Штамм рнотовастеriuм маndарамеnsis м-58,1651,используемый в качестве тестобъекта для определения амилосубтилина

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советски«

Социалистически«

Республик

»»960593 (6l ) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 04. 11.80 (21) 3002530/28-13 (51 } M. Кл.

G 01 t4 21/64/у

С 12 Q 1/02 (С 12 Q 1/02

С 12 R 1/00) (53) УДК 576.8. .093.1(088.8) с присоединением заявки М т11«ЯЭестек««ьй «0NNtoT

CCCP ав де«еи «ее«рете««1

«вткуыт«1 (23) Приоритет

Опубликовано 23. 09. 82. Бюллетень _#_s 35

Дата опубликования описания: 23. 09. 82

И. П. Кириллова, М.А. Державина, Г.В. Силант

Т.Н.Цибезова, О.Т.Лесняк и С.И.Кудрявцев (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский инст приборостроения (54) ШТАММ I HOTOBACTERI UN МАЙОАРАМЕМБ!S

М-58, 1651, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ

ТЕСТ-08bEKTA ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

АМИЛОСУБТИЛИНА

Изобретение относится к микробио логии

Предлагаемый штамм новый, в научно-технической и патентной литературе не описан.

Целью изобретения является получение штамма Photobacterium mandaрааепы в М-58, 1651,.используемого в качестве тест-объекта для определения амилосубтилина.

Штамм Photobacter i um mandapamensis М-58, 1651, выделен во Всесоюзном научно-исследовательском институте приборостроения Главного Управления микробиологической промышлен-. ности при Совете Министров СССР и хранится в коллекции культур микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института антибиотиков.

Микроморфологические признаки.

Бесспоровые палочки 1,0-2,5х0,41,0 мкм, с закругленными концами, одийочные и соединенные в пару.,Кап2 сул нет. Подвижны. При неблагоприятных условиях для роста наблюдаются плеоморфные формы, Грамотрицатель ны.

Макроморфологи ческие призна ки.

Колонии на рыбо-пептонном агаре (РПА) круглые с ровным краем, беловатые,гладкие и блестящие, старые колонии слегка буреют. Полупрозрач10 ные, слегка выпуклые, с приподнятым центром, мелкозернистые, вязкие.

Рост по штриху на РПА беловатый, гладкий, блестящий, на рыбо-пептонном бульоне (РПБ ) - однородная муть с небольшим рыхлым осадком на дне. физиологические признаки. Растет при концентрации хлористого натрия от 0,5 до 6,03,оптимальный рост при

3-54 хлористого натрия .. Метаболизм

20 как аэробный, так и ферментати вный.

Сбраживает до кислот с образованием газа глюкозу, фруктозу, галактозу, без образования газа - глицерин, Не сбраживает арабинозу, ксилозу, Формула изобретения

3 9605 сахарову, мальтозу, лактозу и маннит. Образует нитриты из нитратов.

На пептонной среде образует аммиак.

Индол не образует. Крахмал не гид" ролизует. Желатийу разжижает.Реак" ция фогес-Проскауэра положительна.

Факультативный анаэроб.

Растет при 37О, не растет при 5

-О и 42 . Оптимум роста 25-32 C. Оптимум люминесценции окало 30 С. Рост 1о при рН 6,0-9,0. Люминесцирует в фазе экспоненциального роста и в течение стационарной фазы 1-3 дня.

Штамм Photobacterium mandapamensis И-58 хорошо растет и люьииесци- . д рует на РПА (состав а г/л: камбала 50,0, пептон 5,0, .NaCl 30,0, вода водопроводная 1,0 л, агар 20,0

Способ приготовления: камбалу без костей и кожи размельчают и-замачи" вают в воде на 2 ч, затем кипятят в течение 1 ч и профильтровывают через . вату.

В вытяжку добавляют пептон и хлористыи натрии, доводят рН до 7,3, д разливают по колбам и добавляют агар.

Стерилизуют при 1 ати 20 мин, мясопептонном агаре с 33 хлористdl о натрия, пептонно-глицериновом агаре (состав s г/л: пелтон 5,0, глицерин

20,О, йаС! 30,0, агар 23, вода водопроводная 1,0 л, рН 7,2).

Оптимальные температуры инкубации

25-32 С. Время инкубации 18-24 ч, при высеве из-под вазелинового масла может увеличиваться до 36-48 ч. .При использовании штамма в качестве тест-организма на амилосубтилин неоЬходимо получить его в интенсивно светящейся форме, для чего лиофи;пизированную в желатина-сахарозной среде (состав в г/л: сахароза

100,0, желатин 15,0, вода дистиллированная .1,0 л, стерилизация 2 дня по 0,5 атм, 30 мин), культуру высевают в жидкую рыба-пептонную среду или мясо-пептонный бульон с 34 хлористого натрия и после 18-48 ч инкубации делают пересев на твердые агаризованные среды того же состава ч или при хранении культуры под вазелиновым маслом делают высев непосредственно на вышеуказанные твердые среды.

Инкубацию на твердых средах ведут при 30 С s течение 18 и, после чего .штамм проверяют в темноте на интен93 4 сивность свечения, а затем культу ру смывают с поверхности агара и ,тщательно суспендируют в минималь. ной среде (состав в г/л: NaC1 30,0, йаН2РО . 5,3, К НРО 2, 1т (NHg)g HPOg

0,5, NgSO@ 0 1 глицерин 3 мл,вода дистиллированная 1,0,л, рН 7,2J.

П р.и и е р. В химически чистую посуду производят смыв пыли, содер" жащей амилосубтилин, с поверхности или фильтра минимальной средой.

ПроЬу тщательно перемешивают до возможно полного растворения амилосубтилина и порциями по 4,мл переносят в химически чистые .пробирки.

При большом загрязнении и значитель- „ ном количестве пыли следует сделать разведения пробы. Все определения проводят в тройной повторности с соблюдейием стерильности.

Параллельно методом разведения готовят ряд контрольных пробирок с минимальной средой, содержащей амилосубтилин в убывающих концентрациях оТ 0,2 до 0,0125 мг/мл для построения стандартной кривой.

На чертеже показана калибровочная кривая зависимости интенсивности свечения тест-организма M-. 58 от концентрации амилосубтилина в пробе. Во see опытные и контрольные пробирки одновременно вносят по одной капле суспензии клеток мутанта Photobacterium mandapamens!s И-58, тща. тельно перемешивают и ставят на инкубацию на 18 ч при 30 С.

После окончания инкубации опытные и контрольные пробирки извлекают из термостата, тщательно пере-. мешивают и регистрируют их свечение визуально или на приборе - люьинометре. Сопоставляя интенсивность свечения опытных проб с пробами ряда контрольных пробирок,,определяют концентрацию амилосубтилина в опытных пробах.

Штамм Photobacterium mandapamensis И-58, 1651 (коллекция культур микроор ганизмов ВНИИА), используемый в качестве тест-объекта для onределения амилосубтилина.

960593

fflwgeeepergai NwrjecyhssNNNr Ф ДРОФУ, Фю@

Составитель В.фролова

Редактор Л.филиппова Техред З.Палий Корректор А Йзятко „

Заказ 7251/ Тираж 7 Подпи сное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная.