатом натрия, фильтруют и упаривают досуха. Остаток после упаривания растворяют в

12 мл бенэола, осветляют, добавляя к раствору 0,5 r активированного угля, и отфильтровывают через слой

25 г окиси алюминия (степень активностию). Этот слой промывают затем

867313

150-200 мл бензола до полного уда- Приме 2 1 ления из него виндолина. Промывную высушенных л р и м е р 2. 1 кг измельченных ных листьев Vinca rosea L жидкость объединяют с фильтратом и обрабатывают ают так же, хак в примере упаривают. Остаток после упаривания 1. Получаемые аемые после отделения смеси растворяют в мл диэтилового эфира ульфатных сол и соле димерных алкалоидов и оставляют раствор до тех пор, по5 примерно 100.мп .мг! маточного раствора ка из него не выпадают кристаллы. разбавляют 1 5 л воды и устанавливают

Выпавшие кристаллы отфильтровывают, рН водного раство р створа с помощью концентпромывают дважды порциями диэтило- рированного водног го раствора гидрового эфира по 1 мл и высушивают, по- окиси аммония равным 8,5-9. Из подлучают 0,8 r виндолина; т.пл.167- . щелоченного раствора проводя т экст; () =-,5 (c=1, в хлоро- ракцию бензолом (четыре раза поформе) . циями по 1 л). Бензольные фазы объепорПолученный при укаэанной обработ- диняют,.высушивают безводным сульфаке маточный раствор П доводят раз- том натрия, фильтруют и упаривают бавленным водным раствором гидроо- досуха. Остаток после упаривания киси аммония до рН 5,5 и затем подвер-15 растворяют в 55 мл бензола и полученгают экстракции бензолом (3 5 раз ный раствор подвергают хроматографипорциями по 1 л). Ход экстракции ческому разделению на колонке, заполконтролируют с помощью тонкослойной

L ненной 450 г окиси алюминия (степень хроматографии. рН экстрагируемого активност !(!) В и . начале элюирование по ии б раствора перед добавкой очередной 20 проводят 2 л бензола л ензола, а затем 4,5 л порции ензола устанавливают равным смеси бензола и хло оф и хлороформа в соот-.

5,5. Бензольные экстракты объединяЮт ношении 3:2. Соби ают ф ак и и па ивают а о о у р, стат к после упари-, та по 200 мл. Содержание алкалоидов вания перекристаллизовывают из мета- в отдельных фрак отдельных ракциях контролируют сло но хроматогранола. полученные кристаллы отфильтро- g5 с помощью тонкослойной вывают, а метанольный маточный раст- фии. В первых четырех фракциях не вор оставляют для дальнейшей пе е аботки. Получаемый в количестве 0,35 г ходится в фракция 5-9, ф ходится в ракциях 5-9, в фракциях кристаллический продукт представляет 21-26 содержится виндолин ф собо смесь дейрозина и 3, 4 - ан- gg циях 27 и 28 - виндолин и 3 ; 4,й ! виндолин, в ракгидровинбластина в соотношении 1:1. -ангидровинбластин и в фракц ях 29- .

П лученную смесь лейрозина и 3 о !

34 - лейрозин. Фракции, содержащие акциях ангидровинбластина растворяют один и то же алкалоид объединяют в 3 0 мл диметилформамида и пропускают упаривают досуха, получают следующие ,через раствор воздух в течение 15 мин. 5 продукты: 0,57 г катарантина (из

