Способ изготовления вакцины против трихофитии крупного рогатого скота

Авторы патента:

САРКИСОВ А.Х.

ЯБЛОЧНИК Л.М.

МОХИНА Т.Н.

ЖАРКОВ И.И.

C12R1/645 - Схема кодирования для подклассов C12C-C12Q или C12S, относящаяся к микроорганизмам

C12N1/14 - микробные грибки (культуры грибов A01G 1/04; грибы в качестве нового вида растений A01H 15/00); питательные среды для них

A61K39A61K35/70 -

Способ изготовления вакцины против трихофитии крупного рогатого скота, включающий приготовление «питательной среды, состоящей из cyc,iia и агара, выращивание на ней культуры гриба, съем, гомогенизацию, добавление антибиотиков, приготовление защитной среды, содержащей сахарозу и желатин, стерилизацию защитной среды , смешивание гомогената с защитной средой, расфасовку, замораживание и сушку, отличающийся тем, что, с целью повышения иммуногенности вак1щны, в качестве культуры . гриба используют живую культуру- J ТФ-130 Л, вырапщвание ее проводят до концентрации 250-650,млн. .жизне (Л способных микроконидий на 1 мл пита тельной среды на сусло-агаре с кислотностью 1,6-2,4, причем стерилизацию защитной среды проводят паром в течение трех дней по 30 мин, а сушку проводят при температуре 20-40 С в течение 26-60 ч.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCH0MV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

»-: ....

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 2894951/30-15 (22) 26 ° 03.80 (46) 07.11.84. Бюл. В 41 (72) А.Х.Саркисов, Л.М.Яблочник, Л.И.Никифоров, С.В.Петрович, К.П.Летягин, Т.Н.Махина, Г.Ф.Денисенко, И.И.л(арков, В.Ф.Ковалев и Ю.П.Чернецкий (71) Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов и Всесоюзный ордена Ленина институт экспериментальной ветеринарии им. Я. P. Коваленко (53) 615.371/372(088.8) (56) 1. Авторское свидетельства СССР

9268593, кл. С 12 К 5/00, 1970.

2. Патент Великобритании

91339240, кл. А 5 В 1973, (54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ

ТФ-t30 (К) ПРОТИВ ТРИХОФИТИИ КРУПНОГО

РОГАТОГО СКОТА.

3(59 61 К 39/00 А 61 К 35/70р

С 12 1(1/14 С 12 R 1/645 (57) Способ изготовления вакцины против трихофитии крупного рогатого скота, включающий приготовление питательной среды, состоящей из сусла и агара, выращивание на ней культуры гриба, съем, гомогенизацию, добавление антибиотиков, приготовление защитной срецы, содержащей сахарозу и желатин, стерилизацию защитной среды, смешивание гомогената с защитной средой, расфасовку, замораживание .и сушку, отличающийся тем, что, с целью повышения иммуногенности вакцины, в качестве культуры гриба используют живую культуру

ТФ-130 Л, выращивание ее проводят Я до концентрации 250-650,млн..жизнеспособных микроконидий на 1 мп питательной среды на сусло-агаре с кислотностью (,6-2,4, причем стерилизацию защитной среды проводят паром в Я течение трех дней по 30 мин, а сушку проводят при температуре 20-40 C о в течение 26-60 ч.

955570 2

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к способу изготовления вакцины против трихофитии крупного рогатого скота. 5

В настоящее время известен способ изготовления препарата ТФ-130 против трихофитии крупного рогатого скота, включающий приготовление питательной среды для выращивания культуры 1О

Trichophyton fariforme штамм 13(), засева, выращивания культуры, съема, гомогенизации культуры и разбавления ее физиологическим раствором (1) .

Недостатком данного способа являет.11, ся то, что полученный препарат имеет короткий срок годности и требует жесткий температурный режим хранения.

Известен также способ изготовления ,вакцины ЛТФ-130 против трихофитии 2п крупного рогатого скота, состоящий из приготовления питательной среды на основе сусло-агара для выращивания культуры Trichophyton fariforme штамм 130, засева, выращивания, съе- 2s ма кипения, гомогенизации культуры, приготовления защитной среды и ее. дробной трехдневной стерилизации при 100 С, смешения гомогената с о защитной средой в соотношении 1:1, расфасовки, заморозки и сублимационной сушки в аппаратах КС-30 и

ТТ-50 (2).

