Способ диагностики аллергических заболеваний

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

«i>955931 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 09. 01. 81 (2t)3261579/28-13 (И1М. Кп.з с присоединением заявки М?

A 61 K 35/78

Государственный комитет

СССР оо делам изобретений и открытий (23) Приоритет

{53) УДК 616. -056.

° 3(088. 8) Опубликовано 070982. Бюллетень йо33 с

Дата опубликования описания 070982

Г.В. Порядки, A.Ñ. Павлюк, N.М. Салмаси, A.Н. Чередеев к Л.В. Ковальчук (72) Авторы изобретения

2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н.И. Пирогова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ

ЗАБОЛЕВАНИЯ ! 2

Изобретение относится к медкцине, а именно к иммунологии и аллер-, гологик, и может быть использовано для лабораторной диагностики аллергических состояний при отсутствии клинических проявлений.

Известен способ диагностики аллергическкх заболеваний путем стимулирования конканавалином А супрессорных лимфоцктов в присутствии Н - тимидина с последующим определением их функционального состояния 1 .

Однако известный способ не является достоверным, обладает низкой точностью и не позволяет осуществлять контроль-.;иммунного статуса у больных аллергией.

Целью иэобретенкя является повыщенке достоверности к точности и обеспечение воэможности динамического наблюдения эа состоянием иммунной системы.

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа диагностики-аллергических заболеваний 25 путем стимулирования конканавалином

A супрессорных лимфоцитов в присутствии H3 - тимидина с последующим определением их функционального состояния супрессорные лимфоциты культиви- 30 рувд с конканавалином A в дозе 4080 мкг/мл в течение 40-54 ч с дополнительным введением 16-20В пула че ловеческой сыворотки IV груйпы и при снижении индекса супресски ниже 10% устанавливают у обследованного ал.лергическое состояние. Пример 1. у обследуемого М. стерильно брали 10 мл крови иэ локтевой вены в пробирку с 2,7Фкйм раствором натрий — ЭДТА, разводили раствором Хенкса 1г2 и наслаивали на градиент фиколлверографина с плотностью 1,072 с последующим центрифугированием в течение 30 мин при

800 g. Лимфоциты, в интерфаэе, собирали, трижды отвывали раствором

Хенкса и ресуспензировали в культуральной среде: среда 199-80%, пул сывороток человека IV группы

20%, глютамкн 30 мкг/мл, после чего подсчитывали в камере Горяева.

Выделяли 10 млн лимфоцитов, переносили их в два пенициллиновых флакона, содержащих по 2 мл культуральной среды (по.5 млн. клеток в кажцый ).

В один флакон добавляли Коя-А

60 мкг/мп. Клетки культивировали

54 ч при 37оC. Через 54 ч лимфоциты обрабатывали мнтомицнном С в течение

955931

Индекс супрессии, %

Кол-во дбследований

Практически здоровые доноры

12,5

39,7 5,8

Больные поллинозом в стадии ремиссии

80,0

15 -15,9+9,5

26 -8,7+5,5

73,0

17 -20,0+10,5

76,5

30 мин прн 37оС в концентрации

40 мкг/мл для прекращения митотической активности, затем клетки отмывали и подсчитывали в камере Горяева. Параллельно на градиенте фиколлверографина стерильно выделяли лимФоциты здорового дрнора,,QTMHBcLtlH их и подсчитывали, Затем с этими клетками ставили реакцию бласттрансформации в 4 рядах центрифужных пробирок, по три пробирки в каждом ряду. Каж- t0 дая пробирка содержала 1 мл культу ральной среды и 500 тыс. лимфоцитов донора. Первый ряд — контроль.

Второй — добавляли 0,1 мл фитогемаг. ютинина Р в разведении 1:100, 15 в третий ряд добавляли 500 тыс. обработанных митомицином С лнмфоцитов, культивировавшихся без Кон-А, в четвертый — 500 тыс. обработанных мнтомицином С лимфоцнтов, культиви- 20 рОвавшихся с Кон-A. Пробирки инкубировалн 72 ч при 37оС Эа 4 ч до окончания инкубации во все пробирки добавляли 1 мк Ки Н - тимидина. По окончании культивирования лимфоциты отмывали на микропористых фильтрах, которые помещали в сцинтилляционные кюветы и подсчитывали на счетчике.