Раствор оставляют стоять в течение фракций 5-9), из которых можно полу16-20 ч, после чего устанавливают рН чить 0,52 r сульфата катарантина . его равным 8,5 и подвергают экстрак- 0,145 г 3, 4 - ангидровинбластина ции бензолом. Бензольный экстракт (из фракций 27 и 28 после перекристалупаривают досуха, получают 0,25 г лизации из метанола), т.пл. 212лейрозина; т.пл. 202-204 С! ГсЦ = 40 214 C; Cd)$ =+64,2 (с=0,5, в хло=+79,4 (c=1 в хлороформе).. роформе1, 0,125 г лейрозина {из фракции 29-34; после перекристаллизаПолученный при кристаллизации ции из метанола); 0,78 виндолина смеси лейрозина и 3, 4 -ангндровин- (из метанольного маточного раствора, бластина метанольный маточный раст- 45 полученного после отделения 3,4 вор упаривают досуха. Остаток раст- ангидровинбластина, и из фракций 21воряют в 12 мл бензола и раствор под- 26, после перекристаллизацни из диэвергают хроматографии на колонке, за- тилового эфира) . полненной 100 г окиси алюминия (сте- Пример 3 ° 0,145 r 3, 4 пень активности Н!) . Элюирование про- 5р -ангидровинбластина растворяют в изводят бензолом, отбирая фракции 20 мл диметилформамида. В течение по 50 мл. Содержание катарантина в 10 мин через раствор пропускают слафракциях контролируют с поМощью тон- бый ток газообразного кислорода, поскослойной хроматографии. Основное ле чего реакционную смесь оставляют количество катарантина содержится 55 на 16-20 ч при. комнатной температуре. в четвертой фракции. Фракции, содер- Затем рН смеси с помощью концентрижащие катарантин, объединяют и упа- рованного водного раствора гидроокиривают досуха. Остаток после упари- си аммония устанавливают равным 8, 5 вания растворяют в 1,25%-ном этаноль- и проводят экстракцию бензолом (три ном растворе серной кислоты (pH 4,5- раза порциями по 25 мл) . Бензольные

5,0) и оставляют раствор на ночь dO экстракты объединяют, высушивают для кристаллизации. Выпавшие кристал- безводным сульфатом натрия, фильтрулы отфильтровывают, промывают 1-2 мл . вт и упаривают досуха. Остаток пеэтанола и высушивают, получают 0,41 г рекристаллизовывают из 1 мл метанокатарантина; *) о =+58 (c=1, в ла, получают 0,11 г лейрозина (75В о

96%-ном этаноле) . 65 от теоретич.выхода) .

867313

Формула изобретения

Составитель Т.Левашова

Техред А.Савка Корректор М, Коста

Редактор С.Патрушева

Заказ 8118/85 Тираж 446 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, )(-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, Ул.Проектная,4

Способ получения алкалоидовлейроэина, винкристина, винбластина, дезацетоксивинбластина, й-дезметилвинбластина, дезацетилвинбластина, виндолина, катарантина, 3, 4 -ангидровинбластина с использованием метанола и разбавленного водного раствора кислоты для экстракции высушенных частей растения Viвса rosea L. и хроматографии, о т л ивЂ” ч а ю шийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, экстракцию проводят. смесью метанола с разбавленным водным раствором кислоты и бензолом или его гомологом, устанавливают рН водной фазы 8,5-9, экстрагируют беизолом или его гомологом, остаток после упаривания растворителя обрабатывают спиртовым раствором серной кислоты, осадок сульфатов лейроэина, винкристина, винбласмина, дезацетоксивинбластина й-дезметилвинбластина, дезацетилвинбластина

1 разделяют известным способом, а маточный раствор, полученный после отделения сернокислых солей экстрагируют при рН 5,5-10 бензолом или его гомологом с последующим хроматографическим вселением из экстракта виндолина, катарантина, 3, 4 -ангидровинбластина и лейрозина, или из этогс маточного раствора экстрагируют бензолом или его гомологом при рН 2,5-3,5 виндолин, при рН 5-6 катарантин, 3,4 -ангицровинбластин и лейрозин, которые подвергают хроматографическому разделению или из этой смеси путем кристаллизации отделяют смесь лейрозина и 3, 4 -ангид-, ровинбластина и подвергают ее или после выделения 3,4 вЂ” ангидровинбластина эпоксидированию, а из полученного после отделения кристаллического продукта маточного раствора

20 выделяют катарантин.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент Венгрии 9 160967, кл. С 07 d 57/02, 1970 (прототип),