Недостатком данного способа является низкое спороношение культуры

Tryhaphyton fariforme штамм 130 и низкий выход вакцины, а также то, что для выращивания культуры брали сусло без учета его кислотности.

Размол-культуры и гомогенизатора не всегда обеспечивал выход мелкодисперсной массы, что неблагоприятно отражалась на качестве вакцины и ее выходе.

Сублимационную сушку вакцины проводили в аппаратах КС-30 и ТГ-50, однако не регулировали автоматически температуру полок. Это неблагоприятно сказывалось на качестве вакцины.

Цель изобретения вЂ” повышение иммуногенности вакцины и сокращение технологического цикла.

Для достижения указанной цели в способе, включающем приготовление питательной среды, состоящей из сус- Ы ла и агара, выращивание на ней культуры гриба, съем, гомогенизацию, добавление антибиотиков, приготовление защитной среды, содержащей сахарозу и желатин, стерилизацию защитной среды, смешивание гомогената с защитной средой, расфасовку, замораживание и сушку, в качестве культуры гриба используют дикую культуру ТФ-130 Л, выращивание ее проводят до концентраций 250-650 мпн, жизнеспособных микрокоиидий на 1 мл питательной среды на сусло-агаре с кислотностью

1,8-2 ° .4, причем стерилизацию защитной среды проводят паром в течение трех дней по 30 мин, а сушку проводят при температуре 20-40 С в течение 26-60 ч;

Пример. Приготовление питательной среды. Питательной средой для выращивания культуры Trichophyton fariforme 130 Л при изготовлении вакцины ТФ-130(К) служит суслоагар.

Для приготовления сусло-агара используют пивное неохмеленное сусло с кислотностью 1,9-3 4. Сусло подвергают дробной стерилизации текучим паром в течение 3 пней по

30 мин ежедневно. Простерилизированное сусло может храниться 30 дней при температуре не выше 15 С. Пивное о сусло разводят водопроводной водой (ГОСТ-284-73) нли дистиллированной водой (ГОСТ-609-72) до содержания углеводов по Баллингу 7-8, заливают в нарочный котел и устанавливают рН до стерилизации 7,0-7,4, а затем добавляют 2,5-3,0 агарагара (микробиологический ГОСТ-1720671), кипятят до растворения агара, фильтруют .через ватно-марлевый фильтр, разливают в стерильную посуду матрицы по 300 мл и в пробирки по 7 мл. Стернлиэуют 40 мин при

0,5- 0,7 атм. После стерилизации сусло агара рН должна быть в пределах

6,3-6,8. Матрацы с суслом агара после стерилизации для контроля на отсутствие микрофлоры выдерживают 2-3 суток в термостате при 26 и 37 С. Затем их тщательно просматривают на,чистоту.

Приготовление защитной среды.

Ь качестве защитной среды (среды высушивания) используют стерильный водный раствор, содержащий 20 сахарозы (ГОСТ-5833-54) и. 4 желатина (пищевой ГОСТ-11293-65) .

Дпя приготовления среды в горячую дистиллированную воду добавляют желатин из расчета 4 и после растворе3 955570 4 ния сахарозу из расчета 20Х (по весу) 130 и, выращенную на сусло arape на взятый объем воды, фильтруют и в матрацах, смывают 150-200 мл стерильустанавливают РН 7,0-7,4 . Стерилизуют ного физиологического раствора. ПолутекУчим паРом 3 днЯ подрЯд по 30 мин. ченную взвесь набирают пипеткой ИоПосле стериттизадии РН Должен быть ра или вставляют сифон в матрац и в пределах 6 2-6,8. Хранят в холодиль- засевают новые матрацы с суслоаганике пРи 2-8 С не более 15 дней. Ром (иэ расчета 5-7 мл грибной взвеЗаЩитную сРедУ проверЯют на сте-. си на один матрац). На каждом матраРильность. ДлЯ этого беРУт пРобУ сРе- це отмечают номер ш*амма и дату заседы, из котоРой делают высевы (по 1-2 10 ва, Количество засеваемых матрацев капли) по две пробирки íà NIA., МПБ определяется объемом выпуска вакцины.