Формула подсчета индекса супрессии кол-во имп/мин в культуре 30 лимфоцитов,, активир.. Кон=А .

Х 100% кол-во имп/мин в культуре лнмфоцитов без Кон-A

Для обследованного М, индекс супрессии составил 52,6%. Обследованный М. практически здоров.

Пример. 2. Исследование, функциональной активности лимфоцитов про-40 ведено у больного И. Выделение и обработку лимфойитов осуществляли.как

Группы обследованных

Больные бронхиальной астмой (атопич.форма в стадии ремиссии) Больные бронхиальной астмой.(инф.-аллерг.

Форма в стадии ремиссии) в примере 1. Состав культуральной среды: 82% 18% пула человеческих сывороток IV группы, 30 мкг/мл глютамина. Культивировали с 40 мкг/мл Кон-A и беэ него при

37 С в течение 48 ч. Индекс супрессии о у обследуемого И. оказался равным

53,0%, что позволило снять диагноз бронхиальной астма. По клиническим данным больному поставлен диагноз хроническая пневмония.

Пример 3.. Вольная Ф. была обследована дважды: в момент поступления в больницу и на фоне лечения.

Выделение и обработку лимфоцитов проводили аналогично примеру 1. Состав культуральной жидкости: 84% среды 199, 16% аула человеческих сывороток IV группы, 30 мкг/мл глютамина.

Лимфоциты культивировали с 60 мкг/мп

Кон-А и без него при 37 С в течение

44 ч. При обострении бронхиальной асторы индекс супрессии у больной Ф.

85,6%. После проведения нестероидной терапии - 4,0%. Вольная была выпи» сана в состоянии клинической ремиссии.

Пример 4. У больного A. выделение и обработку лимфоцитов провели как в примере 1. Состав культу« ральной жидкости: 82% среда 199, 18% пула сывороток IV группы, 30 мкг/вщ глютамина. Культивирование с 80 мкг/мл Кон-А и беэ него в течеие 46 ч при 37 С. Индекс супрессии больного А. оказался равным 6,6%, что позволило заподозрить у него состояние аллергии, несмотря на отсутствие выраженных клинических проявлений.

Суммарные данные приведены B таблице.

Результаты исследования функциональной активности индуцированных;

Кон-А лимфоцитов-супрессов у здоровых, и больных аллергией.

Кол-во обследованных с индексом супрессии ниже 10%

955931

Продолжение таблицы

Кол-во обследованных с индексом супрессии ниже 10% абс. Ъ

Ъ

Кол-во

Группы обследованных обследований

Индекс супрессии, Ъ

Больные неспецифичной пневмонией (хроническая форма) 14,3

7 39,9t18,5

Больные боонхиальной астмой в стадии обострения: до лечения после лечения

100,0

17 -91, 6 6, 7

17 -37,9+11,8

82,4

25

Составитель Л. Соловьев

Редактор О. Филиппова Техред С.Мигунова Корректор - ренц

Заказ 6857/3 Тираж 714 Подписное

ВНИИПИ- Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. ужгород, ул. Проектная, 4

Описываемый способ является достоверным неспецифическим способом диагностики аллергических. заболеваний. Использование способа обеспечивает по сравнению с известным способом воэможность наблюдения больного в динамике, получение donee достоверных результатов, резкое снижение количества необходимас реактивов.

Формула изобретения

Способ диагностики аллергических заболеваний путем стимулирования кон канавалином A супрессорных лимфо- 35 цитов в присутствии H> - тимидина с последующим определением их функционального состояния, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения достоверности, точности и обеспечения воэможности динамического наблюдения за состоянием иммунной система, супрессорные лимфоциты, культивируют с конканавалином As дозе. 40-80 мкг/мп в течение 40-54 ч с дополнительным введением .16-20% пула человеческой сыворотки IV группы и при снижении индекса супрессии ниже 10% устанавливают у обследо:ванного аллергическое состояние.

Источники информации, принятые во внимание при.экспертизе

1. Martinez 1.D., Santos J., Stechsehulte D.J., Abalou W.J.Non specific suppressor cell function in atopic Subjects 1 ° Allergy

clin Qmmunol 1979, 64, 6, 485 490.