Китт-Тароцци, сусло агар и агар Чапе- Засеенные матрацы ставят в термо-. о ка (помещают в термостат при 26 С), стат в полунаклонном положении и выпо две пРобиРки с ИПА, ИПБ и Китт-. держивают при температуре 26-28оС.

Тароцци помещают в термостат на 10 15 Выращивание культуры производят о днеи при температуре 37 С. После в течение 12-15 дней. Заметный рост термостатирования посевов в течение на сусло агаре появляется на 3-5-й о„

5 суток при 37 С их просматривают день. Культура должна покрывать и с ИПБ и Китт-Тароцци пересевают всю поверхность сусло агара. на те же питательные сРеды и выцержи-gp В процессе вырашивания матрацы вают еще .в течение 5 сУток пРи Ука- с культурой T.fariforme визуально заннои теМпературе Посевы Должны просматривают .начиная со второго

>Ф быть чистыми и не давать роста микро- дня, через каждые двое суток на нафлоре. личие постороннего загрязнения.

Посев и выращивания культуры Ь При бактериальном или грибковом Т.fariforme 130 Д. загрязнении матрацы выбраковывают

При посеве культуры из диофильно и немеДленно отпРавлЯют в Убивку высушенного состояния для полного (автоклавирование в течение 1 ч восстановления ее энергии роста при 2. атм) . требуется три пассажа. Ампулу вскры- ZO У вают над пламенем горелки, пастеровс- рацах для производственных целей

-кой пипеткой вносят в нее физиологиможет храниться в холодильнике при ческий раствор до полного растворения температуре 2-4"C a TeweHHe 10 дней, культуры. Полученную взвесь переносят Съем и гомогенизация,грибковой во флакон, содержащий 25 мл стериль-,5 массы. Матрацы с кУльтУРой Т.йагт.ного физиологического раствора с forme 130 Л предварительно протиРН 6,4-7,0. 1рибковую суспензию выдер- Рают спиртом, затем откРывают пройживают после растворения в течение . ки под горящими спиртовками или ч при комнатной температуре, за в газовыми горелками. Специальными тем высевают по 5 мл на 4-5 матрацев тО скребками снимают грибную массу с и ставят для выращивания в термостат поверхности сусло агара и с соблюс при 26 С на 12-14 дней. Периодически дением стерильности помещают ее культуру просматривают макроскопи- в стерильные банки с крышками или чески (визуально) на наличие посто- чашки Петри для последующего етерильроннего загрязнения. Рассев культуры 45 ного измельчения в гомогенизаторе

f для получения второй генерации делают миксере или коллоидной мельнице. через 12-14 дней после макроскопичес- Съем грибной массы следует вести, кого и микроскопического исследова- .не захватывая питательную среду. ния культуры, затем еще через 10- Для размола грибной массы исполь- .

15 дней делают рассев для получения 50 зуют гомогенизаторы (миксеры) третьей генерации. Третью генерацию различных марок. или коллоидные мелькультуры берут как производственную ннцы (1У-8, 1У-10) . В течение всего для последующих расплодок, предвари- времени загрузки, измельчения и тельно проверив на чистоту, концент- выгрузки биомассы темтература в paboрацию и жизнеспособность микрокони- з чих камерах (емкостях, где измельдине чается и циркулирует биомасса) гомоДля получения посевного материала генизаторов и коллоидных мельниц

10-15-дневную культуру Т.fariforme не должна быть выше 30 С.

3 9555

Режим работы коллоидной мельницы.

Для измельчения грибной массы, снятой с сусло-агара, могут быть использованы коллоидные мельницы с внесенными дополнениями в их » конструкцию. 5

Основным дополнением является съемная доводка (закрытый бункер), изготовленная иэ нержавеющей стали. В верхней крышке бункеров имеется герметически закрывающийся загрузочный tO люк диаметром 100 мм и два штуцера по 22 мм, один из которых используется для подачи стерильного воздуха в бункер, а второй посредством вакуумной трубки и тройника соединяется 15 с выходным патрубком коллоидной мельницы (для обеспечения циркуляции грибной массы во время размола).

Перед началом работы съемный бункер присоединяют к коллоидной мельни- 20 це. Один из штуцеров бункера посредством вакуумной трубки через тройник .соединяют с выходным патрубком мельницы и бутылью (через короткий сифон), а другой вЂ” с системой сжатого возду- 25 ха. В целях исключения поступления воздуха в бункер и попадания в него посторонней микрофлоры включают систему подачи стерильного воздуха, Зо что позволяет в момент загрузки массы поддерживать избыточное давление.

Через люк загружают в бункер грибную массу, антибиотики пенициллин и стрептомицин (иэ расчета по 300 ед. на 1 мл) и заливают стерильный физиологический раствор. В бункер ем> костью 40 л загружают культуру гриба, снятую приблизительно с 65 мат- 4о рацев. На зто количество грибной .массы в бункер заливают 10-33 л физиологического раствора.

Загрузочный люк бункера герметически закрывают, прекращают подачу 45 стерильного воздуха, регулирующим устройством. устанавливают. ножи на нулевую отметку, затем включают кол-, лоидную мельницу, которая производит размол грибной массы в течение 57 мин. В этот период суспензия (концентрат) грибной массы циркулирует по закрытой системе (из бункера в коллоидную мельницу и через вакуумную трубку вновь в бункер и т.д.).

Для исключения попадания суспенэии в баллон вакуумная трубка, соеди70 б няющая тройник с бутылью, эажимается зажимом, По истечении указанного срока времени работы коллоидной мельницы вакуумную трубку, соединяющую бункер с выходным патрубком мельницы, пережимают зажимом, а зажим со сливной трубы снимают. Перекачка грибной массы в бутыль проводится при включенной мельнице с одновременной подачей стерильного воздуха в бункер. Измельченная грибная масса поступает в бутыль, которая имеет два сифона (длинный и короткий), вмонтированные в пробку. Короткий сифон служит для приема грибной массы в бутыль иэ мельницы, а также для создания избыточного давления в момент слива содержимого в реактор при составлении герии вакцины. К наружному концу. длинного сифона присоединяют 1,52,0-метровую резиновую трубку, через которую берется проба для проверки стерильности. . Цеховой контроль грибной суспенэии.

Из полученной после развода концентрированной грибной массы с соблюдением стерильности берут пробу для проведения цехового контроля, определяют концентрацию грибной массы, количество мнкроконидий, проверку на отсутствие посторонней микрофлоры путем высевов по две пробирки на

МПА, MIH, Китт-Тароцци, а для выявления плесневых грибов на пробирки с агаром Чапека и сусло агаром. Посевы выдерживают в термостате при

37 и 26 С в течение 5-7 суток. По исФ течении указанного срока пробирки визуально просматривают.

Из пробирок с культурами на указанных средах делают мазки и просматривают их в иммерсионной системе.

При наличии пасторонйей микроФлоры суспензию уничтожают, путем автоклавировании при 2 ати в течение чБутыли с концентрированной грибной массой можно хранить в течение

5-7 суток в холодильнике при температуре 2-4 С.

Соединение гомогената с защитной средой. При получении положительных результатов цехового контроля приступают к смешиванию гомогената с защитной средой. Бутыпь с гомогенатом при помощи стерильного шланга присое9555 диняют к другой стерильной бутыли или ферментеру, снабженному мешалкой, куда перекачивают защитную среду

»высушивания и гомогенат в соотношении 1: 1.

Предварительно определяют концентрации гомогената по BOCM ¹10, исходя из того, что 1 млрд. по БОСМ приблизительно соответствует 6-10 млн. микроконидий в 1 мл. Используют гомо- 10 генат. содержащий 360-600.млн/мл микроконидий, что соответствует приблизительно 40-60 млрд. по БОСМ.

Всю работу проводят в стерильном о боксе при температуре не выше 25 С.. !5

Бутыль с гомогенатом устанавливают в шуттель-аппарат и тщательно перемешивают содержимое или используют ферментер с мешалкой, затем при периодическом перемешивании проводят 20 розлив вакцины.

Розлив по флаконы. Вакцину расфавЂ” совывают по 2,5 или 5.мл в стерильные пенициллиновые флаконы (МВТУ

"64-2-15-15-69") емкостью 10 мл и по 25

10 мл в пенициллиновые флаконы емкостью 20 мл, что соответствует

10,20 и 40 дозам вакцины.

Сублимационная сушка вакцины

ТФ-130 К. Сушка вакцины состоит из

30 двух процессов: замораживания продуквЂ” та в низкотемпературном холодильнике и последующей сублимации (лиофилизации) в сублимационном аппарате.

Кассеты с материалом сразу после 35 розлива помещают в охлажденную от о

-40 до -50 С камеру холодильника типа КС-.70/250 или другого типа, обеспечивающую указанную температуру.

В 2-3 флаконах с вакциной в разных40 кассетах устанавливают датчики для снятия показаний температуры продукта в процессе сублимации. Материал промораживаю» при данной температуре в течение 6-20 ч.

Кассеты с замороженной вакциной в течение 2-3 мин, не допуская .оттаивания продукта,. перегружают в подготовленную и охлажденную камеру (в аппарате КС-30 охлаждают камеру от -40 до -50 С в аппаратах

ТГ вЂ” от вЂ” 30 до -50 С, подключают датчики, закрывают крышку (дверцу) камеры и включают вакуумные насосы.

Спустя 1-3 ч при достижении показателей вакуума 9-10 (аппарат КС-30) включают нагрев полок до температуры 35-40 С. Нагрев поддерживают при

70 8 данной температуре до достижения о температуры продукта от -8 до -10 С» а затем повышают нагрев полок до 25 С и выдерживают его до окончания сушки.

В течение всей сушки нагрев полок поддерживают таким образом, чтобы температура продукта повышалась в 1 ч на 1-3 С. Продолжительность о сушки составляет 38-96 ч. В аппарате ТГ-50 продолжительность сушки составляет 18-96 ч, После завершения сушки камеру через специальный фильтр заполняют сухим стерильным воздухом или нейтральным газом.

Кассеты, закрытые марлевыми салфетками, переносят в бокс„ флаконы над спиртовками закрывают стерильными резиновыми пробками, закать1вают, металлическими колпачками и этикируют.

Хранят вакцину при теь.нературе

2-10 С.

Контроль вакцины ТФ-130(К). Вакцину подвергают контролю на. растворимость> наличие механических примесей и других посторонних включений. остаточную влажность, отсутстгие контаминации посторонней микрофлорой, количества микроконидий, типичность роста и морфологические признаки культуры, использованной для ее приготовления, жизнеспособность микроконидий, безвредность, иммуногенную активность.

Растворимость. Дня опрсделения растворимости во флаконы с вакциной вносят 10 мл растворителя (1 Н 6,27,0) . Содержимое флакона при встряхивании должно растворяться в течение не более 2-3 hGiH и иметь вид гомогенной взвеси.

Механические примеси. Для выявления механических примесей и других посторонних включений флаконы с растворенной вакциной просматривают в проходящем свете. Флаконы, включающие механические примеси и другие посторонние включения, бракуют.

Для определения внешнего вида, наличия механических примесей и других посторонних включений флаксны с сухой вакциной просматривают при встряхивании на свету, после чего проверяют их на плотность укупорки.

Для определения остаточной влажности берут 3 навески из отдельного флакона каждую и высушивают при о температуре 100-105 С в течение

955570 (В-С) 100

А= вЂ” вЂ” вЂ” вЂ”вЂ”

«k где С вЂ” вес навески после высушива« ния, r, В вЂ” первоначальный вес навески (вес вакцины), г. 10

За окончательный результат принимают среднее арифметическое результатов всех проб. Остаточная влажность каждого флакона из проверяемых флаконов с вакциной должна быть в пределах 15

1,0-3,5Х.

Для проверки отсутствия контаминации посторонней микрофлорой берут

5 флаконов с вакциной, разводят из расчета 1 доза в 5 мл растворите- 20 ля и высевяют на питательные среды.

Из каждого флакона по 1-2 капли высевают на питательные среды в пробирки: сусло-агар, агар Чапека, ИПА,. ИПБ и Китт-Тароцци. Посевы 25 на сусло-агаре и агаре Чапека, а также и.по две пробирки на ИПА, ИПБ и Китт-Тароцци выдерживают в термостате при 26оC в течение 10 дней. По две пробирки высевов на средах МПА, ИПБ и Китт-Тароцци выдерживают в термостате при 37 С в течение 10 дней.

После термостатирования.посевов в о течение 5 суток при 37 С их просматривают с МПБ и Китт-Тароцци пересе35 вают на те же питательные среды и выдерживают еще 5 суток при укаэанной температуре.

40 используя счетчик для подсчета коло50

1 ч. Содержание влаги (А) в процентах определяют по формуле

Посевы должны быть чистыми и не давать роста посторонней микрофлоры.

Пробирки со средой Китт-Тароцци предварительно прогревают в водяной бане при 30 С в течение 30 мин и затем охлаждают до 18-20 С.

Типичность роста. Посев на сусло агар должен давать характерный рост

Т.fariforme культуры 130 Л (при засеве суспензией) в виде ровной, порошистой, зернистой, стелющейся беловатой грибницы.

При микроскопии морфологические элементы представлены бесцветным, септированным, ровным мицелием, в диаметре 2-5 мкм. Микроконидии, овальной, округлой, грушевидной или палочковидной формы в диаметре

1-2 мк.

Проверку количества микроконидий, жизнеспособности микроконидий и контаминации проводят из одних и тех же флаконов спустя 2 ч после ресуспензирования вакцины.

Количество микроконидий определяют путем подсчета их в счетной камере

Горяева. 1 мл вакцины должен содержать не менее 6 и не более 12 млн. микроконидий.

Жизнеспособность микроконидий определяют в каждом из 5 флаконов контролируемой серии. Проверку вакцины на жизнеспособность микроконидий проводят проводят спустя 2 ч после ресуспендирования вакцины.

На каждый флакон берут 5 пробирок и в каждую пробирку пипеткой или бюреткой наливают по 4,5 мл растворителя (рН 6,2-7,0). Флакон с вакциной встряхивают, берут из него 0 5 мл суспензии и вносят в первую пробирку, перемешивают содержимое легким встряхиванием пробирки и новой пипеткой берут 0 5 мл и переносят во вторую пробирку и т.д., т.е. приготавливаЧ -5 ют разведения от 10 до 10 . Запрещается перемешивание пробирок пилеткой во избежание оседания на стенках пипетки микроконидий.

Из пятой пробирки каждого флакона пипеткой засевают по 0,5 мл в каждую из двух чашек Петри. Всего 10 чашек на серию. Легким покачиванием чашек распределяют суспензию по поверхности питательной среды. Засеянные чашки Петри помещают в термостат при 26 С. Количество выросших колоо ний подсчитывают на 7-9-й день, ний. Суммируют количество выросших колоний в 10 чашках Петри, полученный результат делят на 5 и умножают на 10 (степень разведения). Конечный результат соответствует количеству жизнеспособных микроконидий в 1 мп вакцины. Количество жизнеспособных микроконидий в каждом флаконе должно быть не менее 4 млн. и не более 12 мпн. в 1 мп.

Безвредность вакцины проверяют на морских свинках или белых мьппах по трем флаконам. На 1 серию берут 6 морских свинок массой 300-350 r или 6 белых мьппей массой 15-20 r.

Подкожно в область спины вводят морским свинкам по 0,2 мп, белым мышам по 0,1 мл вакцины, ресуспен12

955570 зированной из расчета 1 доза в 1 мл растворителя.

Наблюдение за животными ведут в течение 10 дней, Животные за время наблюдения должны оставаться живыми при удовлетворительном общем состоянии.

Каждая десятая серия проверяется на иммуногенную активность на

6 телятах 1-4-месячного возраста, 10 ранее не иммунизированных вакциной

ТФ-130 (К) и не болевших триход итией., Для этого используют 3 флакона. вакцины. Иммунизацию проводят согласно наставлению по применению вакцины 15

ТФ-130 К.

Критерием оценки активности служит образование у животных спустя

10-14 дней после второй иммунизации на месте введения вакцины на поверх- 20 ности кожи специфической локализованной корочки.

Один раз в шесть месяцев одна серия вакцины проверяется путем иммунизации и последующего экспериментального заражения. Спустя месяц после второй иммунизации 6 опытных и 3 контрольных (не иммунизированных) телят заражают месячной вирулентной культурой Т,fariforme путем втирания гомо- ЗО гената в предварительно выстриженный и скарифицированный участок кожи в средней трети шеи. Учет результатов проводят спустя 40 дней после заражения. Из 6 иммунизированных телят

5 не должны иметь клинических признаков трихофитии. Все контрольные телята цолжны проявить клиническую картину заболевания, которую подтверждают микроскопическими исследования-40 мие

Вакцина ТФ-130(К) против трихофитии крупного рогатого скота представляет собой однородную, аморфную, пористую, иногда кристаллическую сухую массу в виде тюбика без посторонних примесей серого цвета.

Срок годности вакцины ТФ-130 (К)

18 месяцев со дня изготовления и хра нения ее при температуре 2-20 С и о соблюдения правил транспортировки, хранения и применения.

Для производства одной серии вакцины ТФ-130 (К) объемом 170 тыс. доз необходимо расфасовать вакцину во флаконы по 10 мл в количестве 4680 штук, из которых 430 штук могут быть выбракованы по различным причинам (бой во время заморозки, бой во время обкатки, этикировки и т.д.) а деловых флаконов останется 4250 штук.

Сь|рья требуется для заполнения этих флаконов 4680х10 мп=46,8 л

Потери при розливе вакцины составляют 2,57., следовательно, сырья требуется 48,0 л. Для приготовления

48,0 л сырья необходимо иметь 24,0 л гомогената с концентрацией микроконидий 320 млн/мл и 24,0.л защитной среды. При съеме грибной массы и ее перемоле с одного матраца получается 100 мл гомогената.

Вакцину против трихофитии крупного рогатого скота применяют с профилактической .и лечебной целью. С профилактической целью ее вводят двукратно внутримышечно в область бедра в дозе 1-2 мл, а с лечебной цельювЂ”

2-4 мл, в обоих случаях с интервалом 10-14 дней, Вакцина ТФ-130(К) по сравнению с вакциной ЛТФ-130 обладает более высокой иммуногенностью, повышенной концентрацией и жизнеспособностью микроконидий. Выход вакцины с одного матраца увеличивается в 3-4 раза за счет повышения спорообраэопапия культуры ТФ-130 Л и уменьшения вводимого объема растворителя.

Вводимая доза вакцины в 5 раз меньше по сравнению с вакциной

ЛТФ-130 °

Технико-экономический эффект.

Ранее одна доза сухой вакцины

ЛТФ-130 растворялась в 5 мл специального растворителя, для чего промышленностью ежегодно выпускалось 800 тыс.л растворителя по цене 1,56 руб. за

1 л на сумму 1248 тыс . руб. При новом режиме одна доза сухой вакцинь1

ТФ-130 (К) растворяется в l мл специального растворителя, что позволит сократить его промышленный выпуск до 160 тыс.л. (800:5=f60) и снизить затраты на изготовление до

249,6 тыс.ру6 (160х1,56=249,6).

Экономический эффект составляет (1248-24916)=998,4 тыс.руб.

Эконоьмческая эффективность внедрения культуры ТФ-130 Л на Ставропольской биофабрике.

Всего за. 1975-78 г,из культуры

ТФ-130 Л изготовлено 92 146 000 доз.

Экономия, руб:

По питательной среде 2285

Матрацев 43240

Заказ 8917/1 Тирак 687

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская .наб., д. 4/5

Подписное